Способ определения наличия рецепторов к эстрогену и прогестерону в ткани her2-негативного рака молочной железы

Авторы патента:

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

A61K48/00 - Лекарственные препараты, содержащие генетический материал, который включен в клетки живого организма для лечения генетических заболеваний; для генной терапии

A61B5/00 - Измерение для диагностических целей (радиодиагностика A61B 6/00; диагностика с помощью ультразвуковых, инфразвуковых и звуковых волн A61B 8/00); опознание личности

Владельцы патента RU 2691606:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Смоленский государственный медицинский университет" министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине и биотехнологии, в частности к определению экспрессии рецепторов к эстрогену и прогестерону клетками HER-негативного рака молочной железы. Способ включает приготовление парафиновых блоков из опухолевой ткани и гистологических срезов, депарафинирование их в гексане. Затем неокрашенные депарафинированные гистологические срезы опухолевой ткани подвергают флуориметрическому исследованию, измеряют спектры возбуждения флуоресценции с 230 до 360 нм при длине волны регистрации 410 нм и определяют соотношение между интенсивностями кривых с максимумами в области 262 и 303 нм (I₂₆₂/I₃₀₃) и наличие максимума на 340 нм; при I₂₆₂/I₃₀₃ менее 1,0 и отсутствии пика на спектре возбуждения флуоресценции на 340 нм делают вывод о наличии рецепторов к эстрогену и прогестерону; при I₂₆₂/I₃₀₃, более и равному 1,0, и наличии пика на спектре возбуждения флуоресценции на 340 нм делают вывод об отсутствии рецепторов к эстрогену и прогестерону. Изобретение позволяет повысить объективность получаемых результатов. 3 ил., 2 пр.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в патологической анатомии, медицинской диагностике и для медицинских исследований, в частности для определения наличия рецепторов к эстрогену и прогестерону в ткани рака молочной железы, необходимое для определения тактики лечения пациента.

В настоящее время экспрессия эстрогеновых рецепторов в >1% опухолевых клеток является показанием для назначения гормонотерапии и существенно меняет прогноз больных с раком молочной железы. Важно, что для рецепторов прогестерона характерна ко-экспрессия с рецепторами эстрогенов (Клинические рекомендации по диагностике и лечению больных раком молочной железы. - М., 2014. - 43 с.).

Существует способ определения наличия рецепторов к эстрогену и прогестерону в ткани рака молочной железы на гистологических срезах, приготовленных путем стандартной парафиновой проводки с последующим иммуногистохимическим исследованием с мышиными моноклональными антителами к рецепторам эстрогена и прогестерона. Фрагмент ткани рака молочной железы, полученный путем биопсии или во время операции, подвергают стандартной парафиновой проводке с последующим иммуногистохимическим исследованием на парафиновых срезах пероксидазно-антипероксидазным методом с демаскировкой антигенов в РТ-модуле (DAKO) с использованием буфера для демаскировки (Tris/EDTA рН 9) (DAKO). В качестве системы визуализации используют универсальный набор с полимером EnVision Flex (DAKO). Ядра докрашивают гематоксилином Майера. Используют мышиные моноклональные антитела к рецепторам эстрогена и рецепторам прогестерона (Петров С.В., Райхлин Н.Т. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. - Казань, 2004. - 452 с). Затем интенсивность иммуногистохимической экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в ядрах клеток эпителия оценивают по методу Allred (оценка процента окрашенных ядер клеток (градации от 0 до 5) и интенсивности окраски ядер (градация от 0 до 3), окончательное значение получают суммированием показателей. Значение от 0 до 2 считают отрицательной экспрессией, от 3 до 8 - положительной) (Quresh A., Pervez S. Allred scoring for ER reporting and it's impact in clearly distinguishing ER negative from ER positive breast cancers. Journal Pakistan Medical Association.2010:60(5): 350-353).

Недостатки данного способа:

1) Необходимость дорогостоящего оборудования для автоматической стандартизированной окраски и специальных дорогостоящих реактивов.

2) Необходимость специальной подготовки материала перед парафиновой проводкой.

3) Трудоемкость и низкая объективность при обработке результатов.

4) Результаты способа во многом субъективны и зависят от квалификации специалиста, проводящего оценку экспрессии.

