Тест-штамм leptospira interrogans серогруппы canicola серовара canicola для детекции антител к l. canicola

Изобретение относится к области биохимии, в частности к штамму бактерий Leptospira interrogans серогруппы Canicola серовара canicola для детекции антител к L. canocola. Вышеуказанный штамм депонирован в Международной коллекции эталонных штаммов патогенных и сапрофитных лептоспир Национального исследовательского центра эпидемиологии и микробиологии имени академика Н.Ф. Гамалеи под номером 519. Изобретение позволяет эффективно проводить эпидемиологическое расследование спорадических и групповых заболеваний лептоспирозом: серологическая диагностика, установление источника инфекции в очаге заболевания, а также мониторинг за распространением лептоспироза, вызванного возбудителями серогруппы Canicola как среди людей, так и среди различных видов животных. 1 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и представляет собой оригинальный штамм возбудителя лептоспироза, обладающий выраженной антигенной и иммуногенной активностью и используемый как тест-штамм для детекции антител к L. canocola.

В Российской Федерации лептоспироз регистрируется повсеместно. Ежегодно в России выявляется от 1,5 до 2,5 тысяч заболеваний людей этой инфекцией. Она имеет большую социально-экономическую значимость для страны из-за тяжести течения и наличия отдаленных клинических последствий (Топорков В.П., Величко Л.Н. Динамика заболеваемости лептоспирозами в федеральных округах Российской Федерации // Проблемы особо опасных инфекций. - 2008. - Вып. 96. - С. 22-25; Баталова В.В., Каршин С.П., Веревкина М.Н. Суспензионный антигенный лептоспирозный диагностикум // Ветеринарная патология. - 2016. - №1. - С. 35-42.). Лептоспироз, вызванный возбудителями серогруппы Canicola наряду с иктерогеморрагическим, относится к категории тяжело протекающих зооантропонозных инфекций с высокой частотой летальных исходов (Стоянова Н.А., Бадра Б., Токаревич Н.К. и др. Эпизоотическая ситуация по лептоспирозу и ее эпидемические проявления в условиях Санкт-Петербурга / Диагностика, профилактика и лечение лептоспироза людей и животных. -М., 2007. С. 63-64; Ананьина Ю.В. Лептоспирозы людей и животных: тенденции распространения и проблемы профилактики // Эпидемиология и Вакцинопрофилактики. - 2010. - №2. - С. 13-16.)

Для лептоспироза характерен полиморфизм клинических проявлений в связи, с чем клиническая диагностика затруднена, особенно на ранних днях болезни, поэтому лабораторные методы исследования имеют решающее значение (Киселева Е.Ю., Бренева Н.В., Носков М.Б., Балахонов С.В., Гефан Н.Г. Методы лабораторной диагностики лептоспирозов: особенности постановки, преимущества и недостатки // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН, 2015, №3 (103), С. 85-93).

В серологической диагностике реакция микроагглютинации (РМА) остается «золотым стандартом». Для выявления антител в РМА рекомендован диагностический набор лептоспир (Эпидемиология, диагностика и профилактика заболеваний людей лептоспирозами: методические указания МУ 3.1.1128-02. / Москва; Минздрав России, 2002.), в котором для определения антител к L. canocola рекомендован эталонный штамм Hond Utrecht IY, выделенный в Голландии от собаки в 1931 году. Этот штамм был выбран за прототип. К недостаткам данного штамма можно отнести: во-первых, потерю ряда антигенных свойств в результате длительного (более 80 лет) культивтрования на искусственной питательной среде (Самохвалов А.П. Антигенные и иммуногенные свойства лептоспир в зависимости от сроков выделения // Эпизоотология, эпидемиология, средства диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней, общих для человека и животных: материалы Всесоюз. конф. - Львов, 1988. - С. 211.). Во-вторых, возможная гетерогенность антигенных свойств штаммов лептоспир выделенных на отдаленных друг от друга географических территориях.

Изобретение направлено на получение тест-штамма для выявления антител к L. canicola.

Разработанный штамм позволит осуществлять выявление антител к L. canicola в крови людей и животных, диагностировать лептоспироз, установить серогрупповую принадлежность возбудителя, вызвавшего заболевание, установить источник инфекции в очаге, а также проводить мониторинг за циркуляцией лептоспир серогруппы Canicola на территории России.

