Способ определения противомикробной активности цельной сыворотки и фракции её антимикробных пептидов



Способ определения противомикробной активности цельной сыворотки и фракции её антимикробных пептидов
Способ определения противомикробной активности цельной сыворотки и фракции её антимикробных пептидов
Способ определения противомикробной активности цельной сыворотки и фракции её антимикробных пептидов
G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2686337:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова" (ФГБНУ НИИВС им. И.И. Мечникова) (RU)

Изобретение относится к области лабораторной диагностики, медицинской иммунологии и микробиологии и предназначено для определения общей антимикробной активности и совокупной активности антимикробных пептидов (АМП) в клинических образцах сыворотки крови. Способ определения общей противомикробной активности сыворотки крови и активности фракции антимикробных пептидов сыворотки с молекулярной массой менее 100 кДа заключается в том, что берут образцы цельной сыворотки и указанной фракции, соединяют в пробирках с суспензией микроорганизмов, инкубируют 2 часа при температуре 32 градуса на шейкере, затем центрифугируют и к полученному осадку добавляют раствор бромкрезолового пурпурного, затем вновь термостатируют при тех же условиях, центрифугируют, измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости и рассчитывают активность образцов по формуле, при этом величина указанной активности цельной сыворотки 72,7÷91,6% и величина активности низкомолекулярной фракции сыворотки 21,2÷51,4% интерпретируются как нормальные, а при величине активности цельной сыворотки ниже 72% и величине активности низкомолекулярной фракции сыворотки ниже 21% свидетельствуют о снижении указанной активности. 1 з.п. ф-лы, 3 табл., 3 пр.

 

Область техники

Изобретение относится к области лабораторной диагностики, медицинской иммунологии и микробиологии. Изобретение предназначено для определения общей антимикробной активности и совокупной активности антимикробных пептидов (АМП) в клинических образцах сыворотки крови посредством действия данных образцов на клетки тест-культур микроорганизмов и спектрофотометрического измерения процента красителя, вошедшего в убитые клетки, по сравнению с контролем. Такой подход позволяет установить нормальный и патологический уровень гуморальной противомикробной иммунной защиты организма и усовершенствовать тактику лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, то есть, решить вопрос о проведении иммунотерапии.

Уровень техники.

Обычно для постановки диагноза и разработки схемы лечения инфекционно-воспалительных заболеваний клиницист использует микробиологические и иммунологические исследования. Защитный потенциал конкретного пациента оценивают путем определения иммунного статуса, в который входят многие показатели клеточного и гуморального иммунитета. Гуморальная (сывороточная) противомикробная защита организма складывается из иммуноглобулинов, белков системы комплемента и антимикробных пептидов/ полипептидов (АМП). Независимо от того, какой путь действия системы комплемента реализуется - классический или альтернативный, а также от механизма действия иммуноглобулинов и различных АМП (которых в сыворотке крови свыше 25), происходит прежде всего повреждение клеточной мембраны патогенных микроорганизмов или их лизис. На этом свойстве сыворотки основаны все известные до сих пор методы оценки ее бактерицидности. Метод определения бактерицидных свойств крови входит в "Номенклатуру клинических лабораторных исследований" (п.6.3.2-общие бактерицидные свойства сыворотки крови, секретов), утвержденную Приказом Министерства здравоохранения РФ №64 от 21.02.2000 г. Однако в широкой клинической практике этот метод не нашел применения, очевидно, в силу объективных причин - трудоемкости, длительности выполнения и др. Тем не менее, такой показатель, как прямая противомикробная активность сыворотки, является очень важным.

Методы определения антимикробной активности сыворотки крови и ее компонентов можно разделить на две группы. К первой группе можно отнести "бактериологические" методы, которые основаны на подсчете количества микроорганизмов, обработанных сывороткой крови, по сравнению с контролем. Учет в данном случае проводят путем посева на плотные питательные среды.

Ко второй группе относятся "фотонефелометрические" методы, основанные на оптической регистрации задержки роста бактериальной культуры в жидкой питательной среде. Вышеперечисленные методы трудоемки и требуют больших затрат времени.