5) Высокая вероятность искажения результата при проведении исследования без дорогостоящего автоматизированного оборудования за счет высокой чувствительности метода к условиям его выполнения.

Техническим результатом предлагаемого способа является упрощение методики и повышение объективности получаемых результатов для определения экспрессии рецепторов к эстрогену и прогестерону клетками HER-2-негативного рака молочной железы.

Сущность предлагаемого изобретения состоит в том, что неокрашенные депарафинированные гистологические срезы ткани рака молочной железы, приготовленные путем стандартной парафиновой проводки, после подтверждения путем иммуногистохимического исследования отсутствия рецепторов к HER-2/neu подвергают флуориметрическому исследованию, поместив их на кварцевое стекло. Удаление парафина с гистологического среза проводят промыванием его в растворе гексана. После этого проводят измерение спектра возбуждения флуоресценции опухолевой ткани в диапазоне длин волн от 230 до 360 нм при длине волны регистрации 410 нм и определяют соотношение между интенсивностями кривых с максимумами в области 262 и 303 нм (I₂₆₂/I₃₀₃), и наличие максимума на 340 нм; при I₂₆₂/I₃₀₃ менее 1,0 и отсутствии максимума на спектре возбуждения флуоресценции на 340 нм, делают вывод о наличии рецепторов к эстрогену и прогестерону; при I₂₆₂/I₃₀₃ более и равному 1,0 и наличии максимума на спектре возбуждения флуоресценции на 340 нм, делают вывод об отсутствии рецепторов к эстрогену и прогестерону.

Способ осуществляют следующим образом.

Фрагмент ткани рака молочной железы, полученный путем биопсии или во время операции, подвергают стандартной парафиновой проводке. После подтверждения путем иммуногистохимического исследования отсутствия в ткани рака молочной железы рецепторов к HER-2/neu, с парафинового блока готовят параллельный срез толщиной 6-7 мкм без окрашивания гематоксилином и эозином, депарафинируют его в гексане в течение 3 мин, помещают на кварцевое стекло, не окрашивая, и измеряют спектры возбуждения флуоресценции с 230 до 360 нм при длине волны регистрации 410 нм и спектры флуоресценции при длине волны возбуждения 300 нм и длин волн регистрации от 330 до 450 нм на спектрофлуориметре SOLAR СМ-2203. На графиках фигуры 1 изображены типичные спектры возбуждения флуоресценции образцов рака молочной железы, не имеющего рецепторов к эстрогену и прогестерону. Спектр возбуждения флуоресценции имеет сложную структуру, состоящую из трех четко выраженных максимумов: первый на 268 нм, второй 303 нм и третий на 340 нм. При наличии в ткани HER-2 негативного рака молочной железы рецепторов к эстрогену и прогестерону максимум на 340 нм отсутствует, при этом появляется максимум на 239 нм (фигура 2).

Для анализа спектров их раскладывают на составляющие методом Гауссово-Лоренцевых кривых. На фигуре 3 приведен пример такого разложения типичного спектра. Кривая 1 представляет собой интенсивность света, после поглощения которого произойдет ионизация молекул-флуорофоров исследуемой ткани. Кривые 2 и 3 характеризуют свечение эндогенных флуорофоров исследуемой ткани. Кривая 4 характеризует рассеянный свет. Кривая 5 характеризует измеренный спектр, который разложили на составляющие. После разложения спектра на составляющие вычисляют отношение максимумов кривых 2 и 3, которое характеризует наличие или отсутствие рецепторов к эстрогену и прогестерону.

Способ основан на изменении спектральных свойств ткани из-за изменения его биохимического состава при наличии рецепторов к эстрогену и прогестерону. Данные рецепторы имеют белковую природу, в их состав входят аминокислоты, селективно поглощающие в исследуемом диапазоне длин волн.

Пример 1. Пациентка А., 45 лет. Выполнена правосторонняя мастэктомия по поводу протокового рака молочной железы, верифицированного предоперационной трепанобиоспией. Гистологическое исследование операционного материала подтвердило предоперационный диагноз. Иммуногистохимическое исследование выявило HER2-негативный рак молочной железы, применение моноклональных антител к эстрогену и прогестерону выявило выраженную экспрессию (8 баллов по Allred).

