Гуманизированные тау-антитела при болезни альцгеймера

Авторы патента:

ШКРАБАНА Ростислав (SK)

КОВАЧЕХ Бранислав (SK)

НОВАК Михал (SK)

КОНТСЕКОВА Ева (SK)

G01N33/6896 - Исследование или анализ материалов особыми способами, не отнесенными к предыдущим группам

G01N33/68 - с использованием протеинов, пептидов или аминокислот

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

C07K16/18 - против материала из животных или человека

A61P25/28 - для лечения нейродегенеративных заболеваний центральной нервной системы, например ноотропные агенты, агенты для усиления умственных способностей, для лечения болезни Альцгеймера или других форм слабоумия

A61K39/395 - антитела (агглютинины A61K 38/36); иммуноглобулины; иммунные сыворотки, например антилимфоцитные сыворотки

Владельцы патента RU 2730668:

АКСОН НЬЮРОСАЙЕНС СЕ (CY)

Изобретение относится к области биохимии, в частности к гуманизированному антителу против тау-белка или его тау-связывающему фрагменту, фармацевтической композиции, иммуноконъюгату, а также диагностическому реагенту, его содержащему. Также раскрыта молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая вышеуказанное антитело или его фрагмент, а также вектор и клетка-хозяин, ее содержащие. Изобретение также относится к способу получения гуманизированного антитела против тау-белка или тау-связывающего фрагмента, предусматривающему использование вышеуказанной клетки. Изобретение позволяет эффективно осуществлять профилактику или лечение таутопатии. 14 н. и 14 з.п. ф-лы, 46 ил., 10 табл., 7 пр.

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

Настоящая заявка содержит список последовательностей, представленный в электронном виде в формате ASCII через EFS-Web и включенный в настоящий документ в качестве ссылки в полном объеме. Указанная копия ASCII, созданная 19 ноября 2014 года, называется 11634.6003.00000_SL.txt и имеет размер 284497 байт.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к области биохимии, молекулярной биологии и диагностики, профилактики и лечения болезни Альцгеймера. В настоящем документе предложены гуманизированные антитела против тау-белка человека, которые способны различать нормальный (здоровый) и патологический (связанный с заболеванием) тау-белок.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Болезнь Альцгеймера (AD) является прогрессирующим нейродегенеративным расстройством, которое разрушает высокие структуры головного мозга, такие как структуры, связанные с памятью и мыслительным процессом. Заболевание приводит к дефициту когнитивных функций и снижению памяти, обучения, языковых навыков и способности выполнять преднамеренные и целенаправленные движения. Существует потребность в эффективных способах и композициях для лечения и профилактики AD.

AD гистологически характеризуется наличием экстранейрональных бляшек и внутриклеточных и внеклеточных нейрофибриллярных клубков в головном мозге. Бляшки главным образом состоят из β амилоида (Αβ), тогда как клубки содержат патологические формы тау-белка, такие как патологические конформеры тау-белка и их агрегаты. Подтвержденная роль тау-белка в патологии AD была продемонстрирована в многочисленных исследованиях. Например, в статье Braak показано, что ближайшим аналогом нейродегенерации AD является наличие клубков тау-белка, а не амилоидных бляшек (Braak, H., et al. Neuropathological stageing of Alzheimer-related changes. Acta Neuropathol 82:239-259 (1991)).