Так, из уровня техники известен способ определения бактерицидной активности сыворотки крови, в котором предлагается использование природных или рекомбинантных люминесцирующих бактерий, характеризующиеся прямой пропорциональностью между интенсивностью снижения уровня спонтанной биолюминесценции и выраженностью бактерицидного эффекта. Авторы в качестве примера приводят использование штамма Escherichia coli с генами люминесцентной системы Photobacterium leiognathi. (патент RU 2247987, приоритет 22.01.2003)

К недостаткам данного метода можно отнести модельную тест-культуру, которая не является естественным патогенным микроорганизмом, поэтому может обладать иной чувствительностью к сывороточным антимикробным соединениям, чем штаммы, выделяемые от больных.

Известен также способ определения антимикробной активности пептидов, основанный на свойстве АМП нарушать цитоплазматическую мембрану микроорганизмов (Zimmerman LB1, Worley BV, Palermo EF, Brender JR, Lee KD, Kuroda K, Ramamoorthy A, Meyerhoff ME. Absorbance-based assay for membrane disruption by antimicrobial peptides and synthetic copolymers using pyrroloquinoline quinone-loaded liposomes. AnalBiochem. 2011 Apr 15;411(2): 194-9. doi: 10.1016/j.ab.2011.01.009. Epub 2011 Jan 13). Однако исследователи предлагают использовать не суммарную фракцию АМП, а индивидуальные, причем синтетические аналоги природных АМП. В качестве тест-объекта они используют специально созданную модель - липосомы. Метод требует больших расходов на реактивы (ферменты, пирролохинолин хинон), и не предполагает получения данных об истинной активности АМП против естественных патогенов.

Известен способ определения уровней АМП (Arzumanian V., Shmeleva О., Michailova N. (2017) Elevated Activity Levels of Serum Antimicrobial Peptides in Mice as Response to Immunization with Yeast Antigens, Med Mycol Open Access Vol. 3 No. l), однако, он был реализован в опытах на мышах и, таким образом, не содержит данных касающихся человеческих сывороток, а именно, норм величин антимикробной активности цельных сывороток и их АМП-фракций.

Для оценки противомикробной защиты в клинике пользуются анализами количественной оценки иммуноглобулинов. Несмотря на то, что методы количественной оценки отдельных АМП разработаны, исследования в этой области носят сугубо фундаментальный характер. Кроме того, их действие в организме складывается не столько из суммы их количеств, сколько из их совокупной активности в отношении микробных агентов. Известно, что белки системы комплемента продуцируются в основном гепатоцитами, сывороточные иммуноглобулины - В-лимфоцитами, а сывороточные АМП - в основном нейтрофилами. Молекулярная масса иммуноглобулинов и подавляющего большинства белков комплемента выше 150 кДа, тогда как мол. масса АМП варьирует в пределах 2,8 - 80 кДа. Таким образом, определив совокупную противомикробную активность низкомолекулярной фракции, можно судить об активности АМП, т.е. об эффективности их синтеза нейтрофилами. В этой связи, очевидно, что для клинической диагностики, наряду с общей противомикробной активностью сыворотки, большое значение имеет такой показатель, как совокупная активность АМП.

Наиболее близким аналогом заявленного изобретения является способ определения совокупной активности антимикробных пептидов как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей (патент на изобретение №2602298 от 21.10.2016). Данный метод предназначен для оценки противомикробной активности таких биожидкостей, как слюна, урина, вагинальный и кожный секреты, но не для сыворотки крови. Недостатком данного способа по сравнению с предлагаемым является использование более трудоемкого и длительного метода микроскопии образцов с подсчетом количества убитых клеток.

Задачей изобретения является разработка способа определения противомикробной активности цельной сыворотки и совокупной активности фракции антимикробных пептидов как маркеров состояния отдельных звеньев гуморального иммунитета организма человека, позволяющий за короткое время количественно оценить способность сыворотки крови противостоять инфекционным агентам.

Техническим результатом изобретения является возможность оценить общую противомикробную активность и совокупную активность антимикробных пептидов сыворотки крови. Для определения совокупной активности АМП используется быстрый метод спектрофотометрический метод оценки процента красителя, поглощенного убитыми клетками, по сравнению с контролем, вместо более длительного и трудоемкого метода микроскопирования и подсчета процента убитых клеток. Применение данного метода позволяет на основании количественных критериев определить состояние нормы или дефицита общей противомикробной активности сыворотки и совокупной активности сывороточных АМП.