Результаты флуориметрического исследования: значение отношения I₂₆₅/I₃₀₅ составляет 0,75, на спектре флуоресценции отсутствует максимум на 340 нм., делают вывод о наличии рецепторов к эстрогену и прогестерону в ткани рака молочной железы и необходимости назначения эндокринотерапии.

Пример 2. Пациентка О., 61 год. Выполнена левосторонняя мастэктомия по поводу протокового рака молочной железы, верифицированного предоперационной трепанобиоспией. Гистологическое исследование операционного материала подтвердило предоперационный диагноз. Иммуногистохимическое исследование выявило HER2-негативный рак молочной железы, применение моноклональных антител к эстрогену и прогестерону выявило отсутствие экспрессии (0 баллов по Allred).

Результаты флуориметрического исследования: значение отношения I₂₆₅/I₃₀₅ составляет 1,25, на спектре возбуждения флуоресценции присутствует максимум на 340 нм, делают вывод об отсутствии рецепторов к эстрогену и прогестерону в ткани рака молочной железы и отсутствие необходимости назначения эндокринотерапии.

Таким способом исследовано 33 случая HER2-негативного рака молочной железы, в 100% случаев результаты флуориметрического исследования соответствовали результатам определения наличия рецепторов к эстрогену и прогестерону в ткани рака молочной железы путем иммуногистохимического исследования.

Преимуществами данного способа являются дешевизна, отсутствие необходимости приобретения дорогостоящего оборудования и реактивов, требующих определенных температурных условий хранения, упрощение методики определения гормонального статуса рака молочной железы, устранение влияния субъективности на обработку результатов, отсутствие необходимости специальной подготовки материала к исследованию и возможности искажения результатов под влиянием внешних условий, быстрота получения результата, что особенно важно для онкологических больных для скорейшего решения вопроса о назначении специфической терапии.

Способ определения экспрессии рецепторов к эстрогену и прогестерону клетками HER-негативного рака молочной железы, включающий приготовление парафиновых блоков из опухолевой ткани и гистологических срезов из них с верификацией отсутствия экспрессии рецепторов к HER-2/neu путем иммуногистохимии, отличающийся тем, что неокрашенные депарафинированные гистологические срезы опухолевой ткани подвергают флуориметрическому исследованию, измеряют спектры возбуждения флуоресценции с 230 до 360 нм при длине волны регистрации 410 нм и определяют соотношение между интенсивностями кривых с максимумами в области 262 и 303 нм (I₂₆₂/I₃₀₃) и наличие максимума на 340 нм; при I₂₆₂/I₃₀₃ менее 1,0 и отсутствии пика на 340 нм делают вывод о наличии рецепторов к эстрогену и прогестерону; при I₂₆₂/I₃₀₃, более и равному 1,0, и наличии пика на спектре возбуждения флуоресценции на 340 нм делают вывод об отсутствии рецепторов к эстрогену и прогестерону.

Похожие патенты:

Антитела к h7cr // 2691428

Изобретение относится к области иммунологии. Предложены гуманизированное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, а также антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически связываются с H7CR человека.

Способ прогнозирования характера клинического течения постинфекционного гломерулонефрита // 2691402

Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии, и предназначено для прогнозирования характера клинического течения постинфекционного гломерулонефрита. Способ включает иммуноферментный анализ биосубстрата на содержание цитокинов - интерлейкина-1β (ИЛ-1β) и рецепторного антагониста ИЛ-1β (РАИЛ-1β) в дебюте заболевания.

Способ прогнозирования течения хронического пародонтита // 2691304

Изобретение относится к области медицины, а именно к стоматологии, и предназначен для использования при диагностике и прогнозировании течения хронического пародонтита.

Способ выбора тактики ревизионного эндопротезирования крупных суставов // 2691142

Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и лабораторной диагностике, и может быть использовано для выбора тактики ревизионного эндопротезирования крупных суставов.

Способ прогнозирования развития преэклампсии в поздние сроки беременности // 2691114

Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству и гинекологии, и может найти применение для раннего прогнозирования преэклампсии у пациенток из группы риска по развитию осложнений беременности.

