Фармацевтическая композиция, включающая ингибитор гистондеацетилазы и метотрексат

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для профилактики или лечения воспалительных ревматических заболеваний, включающей ингибитор гистондеацетилазы и метотрексат в качестве эффективного компонента; к способу лечения с использованием композиции и к применению композиции для получения лекарственного средства для лечения воспалительных ревматических заболеваний, при этом фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением показывает отличный эффект профилактики или лечения воспалительных ревматических заболеваний. 4 н. 2 з.п. ф-лы, 10 пр., 22 табл., 6 ил.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для профилактики или лечения воспалительных ревматических заболеваний, включающей ингибитор гистондеацетилазы и метотрексат в качестве эффективных компонентов; способу лечения с использованием композиции; и применению композиции для получения лекарственного средства для профилактики или лечения воспалительных ревматических заболеваний.

Предпосылки создания изобретения

Ревматические заболевания включают различные болезненные расстройства, которые влияют на двигательные системы, включая мягкие ткани, особенно окружающие суставы, мышцы, соединительные ткани, суставы и кости, где воспаления или аутоиммунные реакции способствуют возникновению многих ревматических заболеваний. Такие состояния, которые обычно относят к воспалительным ревматическим заболеваниям, включают артрит, остеоартрит и т.д. различного происхождения без ограничения.

Из ревматических заболеваний ревматоидный артрит (RA) является типичным системным хроническим аутоиммунным заболеванием, которое начинается с воспаления синовиальной оболочки, а затем вызывает повреждение суставов и костей, вызывая их деформацию и инвалидность. Ревматоидный артрит в основном начинается с мелких суставов рук и ног, а затем переходит на крупные суставы, где он также может проникать в другие органы, вызывая внесуставные проявления, такие как перикардит, фиброз легких, периферический неврит и т.д. Непосредственная причина ревматоидного артрита еще не выяснена, но известно, что ревматоидный артрит возникает из-за комбинации генетической предрасположенности и факторов окружающей среды, и возраст начала в основном распределяется от тридцати до пятидесяти лет, что оказывает серьезное влияние на хозяйственно-экономическую активность пациентов.

В настоящее время не существует эффективного терапевтического средства от ревматоидного артрита. Вместо этого прописываются лекарства для облегчения симптомов, снимающие воспаление и боли. Однако даже при использовании таких терапевтических средств заболевание многократно рецидивирует после ремиссии и, таким образом, постепенно вызывает структурные повреждения суставов. Последняя тенденция лечения ревматоидного артрита достигла прогресса в направлении контроля симптомов и минимизации структурных повреждений суставов посредством ранней диагностики и раннего назначения модифицирующих заболевание противоревматических препаратов (DMARD).

Метотрексат (MTX) используется в качестве терапевтического средства первой линии при ревматоидном артрите. Лечебный эффект MTX оценивается через три месяца после его назначения. Затем, если болезнь не улучшится, дополнительно назначают другие DMARD, чтобы минимизировать симптомы и повреждения суставов. Однако MTX демонстрирует снижение терапевтической эффективности, поскольку у 30-40% пациентов, принимающих это лекарственное средство, не достигается его лечебный эффект в течение трех месяцев после его назначения. MTX также может вызывать гепатотоксичность при длительном применении. Недавно появилась тенденция увеличения случаев назначения биопрепаратов, таких как CTLA4-Fc, TNFα-нейтрализующее антитело и т.п., в комбинации в качестве терапии второй линии после метотрексата. Однако у биопрепаратов есть недостаток, заключающийся в том, что они дороги и вводятся в виде инъекции, что вызывает неудобства. Из-за характерной особенности лекарственного средства на основе антител неизбежно, что биопрепараты приводят к появлению нейтрализующих антител, которые, как сообщается, становятся причиной резистентности к биологическим препаратам. Кроме того, НСПВЛС, стероидные препараты, гидроксихлорохин, сульфасалазин, лефлуномид и т.д., которые используются в качестве пероральных терапевтических средств второй и третьей линии, показывают быстрый эффект, но рекомендуются для краткосрочного использования, а не для длительного использования из-за все больших опасений по поводу различных побочных эффектов. Тофацитиниб (Xeljanz®, Pfizer, ингибитор Jak3), который представляет собой пероральное терапевтическое средство от артрита, выпущенный в 2014 году, демонстрирует отличный лечебный эффект, но вызывает повышение уровня холестерина ЛПНП (5 мг: 15%, 10 мг: 30%) в течение одного месяца после начала приема. И у тофацитиниба есть некоторые проблемы, поскольку он вызывает серьезные опасения по поводу тромбоэмболии, инфекции и канцерогенности, обладая в то же время сильным иммуносупрессивным эффектом.

Соответственно, хотя на сегодняшний день имеются сообщения о многих терапевтических средствах от воспалительных ревматических заболеваний, большинство терапевтических средств имеют недостаток, такой как побочные эффекты, помимо лечебного эффекта. Таким образом, существует острая необходимость в разработке эффективного терапевтического средства с меньшими побочными эффектами. В частности, большее значение придается разработке безопасного перорального терапевтического средства для лечения ревматоидного артрита, которое можно использовать в комбинации с MTX, а также на раннем этапе у тех пациентов, которые не отвечают на MTX, прописываемый препарат первой линии.

Сущность изобретения

Техническая задача

Целью настоящего изобретения является обеспечение фармацевтической композиции для профилактики или лечения воспалительных ревматических заболеваний, включающей ингибитор гистондеацетилазы и метотрексат.

Другой целью настоящего изобретения является обеспечение способа для профилактики или лечения воспалительных ревматических заболеваний, включая введение терапевтически эффективного количества композиции.

Еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение применения композиции для получения лекарственного средства для профилактики или лечения воспалительных ревматических заболеваний.

Решение задачи

Это подробно описано ниже. При этом, каждое описание и вариант осуществления, раскрытые в настоящем изобретении, также могут быть применимы к другим его описаниям и вариантам осуществления, соответственно. Иными словами, все комбинации различных элементов, раскрытых в настоящем изобретении, охватываются объемом настоящего изобретения. Также, нельзя считать, что объем настоящего изобретения ограничивается конкретным описанием, представленным ниже.

Настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию для профилактики или лечения воспалительных ревматических заболеваний, содержащую ингибитор гистондеацетилазы и метотрексат.