Тау-белок относится к семейству белков, отличающихся неупорядоченной структурой и характеризующихся отсутствием жесткой трехмерной структуры в их физиологической среде (Skrabana et al., 2006).Однако усечение тау-белка и гиперфосфорилирование может вызвать патологические трансформации состояния, отличающегося неупорядоченной структурой, во множественные растворимые и нерастворимые патологические беспорядочные структуры, включая парные спиральные нити (PHF) и другие агрегаты (Wischik, C.M., Novak, M., Edwards, P.C., Klug, A., Tichelaar, W., Crowther, R.A. (1988). Structural characterization of the core of the paired helical filament of Alzheimer disease, Proc Natl Acad Sci USA 85,4884-8; Wischik, C.M., Novak, M. Thøgersen, H.C., Edwards, P.C., Runswick, M.J., Jakes, R., Walker, J.E., Milstein, C., Roth, M., Klug, A.(1988).Isolation of a fragment of tau derived from the core of the paired helical filament of Alzheimer disease, Proc Natl Acad Sci USA 85, 4506-10; Novak et al., 1993; Skrabana et al.,2006; Zilka, N., et al. Chaperone-like Antibodies Targeting Misfolded Tau Protein: New Vistas in the Immunotherapy of Neurodegenerative Foldopathies. Journal of Alzheimer's disease 15 (2008) 169-179; Kovacech B, Novak M.(2010). Tau truncation is a productive posttranslational modification of neurofibrillary degeneration in Alzheimer's disease. Curr Alzheimer Res Dec;7(8):708-16); Kovacech B, Skrabana R, Novak M.(2010). Transition of tau protein from disordered to misordered in Alzheimer's disease. Neurodegener Dis 7:24-27). Эти структурные изменения приводят к токсическому усилению функции, к потере физиологической функции нативного белка или к тому и другому (Zilka et al., 2008; Kovacech B, Novak M. (2010). Tau truncation is a productive posttranslational modification of neurofibrillary degeneration in Alzheimer's disease. Curr Alzheimer Res Dec;7(8):708-16); Kovacech B, Skrabana R, Novak M. (2010).Transition of tau protein from disordered to misordered in Alzheimer's disease. Neurodegener Dis 7:24-27).).

Физиологическая функция тау-белка заключается в опосредовании сборки мономеров тубулина в микротрубочки, которые составляют сеть микротрубочек нейронов (Buee, L., Bussiere, T., Buee-Scherrer, V., Delacourte, A., Hof, P.R.(2000). Tau protein isoforms, phosphorylation and role in neurodegenerative disorders. Brain Research.Brain Research Reviews.33, 95-130).Tau binds to microtubules through repetitive regions located in the C-terminal portion of the protein. Butner KA, Kirschner MW.1991.Tau protein binds to microtubules through a flexible array of distributed weak sites. J Cell Biol 115:717-730; Lee G, Neve RL, Kosik KS. 1989.The microtubule binding domain of tau protein. Neuron 2:1615-1624..Эти повторяющиеся домены (R1-R4) не идентичны друг другу, но содержат высококонсервативные 31-32 аминокислоты (Taniguchi T, Sumida M, Hiraoka S, Tomoo K, Kakehi T, Minoura K, Sugiyama S, Inaka K, Ishida T, Saito N, Tanaka C 2005 (Effects of different anti-tau antibodies on tau fibrillogenesis:RTA-1 and RTA-2 counteract tau aggregation. FEBS Lett 579:1399-1404; Taniguchi S, Suzuki N, Masuda M, Hisanaga S, Iwatsubo T, Goedert M, Hasegawa M. Inhibition of heparin-induced tau filament formation by phenothiazines, polyphenols, and porphyrins. J Biol Chem 280:7614-7623 (2005)). В человеческом мозге существует шесть уникальных изоформ тау-белка, которые отличаются друг от друга наличием или отсутствием определенных аминокислот в N-концевой части тау-белка в комбинации либо с тремя (R1, R3 и R4), либо с четырьмя (R1-R4) повторяющимися доменами на С-конце белка. См. также фигуру1, на которой показано шесть изоформ человека (2N4R, 1N4R, 2N3R, 0N4R, 1N3R и 0N3R с SEQ ID NO:151-156, соответственно, по порядку).).Было высказано предположение, что наиболее сильнодействующей частью тау-белка, вызывающей полимеризацию микротрубочек, является последовательность 306-VQIVYK-311 (SEQ ID NO:146) и 274-KVQIINKK-281 (SEQ ID NO:144), перекрывающие R1-R2.(von Bergen M, Friedhoff P, Biernat J, Heberle J, Mandelkow EM, Mandelkow E. 2000.Assembly of tau protein into Alzheimer paired helical filaments depends on a local sequence motif ((306)VQIVYK(311)) forming beta structure. Proc Natl Acad Sci U S A 97:5129-5134.)

