Способ мультипликации подвойного материала л-2 в условиях in vitro
Владельцы патента RU 2749614:
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Чеченский государственный университет" (RU)
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения подвойного материала (Л-2) в условиях in vitro, черенкование пробирочных растений и высадку одноузловых черенков на агаризованную питательную среду, содержащую макро- и микроэлементы и витамины на основе прописи питательной среды, Fe-хелат, агар-агар, сахарозу, при этом в питательную среду добавляют высокую концентрацию солей (Хелат - Fe 50 мг/л и Ca(NO3)2 1000 мг/л) и для растительной активности растения пересаживают на питательную среду содержанием 1 мг 6 БАП и 0,05 г/л янтарной кислоты, при этом концентрация микросолей: ZnSO4*7H2O - 4.3 мг/л и Н3ВО3 - 3.1 мг/л, источник кальция тоже изменен в форме (от CaCl2*2H2O на Ca(NO3)2*4H2O), пересадку проводят через 3 недели, при размножении особое внимание уделяют стекловидности или сверховодненности тканей, при этом оптимальными условиями культивирования Л-2 являются: температура 22-26 градусов, освещенность 2500-5000 лк, при 16-часовом фотопериоде. Изобретение позволяет повысить выход растений до 70%. 3 табл.
Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к биотехнологии, и может быть использовано в питомниководстве для массового производства оздоровленного посадочного материала плодовых (косточковых) культур вишни (Л-2).
Изобретение представляет собой способ получения подбойного материала (Л-2) в условиях in vitro, черенкование пробирочных растений и высадку одноузловых черенков на агаризованную питательную среду, содержащую макро- и микроэлементы и витамины на основе прописи питательной среды, Fe-хелат, агар-агар, сахарозу, при этом в питательную среду добавляют высокую концентрацию солей (Хелат - Fe 50 мг/л и Ca(NO3)2 1000 мг/л) и для растительной активности растения пересаживают на питательную среду содержанием 1 мг 6 БАП и 0,05 г/л янтарной кислоты, при этом концентрация микросолей: ZnSO4*7H2O - 4.3 мг/л и Н3 ВО3 - 3.1 мг/л, источник кальция тоже изменен в форме (от CaCl2*2H2O на Ca(NO3)2*4H2O), пересадку проводят через 3 недели, при размножении особое внимание уделяют стекловидности или сверховодненности тканей, при этом оптимальные условия культивирования Л-2 являются: температура 22-26 градусов, освещенность 2500-5000 лк, при 16-часовом фотопериоде.
Наиболее близким техническим решением из известных является способ получения оздоровленных цитрусовых растений (в практике плодоводства известно применение БАВ на основе янтарной кислоты для повышения продуктивности и качества плодов черешни, вишни и сахарной свеклы. Л.А. Бадовская, Н.И. Ненько и др. (1997) успешно применяли препарат «Универсальный», состоящий из смеси янтарной кислоты, фумаровой кислот, малеиновой, и 2(5Н)-фуранона (содержание янтарной кислоты не менее 85%), посредством листовой обработки. Однако этот способ имеет следующие недостатки. Процесс приживаемости высаженных эксплантов желает оставлять лучшее - только 1/20 часть (т.е. 5%) приживаются. Приживаемость таких мелких структур также неудовлетворительна. Кроме того, все полученные растения требуют обязательного тестирования, так как до этой процедуры их фитосанитарный статус неизвестен.
Задача изобретения заключается в мультипликации подвойного материала Л-2 в условиях in vitro для массового производства оздоровленного посадочного материала плодовых (косточковых) культур.
Поставленная задача решается следующим образом: Первый этап считается завершенным после получения небольшого конгламерата побегов длиной 0,5 - 1,5 см. Для увеличения коэффициента размножения в первых пассажах можно не разделять на отдельные единицы, а переносить на свежую питательную среду целиком. При использовании этого приема величина коэффициента размножения резко возрастает и может достигать 40-60 за пассаж. Содержание цитокининов на первом этапе колеблется от 0,1 до 1 мг/л, ауксинов от 0,001 до 1 мг/л. Полученные побеги пересаживают на питательную среду Мурасиге Скуга с добавлением в среду высокую концентрацию солей (Хелат - Fe 50 мг/л и Са(NO3)2*1000 мг/л) и для растительной активности растения пересаживают на питательную среду содержанием 1 мг 6 БАП и 0,05 г/л янтарной кислоты, уменьшая концентрацию микросолей: ZnSO4*7H2O - 4.3 мг/л и Н3ВО3 - 3.1 мг/л., источник кальция тоже изменен в форме (от CaCl2*2Н2О на Са(NO3)2*4Н2O). Пересадки необходимо проводить через 3 недели. При размножении особое внимание уделяют стекловидности или сверховодненности тканей, что можно определить по характерному блеску культур. Такие культуры выбраковываются, а условия культивирования (содержание агара, цитокининов, соотношение NH4, NO3, колебания температуры) корректируются. Оптимальные условия культивирования Гизелы 5 и ВСЛ 2 являются: температура 22-26 градусов, освещенность 2000-5000 лк, при 16-часовом фотопериоде.
Сравнительный анализ питательных сред:
Выход растений: не более 10%.
Выход растений не более 20 - 30%.
Выход растений 70%.
Способ получения подвойного материала Л-2 in vitro, включающий черенкование пробирочных растений и высадку одноузловых черенков на агаризованную питательную среду, содержащую макро- и микроэлементы, витамины и сахарозу на основе прописи питательной среды Мурасиге и Скуга на первом этапе, полученные побеги пересаживают в питательную среду Мурасиге Скуга с добавлением высокой концентрации солей: Хелат - Fe 50 мг/л и Ca(NO3)2 1000 мг/л, далее растения пересаживают на питательную среду Мурасиге Скуга с содержанием 1 мг 6 БАП и 0,05 г/л янтарной кислоты, при этом концентрация микросолей: ZnSO4*7H2O - 4.3 мг/л и Н3ВО3 - 3.1 мг/л, источник кальция Ca(NO3)2*4H2O - 100 мг/л, пересадки проводят через 3 недели, при этом оптимальными условиями культивирования Л-2 являются: температура 22-26 градусов, освещенность 2500-5000 лк, при 16-часовом фотопериоде.
