Способ определения концентрации цефтриаксона в тканях операционного поля



Способ определения концентрации цефтриаксона в тканях операционного поля
Способ определения концентрации цефтриаксона в тканях операционного поля
Способ определения концентрации цефтриаксона в тканях операционного поля
Способ определения концентрации цефтриаксона в тканях операционного поля
Способ определения концентрации цефтриаксона в тканях операционного поля
Способ определения концентрации цефтриаксона в тканях операционного поля
Способ определения концентрации цефтриаксона в тканях операционного поля

Владельцы патента RU 2759533:

федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ярославский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к фармации, а именно к фармацевтической химии. Раскрыт способ определения концентрации цефтриаксона в тканях операционного поля, заключающийся в том, что осуществляют пробоподготовку настаиванием с извлекателем, экстракцией органической системой растворителей и реэкстракцией буферным раствором Бриттона-Робинсона с последующим анализом методом капиллярного электрофореза. При этом в процессе пробоподготовки к измельченной ткани операционного поля в качестве извлекателя добавляют водный раствор натрия гидроксида рН 12,0 в количестве 0,4 мл, экстракцию проводят органической системой растворителей хлороформ:изобутанол в соотношении 3:1 в количестве 1 мл в течение 10 минут четырехкратно, реэкстракцию осуществляют буферным раствором Бриттона-Робинсона рН 12,0 в количестве 1 мл, а анализ полученного реэкстракта проводят с помощью капиллярного электрофореза, соблюдая следующие условия: система капиллярного электрофореза «Капель-105М»; рабочий электролит - буферный раствор Бриттона-Робинсона, рН 12,0; ввод пробы гидродинамическим способом 30 мбар в течение 15 с; напряжение тока - (+20) кВ; длина волны - 265 нм. Изобретение обеспечивает повышение объективности и надежности определения цефтриаксона в тканях операционного поля методом капиллярного электрофореза. 7 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к фармации, а именно к фармацевтической химии.

Цефтриаксон (6R-6-альфа, 7бета(Z)-7-2-амино-4-тиазолил (метоксиимино) ацетил амино-8-оксо-3-(1,2,5,6-тетрагидро-2-метил-5,6-диоксо-1,2,4-триазин-3-ил)тиометил-5-тиа-1 -азабицикло 4.2.0 окт-2-ен-2-карбоновая кислота (в виде динатриевой соли)) - антибиотик широкого спектра действия из группы цефалоспоринов III поколения. Основными показаниями для назначения являются: инфекции ЛОР-органов, мочевыводящих путей, центральной нервной системы, микробные поражения печени, воспалительные заболевания органов малого таза. Он также используется для периоперационной профилактики инфекционно-воспалительных осложнений у больных в хирургии, онкологии, травматологии и ортопедии, колопроктологии и других сферах хирургической деятельности. При этом эффект применения антибиотиков, и в частности цефтриаксона, определяется созданием достаточной концентрации препарата в тканях раневой зоны или иного очага воспаления. В целях повышения эффективности антибиотикопрофилактики необходимо использование современных аналитических методов, позволяющих контролировать содержание антибиотика в тканях операционного поля. Одним из таких методов является капиллярный электрофорез.

Разработанные варианты анализа цефтриаксона в биологических объектах представлены, в основном, хроматографическими методами.

Изучена возможность идентификации цефтриаксона в модельной смеси ткани печени с использованием метода ИК-спектроскопии (Безъязычная А.А., Шорманов В.К., Сипливая Л.Е. // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье», 2018; 1: 128-132). Проведены исследования по выбору способа изолирования цефтриаксона из биологического материала с последующей очисткой методом ТСХ и определением методом УФ-спектрофотометрии (Безъязычная А.А., Шорманов В.К., Сипливая Л.Е. // Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Актуальные вопросы разработки и исследования новых лекарственных средств: Материалы 7 Международной научно-методической конференции "Фармобразование-2018". - Воронеж, 2018. С. 376-379). При этом методика изолирования отличалась длительностью и многостадийностью.

