Способ лабораторной диагностики тяжести covid-19 по определению соотношения активности фактора виллебранда и adamts-13

Авторы патента:

Безнощенко Ольга Сергеевна (RU)

Кречетова Любовь Валентиновна (RU)

Иванец Татьяна Юрьевна (RU)

Менжинская Ирина Владимировна (RU)

Долгушина Наталия Витальевна (RU)

Романов Андрей Юрьевич (RU)

Городнова Елена Александровна (RU)

G01N33/86 - основанные на времени свертываемости крови

G01N33/6893 - Исследование или анализ материалов особыми способами, не отнесенными к предыдущим группам

G01N33/68 - с использованием протеинов, пептидов или аминокислот

G01N2800/26 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

C12Q1/56 - использующие факторы свертывания крови, например тромбин, тромбопластин, фибриноген

C12Q1/37 - использующие пептидазу или протеиназу

Владельцы патента RU 2774143:

федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для лабораторной диагностики тяжести COVID-19. Проводят определение фактора Виллебранда в крови. У пациента с диагнозом COVID-19, подтвержденным лабораторно, при определении в плазме крови фактора Виллебранда оценивают его ристоцитин-кофакторную активность и, дополнительно, определяют активность ADAMTS-13. Затем рассчитывают соотношение активности фактора Виллебранда и ADAMTS-13. При соотношении менее 1,55 диагностируют у пациента легкую степень тяжести COVID-19. При соотношении более 1,55 диагностируют у пациента среднюю или тяжелую степень COVID-19. Способ обеспечивает возможность высокочувствительной и высокоспецифичной лабораторной диагностики, позволяющей с высокой точностью прогнозировать тяжесть течения COVID-19, за счет определения соотношения ристоцитин-кофакторной активности фактора Виллебранда и активности ADAMTS-13 у пациента в крови. 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно клинической лабораторной диагностике, может быть использовано для выявления больных с COVID-19 легкой, средней и тяжелой степенью заболевания. На основании данных изобретения пациентов можно стратифицировать на группы тяжести, согласно которым будут использоваться различные алгоритмы административных и медицинских действий.

При COVID-19 наблюдается дисбаланс между фактором Виллебранда (vWF) и дезинтегрин-подобная металлопротеиназа с мотивом тромбоспондина 1,13 (ADAMTS-13). Концентрация и активность vWF повышается, а уровень и активность ADAMTS-13 снижается; недостаточность ADAMTS-13 приводит к накоплению сверхбольших мультимеров vWF, что индуцирует спонтанное образование микротромбов в артериолах и капиллярах с последующим развитием ишемии тканей и органов [1]. Наиболее тяжелый дефицит ADAMTS-13 возникает при тромботической тромбоцитопенической пурпуре (ТТП), расстройстве, характеризующемся уровнем ADAMTS-13 менее 10% от нормы, поэтому тромбоз является ключевым признаком ТТП [2]. Относительный дефицит ADAMTS-13 может возникать при различных патофизиологических состояниях, включая вторичные микроангиопатии [3]. Люди, с исходно невысоким уровнем vWF (группа крови I (О)), имеют низкий риск инфицирования и развития тяжелой формы COVID-19 по сравнению с другими лицами, имеющими II (А), III (В), IV (AB) группы крови [4]. Цитокиновый профиль при COVID-19 не только способствует высвобождению vWF из эндотелия, но и снижает синтез и активность ADAMTS-13 [5]. Следовательно, необходимо оценивать баланс между активностью vWF и ADAMTS-13.

Известен лабораторный способ определения тяжести течения инфекции с помощью оценки уровня ADAMTS-13. Основной результат данного исследования - умеренное снижение активности ADAMTS-13, которое коррелировало с тяжестью заболевания и внутрибольничной летальностью. Тромботическая тромбоцитопеническая пурпура (ТТП) была исключена ввиду отсутствия глубокого дефицита ADAMTS-13 у пациентов, что указывало на вторичную тромботическую микроангиопатию (ТМА), которая обусловливается инфекциями [5]. Главный недостаток данного способа - отсутствие оценки активности ADAMTS-13.