В настоящем изобретении ингибитор гистондеацетилазы может представлять собой соединение, представленное следующей формулой I, его оптические изомеры или его фармацевтически приемлемые соли:

[Формула I]

где

A представляет собой ,

Xa и Xb каждый независимо представляет собой CH или N,

L₁ и L₂ каждый независимо представляет собой водород, галоген, -CF₃ или -C_1-3 алкил с прямой или разветвленной цепью,

Q представляет собой C(=O), S(=O)₂, S(=O) или C(=NH), и

Y выбран из следующей группы:

M представляет собой C, N, O, S или S(=O)₂ (при этом если M представляет собой C, l и m имеют значение 1; если M представляет собой N, l имеет значение 1, а m имеет значение 0; и если M представляет собой O, S или S(=O)₂, l и m имеют значение 0),

R_a1 и R_a2 каждый независимо представляет собой водород; гидрокси; -C_1-4 алкил с прямой или разветвленной цепью, который является незамещенным или замещен по меньшей мере одним галогеном; -C_1-4 спирт с прямой или разветвленной цепью; бензгидрил; -C_1-4 алкил с прямой или разветвленной цепью, который замещен насыщенным или ненасыщенным пяти-семи-членным гетероциклическим соединением, содержащим от одного до трех гетероатомов, выбранных из N, O или S, в качестве кольцевого члена (при этом гетероциклическое соединение может быть незамещенным, или по меньшей мере один водород, необязательно, может быть замещен OH, OCH₃, CH₃, CH₂CH₃ или галогеном); насыщенное или ненасыщенное пяти-семи-членное гетероциклическое соединение, содержащее от одного до трех гетероатомов, выбранных из N, O или S, в качестве кольцевого члена (при этом гетероциклическое соединение может быть незамещенным, или по меньшей мере один водород, необязательно, может быть замещен OH, OCH₃, CH₃, CH₂CH₃ или галогеном); фенил, при этом он является незамещенным, или по меньшей мере один водород замещен галогеном, C_1-4 алкокси, C_1-2 алкилом или гидрокси; бензил, при этом он является незамещенным, или по меньшей мере один водород замещен галогеном, C_1-4 алкокси, C_1-2 алкилом или гидрокси; -S(=O)₂CH₃; галоген; -C_1-6 алкокси с прямой или разветвленной цепью; -C_2-6 алкоксиалкил; -C(=O)R_x, где R_x представляет собой C_1-3 алкил с прямой или разветвленной цепью или C_3-10 циклоалкил; , где R_c и R_d независимо представляют собой водород или C_1-3 алкил с прямой или разветвленной цепью; или ,

n представляет собой целое число 0, 1 или 2,

R_b представляет собой водород; гидрокси; -C_1-6 алкил с прямой или разветвленной цепью, при этом он является незамещенным, или по меньшей мере один водород замещен галогеном; -C(=O)CH₃; -C_1-4 гидроксиалкил с прямой или разветвленной цепью; -C_1-6 алкокси с прямой или разветвленной цепью; -C_2-6 алкоксиалкил с прямой или разветвленной цепью; -CF₃; галоген; или ,

R_e и R_f каждый независимо представляет собой водород или -C_1-3 алкил с прямой или разветвленной цепью, и

Z выбран из следующей группы:

P_a и P_b каждый независимо представляет собой ; водород; гидрокси; -C_1-4 алкил с прямой или разветвленной цепью, при этом он является незамещенным, или по меньшей мере один водород замещен галогеном; галоген; -CF₃; -OCF₃; -CN; -C_1-6 алкокси с прямой или разветвленной цепью; -C_2-6 линейный или разветвленный алкилалкокси; -CH₂F; или -C_1-3 спирт,

где представляет собой кольцо, выбранное из фенила, пиридина, пиримидина, тиазола, индола, индазола, пиперазина, хинолина, фурана, тетрагидропиридина, пиперидина или следующей группы:

,

x, y и z каждый независимо представляет собой целое число 0 или 1, и

R_g1, R_g2 и R_g3 каждый независимо выбран из водорода; гидрокси; -C_1-3 алкила; -CF₃; -C_1-6 алкокси с прямой или разветвленной цепью; -C_2-6 линейного или разветвленного алкилалкокси; -C(=O)CH₃; -C_1-4 гидроксиалкила с прямой или разветвленной цепью; -N(CH₃)₂; галогена; фенила; -S((=O)₂)CH₃; или следующей группы:

В настоящем изобретении "галоген" представляет собой F, Cl, Br или I.

В одном варианте осуществления ингибитор гистондеацетилазы может представлять собой соединение, представленное следующей формулой II, его оптические изомеры или его фармацевтически приемлем соли:

[Формула II]

где

Y выбран из следующей группы:

,

каждый из M, l, m, n, R_a1, R_a2 и R_b имеет значение, определенное для Формулы I выше,

Z представляет собой, и

P_a и P_b каждый независимо представляет собой водород; гидрокси; -C_1-4 алкил с прямой или разветвленной цепью, при этом он является незамещенным, или по меньшей мере один водород замещен галогеном; галоген; -CF₃; -OCF₃; -CN; -C_1-6 алкокси с прямой или разветвленной цепью; -C_2-6 линейный или разветвленный алкилалкокси; -CH₂F; или -C_1-3 спирт.

В соответствии с конкретным вариантом осуществления настоящего изобретения, соединение, представленное формулой I выше, описано в следующих таблицах 1-12.

В настоящем изобретении соединение, представленное формулой I выше, можно получить способом, раскрытым в Публикации корейского патента №2014-0128886 (международная патентная публикация WO 2014/178606), но не ограничиваясь этим.

В настоящем изобретении фармацевтически приемлемые соли означают соли, обычно используемые в фармацевтической промышленности, и могут представлять собой, например, соли неорганических ионов, полученные из кальция, калия, натрия, магния и т.п., соли неорганических кислот, полученные из хлористоводородной кислоты, азотной кислоты, фосфорной кислоты, бромной кислоты, йодной кислоты, перхлорной кислоты, серной кислоты и т.п.; соли органических кислот, полученные из уксусной кислоты, трифторуксусной кислоты, лимонной кислоты, малеиновой кислоты, янтарной кислоты, щавелевой кислоты, бензойной кислоты, винной кислоты, фумаровой кислоты, миндальной кислоты, пропионовой кислоты, лимонной кислоты, молочной кислоты, гликолевой кислоты, глюконовой кислоты, галактуроновой кислоты, глутаминовой кислоты, глутаровой кислоты, глюкуроновой кислоты, аспарагиновой кислоты, аскорбиновой кислоты, карбоновой кислоты, ванилиновой кислоты, йодистоводородной кислоты и т.д.; соли сульфоновых кислот, полученные из метансульфоновой кислоты, этансульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты, п-толуолсульфоновой кислоты, нафталинсульфоновой кислоты и т.п.; соли аминокислот, полученные из глицина, аргинина, лизина и т.д.; соли аминов, полученные из триметиламина, триэтиламина, аммиака, пиридина, пиколина и т.д.; и т.п., но типы солей, предусматриваемые в настоящем изобретении, не ограничиваются перечисленными солями.

В настоящем изобретении метотрексат (MTX) представляет собой разновидность антифолата, который используется в качестве канцеростатического средства при таких заболеваниях, как лейкоз, хориокарцинома и т.д. Известно, что MTX необратимо связывается с дигидрофолатредуктазой, таким образом ингибируя ее ферментативную реакцию, препятствуя продукции тетрагидрофолатов и ингибируя различные реакции переноса углерода, в которых участвуют тетрагидрофолаты.

В настоящем изобретении метотрексат может быть получен способом, известным в данной области, или можно использовать продукты, которые продаются на рынке, без ограничений.

В настоящем изобретении воспалительные ревматические заболевания могут представлять собой по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из ревматоидного артрита, дегенеративного артрита, реактивного артрита, энтеропатического артрита, септического артрита, псориатического артрита, синдрома Рейтера, остеоартрита, анкилозирующего спондилита, болезни Бехчета и волчанки, и, в частности, заболевание может представлять собой артрит, но не ограничиваясь этим.