Ряд авторов сообщают о возможности применения высокоэффективной тонкослойной хроматографии (Bhushan R., Parshad V. // Biomed Chromatogr, 1996; 10 (5): 258-260; Raju V.J., Seshagiri Rao J.V.L.N. // Chemistry, 2008; 5 (3): 427-430).

Капиллярный зонный электрофорез был применен для разделения смеси 10 цефалоспориновых антибиотиков (цефаклор, цефадроксил, цефалексин, цефазолин, цефокситин, цефуроксим, цефоперазон, цефотаксим, цефтазидим, цефтриаксон) в лекарственных препаратах. Разделение проводили с использованием буферного раствора, содержащего 25 мМ динатрий гидрофосфат, рН 7,00, напряжение +25 кВ, при температуре 25°С, УФ-детекция при 210 нм (Hancu G., Sasebesj A., Rusu A., Kelemen Н., Ciurba А. // Adv Pharm Bull, 2015; 5 (2): 223-229).

Концентрация цефтриаксона в количестве 1,4±1,2 мг/л определялась методом капиллярного электрофореза в мокроте больного после 6 внутривенных введений препарата через каждые 24 часа в концентрации 80 мг/кг (Klekner A., Bagyi К. et al. Clin Microbiol, 2006; 44 (9): 3418-21).

Цель предлагаемого способа - повышение объективности и надежности определения цефтриаксона в тканях операционного поля методом капиллярного электрофореза.

Поставленная цель достигается тем, что в процессе пробоподготовки в качестве извлекателя используют водный раствор натрия гидроксида рН 12,0 в количестве 0,4 мл, экстракцию проводят органической системой растворителей хлороформ и изобутанол в соотношении 3:1 в количестве 1 мл в течение 10 минут четырехкратно, реэкстракцию осуществляют буферным раствором Бриттона-Робинсона рН 12,0 в количестве 1 мл, а анализ полученного реэкстракта проводят с помощью капиллярного электрофореза, соблюдая следующие условия: система капиллярного электрофореза «Капель- 105М»; рабочий электролит - буферный раствор Бриттона-Робинсона, рН 12,0; ввод пробы гидродинамическим способом 30 мбар в течение 15 сек; напряжение тока: +20 кВ; длина волны - 265 нм.

Новизна предлагаемого способа заключается в пробоподготовке биологического объекта, где в качестве извлекателя применяют водный раствор натрия гидроксида рН 12,0 в количестве 0,4 мл, экстракцию проводят органической системой растворителей хлороформ и изобутанол в соотношении 3:1 в количестве 1 мл в течение 10 мин. четырехкратно, реэкстракцию осуществляют буферным раствором Бриттона-Робинсона рН 12,0 в количестве 1 мл, анализ полученного реэкстракта проводят с помощью капиллярного электрофореза при следующих условиях: система капиллярного электрофореза «Капель-105М»; рабочий электролит - буферный раствор Бриттона-Робинсона, рН 12,0; ввод пробы гидродинамическим способом 30 мбар в течение 15 сек.; напряжение тока: +20 кВ; длина волны - 265 нм.

Технические решения, имеющие признаки, которые совпадают с отличительными признаками предлагаемого нами способа, не выявлены, что позволяет сделать вывод о соответствии предлагаемого способа критерию «изобретательский уровень».

Предлагаемый способ определения концентрации цефтриаксона осуществляется следующем образом: к 0,1 г измельченной ткани печени, предположительно содержащей от 0,1 до 20 мкг цефтриаксона добавляют 0,4 мл водного раствора натрия гидроксида (рН 12,0), перемешивают и оставляют в защищенном от света месте при периодическом перемешивании в течение 30 мин. Смесь центрифугируют (6000 об./мин., 5 мин.), надосадочную жидкость отделяют, добавляют по каплям 10% раствор хлористоводородной кислоты до рН 2,0 (по универсальной индикаторной бумаге) и подвергают экстракции органической системой хлороформ: изобутанол, 3:1 (1 мл × 4, 10 мин.). Эмульсию разрушают центрифугированием (6000 об./мин. 10 мин.). Органическую фазу отделяют, к объединенным экстрактам добавляют 1 мл буферного раствора Бриттона-Робинсона, рН 12,0, проводят реэкстрагирование в течение 10 мин. Для разрушения эмульсии смесь центрифугируют (6000 об./мин., 10 мин.). Реэкстракты отделяют, дегазируют центрифугированием (центрифуга «Mini Spin Plus», 10000 об./мин., 10 мин.) и используют для анализа цефтриаксона методом капиллярного электрофореза («Капель-105 М») в следующих условиях:

• рабочий электролит (РЭ) - буферный раствор Бриттона-Робинсона, рН12,0;

• растворитель пробы - РЭ, разбавленный водой очищенной в 10 раз;

• ввод пробы - давлением (30 мБар × 15 сек.);

• положительный электрод со стороны введения РЭ - +20кВ;

• детекция - встроенный УФ-детектор, 265 нм;

• запись и обработку полученных электрофореграмм (ЭФГ) осуществляют с помощью программного обеспечения «Эльфоран» для Windows.

На ЭФГ рассчитывают площади пика (величины фотометрического сигнала). Результаты исследований представлены в таблице 1.

Средние величины фотометрических сигналов (площадей пиков) использовали для построения калибровочного графика:

у=а⋅х+b, где

х - измеренная концентрация цефтриаксона

у - измеренная площадь пика (величина фотометрического сигнала)

a, b - рассчитанные коэффициенты.

Рассчитанное уравнение калибровочного графика: у=0,162х-0,0187

При этом установлено, что в диапазоне концентраций цефтриаксона от 0,1 до 20,0 мкг/0,1 г печени наблюдается линейная зависимость величин фотометрического сигнала от концентраций антибиотика и аппроксимируется уравнением с коэффициентами корреляции 0,9996, что позволяет использовать данную методику для количественного определения цефтриаксона в указанном интервале концентраций.

В процессе разработки способа проводилась валидация по показателям: правильность, прецизионность, предел обнаружения, предел количественного определения, линейность согласно руководству ЕМЕА (Guideline on bioanalitical method validation, ЕМЕА, 2009) и Руководству по экспертизе лекарственных средств (Москва, 2013; Т. 1).

Для оценки прецизионности и правильности методики определения цефтриаксона в биологических объектах проводили 6 параллельных исследований антибиотика на уровнях концентрации: 0,1 мкг/мл; 5 мкг/мл; 20,0 мкг/мл в разработанных выше условиях. На ЭФГ определяли площади пика и по вышеприведенному уравнению калибровочного графика рассчитывали концентрацию цефтриаксона в течение 1-го и 2-го дней исследований. Для получения значений концентраций цефтриаксона были рассчитаны относительные величины стандартных отклонений (RSD, %), правильность относительные погрешности . Результаты представлены в таблицах 2.1. и 2.2.

Представленные результаты показывают, что величины стандартного отклонения (RSD, %) и относительной погрешности соответствуют нормам нормативной документации (не более 20% для минимальной концентрации, а для остальных концентраций не превышают 15%) (см. табл. 3).

Предлагаемый способ иллюстрируется следующими примерами использования:

Пример 1. Пациенту, которому выполнена мастэктомия, за 20 минут до операции внутривенно введен 1,0 г цефтриаксона. Через 30 и 60 мин осуществляли отбор тканей операционного поля (фасция, подкожно жировая клетчатка, кожа). Навески биологических объектов не превышали 0,1 г. Последующую пробоподготовку и анализ проводили согласно методике: к 0,1 г мелкоизмельченной ткани операционного поля (фасция, подкожно жировая клетчатка, кожа), добавляют 0,4 мл водного раствора натрия гидроксида (рН 12,0), перемешивают и оставляют в защищенном от света месте при периодическом перемешивании в течение 30 мин. Смесь центрифугируют (6000 об./мин., 5 мин.), надосадочную жидкость отделяют, добавляют по каплям 10% раствор хлористоводородной кислоты до рН 2,0 (по универсальной индикаторной бумаге) и подвергают экстракции органической системой хлороформ: изобутанол, 3:1 (1 мл × 4, 10 мин.). Эмульсию разрушают центрифугированием (6000 об./мин. 10 мин.). Органическую фазу отделяют, к объединенным экстрактам добавляют 1 мл буферного раствора Бриттона-Робинсона, рН 12,0, проводят реэкстрагирование в течение 10 мин. Для разрушения эмульсии смесь центрифугируют (6000 об./мин., 10 мин.). Реэкстракты отделяют, дегазируют центрифугированием (центрифуга «Mini Spin Plus», 10000 об./мин., 10 мин.) и используют для анализа цефтриаксона методом капиллярного электрофореза («Капель-105 М») в следующих условиях:

• рабочий электролит (РЭ) - буферный раствор Бриттона-Робинсона, рН12,0;

• растворитель пробы - РЭ, разбавленный водой очищенной в 10 раз;

• ввод пробы - давлением (30 мБар × 15 сек.);

• положительный электрод со стороны введения РЭ - +20кВ;

• детекция - встроенный УФ-детектор, 265 нм;

• запись и обработку полученных электрофореграмм (ЭФГ) осуществляют с помощью программного обеспечения «Эльфоран» для Windows.

На ЭФГ рассчитывают площади пика (величины фотометрического сигнала).

Результаты исследований представлены в таблице 4.

Пример 2. Пациенту, которому выполнена мастэктомия, за 20 минут до операции внутривенно введен 1,0 г цефтриаксона. Через 30 и 60 мин осуществляли отбор тканей операционного поля (фасция, подкожно жировая клетчатка, кожа). Навески биологических объектов не превышали 0,1 г. Последующую пробоподготовку и анализ проводили согласно методике: к 0,1 г мелкоизмельченной ткани операционного поля (фасция, подкожно жировая клетчатка, кожа), добавляют 0,4 мл водного раствора натрия гидроксида (рН 12,0), перемешивают и оставляют в защищенном от света месте при периодическом перемешивании в течение 30 мин. Смесь центрифугируют (6000 об./мин., 5 мин.), надосадочную жидкость отделяют, добавляют по каплям 10% раствор хлористоводородной кислоты до рН 2,0 (по универсальной индикаторной бумаге) и подвергают экстракции органической системой хлороформ: изобутанол, 3:1 (1 мл × 4, 10 мин.). Эмульсию разрушают центрифугированием (6000 об./мин. 10 мин.). Органическую фазу отделяют, к объединенным экстрактам добавляют 1 мл буферного раствора Бриттона-Робинсона, рН 12,0, проводят реэкстрагирование в течение 10 мин. Для разрушения эмульсии смесь центрифугируют (6000 об./мин., 10 мин.). Реэкстракты отделяют, дегазируют центрифугированием (центрифуга «Mini Spin Plus», 10000 об./мин., 10 мин.) и используют для анализа цефтриаксона методом капиллярного электрофореза («Капель-105 М») в следующих условиях:

• рабочий электролит (РЭ) - буферный раствор Бриттона-Робинсона, рН12,0;

• растворитель пробы - РЭ, разбавленный водой очищенной в 10 раз;

• ввод пробы - давлением (30 мБар × 15 сек.);

• положительный электрод со стороны введения РЭ - +20кВ;

• детекция - встроенный УФ-детектор, 265 нм;

• запись и обработку полученных электрофореграмм (ЭФГ) осуществляют с помощью программного обеспечения «Эльфоран» для Windows.

На ЭФГ рассчитывают площади пика (величины фотометрического сигнала).

Результаты исследований представлены в таблице 5.