Для решения поставленной задачи мы предлагаем способ определения общей противомикробной активности и совокупной активности антимикробных пептидов сыворотки крови человека, заключающийся в том, что в качестве образца сыворотки осуществляют сбор крови, затем образец освобождают от форменных клеток крови путем центрифугирования и делят на две аликвоты, одну из которых фильтруют через молекулярный фильтр с размером пор 100 кДа, затем обе аликвоты и контрольный образец, содержащий физраствор вместо компонентов сыворотки, соединяют в определенном соотношении с суспензией клеток экспоненциальной культуры микроорганизмов, после чего приготовленные смеси инкубируют в термостате 2 часа, центрифугируют и к полученным осадкам добавляют раствор бромкрезолового пурпурного для окрашивания убитых клеток, затем вновь термостатируют и центрифугируют, а оптическую плотность полученных супернатантов измеряют на спектрофотометре и рассчитывают процент красителя, поглощенного убитыми клетками опытных образцов в сравнении с контрольным образцом, что и отражает общую противомикробную активность сыворотки и ее совокупную активность АМП.

В частном случае для определения антимикробной активности АМП данную фракцию сыворотки соединяют с клетками грибов Candida albicans, либо грибов Cryptococcus neoformans, либо бактерий Staphylococcus aureus, либо бактерий Escherichia coli.

Краткое описание чертежей и иных поясняющих материалов

Таблица 1. Противомикробная активность цельной сыворотки и активность АМП сыворотки с молекулярной массой менее 100 кДа у здоровых добровольцев.

Таблица 2. Противомикробная активность цельной сыворотки и активность АМП сыворотки с молекулярной массой менее 100 кДа у здоровых добровольцев и пациентов с сепсисом.

Таблица 3. Противомикробная активность цельной сыворотки и активность АМП сыворотки с молекулярной массой менее 100 кДа у здоровых добровольцев, которую оценивали в отношении нескольких культур условно-патогенных грибов и бактерий.

Осуществление изобретения

Способ был реализован для разных видов сывороток и микроорганизмов. Ниже приведены примеры реализации способа.

Пример 1.

Образец венозной крови объемом 2 мл инкубируют 1 час, центрифугируют 5 мин со скоростью 10000 об/мин и полученный супернатант делят на две части, одну из которых отделяют (фракция I), а другую объемом 0,5 мл фильтруют через молекулярный фильтр «Amicon» с диаметром пор 100 кДа на центрифуге в течение 15 мин при 16000 об/мин (фракция II), после чего по 300 мкл из обеих фракций соединяют в пробирках типа Эппендорф с 50 мкл суспензии дрожжей С. albicans №927, полученной из культуры этих дрожжей, выращенной на среде Сабуро в течение 20 часов при 25 градусах и приготовленной из расчета 1 петля 1 мм, суспендированная в 50 мкл физраствора; контролем является пробирка, в которой 300 мкл физраствора, соединяют с 50 мкл упомянутой смеси; пробирки инкубируют 2 часа при 32 градусах на шейкере, затем центрифугируют 5 мин при 10000 об/мин, супернатанты осторожно удаляют, а к осадкам добавляют по 300 мкл раствора бромкрезолового пурпурного в фосфатном буфере рН 4,6, суспендируют и инкубируют 45 мин при 32 градусах на шейкере; после этого 5 мин при 10000 об/мин, супернатанты - по 250 мкл - собирают в отдельную пробирку для каждой пробы, перемешивают и оттуда вносят по 50 мкл в заранее подготовленные пробирки, содержащие по 2,5 мл фосфатного буфера рН 4,6; полученные растворы перемешивают и измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 440 нм в кюветах 1 см; из трех измерений для каждой пробы вычисляют среднее значение оптической плотности, затем производят расчет по формуле:

А=(ОПконтр. - ОПопыт.)* 100 / ОПконтр.,

где А - противомикробная активность цельной сыворотки или полученной фракции ее антимикробных пептидов, выраженная в процентах.

ОПконтр. - это оптическая плотность смеси из контрольной пробирки; ОПопыт. - это оптическая плотность смеси из пробирки фракции I либо фракции II.

Таким образом обрабатывали сыворотки 15 здоровых добровольцев (табл. 1). При этом определяли количественные критерии нормальной противомикробной активности цельной сыворотки и полученной фракции ее антимикробных пептидов.