В настоящем изобретении воспалительные ревматические заболевания можно предотвратить или лечить путем введения фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением. Например, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может предотвращать или лечить воспалительные ревматические заболевания, опосредуя иммунорегуляцию или ингибируя воспаления.

В вариантах осуществления настоящего изобретения на модели адъювант-индуцированного артрита было показано, что фармацевтическая композиция, содержащая соединение, представленное приведенной выше формулой I, и метотрексат, не только улучшает состояния артрита, такие как опухание, эритема, отек и т.д., и снижает уровень анти-CCP, но также имеет превосходный эффект профилактики или лечения артрита по сравнению с группой, которой вводили только активный ингредиент.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может также содержать по меньшей мере один тип фармацевтически приемлемых носителей для ее введения в дополнение к соединению, представленному приведенной выше формулой I, и метотрексату. В качестве фармацевтически приемлемых носителей можно использовать следующие: физиологический раствор, стерилизованная вода, раствор Рингера, забуференный физиологический раствор, раствор декстрозы, раствор мальтодекстрина, глицерин, этанол и комбинация по меньшей мере одного компонента из вышеуказанных, и при необходимости к ним могут быть добавлены другие обычные добавки, такие как антиоксиданты, буферные растворы, бактериостатические агенты и т.д. Также такую фармацевтическую композицию можно сформулировать в виде лекарственных форм для инъекций, таких как водные растворы, суспензии, эмульсии и т.д., пилюль, капсул, гранул или таблеток, дополнительно добавляя к ней разбавители, диспергирующие агенты, поверхностно-активные вещества, связующие и смазывающие вещества. Таким образом, композиция по настоящему изобретению может быть в виде пластырей, жидких лекарственных средств, пилюль, капсул, гранул, таблеток, суппозиториев и т.д. Эти препараты можно сформулировать обычным способом, используемым в области, к которой относится изобретение, в соответствии с каждым заболеванием и/или компонентом, или способом, описанным в Remington's Pharmaceutical Science (последняя версия), Mack Publishing Company, Easton PA.

Неограничивающим примером препаратов для перорального введения с использованием фармацевтической композиции по настоящему изобретению могут быть таблетки, лепешки, пастилки, водорастворимые суспензии, масляные суспензии, готовые порошки, гранулы, эмульсии, твердые капсулы, мягкие капсулы, сиропы, эликсиры или т.п. Для формулирования фармацевтической композиции по настоящему изобретению в виде препаратов для перорального введения можно использовать следующие вещества: связующие, такие как лактоза, сахароза, сорбит, маннит, крахмал, амилопектин, целлюлоза, желатин или т.п; эксципиенты, такие как дикальцийфосфат и т.д.; разрыхлители, такие как кукурузный крахмал, крахмал из сладкого картофеля и т.п.; смазывающие вещества, такие как стеарат магния, стеарат кальция, стеарилфумарат натрия, полиэтиленгликолевый воск или т.п.; и т.д., при этом также можно использовать подсластители, ароматизаторы, сиропы и т.д. Кроме того, в случае капсул также можно использовать жидкие носители, такие как жирное масло и т.д., в дополнение к вышеперечисленным веществам.

Неограничивающим примером парентеральных препаратов с использованием фармацевтической композиции по настоящему изобретению могут быть растворы для инъекций, суппозитории, порошки для респираторной ингаляции, аэрозоли для спрея, мази, порошки для нанесения, масла, кремы и т.д. Для формулирования фармацевтической композиции по настоящему изобретению для получения препаратов для парентерального введения можно использовать следующие вещества: стерилизованные водные растворы, неводные растворители, суспензии, эмульсии, лиофилизированные препараты, препараты для наружного применения и т.д. В качестве неводных растворителей и суспензий можно использовать следующие вещества, но не ограничиваясь этим: пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло, сложные эфиры для инъекций, такие как этилолеат и т.д.

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить перорально или парентерально (например, вводить внутривенно, подкожно, интраперитонеально или местно) в соответствии с предполагаемым способом, при этом ее дозировка варьируется в определенном диапазоне в зависимости от массы тела, возраста, пола, состояния здоровья и режима питания пациента, времени введения, способа введения, скорости экскреции, тяжести заболевания и т.п.

Суточная доза соединения по настоящему изобретению, представленного формулой I, его оптических изомеров или его фармацевтически приемлемых солей может составлять, например, от около 0,1 до 10000 мг/кг, в диапазоне от около 1 до 8000 мг/кг, в диапазоне от около 5 до 6000 мг/кг или в диапазоне от около 10 до 4000 мг/кг, и может предпочтительно находиться в диапазоне от около 50 до 2000 мг/кг, но не ограничиваясь этим, и ее также можно вводить один раз в день или разделить для введения несколько раз в день. Кроме того, суточная доза метотрексата по настоящему изобретению может находиться, например, в диапазоне от около 2,5 до 30 мг/кг, предпочтительно в диапазоне от около 2,5 до 20 мг/кг, но не ограничивается этим, и ее также можно вводить один раз в неделю или разделить для введения несколько раз в неделю.

Фармацевтически эффективная доза и эффективная дозировка фармацевтической композиции по настоящему изобретению могут варьироваться в зависимости от способа формулирования фармацевтической композиции, способа введения, времени введения и/или пути введения и т.д., и могут быть диверсифицированы в соответствии с различными факторами, включая тип и степень реакций, которые должны быть достигнуты посредством введения фармацевтической композиции, тип индивидуума для введения, возраст, массу тела, общее состояние здоровья такого индивиддума, симптом или тяжесть заболевания, пол, режим питания и экскрецию, компоненты других лекарственных композиций, используемых для соответствующего индивидуума одновременно или в разное время, и т.д., а также другие аналогичные факторы, хорошо известные в области фармацевтики, при этом специалисты в данной области могут легко определить и прописать эффективную дозировку для предполагаемого лечения.

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить один раз в день или разделить для введения несколько раз в день. Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить как отдельное терапевтическое средство или в комбинации с другими терапевтическими средствами, и можно вводить последовательно или одновременно с обычным терапевтическим средством. Принимая во внимание все вышеперечисленные факторы, фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить в количестве, при котором максимальный эффект может быть достигнут с минимальным количеством без побочного эффекта, при этом такое количество легко может определить специалист в области, к которой относится настоящее изобретение.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может проявлять превосходный эффект даже при использовании отдельно, но ее также можно использовать в комбинации с различными методами, такими как гормональная терапия, лекарственное лечение и т.д., для повышения терапевтической эффективности.

Настоящее изобретение также обеспечивает способ профилактики или лечения воспалительных ревматических заболеваний, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения, представленного формулой I выше, его оптических изомеров или его фармацевтически приемлемых солей; и метотрексата субъектам, нуждающимся в этом.

Способ лечения по настоящему изобретению может давать синергетический эффект или аддитивный эффект при лечении воспалительных ревматических заболеваний, таким образом, соединение указанной выше формулы I и метотрексат вводят в комбинации.