Кроме того, патологические и физиологические функции тау-белка, по-видимому, влияют на специфическую структурную конформацию и природную неупорядоченную структуру, которую принимают полноразмерные изоформы белка и их фрагменты. Например, в статье Kontsekova et al. описан конформационный участок (включающий остатки 297-IKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSL-325 (SEQ ID NO:145) в пределах некоторых усеченных молекулах тау, которые отказывают значительное влияние на функцию этих укороченных молекул тау при сборке микротрубочек (WO 2004/007547).

Кроме их физиологической роли, считается, что повторы тау-белка связаны с формированием патологических агрегатов и других структур тау-белка. Таким образом, существует потребность в терапевтических и диагностических подходах, направленных на тау-белок, которые способны различать физиологическую и патологическую активность микротрубочек по связыванию с повторяющимися областями. Например, устойчивое к действию протеиназы ядро патологических спаренных спиральных филаментов (PHF) состоит из областей связывания микротрубочек с 3- и 4-повторами изоформ тау-белками (Jakes, R., Novak, M., Davison, M., Wischik, C.M. (1991).Identification of 3- and 4-repeat tau isoforms within the PHF in Alzheimer's disease. EMBO J 10, 2725-2729; Wischik, et al. 1988a; Wischik, et al. 1988b).Кроме того, в статье Novak et al. показано, что устойчивое к действию протеазы ядро PHF, длина которого составляет 93-95 аминокислот, ограничено тремя тандемными повторами (Novak, M., Kabat, J., Wischik, C.M.(1993). Molecular characterization of the minimal protease resistant tau unit of the Alzheimer's disease paired helical filament. EMBO J 12, 365-70). В статье Von Bergen et al. был определен минимальный тау-пептидный/взаимодействующий мотив (306-VQIVYK-311; SEQ ID NO:146), а также второй сайт тау-белка (275-VQIINK-280) (SEQ ID NO:147), которые образуют структуры бета-листов и описаны как вероятно ответственные за инициирование образования PHF, патологического агрегата тау-белка (von Bergen M, Friedhoff P, Biernat J, Heberle J, Mandelkow EM, Mandelkow E. 2000.Assembly of tau protein into Alzheimer paired helical filaments depends on a local sequence motif ((306)VQIVYK(311)) forming beta structure. Proc Natl Acad Sci U S A 97:5129-5134); EP 1214598; WO 2001/18546).См. фигуру 2, где показана функциональная карта тау-белка. Следовательно, современные стратегии нацелены на получение лекарственных средств против агрегатов, которые не нарушают внутриклеточную роль тау-белка в стабилизации микротрубочек.