Также возможна оценка тяжести течения инфекции COVID-19 путем определения активности фактора Виллебранда в сыворотке крови. При увеличении уровня ФВ относительно верхней границы нормы в 1,3-1,5 раз диагностируют легкое течение инфекции, в 1,51-2,5 раз относительно верхней границы нормы - средней тяжести течение инфекции, в более 2,51 раз относительно верхней границы нормы - тяжелое течение инфекции. Недостаток этого способа - отсутствие оценки количества и активности ADAMTS-13 [7].

Наиболее близким к нашему способу является способ определения соотношения vWF:RCo/ADAMTS-13 для мониторинга состояния госпитализированных пациентов с COVID-19. Соотношение vWF:RCo/ADAMTS-13≥5,7 (AUC=0,81 [0,70-0,92], Р<0,001 прогнозировало поступление в отделение реанимации и интенсивной терапии. Соотношение vWF:RCo/ADAMTS-13≥6,5 прогнозировало внутрибольничную смертность AUC=0,71 (Р=0,003).

Заявляемый способ лабораторной диагностики позволяет прогнозировать течение легкой или средней и тяжелой степени COVID-19, демонстрирует более высокую точность прогноза относительно течения COVID-19 (AUC=82,6) по сравнению со способом-прототипом (AUC=0,81) с высокой специфичностью Sp=90%. Точность прогноза течения заболевания является важным критерием для маршрутизации и применения/изменения тактики лечения пациента.

Технической задачей, на решение которой направлено настоящее изобретение, является создание высокочувствительного и высокоспецифичного способа лабораторной диагностики, позволяющего с высокой точностью прогнозировать тяжесть течения COVID-19.

Задача достигается следующим образом: у пациента с диагнозом COVID-19, подтвержденным лабораторно, определяют соотношение ристоцитин-кофакторной активности фактора Виллебранда и активности ADAMTS-13. Пороговое значение данного показателя, отличающее пациентов с легким течением COVID-19 от пациентов со среднем и тяжелым течением инфекционного процесса - 1,55 (р=0,0005).

Для решения поставленной задачи нами проведено обсервационное проспективное исследование. Был обследован 141 пациент с подтвержденным диагнозом COVID-19 различной степени тяжести: легкая (n=39), средняя (n=65), тяжелая (n=37). Тяжесть COVID-19 устанавливали на основании временных методических рекомендаций Минздрава России «Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19)» [6]. Взятие образца крови проводили при обращении за медицинской помощью или на 2-3 сутки пребывания в стационаре. У пациентов с диагнозом COVID-19, подтвержденным лабораторно, определяли соотношение ристоцитин-кофакторной активности фактора Виллебранда и активности ADAMTS-13 в плазме крови. Получены следующие результаты: пороговое значение данного показателя, отличающее пациентов с COVID-19 легкой степени от пациентов со средней и тяжелой степенью - 1,55 (AUC=82,6%, Se=73,3%, Sp=90%; Р<0,0001).

Использование данного способа подтверждается конкретными клиническими примерами:

Пример 1.

Пациентка 3. 29 лет наблюдалась амбулаторно с клиническим диагнозом: легкое течение COVID-19, температура тела 37,5°С, катаральные явления, SpO2 97%, по данным КТ органов грудной клетки изменений не выявлено. Соотношение ристоцитин-кофакторной активности фактора Виллебранда и активности ADAMTS-13 в плазме крови составило 0,8. Госпитализация не потребовалась.

Пример 2.

Пациент К., 59 лет, поступил в инфекционное отделение с клиническим диагнозом: COVID-19 средней степени тяжести, температура тела 39°С, катаральные явления, кашель, одышка при обычных нагрузках, SpO2 94%, двусторонняя полисегментарная пневмония, по данным КТ органов грудной клетки объем поражения легочной ткани пациента составил 32%. Соотношение ристоцитин-кофакторной активности фактора Виллебранда и активности ADAMTS-13 в плазме крови составило 3,3.