В вариантах осуществления настоящего изобретения на модели адъювант-индуцированного артрита было показано, что состояния артрита, такие как опухание, эритема, отек и т.д., улучшаются (Таблицы 16 и 17); уровень анти-CCP снижается (Таблица 20); и показано заметное усиление лечебного эффекта по сравнению с группой введения только эффективных компонентов, таким образом, соединение, представленное приведенной выше формулой I, и метотрексат вводят в комбинации.

В контексте настоящей заявки термин “терапевтически эффективное количество” относится к количеству соединения, представленного приведенной выше формулой I, его оптических изомеров или его фармацевтически приемлемых солей; и метотрексата, которые эффективны для профилактики или лечения воспалительных ревматических заболеваний.

В способе лечения по настоящему изобретению подходящее общее суточное количество соединения, представленного приведенной выше формулой I, его оптических изомеров или его фармацевтически приемлемых солей; и используемого метотрексата может быть определено в рамках правильного медицинского решения лечащими врачами, и может быть, например, в диапазоне от около 0,1 до 10000 мг/кг, в диапазоне от около 1 до 8000 мг/кг, в диапазоне от около 5 до 6000 мг/кг или в диапазоне от около 10 до 4000 мг/кг, и предпочтительно количество в диапазоне от около 50 до 2000 мг/кг можно вводить один раз в день или разделить для введения несколько раз в день. Однако для целей настоящего изобретения предпочтительно, чтобы конкретная терапевтически эффективная доза применялась по-разному к каждому конкретному пациенту в зависимости от различных факторов, включая тип и степень реакций, которые при этом должны достигаться, конкретную композицию, включая присутствие других препаратов, используемых в некоторых случаях, возраст пациента, массу тела, общее состояние здоровья, пол и режим питания, время введения, путь введения, скорость секреции композиции, период лечения и лекарственное средство, используемое вместе с конкретной композицией или одновременно с ней, а также другие подобные факторы, хорошо известные в области фармацевтики.

Также, в способе лечения по настоящему изобретению соединение, представленное приведенной выше формулой I, и метотрексат можно вводить одним и тем же способом или разными способами. В частности, соединение, представленное приведенной выше формулой I, можно вводить перорально, а метотрексат можно вводить подкожно, но не ограничиваясь этим.

Способ профилактики или лечения воспалительных ревматических заболеваний по настоящему изобретению не только имеет дело с самими заболеваниями до проявления их симптомов, но также включает ингибирование или предотвращение таких симптомов путем введения соединения, представленного приведенной выше формулой I, и метотрексата. При лечении заболеваний профилактическая или терапевтическая доза определенного активного компонента может варьироваться в зависимости от характеристик и тяжести заболеваний или состояний и пути введения активного компонента. Доза и ее частота могут варьироваться в зависимости от возраста, массы тела и реакций конкретного пациента. Подходящую дозу и применение легко могут выбрать специалисты в данной области техники, естественно, с учетом таких факторов. Кроме того, способ профилактики или лечения воспалительных ревматических заболеваний в соответствии с настоящим изобретением может также включать введение терапевтически эффективного количества дополнительных активных средств, которые полезны для профилактики или лечения заболеваний, наряду с соединением, представленным формулой I выше, и метотрексатом.

Настоящее изобретение также обеспечивает применение соединения, представленного приведенной выше формулой I, его оптических изомеров или его фармацевтически приемлемых солей; и метотрексата для получения лекарственного средства для профилактики или лечения воспалительных ревматических заболеваний. Соединение, представленное приведенной выше формулой I, его оптические изомеры или его фармацевтически приемлемые соли; и метотрексат для получения лекарственного средства могут быть объединены с фармацевтически приемлемыми адъювантами, разбавителями, носителями и т.д. и могут быть получены в виде комплексных препаратов вместе с другими активными средствами, чтобы они, таким образом, имели синергетическое действие.

Вопросы, обсуждаемые в связи с фармацевтической композицией, способом лечения и применением настоящего изобретения, применимы одинаково, если не противоречат друг другу.

Полезные эффекты изобретения

Фармацевтическая композиция, содержащая соединение, представленное формулой I в соответствии с настоящим изобретением, его оптические изомеры или его фармацевтически приемлемые соли; и метотрексат, может проявлять отличный эффект профилактики или лечения воспалительных ревматических заболеваний, таким образом, широко применяется для профилактики или лечения воспалительных ревматических заболеваний.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 представляет график, показывающий результаты клинической оценки каждой группы от 9-го дня до 16-го дня после индукции адъювант-индуцированного артрита для определения эффекта лечения соединением 374 (SM374).

Фиг. 2 представляет график, показывающий конечные результаты клинической оценки каждой группы в модели адъювант-индуцированного артрита для определения эффекта лечения соединением 374 (SM374).

Фиг. 3 представляет график, показывающий конечные результаты клинической оценки каждой группы в модели адъювант-индуцированного артрита для определения эффекта лечения соединениями 374, 413, 484, 530 и 652 (SM374, SM413, SM484, SM530 и SM652).

Фиг. 4 представляет график, показывающий конечные результаты определения массы тела в каждой группе в модели адъювант-индуцированного артрита для определения эффекта лечения соединениями 374, 413, 484, 530 и 652 (SM374, SM413, SM484, SM530 и SM652).

Фиг. 5 представляет результат измерения уровней анти-CCP lgG в модели адъювант-индуцированного артрита.

Фиг. 6 показывает результат фармакокинетического анализа фармацевтической композиции по настоящему изобретению.

Способ осуществления изобретения

Далее настоящее изобретение будет описано более подробно посредством примеров получения и вариантов осуществления. Однако эти примеры получения и варианты осуществления представлены только в целях иллюстрации настоящего изобретения, и, таким образом, настоящее изобретение не ограничивается ими.

Пример получения 1. Синтез N-(4-(гидроксикарбамоил)бензил)-N-(3-(трифторметил)фенил)морфолин-4-карбоксамид {Соединение 374 (SM374)}

[Стадия 1] Синтез метил 4-((3-(трифторметил)фениламино)метил)бензоата)

3-(трифторметил)бензоламин (0,30 г, 1,84 ммоль) и карбонат калия (0,76 г, 5,53 ммоль) растворяли в диметилформамиде (DMF, 5 мл), после этого в смесь вводили метил 4-(бромметил)бензоат (0,42 г, 1,84 ммоль). Полученный раствор подвергали взаимодействию при комнатной температуре в течение одного дня и разбавляли этилацетатом. Реакционную смесь промывали водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия, затем сушили и фильтровали при помощи безводного сульфата магния и затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией (диоксид кремния; этилацетат/гексан=20%) с получением указанного в заголовке соединения (0,37 г, 65%).

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 7,93 (д, 2 H, J=8,3 Гц), 7,49 (д, 2 H, J=8,3 Гц), 7,24 (т, 1 H, J=7,9 Гц), 6,88-6,78 (м, 4 H), 4,42 (д, 2 H, J=6,1 Гц), 3,83 (с, 3H), MS (ESI) m/z 310 (M⁺ + H).