Более того, в то время как при физиологических условиях тау-белок считается внутриклеточным цитоплазматическим белком, внутриклеточный тау-белок может высвобождаться во внеклеточное пространство и способствовать нейродегенерации (Gómez-Ramos, A., Díaz-Hernández, M., Cuadros, R., Hernández, F., and Avila, J.(2006). Extracellular tau is toxic to neuronal cells. FEBS Lett 580(20), 4842-50).Действительно, потеря нейронов связана с топографическим распределением нейрофибриллярных клубков (состоящих из тау-белка) в мозге при AD (West, M.J., Coleman, P.D., Flood, D.G.,Troncoso, J.C. (1994).Differences in the pattern of hippocampal neuronal loss in normal ageing and Alzheimer's disease. Lancet 344,769-72; Gómez-Isla, T., Price, J.L., McKeel Jr, D.W., Morris, J.C., Growdon, J.H., Hyman, B.T.(1996).Profound loss of layer II entorhinal cortex neurons occurs in very mild Alzheimer's disease. J Neurosci 16(14),4491-500; Gomez-Isla T, Hollister R, West H, Mui S, Growdon JH, Petersen RC, Parisi JE, Hyman BT. Neuronal loss correlates with but exceeds neurofibrillary tangles in Alzheimer's disease. Ann Neurol 41:17-24 (1997)).Кроме того, уровни общего тау-белка и фосфорилированного тау-белка увеличиваются в цереброспинальной жидкости (CSF) у пациентов с AD (Hampel, H., Blennow, K., Shaw, L.M., Hoessler, Y.C., Zetterberg, H., Trojanowski, J.Q. (2010).Total and phosphorylated tau protein as biological markers of Alzheimer's disease. Exp Gerontol 45(1), 30-40) и внеклеточный тау-белок был описан как "призрачные клубкиʺ в мозге (Frost, B., Diamond, M.I. (2009).The expanding realm of prion phenomena in neurodegenerative disease. Prion 3(2):74-7), что указывает на то, что внутриклеточный тау-белок высвобождается во внеклеточное пространство. Кроме того, внеклеточные агрегаты тау-белка могут проникать в клетки и стимулировать образование фибрилл внутриклеточного тау-белка, дополнительно распространяя тау мономер для продукции агрегатов патологического тау-белка (Frost et al.,2009).Такие исследования показали что внеклеточный нерастворимый тау-белок может выступать в качестве трансмиссивного агента, распространяя патологию, вызываемую тау-белком, по всему мозгу прионо-подобным образом (Frost, B., Jacks, R.L., Diamond, M.I. (2009).Propagation of tau misfolding from the outside to the inside of a cell. J Biol Chem 284(19),12845-52; Frost et al., 2009; Frost, B., Diamond, M.I. (2009).The expanding realm of prion phenomena in neurodegenerative disease. Prion 3(2):74-7). Нацеливание на патологический тау-белок может уменьшить патологию, связанную с внеклеточным и внутриклеточным тау-белком. См. Eva Kontsekova, Norbert Zilka, Branislav Kovacech, Petr Novak, Michal Novak. 2014.First-in-man tau vaccine targeting structural determinants essential for pathological tau-tau interaction reduces tau oligomerisation and neurofibrillary degeneration in an Alzheimer's disease model. Alzheimer's Research & Therapy, 6:44.Таким образом существует необходимость в лечебных подходах, способных уменьшать внеклеточный тау-белок либо предотвращая его формирование, либо ускоряя его выведение, либо и то, и другое, а также в лечебных подходах, которые уменьшают патологический внутриклеточный тау-белок. Более ясное понимание молекулярных механизмов, лежащих в основе патологической трансформации тау-белка, делает возможным специфическое нацеливание на патологические модификации тау-белка в терапевтических целях.

В международной публикации №WO 2013141962, Novak et al., описано обнаружение четырех областей тау-белка, которые стимулируют агрегацию тау-тау при AD, и раскрыты антитела, которые предотвращают агрегацию тау-белка за счет связывания этих четырех областей.

Не смотря на то, что в других исследованиях описаны антитела, которые связываются с последовательностями тау-белка, и сообщается о том, что некоторые из этих антител, влияют на агрегацию и выведение тау-белка (Asuni AA, Boutajangout A, Quartermain D, Sigurdsson EM. Immunotherapy targeting pathological tau conformers in a tangle mouse model reduces brain pathology with associated functional improvements. J Neurosci 27:9115-9129 (2007)), о моноклональных антителах против тау-белка, с которыми проводят клинические испытания для лечения AD, не сообщалось.

Успеху чужеродных (мышиных) моноклональных антител при лечении человека отчасти препятствовали иммуногенные антиглобулиновые ответы, индуцируемые человеком-реципиентом против таких чужеродных терапевтических средств. Они ухудшают как безопасность, так и фармакокинетические свойства антител. Эти проблемы привели к разработке антител с более низким риском иммунных реакций методами генной инженерии. Целый ряд запатентованных технологий генной инженерии (например, химеризация, гуманизация, трансплантация CDR, трансплантация каркасной области, созревание аффинности, фаговый дисплей, трансгенные мыши) постоянно разрабатываются для облегчения этого процесса. Недавний обзор см. в статье Safdari Y1, Farajnia S, Asgharzadeh M, Khalili M.Antibody humanization methods - a review and update. 2013.Biotechnol Genet Eng Rev. 29:175-86. doi:10.1080/02648725.2013.801235 and Almagro JC1, Fransson J. Humanization of antibodies. 2008.Front Biosci. 13:1619-33.