Технический результат: обеспечение наиболее эффективного выявления антител к L canicola, циркулирующих на территории России за счет выделения предлагаемого штамма на данной территории, выраженных антигенных свойств предлагаемого штамма «Хавизов» и использования его для серологической диагностики лептоспироза.

Полученный штамм Leptospira interrogans серогруппы Canicola серовара canicola №344 «Хавизов» выделен из крови человека больного тяжелой клинической формой лептоспироза в Санкт-Петербурге в 2014 году. Штамм депонирован в Международной коллекции эталонных штаммов патогенных и сапрофитных лептоспир Национального исследовательского центра эпидемиологии и микробиологии имени академика НФ. Гамалеи под номером 519.

Морфологические и физиологические характеристики. Грамотрицательные спирохеты с характерной морфологией и подвижностью, спор и капсул не образуют. Относятся к хемоорганотрофам и гидрофилам, культивируются на жидкой питательной среде. Лаг-фаза длится двое суток, экспотенциальная фаза характеризуется продолжительностью в 7 суток, время генерации 20 ч. В стационарной фазе наибольшая концентрация составляет (5,3±0,3)×107 лептоспир в 1 мл. Культивируются на жидкой фосфатно-сывороточной среде Терских, состоящей из 90% дистиллированной воды, 10% фосфатного буфера (рН=7,2) с добавлением 10% сыворотки кролика. Оптимальная температура культивирования - 28°С.

Генетические характеристики. На основании анализа нуклеотидной последовательности гена 16sRNA заявленного штамма, полученной в ходе секвенирования по Сенгеру, путем сравнения с известными нуклеотидными последовательностями, доступными в базе данных GenBank (www.ncbi.nlm.nih.gov). выявлено сходство с идентичностью 99% с нуклеотидной последовательностью гена 16SrRNA геномовида Leptospira interrogans, что позволяет отнести штамм к данному геномовиду.

Антигенные свойства: реакция микроагглютинации с сывороткой к L. Canicola положительная в разведении 1:51200.

По сравнению со штаммом аналогом в настоящем изобретении предлагается свежевыделенный штамм L. Canicola, выделенный на территории России. Известно, что «свежевыделенные штаммы лептоспир обладают наиболее выраженной антигенной активностью нежели штаммы, выделенные 10-30 лет тому назад»

Изобретение реализуется следующим образом.

Пример 1. Способ получения штамма

Штамм получен путем посева крови больного лептоспирозом человека на жидкую питательную фосфатно-сывороточную среду Терских, состоящую из 90% дистиллированной воды, 10% фосфатного буфера (рН=7,2) с добавлением 5% сыворотки кролика. Культивирование штамма осуществлялось при температуре - 28°С в течение 10 суток, с последующим определением серологической принадлежности и генотипированием штамма, изучением его биологических свойств.

Пример 2. Способ применения штамма

Для постановки РМА используют живую культуру L. canicola, выращенную на среде Терских с добавлением сыворотки кролика, со сроком культивировавния 7-14 суток. Культура должна иметь хорошую подвижность, накопление 5×107 клеток на 1 мл, что соответствует 50-100 лептоспирам в поле зрения микроскопа при увеличении ×400.

Исследуемую сыворотку разводят и титруют в физиологическом растворе, начиная с 1:50 с последующим двукратным разведением. Разведенную сыворотку и живую культуру L. canicola смешивают в равных объемах по 50 мкл в лунках полистироловых планшет. После экспозиции в течение 30 минут при комнатной температуре производят учет реакции.

Пример использования штаммов Hond Utrecht IY и «Хавизов» для выявления антител к L. canicola в крови больных лептоспирозом людей в Санкт-Петербурге представлен в таблице.

Таблица 1. Сравнение эффективности предлагаемого штамма и прототипа для выявления антител к L. Canicola.

Предлагаемый штамм, по сравнению с прототипом, позволяет выявлять антитела к L. canicola в более высоком разведении сывороток (более высокие титры антител).

Таким образом, заявленный штамм пригоден для детекции антител к L. canicola, что позволит диагностировать лептоспироз, установить серогрупповую принадлежность возбудителя, вызвавшего заболевание, установить источник инфекции в очаге, а также проводить мониторинг за циркуляцией лептоспир серогруппы Canicola на территории России.

Тест-штамм Leptospira interrogans серогруппы Canicola серовара canocola Международная коллекция эталонных штаммов патогенных и сапрофитных лептоспир Национального исследовательского центра эпидемиологии и микробиологии имени академика Н.Ф. Гамалеи номер 519 для детекции антител к L. canocola.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к клеточному сфероиду, его получению и оценке эффекта воздействия на функциональную активность меланоцитов.