[Стадия 2] Синтез метил 4-((((4-нитрофенокси)карбонил)(3-(трифторметил)фенил)амино)метил)бензоата

Метил 4-((3-(трифторметил)фениламино)метил)бензоат (0,26 г, 0,82 ммоль) и 4-нитрофенил карбонохлоридат (0,33 г, 1,65 ммоль) растворяли в ацетонитриле (10 мл), после этого в смесь вводили карбонат калия (0,34 г, 2,47 ммоль). Полученный раствор подвергали взаимодействию при комнатной температуре в течение одного дня и разбавляли этилацетатом. Реакционную смесь промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, затем сушили и фильтровали при помощи безводного сульфата натрия и затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией (диоксид кремния; этилацетат/гексан=20%) с получением указанного в заголовке соединения (0,35 г, 89%) в виде бесцветного масла.

¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,20 (д, 2 H, J=10,2 Гц), 8,01 (д, 2 H, J=7,8 Гц), 7,56-7,46 (м, 3H), 7,35 (д, 3 H, J=8,0 Гц), 7,26 (д, 2 H, J=8,1 Гц), 5,01 (шир.с, 2H), 3,90 (с, 3H).

[Стадия 3] Синтез метил 4-((N-(3-(трифторметил)фенил)морфолин-4-карбоксамидо)метил)бензоата

Метил 4-((((4-нитрофенокси)карбонил)(3-(трифторметил)фенил)амино)метил)бензоат (0,29 г, 0,60 ммоль) растворяли в диметилформамиде (10 мл), после этого в смесь вводили карбонат калия (0,25 г, 1,81 ммоль) и морфолин (0,05 мл, 0,60 ммоль). Полученный раствор подвергали взаимодействию при 60°С в течение двух дней и затем разбавляли насыщенным раствором хлорида аммония. Осуществляли экстрагирование этилацетатом, после этого полученный экстракт сушили и фильтровали при помощи безводного сульфата натрия и затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией (диоксид кремния; этилацетат/гексан=50%) с получением указанного в заголовке соединения (0,15 г, 60%).

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 7,97 (д, 2 H, J=8,2 Гц), 7,43-7,32 (м, 5H), 7,20 (д, 1 H, J=8,0 Гц), 4,94 (с, 2H), 3,90 (с, 3H), 3,50 (т, 4 H, J=4,8 Гц), 3,25 (т, 4 H, J=4,8 Гц); MS (ESI) m/z 423 (M⁺ + H).

[Стадия 4] Синтез N-(4-(гидроксикарбамоил)бензил)-N-(3-(трифторметил)фенил)морфолин-4-карбоксамида

Метил 4-((N-(3-(трифторметил)фенил)морфолин-4-карбоксамидо)метил)бензоат (0,15 г, 0,36 ммоль) растворяли в метаноле (5 мл), после этого в смесь вводили водный раствор гидроксиламина (50% масс., 1 мл) и гидроксид калия (0,10 г, 1,81 ммоль) и затем перемешивали в течение ночи. После завершения реакции полученный раствор подвергали дистилляции при пониженном давлении для удаления метанола, после этого осуществляли экстрагирование этилацетатом и водой для выделения продукта реакции. Полученный экстракт сушили и фильтровали при помощи безводного сульфата натрия и затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток перемешивали в диэтиловом эфире, после этого получали твердый продукт, фильтровали и сушили с получением указанного в заголовке соединения (0,082 г, 54%) в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (400 МГц, MeOD-d₃) δ 11,14 (шир.с, 1 H), 8,99 (шир.с, 1 H), 7,85 (д, 2 H, J=8,0 Гц), 7,66-7,27 (м, 6 H), 4,94 (с, 2 H), 3,41 (с, 2 H), 3,15 (с, 2 H). MS (ESI) m/z 424 (M⁺ + H).

Пример получения 2. Синтез N-(2,4-дифторфенил)-N-(4-(гидроксикарбамоил)бензил)морфолин-4-карбоксамида {Соединение 413 (SM413)}

Указанное в заголовке соединение получали по существу таким же способом, как описано в Примере 69 публикации корейского патента №2014-0128886 (Международная патентная публикация № WO 2014/178606).

Пример получения 3. Синтез N-(4-(гидроксикарбамоил)бензил)-N-(3-метоксифенил)морфолин-4-карбоксамида {Соединение 484 (SM484)}

Указанное в заголовке соединение получали по существу таким же способом, как описано в Примере 108 публикации корейского патента №2014-0128886 (Международная патентная публикация № WO 2014/178606).

Пример получения 4. Синтез N-(3-фторфенил)-N-(4-гидроксикарбамоил)бензил)морфолин-4-карбоксамида {Соединение 530 (SM530)}

Указанное в заголовке соединение получали по существу таким же способом, как описано в Примере 135 публикации корейского патента №2014-0128886 (Международная Патентная Публикация № WO 2014/178606).

Пример получения 5. Синтез N-(3-фторфенил)-N-(4-(гидроксикарбамоил)бензил)-1,4-оксазепан-4-карбоксамида {Соединение 652 (SM652)}

[Стадия 1] Синтез Метил 4-(N-(3-фторфенил)-1,4-оксазепан-4-карбоксамидо)метил)бензоата

Реакционный раствор, в котором метил 4-(((3-фторфенил)((4-нитрофенокси)карбонил)амино)метил)бензоат (0,290 г, 0,683 ммоль), полученный по существу таким же способом, как Стадия 2 Примера получения 4, описан в Примере 135 публикации корейского патента №2014-0128886 (Международная Патентная Публикация № WO 2014/178606). 1,4-оксазепан (0,188 г, 1,367 ммоль) и карбонат калия (0,283 г, 2,050 ммоль) растворяли в DMF (10 мл), перемешивали при 60°С в течение одного дня. А затем насыщенный водный раствор NaHCO₃ вливали в реакционную смесь, которую затем экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным водным раствором хлората натрия, затем удаляли влагу при помощи безводного сульфата магния и затем концентрировали при пониженном давлении. Концентрат очищали колоночной хроматографией (SiO₂, 15 г картридж; этилацетат/гексан=20 до 50%) и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения (0,116 г, 43,9%) в виде бесцветной жидкости.

[Стадия 2] Синтез N-(3-фторфенил)-N-(4-(гидроксикарбамоил)бензил)-1,4-оксазепан-4-карбоксамида

Метил 4-((N-(3-фторфенил)-1,4-оксазепан-4-карбоксамидо)метил)бензоат (0,116 г, 0,3 ммоль), который был исходным веществом, полученным по существу таким же способом, как [Стадия 3] Примера получения 1, растворяли в метаноле (10 мл), после этого в смесь вводили водный раствор гидроксиламина (50% масс., 1 мл) и гидроксид калия (0,168 г, 3,01 ммоль) и затем перемешивали в течение ночи. После завершения реакции полученный раствор подвергали дистилляции при пониженном давлении для удаления метанола, после этого осуществляли экстрагирование этилацетатом и водой для выделения продукта реакции. Полученный экстракт сушили и фильтровали при помощи безводного сульфата натрия и концентрировали при пониженном давлении, после этого остаток перемешивали в диэтиловом эфире с получением твердого продукта, который фильтровали и сушили, и таким образом получали указанное в заголовке соединение (0,032 г, 27,5%) в виде белого твердого вещества.