Пример 3. Пациенту, которому выполнена мастэктомия, за 20 минут до операции внутривенно введен 1,0 г цефтриаксона. Через 30 и 60 мин осуществляли отбор тканей операционного поля (фасция, подкожно жировая клетчатка, кожа). Навески биологических объектов не превышали 0,1 г. Последующую пробоподготовку и анализ проводили согласно методике: к 0,1 г измельченной ткани операционного поля (фасция, подкожно жировая клетчатка, кожа), предположительно содержащей от 0,1 до 20 мкг цефтриаксона добавляют 0,4 мл водного раствора натрия гидроксида (рН 12,0), перемешивают и оставляют в защищенном от света месте при периодическом перемешивании в течение 30 мин. Смесь центрифугируют (6000 об./мин., 5 мин.), надосадочную жидкость отделяют, добавляют по каплям 10% раствор хлористоводородной кислоты до рН 2,0 (по универсальной индикаторной бумаге) и подвергают экстракции органической системой хлороформ: изобутанол, 3:1 (1 мл × 4, 10 мин.). Эмульсию разрушают центрифугированием (6000 об./мин. 10 мин.). Органическую фазу отделяют, к объединенным экстрактам добавляют 1 мл буферного раствора Бриттона-Робинсона, рН 12,0, проводят реэкстрагирование в течение 10 мин. Для разрушения эмульсии смесь центрифугируют (6000 об./мин., 10 мин.). Реэкстракты отделяют, дегазируют центрифугированием (центрифуга «Mini Spin Plus», 10000 об./мин., 10 мин.) и используют для анализа цефтриаксона методом капиллярного электрофореза («Капель-105 М») в следующих условиях:

• рабочий электролит (РЭ) - буферный раствор Бриттона-Робинсона, рН12,0;

• растворитель пробы - РЭ, разбавленный водой очищенной в 10 раз;

• ввод пробы - давлением (30 мБар × 15 сек.);

• положительный электрод со стороны введения РЭ - +20кВ;

• детекция - встроенный УФ-детектор, 265 нм;

• запись и обработку полученных электрофореграмм (ЭФГ) осуществляют с помощью программного обеспечения «Эльфоран» для Windows.

На ЭФГ рассчитывают площади пика (величины фотометрического сигнала).

Результаты исследований представлены в таблице 6.

Предлагаемый способ определения концентрации цефтриаксона в тканях операционного поля применялся в лаборатории «Аналитических методов исследования» кафедры химии с курсом фармацевтической и токсикологической химии ФГБОУ ВО ЯГМУ Минздрава России.

Способ определения концентрации цефтриаксона в тканях операционного поля, заключающийся в том, что осуществляют пробоподготовку настаиванием с извлекателем, экстракцией органической системой растворителей и реэкстракцией буферным раствором Бриттона-Робинсона с последующим анализом методом капиллярного электрофореза, отличающийся тем, что в процессе пробоподготовки к измельченной ткани операционного поля в качестве извлекателя добавляют водный раствор натрия гидроксида рН 12,0 в количестве 0,4 мл, экстракцию проводят органической системой растворителей хлороформ:изобутанол в соотношении 3:1 в количестве 1 мл в течение 10 минут четырехкратно, реэкстракцию осуществляют буферным раствором Бриттона-Робинсона рН 12,0 в количестве 1 мл, а анализ полученного реэкстракта проводят с помощью капиллярного электрофореза, соблюдая следующие условия:

- система капиллярного электрофореза «Капель-105М»;

- рабочий электролит - буферный раствор Бриттона-Робинсона, рН 12,0;

- ввод пробы гидродинамическим способом 30 мбар в течение 15 с;

- напряжение тока - (+20) кВ;

- длина волны - 265 нм.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии, геронтологии и гериатрии, и предназначено для прогнозирования ухудшения состояния пожилого больного с инфарктом миокарда и синдромом старческой астении.
Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии, и может быть использовано для лабораторной диагностики туберкулеза. Сущность способа выявления микобактерий туберкулеза из резецированной ткани легкого: обрабатывают исследуемый материал от сопутствующей микрофлоры путем помещения исследуемого материала на 45 мин в 0,9%-й озонированный раствор NaCl, нагретый до температуры 21°С, который непрерывно насыщают озоно-кислородной смесью с концентрацией озона 10000 мкг/л/мин; после обработки материала его центрифугируют при скорости 3000 об/мин в течение 15-20 мин; надосадочную жидкость сливают, осадок засевают поровну в пробирки с питательными средами.