Способ оценки степени тяжести овариальной дисфункции у девочек с пубертатной гиперандрогенией // 2690502

Изобретение относится к области медицины, а именно гинекологии и эндокринологии, и может быть использовано для определения тяжести овариальной дисфункции у девочек-подростков, страдающих нарушениями менструального цикла.

Способ получения производного окисленного декстрана, пригодного для его визуализации в сыворотке крови // 2690380

Изобретение относится к способу получения производного окисленного декстрана, пригодного для его визуализации в сыворотке крови, включающему проведение реакции окисленного декстрана с меткой для его визуализации при температуре 80-90°С, в качестве метки для визуализации используют гидразид акридонуксусной кислоты; реакцию гидразид акридонуксусной кислоты - окисленный декстран проводят при соотношении компонентов 1:10 соответственно в пересчете на массу сухого вещества в течение 90 минут, фильтруют полученную суспензию, охлаждают ее до комнатной температуры, добавляют липосомообразующий агент, выдерживают полученную липосомальную форму производного окисленного декстрана при температуре 4-6°С в течение не менее 24 часов, затем фильтруют ее с помощью микрофильтра.

Сканирующий в режиме реального времени микрожидкостный термоциклер и способы синхронизированных термоциклирования и сканирующего оптического обнаружения // 2690374

Группа изобретений относится к области амплификации нуклеиновой кислоты. Способ управления множеством протоколов амплификации нуклеиновой кислоты во множестве реакторов, реализованный на одном или большем количестве компьютерных процессорах, в котором каждый из указанных протоколов содержит один или большее количество циклов этапов, причем каждый из указанных циклов этапов содержит этап нагрева и этап охлаждения, при этом этап нагрева и/или этап охлаждения содержит внутри себя время для выполнения обнаружения нуклеиновой кислоты.

Применение эрибулина для лечения рака молочной железы // 2689977

Группа изобретений касается лечения рака молочной железы. Предложены: применение эрибулина или его соли для лечения HER2-негативного рака молочной железы у пациента, ранее не лечившего его; способ выявления пациента-кандидата для лечения эрибулином или его солью HER2-негативного рака молочной железы; способ выбора такого пациента; способ in vitro оценки пригодности индивидуума для лечения эрибулином или его солью такого рака; применение способа in vitro для оценки статуса HER2 в образце пациента, страдающего раком молочной железы, и способ лечения HER2-негативного рака молочной железы.

Способ прогнозирования формирования детского церебрального паралича у детей 3-6 месяцев жизни // 2689918

Изобретение относится к области медицины, а именно к детской неврологии, предназначено для использования при прогнозировании формирования детского церебрального паралича к году жизни.

Способы и композиции для лечения болезни хантингтона // 2691102

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, и может быть использовано для уменьшения экспрессии мутантного гена хантингтина (mHTT) для уменьшения или предотвращения образования агрегатов Htt у субъекта с болезнью Хантингтона (БХ).

Направляемая рнк регуляция транскрипции // 2690935

Изобретение относится к биотехнологии. Представлены способы модулирования экспрессии целевой нуклеиновой кислоты в клетках, включающие введение в клетки первой чужеродной нуклеиновой кислоты, кодирующей одну или несколько РНК, комплементарных к ДНК, причем ДНК включает целевую нуклеиновую кислоту, введение в клетки второй чужеродной нуклеиновой кислоты, кодирующей безнуклеазный белок Cas9, который связывается с ДНК и направляется одной или несколькими РНК, введение в клетки третьей чужеродной нуклеиновой кислоты, кодирующей регулирующий транскрипцию белок или домен, причем одна или несколько РНК, безнуклеазный белок Cas9 и регулирующий транскрипцию белок или домен экспрессируются, при этом одна или несколько РНК, безнуклеазный белок Cas9 и регулирующий транскрипцию белок или домен совместно локализуются на ДНК, а регулирующий транскрипцию белок или домен регулирует экспрессию целевой нуклеиновой кислоты.