Пример получения 6. Подготовка модели адъювант-индуцированного артрита (AIA)

Крыс Lewis (самки, возраст пять недель) закупали в Central Lab Animal, Inc. и содержали в контролируемых условиях при температуре 22 ± 2°С, влажности 44-56% и с 12-часовым циклом свет/темнота, при этом они имели свободный доступ к стандартному корму и воде в течение одной недели перед исследованием. Полный Адъювант Фрейнда (Chondrex), содержащий 10 мг/мл убитого нагреванием микобактериального токсина, полностью смешивали вместе, после этого 100 мкл раствора отбирали и подкожно вводили каждой крысе в верхнюю часть хвоста для индукции артрита.

Для введения лекарственного средства соединения 374 (SM374) и оценки его эффекта крыс разделяли на 11 групп (по 9, 10 или 11 животных на группу) за день до или через девять дней после индукции артрита, после этого каждую группу классифицировали в соответствии с вводимыми веществами (носитель, соединение 374 (SM374) или метотрексат (MTX)) и путем введения (пероральное введение (п/о) или интраперитонеальное введение (и/п)), как показано в следующей таблице 13.

Таблица 13
Группа	Вводимая доза (мг/кг)	Количество лекарственного средства	Схема введения	Количество животных	Путь введения
Носитель	-	-	-	10	п/о
SM374	0,1	2 мг	Один раз в день	10	п/о
	0,5	10 мг		11
	1	20 мг		10
10	200 мг	11
MTX	1	4 мг	Один раз в неделю	9	и/п
MTX+SM374	1+0,1	4+2 мг	Один раз в неделю+Один раз в день	10	и/п+п/о
	1+0,5	4+10 мг		10
	1+1	4+20 мг		10
1+10	4+200 мг	10
MTX	3	24 мг	Два раза в неделю	10	и/п
(Носитель - Cremophor EL:этанол:физиологический раствор=1:1:8, 5 мл/кг)

Также, для введения соединений 374, 413, 484, 530 и 652 (SM374, SM413, SM484, SM530 и SM652) в качестве лекарственного средства и оценки их эффекта крыс разделяли на 13 групп (по 9 или 10 животных на группу) через восемь дней после индукции артрита и каждую группу классифицировали в соответствии с вводимыми веществами (носитель, SM374, SM413, SM484, SM530, SM652 и MTX) и путем введения (пероральное или интраперитонеальное введение) как показано в следующей таблице 14.

Таблица 14
Группа	Вводимая доза (мг/кг)	Схема введения	Количество животных	Путь введения
Носитель	один раз в день	9	п/о
SM374		10		9
SM413				9
SM484				9
SM530				9
SM652	9
MTX	1	один раз в неделю	9	и/п
MTX+SM374	1+10	один раз в неделю + один раз в день	9	и/п+п/о
MTX+SM413			9
MTX+SM484			9
MTX+SM530			9
MTX+SM652	10
MTX	3	один раз в неделю	9	и/п
(Носитель - Cremophor EL:этанол:физиологический раствор=1:1:8, 5 мл/кг)

Все результаты указаны как среднее значение ± стандартное отклонение (среднее значение ± SD) или среднее значение ± стандартная ошибка среднего (среднее значение ± SEM); статистическую значимость оценивали с использованием критерия Манна-Уитни и Graph pad prism version 4.0; и значение считалось статистически значимым, если p<0,05 или <0,01 во всех исследованиях.

Пример 1: Анализ клинической оценки в AIA модели

(1) Результаты анализа клинической оценки для соединения 374

Для определения эффективности композиции по изобретению для профилактики или лечения артрита в AIA модели осуществляли анализ на основании клинических оценок крыс, которым вводили соединение 374 (SM 374, один раз в день) или MTX (один раз в неделю или два раза в неделю) с 9-го дня по 16-й день после индукции артрита.

В частности, наблюдали степень опухания, эритему и т.д. в каждом суставе крыс, после этого рассчитывали клинические оценки в соответствии с системой балльной оценки, описанной в следующей таблице 15, при этом клинические оценки четырех суставов складывали с получением общей оценки для каждой крысы (Vishwakarma et al., 2013).

Таблица 15
Оценка	Клиническая оценка
0	Нет ни опухания, ни эритемы.
1	Появляется небольшое опухание и/или эритема.
2	Появляется умеренный или менее выраженный отек.
3	Появляется явный отек с ограничением использования суставов.
4	Появляется чрезмерный отек с неподвижностью суставов.

Результаты анализа клинической оценки для соединения 374 (SM374) показаны в следующей таблице 16 и на Фиг. 1 и 2.

Таблица 16
Группа	Схема введения	Количество животных	9-й день	13-й день	16-й день	Снижение клинических оценок (%)
Носитель	-	10	0,0±0,0	2,9±2,2	6,9±2,6	-
SM374	0,1 мг/кг	Один раз в день	10	0,0±0,0	4,3±2,9	6,9±3,0	0
	0,5 мг/кг		11	0,0±0,0	2,6±2,3	6,7±4,2	2,9
	1 мг/кг		10	0,0±0,0	2,7±3,0	5,9±4,4	14,5
10 мг/кг	11	0,0±0,0	2,9±2,9	7,1±3,1	- 2,9
MTX	1 мг/кг	Один раз в неделю	9	0,0±0,0	2,2±1,2	5,9±2,8	14,5
MTX + SM374	1 мг/кг+0,1 мг/кг	Один раз в неделю+Один раз в день	10	0,0±0,0	1,5±2,0	5,3±2,9	23,2
	1 мг/кг+0,5 мг/кг		10	0,0±0,0	1,2±1,8	4,8±3,6	30,4
	1 мг/кг + 1 мг/кг		10	0,0±0,0	1,1±2,2	2,5±2,5**	63,8
1 мг/кг + 10 мг/кг	10	0,0±0,0	1,0±1,7*	2,1±1,9**	69,6
MTX	3 мг/кг	Два раза в неделю	10	0,0±0,0	1,1±1,6*	2,4±3,0**	65,2
(среднее значение ± SD, * P < 0,05, ** P < 0,01)

Как показано на Фиг. 1 и 2 и в Таблице 16, для группы, которой вводили MTX и соединение 374 (SM374) в комбинации, было определено, что клинические оценки заметно снижены по сравнению с группой, которой вводили такую же дозу только MTX или только соединения 374 (SM374).

Приведенные выше результаты показывают, что введение соединения 374 (SM374) и MTX в комбинации демонстрирует отличный синергетический эффект и, таким образом, может эффективно применяться в профилактике или лечении артрита.

(2) Результаты анализа клинической оценки для соединений 374, 413, 484, 530 и 652

Для определения эффективности композиции по изобретению для профилактики или лечения артрита в AIA модели осуществляли анализ на основании клинических оценок крыс, которым вводили соединения 374, 413, 484, 530 и 652 (SM374, SM413, SM484, SM530 и SM652, один раз в день) или MTX (один раз в неделю) с 8-го дня по 18-й день после индукции артрита. Результаты показаны на Фиг. 3 и в таблице 17.