Гуманизированные антитела сконструированы, в первую очередь, для сохранения специфичности и аффиности исходного антитела, при этом имеющего константные области человека, что в идеале должно давать меньшую иммуногенную мишень для пациента. Типичное гуманизированное антитело содержит области, определяющие комплементарность (CDR) исходного антитела, имеющего мышиное или крысиное происхождение, и каркасные (FR) и константные области, которые в основном имеют человеческое происхождение, но часто мутированные для сохранения связывающих свойств исходного антитела. Однако антиген-связывающая аффинность и специфичность не являются единственными факторами, влияющими на биологическую активность и клиническую эффективность антитела. Улучшение активации антител иммунной системой пациента является важным фактором для некоторых гуманизированных антител, тогда как в других случаях целью является снизить клеточную токсичность. В конечном счете, более глубокое понимание структуры и активности антител позволяет исследователям создавать методами генной инженерии, часто посредством мутаций, гуманизированные антитела с улучшенными свойствами, которые являются более гомогенными и имеют улучшенные антиген-связывающие свойства (аффинность связывания, специфичность к мишени), эффекторные функции, стабильность, уровень экспрессии, свойства очистки, фармакокинетические и фармакодинамические свойства.Многие из этих улучшений важны для коммерческой жизнеспособности данного антитела. Иногда после того, как достигается аффинность связывания с мишенью и специфичность, необходимо мутировать некоторые из аминокислот в CDR или FR для уменьшения способности к агрегации гуманизированных антител. В других случаях изменяют (переключают или мутируют) константные области для улучшения эффекторных функций. Эти и другие аспекты функции и активности антител все еще создают проблемы при разработке антител для клинического применения. Ниже раскрыт набор гуманизированных антител против тау-белка, которые в результате конструирования обладают неожиданными благоприятными свойствами. Также ниже представлены новые способы и композиции, содержащие эти высокоспецифичные и высокоэффективные антитела, обладающие способностью специфически распознавать и связываться с патологическим тау-белком, препятствуя его агрегации. Все эти антитела, способы и композиции могут использоваться для диагностики и лечения AD и связанных таупатий.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Эти и другие объекты, признаки и преимущества настоящего изобретения станут очевидными после рассмотрения нижеследующего подробного описания раскрытого варианта осуществления и прилагаемой формулы изобретения.

Объектом изобретения является гуманизированное антитело против тау-белка или его тау-связывающий фрагмент, где указанное антитело или связывающий фрагмент содержит:

вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 с SEQ ID NO:1, 2, 3 соответственно, и каркасную область иммуноглобулина человека M65092 (SEQ ID NO:71);

вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 с SEQ ID NO:4, 5, 6, соответственно, и каркасную область иммуноглобулина человека X72449 (SEQ ID NO:65); а также

константные области тяжелой цепи и легкой цепи, каждая из иммуноглобулина человека; и где каркасная область тяжелой цепи замещена в одном или нескольких положениях, выбранных из 9, 21, 27, 28, 30, 38, 48, 67, 68, 70 и 95; указанная каркасная область легкой цепи либо не замещена, либо замещена в положении 5; и где указанные положения соответствую нумерации Kabat. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами.

Такие антитела и связывающие фрагменты также рассматриваются в форме, когда положение 9 тяжелой цепи занято P, положение 21 занято P, положение 27 занято Y, положение 28 занято I, положение 30 занято T, положение 38 занято K, положение 48 занято I, положение 67 занято K, положение 68 занято A, положение 70 занято L, и/или положение 95 занято F. В одном из вариантов осуществления положение 5 легкой цепи занято S. В некоторых вариантах осуществления по сути только два из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути только три из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути только четыре из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути только пять из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути только шесть из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути только семь из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути только восемь из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути только девять из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути только десять из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути все 11 из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в которых последовательность вариабельной области тяжелой цепи выбрана из RHA-RHM, SEQ ID NO:13-25, соответственно; и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26 (RKA).