Изобретение относится к способу использования маркерных белков сапробных групп индикаторных организмов для оценки экологического состояния окружающей среды. Способ предусматривает отбор пробы организмов из оцениваемой среды, проведение анализа аминокислотных последовательностей маркерных белков индикаторных организмов на определение участков аминокислотных последовательностей маркерных белков, уникальных для каждой сапробной группы индикаторных организмов.

Предложен способ отбора молочнокислого бактериального штамма, эффективного для лечения нарушения моторики кишечника. Указанный способ включает: a) стадию пространственно-временного (ST) картирования, которую осуществляют на желудочно-кишечном сегменте для того, чтобы анализировать эффект указанного молочнокислого бактериального штамма, оказываемый на моторику желудка и кишечника; b) стадию регистрации нервного пучка ex vivo, которую осуществляют на желудочно-кишечном сегменте для того, чтобы анализировать эффект указанного молочнокислого бактериального штамма, оказываемый на прохождение импульсов по брыжеечным афферентным нервам; и с) стадию выбора бактериального штамма, эффективного для лечения нарушения моторики кишечника, в соответствии с критериями отбора на основе эффектов указанного средства на моторику желудка и кишечника и на прохождение импульсов по брыжеечным афферентным нервам, проанализированных на стадии (а) и стадии (b), где критерии отбора варьируют в зависимости от нарушения моторики, которое желательно подлежит лечению.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммуногенным эпитопам URLC10, и может быть использовано в медицине для лечения пациента, страдающего раком.

Изобретение относится к области фармацевтической химии и технологии, а именно к синтезу 1,20-дибром-3,6,9,12,15,18-гексаоксаперфтор-4,7,10,11,14,17-гексаметилэйкозана, используемого для получения оксигенирующих прямых эмульсий медицинского и биотехнологического назначения, например для лечения ожогов.

Группа изобретений относится к композиции для ухода за полостью рта и способу ее применения. Предлагаемая композиция для ухода за полостью рта содержит эффективное количество пребиотика сахарида для избирательной стимуляции роста, метаболической активности или колонизации бактерий, благоприятно влияющих на здоровье полости рта, выбранных из группы, состоящей из Streptococcus mitis, Streptococcus salivarius, Streptococcus sanguinis, Actinomyces viscosus, Veillonella parvula, Streptococcus gordonii, Actinomyces naeslundii, предпочтительных по отношению к росту, метаболической активности или колонизации патогенных бактерий полости рта, где пребиотик сахарид представляет собой N-ацетил-D-маннозамин, взятый в количестве от 0,1 до 5 мас.% от общей массы композиции.

Группа изобретений относится к композиции для ухода за полостью рта и способу ее применения. Предлагаемая композиция для ухода за полостью рта содержит эффективное количество пребиотика сахарида для избирательной стимуляции роста, метаболической активности или колонизации бактерий, благоприятно влияющих на здоровье полости рта, выбранных из группы, состоящей из Streptococcus mitis, Streptococcus salivarius, Streptococcus sanguinis, Actinomyces viscosus, Veillonella parvula, Streptococcus gordonii, Actinomyces naeslundii, предпочтительных по отношению к росту, метаболической активности или колонизации патогенных бактерий полости рта, где пребиотик сахарид представляет собой N-ацетил-D-маннозамин, взятый в количестве от 0,1 до 5 мас.% от общей массы композиции.

Изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской микробиологии, и предназначено для определения типа противомикробного действия фармакологических веществ в процессе изучения их противомикробной активности.

Изобретение относится к технике исследования механических свойств материалов. Способ включает в себя подготовку стерильной плотной питательной среды (СППС, представляющей собой водный раствор с рН 7,2±0,3, содержащий 13-19 г/л агар-агара + 8-12 г/л сахарозы + 1,3-1,9 г/л NH4NO3 + 0,4-0,6 г/л KH2PO4 + 0,4-0,6 г/л NaH2PO4 + 0,6-0,8 г/л (NH4)2SO4 + 0,18-0,22 г/л Mg(NO3)2 + 0,05-0,07 г/л FeCl3 + 0,018-0,022 г/л CaCl2), подготовку плотной питательной среды с тестовыми микроорганизмами (МППС, состоящей из СППС с выращенной на ее поверхности сплошной колонией Rhodotorula sp.