Таблица 17
Группа	Вводимая доза (мг/кг)	Схема введения	Количество животных	11-й день	15-й день	18-й день	Снижение клинических оценок (%)
Носитель	-	9	0,0±0,0	1,6±0,8	6,1±1,5	-
SM374	10	Один раз в день	9	0,0±0,0	1,6±0,7	4,8±1,4	21,3
SM413			9	0,0±0,0	3,0±1,4	6,3±1,4	-3,3
SM484			9	0,0±0,0	2,9±1,3	4,9±1,7	19,7
SM530			9	0,0±0,0	1,2±0,5	4,2±1,6	31,1
SM652	9	0,0±0,0	1,4±0,9	4,9±1,6	19,7
MTX	1	Один раз в неделю	9	0,0±0,0	1,3±0,9	4,7±1,9	23,0
MTX + SM374	1+10	Один раз в неделю + Один раз в день	9	0,0±0,0	0,3±0,3	1,2±0,7*,#	80,3
MTX + SM413			9	0,0±0,0	1,1±0,8	1,9±1,3*	68,9
MTX + SM484			9	0,0±0,0	0,2±0,2	0,6±0,5**,#	90,2
MTX + SM530			9	0,0±0,0	1,4±0,8	2,2±1,0*	63,9
MTX + SM652	10	0,0±0,0	0,5±0,6	1,2±0,9*,#	80,3
MTX	3	Один раз в неделю	9	0,0±0,0	0,0±0,0	0,2±0,2**,#	96,7
(среднее значение ± SEM, [* или ** означает статистическую значимость по сравнению с группой введения носителя, * P < 0,05, ** P < 0,01]. [# означает статистическую значимость по сравнению с группой, не получавшей MTX (1 мг/кг), # P < 0,05])

Как показано на Фиг. 3 и в Таблице 17, для группы, которой вводили соединение 374, 413, 484, 530 или 652 (SM374, SM413, SM484, SM530 или SM652); и MTX в комбинации было определено, что клинические оценки существенно снижены по сравнению с группой, которой вводили такую же дозу только соединения 374, 413, 484, 530 или 652 (SM374, SM413, SM484, SM530 или SM652) или только MTX.

Приведенные выше результаты показывают, что введение соединения 374, 413, 484, 530 или 652 (SM374, SM413, SM484, SM530 или SM652); и MTX в комбинации демонстрирует отличный синергетический эффект и, таким образом, может эффективно применяться в профилактике или лечении артрита.

Пример 2: Анализ массы тела в AIA модели

(1) Результаты анализа массы тела для группы, которой вводили соединение 374

Осуществляли анализ массы тела крыс, которым вводили соединение 374 (SM 374, один раз в день) или MTX (один раз в неделю или два раза в неделю) с 9-го дня до 16-й день после индукции AIA. Результаты показаны в следующей таблице 18.

Таблица 18
Группа	Схема введения	Количество животных	Масса тела (г)
9-й день	13-й день	16-й день
Носитель	-	10	157,4±10,4	153,5±11,9	147,5±10,3
SM374	0,1 мг/кг	Один раз в день	10	157,3±10,1	151,3±13,3	144,2±10,5
	0,5 мг/кг		11	157,3±10,0	153,1±10,8	148,6±9,5
	1 мг/кг		10	157,3±10,7	156,9±8,9	151,6±11,5
10 мг/кг	11	157,3±9,9	151,6±12,2	147,6±9,3
MTX	1 мг/кг	Один раз в неделю	9	157,3±11,9	160,6±4,2	153,8±7,9
MTX+ SM374	1 мг/кг + 0,1 мг/кг	Один раз в неделю+один раз в день	10	157,2±12,0	163,7±7,0	154,3±10,7
	1 мг/кг + 0,5 мг/кг		10	157,2±8,4	157,7±8,0	152,9±12,8
	1 мг/кг + 1 мг/кг		10	157,2±7,5	159,6±8,9	155,0±9,7
1 мг/кг + 10 мг/кг	10	157,2±7,4	154,5±16,0	154,8±13,3
MTX	3 мг/кг	Два раза в неделю	10	157,2±7,3	159,6±5,7	157,6±5,7*
(среднее значение ± SD, звездочка (* или **) означает статистическую значимость по сравнению с группой введения носителя, * P < 0,05, ** P < 0,01)

Как показано в Таблице 18 выше, для группы, которой вводили соединение 374 (SM374) и MTX в комбинации, было определено, что масса тела животных не снижалась, а существенно увеличивалась по сравнению с группой, которой вводили носитель.

(2) Результаты анализа массы тела для групп, которым вводили соединения 374, 413, 484, 530 и 652

Осуществляли анализ массы тела крыс, которым вводили соединение 374, 413, 484, 530 или 652 (SM374, SM413, SM484, SM530 или SM652, один раз в день) или MTX (один раз в день) с 8-го дня по 18-й день после индукции AIA.

Таблица 19
Группа	Вводимая доза (мг/кг)	Схема введения	Количество животных	Масса тела (г)
8-й день	11-й день	15-й день	18-й день
Носитель	-	-	9	151,3±3,2	154,2±2,7	160,3±3,2	156,7±3,7
SM374	10	Один раз в день	9	151,3±2,1	153,9±1,5	159,2±1,5	157,6±3,1
SM413			9	151,3±2,9	151,4±3,9	157,4±4,2	155,2±4,5
SM484			9	151,4±2,5	154,7±2,1	160,7±3,3	158,3±4,6
SM530			9	151,2±2,6	153,0±2,1	161,1±2,1	159,2±4,5
SM652	9	152,8±2,4	157,6±1,9	158,8±1,6	156,8±3,9
MTX	1	Один раз в неделю	9	151,2±2,4	152,1±2,3	156,9±2,8	155,0±3,9
MTX + SM374	1+10	Один раз в неделю + один раз в день	9	151,9±2,4	153,8±1,0	163,3±1,7	162,6±2,8
MTX + SM413			9	151,2±2,3	153,6±2,5	162,3±3,4	164,6±4,5
MTX + SM484			9	151,3±2,5	153,6±2,7	164,0±2,7	164,4±2,5
MTX + SM530			9	151,2±2,3	151,0±1,8	158,2±2,3	158,1±4,1
MTX + SM652	10	151,3±3,0	151,5±3,4	159,4±3,5	162,9±3,7
MTX	3	Один раз в неделю	9	151,2±2,4	151,6±3,8	160,0±2,9	164,7±2,5

Как показано на Фиг. 4 и в Таблице 19 выше, для группы, которой вводили соединение 374, 413, 484, 530 или 652 (SM374, SM413, SM484, SM530 или SM652); и MTX в комбинации, было определено, масса тела животных существенно увеличивалась по сравнению с группой, которой вводили носитель.

Пример 3: Анализ анти-CCP IgG в AIA модели

Эффект соединения 374 (SM374) и MTX для профилактики или лечения артрита в соответствии с их введением в комбинации оценивали на основании анализа анти-CCP IgG, известного как диагностический маркер для ревматоидного артрита.

В частности, кровь собирали из яремной вены каждой крысы, которой вводили соединение 374 (SM374, один раз в день) и MTX (один раз или два раза в неделю) с 9-го дня до 16-й день после индукции AIA, затем плазму отделяли для измерения анти-CCP IgG с использованием набора QUANTA Lite^®CCP3 (циклический цитруллинированный пептид 3) IgG ELISA (INOVA Diagnostics Inc., U.S., catalog no. 704535) в соответствии с протоколом изготовителя, при этом результаты анализа показаны на Фиг. 5 и в Таблице 20.