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:13, RHA, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:14, RHB, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:15, RHC, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:16, RHD, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:17, RHE, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:18, RHF, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:19, RHG, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:20, RHH, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:21, RHI, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:22, RHJ, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:23, RHK, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:24, RHL, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:25, RHM, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:14, RHB, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:15, RHC, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:16, RHD, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:17, RHE, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:18, RHF, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:19, RHG, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:20, RHH, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:21, RHI, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:22, RHJ, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:23, RHK, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:24, RHL, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:25, RHM, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:14, RHB, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA, и константная область представляет собой изотип IgG1.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:16, RHD, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA, и константная область представляет собой изотип IgG1.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:17, RHE, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA, и константная область представляет собой изотип IgG1.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:25, RHM, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA, и константная область представляет собой изотип IgG1.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RHD, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB, и константная область представляет собой изотип IgG1.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:17, RHE, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB, и константная область представляет собой изотип IgG1.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:16, RHD, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB, и константная область представляет собой изотип IgG4.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:17, RHE, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB, и константная область представляет собой изотип IgG4.

Также раскрыто гуманизированное антитело против тау-белка или его тау-связывающий фрагмент, где указанное антитело или связывающий фрагмент содержит:

вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 с SEQ ID NO:1, 2, 3 соответственно, и каркасную область иммуноглобулина человека M65092 (SEQ ID NO:71); и

вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 с SEQ ID NO:4, 5, 6, соответственно, и каркасную область иммуноглобулина человека X72449 (SEQ ID NO:65); и

константные области тяжелой цепи и легкой цепи иммуноглобулина человека, предпочтительно IgG1 или IgG4.

Дополнительно раскрыто антитело против тау-белка или его тау-связывающий фрагмент, где указанное антитело или связывающий фрагмент содержит следующие полные цепи:

тяжелую цепь с любой аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO:28-40; и

вариабельный домен легкой цепи с любой аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO:26 и 27. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами.

тяжелую цепь с любой аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO:43-55; и

легкую цепь, содержащую вариабельный домен легкой цепи с любой аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO:26 и 27. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами.

тяжелую цепь с любой аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO:43-55; и

легкую цепь с любой аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO:57 и 58. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами.

тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:31; и

легкую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:57. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами.

тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:32; и

легкую цепь с любой аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO:57. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами.

тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:31; и

легкую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:58. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами.

тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:32; и

легкую цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:58 и 27. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами.

тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:46; и

тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:47; и

тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:46; и

тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:47; и

Также раскрыто антитело, содержащее:

вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 с SEQ ID NO:1, 2, 3, и которая по меньшей мере на 85% идентична любой из SEQ ID NO: RHA, SEQ ID RHB, SEQ ID RHC, SEQ ID RHD, SEQ ID RHE, SEQ ID RHF, SEQ ID RHG, SEQ ID RHH, SEQ ID RHI, SEQ ID RHJ, SEQ ID RHL, SEQ ID RHM, то есть, SEQ ID NO:13-25;

и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 с SEQ ID NO:4, 5, 6, соответственно, и которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO:26, RKA, где антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами. В некоторых вариантах осуществления антитело является химерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гуманизированным.

Также раскрыто антитело, содержащее:

вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 с SEQ ID NO:1, 2, 3, и которая по меньшей мере на 90% идентична любой из SEQ ID NO: RHA, SEQ ID RHB, SEQ ID RHC, SEQ ID RHD, SEQ ID RHE, SEQ ID RHF, SEQ ID RHG, SEQ ID RHH, SEQ ID RHI, SEQ ID RHJ, SEQ ID RHL, SEQ ID RHM, то есть, SEQ ID NO:13-25;

и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 с SEQ ID NO:4, 5, 6, соответственно, и которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO:26, RKA, где антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами. В некоторых вариантах осуществления антитело является химерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гуманизированным.