Изобретение относится к области медицины, в частности, к гастроэнтерологии и педиатрии. Для диагностики аутоиммунного гастрита у детей с целиакией оценивают в баллах диагностически значимые гистологические признаки в фундальном и антральном отделах желудка и клинико-анамнестические данные.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и эндокринологии, и может быть использовано для прогнозирования неблагоприятных исходов беременности у женщин с сахарным диабетом (СД) 1 типа во второй половине беременности.
Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано в неврологии, хирургии, анестезиологии-реаниматологии и смежных медицинских специальностях.

Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантации органов и клинической лабораторной диагностике, может быть использовано при ведении пациентов после трансплантации для диагностики острого отторжения трансплантированного сердца.

Изобретение относится к различным областям народного хозяйства (медицине, химической и фармацевтической промышленности), где есть потребность в измерении массовой концентрации метиловых эфиров жирных кислот (МЭЖК) в биологических средах, в том числе животных и растительных тканях методом газожидкостной хроматографии.

Изобретение относится к различным областям народного хозяйства (медицине, химической и фармацевтической промышленности), где есть потребность в измерении массовой концентрации метиловых эфиров жирных кислот (МЭЖК) в биологических средах, в том числе животных и растительных тканях методом газожидкостной хроматографии.

Изобретение относится к области животноводства, ветеринарии и экологии и предназначено для определения концентрации кадмия в мышечной ткани крупного рогатого скота.

Изобретение относится к области медицины, в частности к детской оториноларингологии, аллергологии, клинической фармакологии, и может быть предназначено для диагностики хронического экссудативного среднего отита аллергического генеза.
Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, клинической андрологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности низкоинтенсивной лазерной терапии (НИЛТ) при секреторной тератозооспермии. До начала терапии определяют в плазме крови уровень фолликулостимулирующего гормона, количество лейкоцитов в эякуляте, прогрессивную подвижность и концентрацию сперматозоидов. Определяют значение дискриминантной функции по формуле: F=0,112×fsh+0,051×spLey+0,056×spMotProgr+0,009×spConc -2,729, где F - значение дискриминантной функции; fsh - уровень фолликулостимулирующего гормона в плазме крови (МЕ/л); spLey - количество лейкоцитов в эякуляте (млн/мл); spMotProgr - прогрессивная подвижность сперматозоидов (%); spConc - концентрация сперматозоидов (млн/мл). При F>0,053 низкоинтенсивная лазерная терапия будет эффективна в отношении восстановления числа нормальных форм сперматозоидов. При F≤0,053 - неэффективна. Способ обеспечивает возможность повышения эффективности курса НИЛТ в ИК-спектре при лечении мужчин с секреторной тератозооспермией за счет прогнозирования результатов лечения индивидуально для каждого пациента на основании рутинных методов диагностики - гормонального статуса и параметров эякулята, прост в исполнении, уменьшает число неоправданных процедур. 2 пр.

Изобретение относится к фармации, а именно к фармацевтической химии. Раскрыт способ определения концентрации цефтриаксона в тканях операционного поля, заключающийся в том, что осуществляют пробоподготовку настаиванием с извлекателем, экстракцией органической системой растворителей и реэкстракцией буферным раствором Бриттона-Робинсона с последующим анализом методом капиллярного электрофореза. При этом в процессе пробоподготовки к измельченной ткани операционного поля в качестве извлекателя добавляют водный раствор натрия гидроксида рН 12,0 в количестве 0,4 мл, экстракцию проводят органической системой растворителей хлороформ:изобутанол в соотношении 3:1 в количестве 1 мл в течение 10 минут четырехкратно, реэкстракцию осуществляют буферным раствором Бриттона-Робинсона рН 12,0 в количестве 1 мл, а анализ полученного реэкстракта проводят с помощью капиллярного электрофореза, соблюдая следующие условия: система капиллярного электрофореза «Капель-105М»; рабочий электролит - буферный раствор Бриттона-Робинсона, рН 12,0; ввод пробы гидродинамическим способом 30 мбар в течение 15 с; напряжение тока - кВ; длина волны - 265 нм. Изобретение обеспечивает повышение объективности и надежности определения цефтриаксона в тканях операционного поля методом капиллярного электрофореза. 7 табл., 3 пр.

Наверх