Пример 2. Образцы крови обрабатывали аналогично примеру 1, но в исследование были включены: контрольная группа - здоровые добровольцы и пациенты с сепсисом, противомикробную активность также оценивали в отношении дрожжей Candida albicans. Результаты приведены в табл. 2. Как видно из приведенных результатов, дефицитное состояние противомикробной активности цельной сыворотки и полученной фракции ее антимикробных пептидов диагностируется при показателях 72% и 21% соответственно.

Достоверность различий рассчитывали по критерию Манна-Уитни.

Пример 3. Образцы крови обрабатывали аналогично примеру 1, но исследование проводили только на сыворотках крови 6 здоровых добровольцев, причем активность оценивали в отношении нескольких культур условно-патогенных грибов и бактерий (таблица 3). Величины противомикробной активности цельных сывороток против разных видов микроорганизмов в норме варьируют от 72% до 92%, тогда как активность АМП-фракций - в пределах от 20% до 51%.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет быстро и точно оценить общую противомикробную активность и совокупную активность антимикробных пептидов сыворотки крови и охарактеризовать ее состояние как нормальное или дефицитное.

1. Способ определения общей противомикробной активности сыворотки крови и активности фракции антимикробных пептидов сыворотки с молекулярной массой менее 100 кДа, для чего берут образцы цельной сыворотки и указанной фракции, соединяют в пробирках с суспензией микроорганизмов, инкубируют 2 часа при температуре 32 градуса на шейкере, затем центрифугируют и к полученному осадку добавляют раствор бромкрезолового пурпурного, затем вновь термостатируют при тех же условиях, центрифугируют, измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости и рассчитывают активность образцов по формуле:

Противомикробная активность образца = (оптическая плотность жидкости из контрольной пробирки минус оптическая плотность жидкости из опытной пробирки)×100 / оптическая плотность жидкости из контрольной пробирки, при этом величина указанной активности цельной сыворотки 72,7÷91,6% и величина активности низкомолекулярной фракции сыворотки 21,2÷51,4% интерпретируются как нормальные, а при величине активности цельной сыворотки ниже 72% и величине активности низкомолекулярной фракции сыворотки ниже 21% свидетельствуют о снижении указанной активности.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для определения антимикробной активности АМП данную фракцию сыворотки соединяют с клетками грибов Candida albicans, либо грибов Cryptococcus neoformans, либо бактерий Staphylococcus aureus, либо бактерий Escherichia coli.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины, а именно к хирургии, и предназначено для прогнозирования течения репаративного процесса лапаротомной раны при механической желтухе неопухолевого происхождения.

Изобретение относится к области медицины, а именно к психиатрии, и представляет собой способ прогнозирования течения шизофрении у мужчин с приступообразными эндогенными психозами, манифестирующими в возрасте от 18 до 25 лет, включающий оценку уровня функционирования больного в период, предшествующий началу заболевания, по шкале преморбидного функционирования (PAS), отличающийся тем, что при оценке преморбидного функционирования (PAS) в диапазоне от 0,23 до 0,5 баллов и выше у больного отбирают биологический материал, выделяют из него ДНК, определяют варианты полиморфных локусов 5-HTTLPR гена переносчика серотонина, Val66Met гена нейротрофического фактора головного мозга (BDNF), Т102С гена рецептора серотонина типа 2А (5-HTR2A) и по комбинации вариантов генов прогнозируют течение шизофрении, при этом при наличии в комбинации варианта LL (5-HTTLPR), или Met (Val66Met), или СС (Т102С) прогнозируют неблагоприятное, а при наличии комбинации SValValT - благоприятное течение шизофрении.
Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способу изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц. Способ включает получение бактериальной массы Salmonella gallinarum pullorum, выделение из нее антигенной фракции, Обработку бактериальной массы поверхностно-активным веществом с добавлением соды или щелочи в дистиллированной воде при 93-96°C с дальнейшей сенсебилизацией формалинизированных эритроцитов, их очисткой и получением целевого продукта в виде 10%-ной суспензии.

Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии и профилактической медицине и раскрывает cпособ определения предрасположенности к развитию осложнений заболеваний сердечно-сосудистой системы при экстремальных изменениях климатических условий.

Изобретение относится к медицине и касается способа хроматографической очистки тканевого активатора плазминогена, где проводят цинк-хелатную хроматографию на металлхелатном сорбенте с метакрилатной матрицей, затем аффинную хроматографию на пептидном аффинном сорбенте Capture Select tPA и затем переводят тканевой активатор плазминогена в финальный буферный раствор путем хроматографии на сильном катионообменном сорбенте, с повышением содержания хлорида натрия и аргинина в промывочных буферных растворах.