Также раскрыто антитело, содержащее:

вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 с SEQ ID NO:1, 2, 3, и которая по меньшей мере на 95% идентична любой из SEQ ID NO: RHA, SEQ ID RHB, SEQ ID RHC, SEQ ID RHD, SEQ ID RHE, SEQ ID RHF, SEQ ID RHG, SEQ ID RHH, SEQ ID RHI, SEQ ID RHJ, SEQ ID RHL, SEQ ID RHM, то есть, SEQ ID NO:13-25;

и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 с SEQ ID NO:4, 5, 6, соответственно, и которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO:26, RKA, где антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами. В некоторых вариантах осуществления антитело является химерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гуманизированным.

Такие антитела и связывающие фрагменты согласно трем предыдущим параграфам также предусматриваются в форме, когда положение 9 тяжелой цепи занято P, положение 21 занято P, положение 27 занято Y, положение 28 занято I, положение 30 занято T, положение 38 занято K, положение 48 занято I, положение 67 занято K, положение 68 занято A, положение 70 занято L, и/или положение 95 занято F. В одном из вариантов осуществления положение 5 легкой цепи занято S. В некоторых вариантах осуществления по сути только два из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути только три из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути только четыре из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути только пять из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути только шесть из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути только семь из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути только восемь из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути только девять из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути только десять из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления по сути все 11 из этих 11 положений заняты. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами.

Также раскрыто антитело, содержащее:

и зрелую вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 с SEQ ID NO:4, 5, 6, соответственно, и которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO:27, RKB, где антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами. В некоторых вариантах осуществления антитело является химерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гуманизированным.

Также раскрыто антитело, содержащее:

и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 с SEQ ID NO:4, 5, 6, соответственно, и которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO:27, RKB, где антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами. В некоторых вариантах осуществления антитело является химерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гуманизированным.

Также раскрыто антитело, содержащее:

и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 с SEQ ID NO:4, 5, 6, соответственно, и которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO:27, RKB, где антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами. В некоторых вариантах осуществления антитело является химерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гуманизированным.

В настоящем описании также представлено и раскрыто антитело всех предыдущих параграфов этого раздела ("Сущность изобретения"), где указанное антитело или связывающий фрагмент представляет собой Fab, Fab', F(ab')2, Fd, scFv, (scFv)2 или scFv-Fc. В некоторых вариантах осуществления такое антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами.

В настоящем описании также представлено и раскрыто антитело предыдущих параграфов этого раздела, где указанное антитело или связывающий фрагмент представляет собой антитело IgG1, IgG2, IgG3, или IgG4. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами.

В настоящем описании также представлено и раскрыто антитело всех предыдущих параграфов этого раздела, где указанное антитело или связывающий фрагмент представляет собой антитело IgG1. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами.

В настоящем описании также представлено и раскрыто антитело предыдущих параграфов этого раздела, где указанное антитело или связывающий фрагмент является гликозилированным. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами.

В настоящем описании также представлено и раскрыто антитело всех предыдущих параграфов этого раздела, где указанное антитело или связывающий фрагмент связывается с тау 151-391/4R с аффинностью (KD), равной по меньшей мере 5×10-7. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами. В некоторых вариантах осуществления антитело является химерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гуманизированным. В некоторых вариантах осуществления аффинность связывания измеряют с помощью SPR. В некоторых вариантах аффинность связывания измеряют с помощью ELISA.

В настоящем описании также представлено и раскрыто антитело предыдущих параграфов этого раздела, где указанное антитело или связывающий фрагмент связывается с тау по меньшей мере на 80% с той же аффинностью связывания, по существу с той же аффинностью связывания или с большей аффинностью связывания, чем антитело DC8E8, секретируемое гибридомой PTA-11994, депонированной в Американской коллекции типовых культур. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами. В некоторых вариантах осуществления антитело является химерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гуманизированным. В некоторых вариантах осуществления аффинность связывания измеряют с помощью SPR. В некоторых вариантах аффинность связывания измеряют с помощью ELISA.