Таблица 20
Группа	Количество животных (N)	Анти-CCP IgG (RU)
Носитель	10	226,2±14,0
SM374	0,5 мг/кг	11	216,2±30,0
	1 мг/кг	10	221,8±28,0
10 мг/кг	11	206,6±32,9
MTX	1 мг/кг	11	208,0±24,3
MTX+ SM374	1 мг/кг + 0,5 мг/кг	11	216,8±25,8
	1 мг/кг + 1 мг/кг	10	205,3±25,9*
1 мг/кг + 10 мг/кг	8	154,8±44,1**
MTX	3 мг/кг	8	104,6±56,7**
(среднее значение ± SD, * P < 0,05, ** P < 0,01)

Как показано на Фиг. 5 и в Таблице 20, для группы, которой вводили соединение 374 (SM374, 1 или 10 мг/кг) и MTX в комбинации, было определено, что анти-CCP IgG значение ниже по сравнению с группами, которым вводили носитель, только MTX и только соединение 374 (SM374).

Приведенные выше результаты показывают, что введение соединения 374 (SM374) и MTX в комбинации демонстрирует отличный синергетический эффект и, таким образом, может эффективно применяться в профилактике или лечении артрита.

Пример 4: Фармакокинетический анализ

Биоэквивалентность оценивали при помощи фармакокинетического анализа при введении соединения 374 (SM374) по изобретению и MTX в комбинации, а также введении только MTX.

В частности, после введения соединения 374 (SM374) и MTX плазму отделяли от крови, собранной у крыс для каждого временного интервала, затем в эту плазму добавляли органический растворитель для осуществления депротеинизации и экстрагирования, полученный таким образом образец подвергали количественному анализу методом хидкостной хроматографии и масс-спектрометрии (ЖХ/МС) вместе с эталонным образцом, обработанным в таких же условиях, для определения концентрации соединения 374 (SM374) и MTX (Фиг. 6 и Таблица 21) в плазме крыс, а также каждого PK параметра (Таблица 22).

Таблица 21
Время (ч)	Количество животных	Концентрация в плазме (нг/мл)
MTX (1 мг/кг)	MTX (1 мг/кг) + SM374 (10 мг/кг)
0	3	BLOQ (ниже порога количественного определения)	BLOQ
0,5	3	1299±97,3	1352±256
1	3	747±129	794±73,5
2	3	245±108	224±128
4	3	24,4±9,7	22,4±10,2
8	3	3,0±0,3	2,9±0,2

Таблица 22
Время (ч)	Количество животных	MTX (1 мг/кг)	MTX (1 мг/кг) + SM374 (10 мг/кг)
T1/2 (ч)	3	0,9±0,0	0,8±0,0
Tmax(ч)	3	0,5±0,0	0,5±0,0
Cmax(нг/мл)	3	1299±97,3	1352±256
AUC0→8ч (нг.ч/мл)	3	1502±231	1518±139
AUCinf (нг.ч/мл)	3	1506±231	1522±139

Как показано на Фиг. 6 и в Таблицах 21 и 22, было определено, что введение соединения 374 (SM374) и MTX в комбинации с фармакокинетической точки зрения подобно введению MTX отдельно.

Хотя конкретные части настоящего изобретения подробно описаны выше, для специалистов в данной области должно быть очевидно, что такие подробные описания представлены только для иллюстрации иллюстративных вариантов осуществления, но не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения. Таким образом, должно быть понятно, что существенный объем настоящего изобретения определяется прилагаемой формулой изобретения и ее эквивалентами.

1. Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения ревматоидного артита, включающая соединение, представленное следующей формулой II, и метотрексат:

[Формула II]

,

где

Y выбран из следующей группы:

,

M представляет собой O (в этом случае l и m равны 0),

R_b представляет собой водород,

n представляет собой целое число 1,

Z представляет собой и

P_a и P_b каждый независимо представляет собой водород; гидрокси; -C_1-4 линейный или разветвленный алкил, при этом он является незамещенным, или по меньшей мере один водород замещен галогеном; галоген; -CF₃; -OCF₃; -CN; -C_1-6 линейный или разветвленный алкокси; -C_2-6 линейный или разветвленный алкилалкокси; -CH₂F или -C_1-3 спирт.

2. Фармацевтическая композиция по п. 1, где соединение, представленное формулой II выше, представляет собой по меньшей мере одно, выбранное из следующих:

соединение 255 ();

соединение 279 ();

соединение 372 ();

соединение 374 ();

соединение 385 ();

соединение 391 ();

соединение 413 ();

соединение 439 ();

соединение 458 ();

соединение 484 ();

соединение 500 ();

соединение 530 ();

соединение 580 ();

соединение 652 ();

соединение 771 ();

соединение 772 ();

соединение 773 ();

соединение 774 ();

соединение 776 () и

соединение 791 ().

3. Фармацевтическая композиция по п. 1, где соединение формулы II вводят перорально.

4. Способ профилактики или лечения ревматоидного артрита, включающий введение терапевтически эффективного количества композиции, включающей соединение, представленное следующей формулой II, и метотрексат:

[Формула II]

,

где

Y выбран из следующей группы:

,

M представляет собой O (в этом случае l и m равны 0),

R_b представляет собой водород,

n представляет собой целое число 1,

Z представляет собой и

P_a и P_b каждый независимо представляет собой водород; гидрокси; -C_1-4 линейный или разветвленный алкил, при этом он является незамещенным или по меньшей мере один водород замещен галогеном; галоген; -CF₃; -OCF₃; -CN; -C_1-6 линейный или разветвленный алкокси; -C_2-6 линейный или разветвленный алкилалкокси; -CH₂F или -C_1-3 спирт.

5. Применение композиции, включающей соединение, представленное следующей формулой II, и метотрексат, для получения лекарственного средства для профилактики или лечения ревматоидного артрита:

[Формула II]

,

где

Y выбран из следующей группы:

,

M представляет собой O (в этом случае l и m равны 0),

R_b представляет собой водород,

n представляет собой целое число 1,

Z представляет собой и

P_a и P_b каждый независимо представляет собой водород; гидрокси; -C_1-4 линейный или разветвленный алкил, при этом он является незамещенным, или по меньшей мере один водород замещен галогеном; галоген; -CF₃; -OCF₃; -CN; -C_1-6 линейный или разветвленный алкокси; -C_2-6 линейный или разветвленный алкилалкокси; -CH₂F или -C_1-3 спирт.

6. Применение композиции, включающей соединение, представленное следующей формулой II, и метотрексат, для профилактики или лечения ревматоидного артрита:

[Формула II]

,

где

Y выбран из следующей группы:

,

M представляет собой O (в этом случае l и m равны 0),

R_b представляет собой водород,

n представляет собой целое число 1,

Z представляет собой и

P_a и P_b каждый независимо представляет собой водород; гидрокси; -C_1-4 линейный или разветвленный алкил, при этом он является незамещенным, или по меньшей мере один водород замещен галогеном; галоген; -CF₃; -OCF₃; -CN; -C_1-6 линейный или разветвленный алкокси; -C_2-6 линейный или разветвленный алкилалкокси; -CH₂F или -C_1-3 спирт.