Группа изобретений относится к медицине и предназначена для диагностики и лечения синдрома раздраженного кишечника (СРК). Описаны способы, анализы и системы для диагностики, выбора терапии и лечения СРК на основании уровня антител к винкулину и к CdtB у субъекта.

Группа изобретений относится к области создания магазинов аналитических средств. Магазин аналитических средств содержит множество аналитических вспомогательных средств, по меньшей мере два отсека, в которые помещены аналитические вспомогательные средства, при этом каждое из аналитических вспомогательных средств содержит по меньшей мере один тестирующий элемент с по меньшей мере одним химическим реактивом для распознавания по меньшей мере одного аналита в пробе жидкости.

Изобретение относится к области ветеринарии, микробиологии и биотехнологии. Предложен способ выявления и количественной оценки содержания ДНК U.

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, и предназначено для прогнозирования преждевременных родов. Используя показатели концентрации общего количества внеклеточной ДНК (овДНК) и концентрации IL-8 в плазме периферической крови у беременных женщин на 22-36 неделях гестации, определяют переменную Р.
Изобретение относится к медицине, гинекологии и может быть использовано в лечении пациенток с пролапсом гениталий при недифференцированной дисплазии соединительной ткани.

Группа изобретений относится к устройствам и системам для обработки яиц. Раскрыта система идентификации лотка с яйцами, содержащая первое измерительное устройство, предназначенное для определения первого значения параметра яиц, содержащихся в яичном лотке в группе таких лотков, процессор, связанный с первым измерительным устройством и выполненный с возможностью приема первых значений параметра от первого измерительного устройства и создания и хранения первой картины образцов данных для яичных лотков, основанной на указанных первых значениях параметра и привязываемой к каждому соответствующему лотку с яйцами в указанной группе таких лотков, и второе измерительное устройство, предназначенное для определения второго значения указанного параметра яиц, находящихся в яичных лотках, при этом указанное устройство расположено за первым измерительным устройством и связано с процессором таким образом, что процессор может принимать вторые значения параметра с получением сравнительной картины образцов данных для яичных лотков, исходя из указанных вторых значений параметра соответствующего лотка с яйцами.

Объектом настоящего изобретения является способ прогнозирования риска развития у субъекта сахарного диабета или метаболического синдрома, где у указанного субъекта нет диабета.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки эффективности лечения генерализованной формы хронического урогенитального хламидиоза, вызванного Chlamydia trachomatis.

Изобретение относится к экологии, а именно определению остаточного загрязнения твердого материала после обработки его моющей жидкостью. Для этого образец чистого материала с известным начальным весом помещают в водный раствор хлористого натрия с весовой концентрацией 5±0,05% на 2 часа, а затем высушивают и загрязняют композицией, состоящей из материалов, имитирующих загрязнение.

Изобретение относится к области контроля качества топлив и может быть использовано для определения температуры помутнения дизельных топлив. Способ заключается в том, что анализируемый образец вводят в измерительную ячейку, размещают ее в криостатированную камеру, в которой образец предварительно нагревают, а затем подвергают не менее пяти циклам «охлаждение-нагрев», поддерживая в каждом цикле разную скорость изменения температуры и записывая для каждого цикла «охлаждение-нагрев» кривую зависимости, показывающую изменение удельного теплового потока, поступающего из образца при его охлаждении и получаемого образцом при его нагревании, как функцию температуры, на каждой из которых фиксируют температуру начала кристаллизации (ТнкVi) анализируемого образца, температуру застывания (ТзVi) и температуру окончания плавления твердой фазы (ТопVi).

Настоящее изобретение относится к датчику для определения свойств газа, в частности горючего газа. Газовый датчик для измерения свойств газа включает в себя датчик вязкости газа, содержащий взаимодействующую с газом часть, находящуюся в контакте с газом, подлежащим измерению, и систему измерительной камеры, содержащую измерительную камеру, первый проход с высоким сопротивлением, соединяющий по текучей среде измерительную камеру с взаимодействующей с газом частью, генератор давления, выполненный с возможностью создания изменения давления в измерительной камере, и датчик давления, выполненный с возможностью измерения изменяющегося во времени отклонения давления газа в измерительной камере, причем изменяющееся во времени отклонение давления в измерительной камере вследствие течения газа через проход с высоким сопротивлением коррелировано с вязкостью газа, датчик вязкости газа дополнительно содержит систему эталонной камеры, содержащую эталонную камеру и второй проход с высоким сопротивлением, соединяющий между собой по текучей среде эталонную камеру и взаимодействующую с газом часть, причем эталонная камера связана с датчиком давления измерительной камеры так, что датчик давления выполнен с возможностью измерения перепада давления между давлением в измерительной камере и давлением в эталонной камере.