В настоящем описании также представлено и раскрыто антитело предыдущих параграфов этого раздела, где указанное антитело конкурирует за связывание с тау-белком по меньшей мере на одном и том же эпитопе с антителом DC8E8, секретируемым гибридомой PTA-11994, депонированной в Американской коллекции типовых культур. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами. В некоторых вариантах осуществления антитело является химерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гуманизированным.

В настоящем описании также представлено и раскрыто антитело предыдущих параграфов этого раздела, где указанное антитело получают рекомбинантным путем. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами. В некоторых вариантах осуществления антитело является химерным. В некоторых вариантах осуществления антитело является гуманизированным.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент предыдущих четырех параграфов также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, где последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:14, RHB, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA. Необязательно, антитело и связывающий фрагмент представляют собой изотип IgG1.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент первых четырех из предыдущих пяти абзацев также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, где последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:16, RHD, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA. Необязательно, антитело и связывающий фрагмент представляют собой изотип IgG1.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент первых четырех из предыдущих шести абзацев также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, где последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:17, RHE, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA. Необязательно, антитело и связывающий фрагмент представляют собой изотип IgG1.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент первых четырех из предыдущих семи абзацев также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, где последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:25, RHM, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA. Необязательно, антитело и связывающий фрагмент представляют собой изотип IgG1.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:14, RHB, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA. Необязательно, антитело и связывающий фрагмент представляют собой изотип IgG4.

В некоторых других вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, где последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:16, RHD, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA. Необязательно, антитело и связывающий фрагмент представляют собой изотип IgG4.

В некоторых других вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, где последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:17, RHE, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA. Необязательно, антитело и связывающий фрагмент представляют собой изотип IgG4.

В некоторых других вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, где последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:25, RHM, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA. Необязательно, антитело и связывающий фрагмент представляют собой изотип IgG4.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:14, RHB, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB, и константная область представляет собой изотип IgG1.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:14, RHB, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB, и константная область представляет собой изотип IgG4.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент, первых четырех из предыдущих восьми абзацев также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, где последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RHD, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB, и константная область представляет собой изотип IgG1.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент первых четырех из предыдущих девяти абзацев также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, где последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:17, RHE, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB, и константная область представляет собой изотип IgG1.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент первых четырех из предыдущих десяти абзацев также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, где последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:16, RHD, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB, и константная область представляет собой изотип IgG4.

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент первых четырех из предыдущих одиннадцати абзацев также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, где последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:17, RHE, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:27, RKB, и константная область представляет собой изотип IgG4.

В настоящем описании также представлено и раскрыто антитело предыдущих параграфов этого раздела, где указанное антитело получают рекомбинантным путем в линии клеток яичника китайского хомяка (CHO). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами.

В настоящем описании также представлено и раскрыто антитело предыдущих параграфов этого раздела, где указанное антитело или связывающий фрагмент содержит Fс-область, в которой была изменена эффекторная функция, время полураспада, протеолиз и гликозилирование. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с одним или двумя эпитопами, выбранными из HQPGGG (SEQ ID NO:148), HVPGGG (SEQ ID NO:149) и HKPGGG (SEQ ID NO:150). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается со всеми тремя эпитопами.

Ниже приведены четырнадцать примеров вариантов осуществления предыдущих двух абзацев:

В некоторых вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, в котором последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:14, RHB, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA. Необязательно, антитело и связывающий фрагмент представляют собой изотип IgG1.

В некоторых других вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, где последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:17, RHE, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA. Необязательно, антитело и связывающий фрагмент представляют собой изотип IgG1.

В некоторых других вариантах осуществления антитело и связывающий фрагмент также представляют собой антитело и связывающий фрагмент, где последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:25, RHM, и последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:26, RKA. Необязательно, антитело и связывающий фрагмент представляют собой изотип IgG1.