Пример 3.

Пациентка О., 76 лет, поступила в отделение анестезиологии и реанимации с клиническим диагнозом: COVID-19 тяжелое течение, температура тела 39,2°С, головная боль, малопродуктивный кашель, одышка в состоянии покоя, SpO2 90%, двусторонняя полисегментарная пневмония, по данным КТ органов грудной клетки объем поражения легочной ткани пациентки 78%. Соотношение ристоцитин-кофакторной активности фактора Виллебранда и активности ADAMTS-13 в плазме крови составило 4,2.

Список литературы

1. S. Е. Ward et al, "ADAMTS13 regulation of VWF multimer distribution in severe COVID-19," J. Thromb. Haemost., vol. 19, no. 8, pp.1914-1921, Aug. 2021, doi: 10.1111/JTH.l 5409.

2. R. Blennerhassett, J. Curnow, and L. Pasalic, "Immune-Mediated Thrombotic Thrombocytopenic Purpura: A Narrative Review of Diagnosis and Treatment in Adults," Semin. Thromb. Hemost., vol. 46, no. 3, pp. 289-301, Apr. 2020, doi: 10.1055/S-0040-1708541.

3. C. Aigner, A. Schmidt, M. Gaggl, and G. Sunder-Plassmann, "An updated classification of thrombotic microangiopathies and treatment of complement gene variant-mediated thrombotic microangiopathy," Clin. Kidney J., vol. 12, no. 3, pp. 333-337, Jun. 2019, doi: 10.1093/CKJ/SFZ040.

4. Z. W. Mei, X. M. R. van Wijk, H. P. Pham, and M. J. Marin, "Role of von Willebrand Factor in COVID-19 Associated Coagulopathy," J. Appl. Lab. Med., vol. 6, no. 5, pp. 1305-1315, Sep. 2021, doi: 10.1093/JALM/JFAB042.

5. G. Mobayen et al, "Severe COVID-19 is associated with endothelial activation and abnormal glycosylation of von Willebrand factor in patients undergoing hemodialysis," Res. Pract. Thromb. Haemost., vol. 5, no. 6, Aug. 2021, doi: 10.1002/RTH2.12582.

6. "Временные методические рекомендации 'Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19)' Версия 10 (утв. Министерством здравоохранения РФ 8 февраля 2021 г.)."

7. Определение активности фактора Виллебранда как способ лабораторной диагностики тяжести течения инфекции SARS-CoV-2. RU (11) 2 746 520 (13) С1.

Способ лабораторной диагностики тяжести COVID-19, включающий определение фактора Виллебранда в крови, отличающийся тем, что у пациента с диагнозом COVID-19, подтвержденным лабораторно, при определении в плазме крови фактора Виллебранда оценивают его ристоцитин-кофакторную активность и, дополнительно, определяют активность ADAMTS-13, затем рассчитывают соотношение активности фактора Виллебранда и ADAMTS-13, при соотношении менее 1,55 диагностируют у пациента легкую степень тяжести COVID-19, а при соотношении более 1,55 диагностируют у пациента среднюю или тяжелую степень COVID-19.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ определения функциональной активности антитромбина III (AT III) в плазме крови, включающий взаимодействие AT III с гепарином.

Антитела к фактору ix padua // 2770006

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывает фактор IX Padua, полипептид, который связывает фактор IX Padua, конъюгат, который связывает фактор IX Padua, содержащий вышеуказанное антитело или антигенсвязывающий фрагмент или полипептид, нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, клетку-хозяин, набор для детекции фактора IX Padua, композиция для детекции фактора IX Padua (варианты), применение антител, или антигенсвязывающего фрагмента, полипептида, конъюгата, нуклеиновой кислоты, вектора, клетки-хозяина и набора для детекции фактора IX Padua в образце и способ детекции фактора IX Padua в полученном от субъекта образце.