Данное изобретение относится к биотехнологии. Предложены способы in vitro прогнозирования риска смерти в течение одного года, основанные на использовании антител, которые связываются с растворимым белком человека, продуктом гена 2, экспрессируемым при стимуляции роста (ST2), или их антигенсвязывающих фрагментов.

Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ обнаружения генетических факторов (генов), определяющих функционирование ДНК-структур клетки - теломер, обуславливающих, в свою очередь, продолжительность жизни клетки эукариот.

Изобретение относится к экологии, а именно к оценке состояния жилых помещений, включающий определение уровней загрязнения, по нескольким загрязняющим факторам. Для этого отбирают пробы воды и воздуха в помещениях обследуемого объекта, измеряют уровни радиационного фона, электромагнитных полей, шума, температуры, влажности и скорости движения воздуха в помещении.

Изобретение относится к медицине и может быть применено для определения показаний к ранней повторной лапароскопической санации брюшной полости у пациентов с панкреатогенным перитонитом.

Изобретение относится к наборам для иммунохимического анализа антител и антигенов в препаратах крови и может быть использовано в медицинской диагностике. Раскрыт набор для мультиплексного иммунохимического анализа антител и антигенов в препаратах крови, включающий устройство в виде гребенчатой подложки с набором дискретно нанесенных на поверхности зубцов подложки реагентов захвата маркеров инфекционных заболеваний и дополнительно блокированной неспецифическими природными или синтетическими полимерами; емкость для проведения анализа, содержащую несколько рядов изолированных ячеек, выполненных с возможностью введения каждого зубца подложки в отдельную ячейку ванны; растворы для разведения образца и отмывок; конъюгат для детекции; встроенные положительный контроль и отрицательный контроль. При этом реагенты захвата содержат антигены и антитела к маркерам одного или нескольких возбудителей инфекционных заболеваний; иммобилизованные на каждом зубце подложки; конъюгат для детекции содержит многокомпонентный состав, включающий несколько видов детекторных антител против иммуноглобулинов человека и против выявляемых антигенов, связанных с каталитически активными золями золота; положительные контроли предусматривают оценку работоспособности всех специфических компонентов конъюгата, расположены на отдельных сегментах иммуночипа и включают зону для контроля работоспособности антивидовых детекторных антител, зоны для контроля специфических детекторных антител к каждому выявляемому антигену и зону отрицательного контроля, свободную от специфических белков; проявитель иммуночипа содержит сухой таблетированный и жидкий компоненты и снабжен усилителем и стабилизатором окраски проявленных иммуночипов. Изобретение обеспечивает повышение информативности мультиплексного анализа и диагностику ранних стадий инфекции за счет одновременного выявления в образцах интересующих спектров антител и антигенов. 4 з.п. ф-лы, 4 ил., 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области лабораторной диагностики, медицинской иммунологии и микробиологии и предназначено для определения общей антимикробной активности и совокупной активности антимикробных пептидов в клинических образцах сыворотки крови. Способ определения общей противомикробной активности сыворотки крови и активности фракции антимикробных пептидов сыворотки с молекулярной массой менее 100 кДа заключается в том, что берут образцы цельной сыворотки и указанной фракции, соединяют в пробирках с суспензией микроорганизмов, инкубируют 2 часа при температуре 32 градуса на шейкере, затем центрифугируют и к полученному осадку добавляют раствор бромкрезолового пурпурного, затем вновь термостатируют при тех же условиях, центрифугируют, измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости и рассчитывают активность образцов по формуле, при этом величина указанной активности цельной сыворотки 72,7÷91,6 и величина активности низкомолекулярной фракции сыворотки 21,2÷51,4 интерпретируются как нормальные, а при величине активности цельной сыворотки ниже 72 и величине активности низкомолекулярной фракции сыворотки ниже 21 свидетельствуют о снижении указанной активности. 1 з.п. ф-лы, 3 табл., 3 пр.

Наверх