Соединения и способы модуляции экспрессии дистрофической миотонин-протеинкиназы (dmpk) // 2690333

Изобретение относится к биотехнологии. Описаны соединения для снижения экспрессии мРНК DMPK, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 10-30 связанных нуклеозидов и имеющий по меньшей мере один модифицированный сахарный компонент, модифицированную межнуклеозидную связь и/или модифицированное нуклеотидное основание, при этом указанная нуклеотидная последовательность модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 90% комплементарна SEQ ID NO: 1 и/или SEQ ID NO: 2 на протяжении всей длины модифицированного олигонуклеотида.

Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевым эффектом, и способ снижения ингибирующего эффекта pd-l1 на т-клетки человека // 2688692

Группа изобретений относится к медицине и касается фармацевтической композиции, обладающей противоопухолевым эффектом, содержащей эффективное количество популяций Т-клеток человека, где Т-клетки человека включают изолированную нуклеотидную последовательность, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую модифицированный белок запрограммированной смерти клетки 1 (PD-1) и нуклеотидную последовательность, кодирующую химерный антигенный рецептор (CAR), где модифицированный PD-1 и CAR экспрессируются в виде генных продуктов, которые являются отдельными полипептидами, и где модифицированный PD-1 является доминантно-негативным PD-1.

Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая микрорнк в качестве активного ингредиента // 2686313

Изобретение относится к области медицины. Предложена фармацевтическая композиция для лечения рака, включающая одну или несколько миРНК, выбранных из группы, состоящей из miR-3670 и miR-8078, где miR-3670 включает двухцепочечную РНК, представленную нуклеотидными последовательностями SEQ ID NO: 35 и SEQ ID NO: 36, и miR-8078 включает двухцепочечную РНК, представленную нуклеотидными последовательностями SEQ ID NO: 65 и SEQ ID NO: 66.

Рекомбинантный вектор для создания плазмидных генетических конструкций, обладающих повышенной длительностью экспрессии целевых генов // 2686102

Изобретение относится к области молекулярной генетики, биотехнологии и медицины. Предложен рекомбинантный вектор для создания плазмидных генетических конструкций, обладающих повышенной длительностью экспрессии целевых генов, содержащий гексамер модифицированного S/MAR элемента из человеческого гена IFNβ и сниженное до 13 число CpG динуклеотидов, нуклеотидная последовательность которого представлена в SEQ ID NO 1.

Способы и композиции для направленной модификации генома // 2685914

Настоящее изобретение относится к генной инженерии. Предложен способ in vitro модификации генома в представляющем интерес геномном локусе в нечеловеческой плюрипотентной клетке млекопитающего, включающий внесение в клетку компонентов системы CRISPR/Cas9 в комбинации с крупным направляющим вектором (LTVEC), который составляет по меньшей мере 10 т.п.о.

Химерный антигенный рецептор // 2684713

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к химерным антигенным рецепторам (CAR), и может быть использовано в медицине для лечения заболевания плазматических клеток, которые характеризуются экспрессией антигена созревания B-клеток (BCMA) и рецептора трансмембранного активатора, модулятора кальция и активатора лиганда циклофилина (TACI).

Композиции и способы модуляции smn2 сплайсинга у субъекта // 2683772

Изобретение относится к области медицины и предназначено для лечения спинальной мышечной атрофии (СМА). Способ включает введение посредством болюсной инъекции в интратекальное пространство субъекта, являющегося человеком, антисмыслового соединения, содержащего антисмысловой олигонуклеотид, состоящий из 18 связанных нуклеозидов, где каждая межнуклеозидная связь олигонуклеотида представляет собой фосфоротиоатную связь, где каждый нуклеозид олигонуклеотида представляет собой 2'-МОЭ нуклеозид и где введение антисмыслового соединения усиливает включение экзона 7 в SMN2 мРНК транскриптах у субъекта, являющегося человеком.

Композиция и способы высокоэффективного переноса генов с помощью вариантов капсида aav // 2683497

Изобретение относится к биотехнологии. Описан вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV) для доставки субъекту гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты, содержащей капсидный белок VP1, который содержит одну или несколько замен лизина, где одна замена лизина представляет K137R.

Способ точного определения локализации патологического очага в тонкой кишке при проведении баллонно-ассистированной энтероскопии // 2691522

Изобретение относится к медицине, а именно к эндоскопии, и может быть использовано для точного определения локализации патологического очага в тонкой кишке при проведении баллонно-ассистированной энтероскопии.