Изобретение относится к технике исследования механических свойств материалов. Способ включает в себя подготовку стерильной плотной питательной среды (СППС, представляющей собой водный раствор с рН 7,2±0,3, содержащий 13-19 г/л агар-агара + 8-12 г/л сахарозы + 1,3-1,9 г/л NH4NO3 + 0,4-0,6 г/л KH2PO4 + 0,4-0,6 г/л NaH2PO4 + 0,6-0,8 г/л (NH4)2SO4 + 0,18-0,22 г/л Mg(NO3)2 + 0,05-0,07 г/л FeCl3 + 0,018-0,022 г/л CaCl2), подготовку плотной питательной среды с тестовыми микроорганизмами (МППС, состоящей из СППС с выращенной на ее поверхности сплошной колонией Rhodotorula sp.

Изобретение относится к области биотехнологии. Штамм Rhodococcus ruber ИЭГМ 346, обладающий способностью полностью деструктировать диклофенак натрия, депонирован в Национальном биоресурсном центре - Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (НБЦ ВКПМ) ФГБУ ГосНИИгенетика НИЦ «Курчатовский институт» под регистрационным номером ВКПМ Ас-2106.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения белковой биомассы. Предлагается штамм бактерий Methylococcus capsulatus, депонированный во Всероссийской коллекции микроорганизмов ИБФМ им.

Изобретение относится к иммунобиотическому комплексу для нормализации кишечной микрофлоры организма. Указанный комплекс включает сухую микробную массу живых бактерий и биологически активные вещества (БАВ).

Изобретение относится к микробиологии. Способ производства сухих солей желчных кислот из нативной желчи крупного рогатого скота предусматривает осветление нативной желчи путем добавления активированного угля, прогреванием смеси до заданной температуры и охлаждением с последующей фильтрацией с получением осветленной желчи.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм лактобактерий Enterococcus hirae Т-8 13-2018, обладающий способностью продуцировать молочную кислоту и высокой антагонистической активностью по отношению к условно-патогенной и патогенной микрофлоре депонированный под регистрационным номером ВКПМ В-13055.

Изобретение относится к микробиологии. Изобретение касается нового штамма (вида) микроорганизма – продуцента актифенола.
Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Lactobacillus plantarum Лб (н)37 2-2018, обладающий антагонистической активностью по отношению к условно-патогенной и патогенной микрофлоре, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ В-13052.

Изобретение относится к клинической и санитарной микробиологии. Питательная среда для выделения клебсиелл содержит панкреатический гидролизат рыбной муки, пептон мясной, дрожжевой экстракт, мезо-инозит, натрий хлористый, соли желчных кислот, кристаллический фиолетовый, нейтральный красный, натрий углекислый, карбенициллин, агар микробиологический и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для изготовления вакцинных препаратов. Предложен способ получения вакцины гемофильной тип b конъюгированной.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к применению штамма Rickettsia raoultii «Шайман» генотипа DnSH, депонированного во Всероссийском музее риккетсиозных культур ФГБУ «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им.
Изобретение относится к бактериологии. Предложен штамм Salmonella enterica sbsp. enterica serovar Typhi B-8453, характеризующийся устойчивостью низкого уровня к фторхинолонам, обусловленной мутацией в хромосомном гене gyrA вида Ser83Tyr. Предложенный штамм депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ-Оболенск» под регистрационным номером B-8453. Штамм может быть использован в качестве контрольного штамма для фенотипических (детекция устойчивости низкого уровня к фторхинолонам) и молекулярных (детекция мутации в гене gyrA вида Ser83Tyr) исследований при диагностике брюшного тифа. 4 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к штамму бактерий Leptospira interrogans серогруппы Canicola серовара canicola для детекции антител к L. canocola. Вышеуказанный штамм депонирован в Международной коллекции эталонных штаммов патогенных и сапрофитных лептоспир Национального исследовательского центра эпидемиологии и микробиологии имени академика Н.Ф. Гамалеи под номером 519. Изобретение позволяет эффективно проводить эпидемиологическое расследование спорадических и групповых заболеваний лептоспирозом: серологическая диагностика, установление источника инфекции в очаге заболевания, а также мониторинг за распространением лептоспироза, вызванного возбудителями серогруппы Canicola как среди людей, так и среди различных видов животных. 1 табл., 2 пр.

Наверх