Способ диагностики двс-синдрома у больных с гемобластозами с сопутствующей тромбоцитопенией // 2769490

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, и может быть использовано для диагностики ДВС-синдрома у больных гемобластозами с сопутствующей тромбоцитопенией. Для диагностики явного ДВС-синдрома, кроме наличия 5 и более баллов по шкале DIC (ISTH), оценивается уровень синдекана-1 в сыворотке крови, повышение которого более 5,5 нг/мл подтверждает диагноз и требует назначения патогенетической терапии.

Способ скринингового обследования для выявления групп риска развития гиперкоагуляционного состояния в условиях экспедиционной работы в арктике // 2767891

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ скринингового обследования для выявления групп риска развития гиперкоагуляционного состояния в условиях экспедиционной работы в Арктике.

Способ прогнозирования тромбозов и кровотечений у критических пациентов с covid-19 в условиях проведения экмо // 2766350

Изобретение относится к медицине, а именно к анестезиологии, реаниматологии, и может быть использовано для прогнозирования тромбозов и кровотечений у критических пациентов с COVID-19 в условиях проведения экстракорпоральной мембранной оксигенации (ЭКМО). Определяют следующие показатели: объем гепаринизации нефракционированным гепарином (ME/кг/час), активированное частичное тромбопластиновое время (сек), уровень активности антитромбина-III (%), концентрацию оксида азота (мкмоль/л), концентрацию малонового диальдегида (нмоль/мл), концентрацию ангиотензинпревращающего фермента (ACE units), тотальный антиоксидантный статус (ммоль/л).

Способ прогнозирования развития острого инфаркта миокарда у пациентов с перемежающейся хромотой вследствие облитерирующего атеросклероза артерий нижних конечностей // 2754502

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и ангиологии, и может быть использовано для оценки вероятности развития острого инфаркта миокарда у пациентов с перемежающейся хромотой вследствие облитерирующего атеросклероза артерий нижних конечностей в течение года. Осуществляют определение в периферической венозной крови активности фактора свертываемости FXI, оценку наличия или отсутствия постинфарктного кардиосклероза в анамнезе, с учетом возраста пациента.

Способ измерения реактивности fviii // 2752595

Группа изобретений относится к медицине и касается способа измерения реактивности фактора свертывания VIII, где способ включает стадию, на которой приводят в контакт (1) полученный из крови образец, содержащий субстанцию, обладающую активностью в отношении функционального замещения фактора свертывания VIII, где субстанция является биспецифическим антителом, которое связывается с фактором свертывания IX и/или активированным фактором свертывания IX и фактором свертывания X и/или активированным фактором свертывания крови X, с (2) одной или несколькими субстанциями, нейтрализующими субстанцию, обладающую активностью в отношении функционального замещения фактора свертывания VIII, где одна или более нейтрализующих субстанций представляет собой одну или несколько субстанций, выбранных из группы, состоящей из пептидов, полипептидов, органических соединений, аптамеров и антител, которые нейтрализуют субстанцию, обладающую активностью в отношении функционального замещения фактора свертывания VIII; с последующим измерением реактивности фактора свертывания с помощью измерения активности фактора свертывания VIII или титра ингибитора фактора свертывания VIII.

Регулируемая кальцием активация тромбоцитов посредством электростимуляции // 2742937

Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к способам ex-vivo получения активированного образца обогащенной тромбоцитами плазмы и к способу получения тромбоцитарного геля с заданной механической прочностью сгустков в тромбоцитарном геле. Способ ex-vivo получения активированного образца обогащенной тромбоцитами плазмы (ОТП) включает: получение образца обогащенной тромбоцитами плазмы для активации, добавление в полученный образец ОТП ионов кальция в концентрации, которую выбирают исходя из заданных параметров в активированном образце ОТП, выбранных из времени образования сгустка и/или механической прочности сгустков; размещение образца ОТП между электродами устройства для электромагнитной стимуляции; установление набора параметров электрического импульса исходя из указанной концентрации ионов кальция и указанных заданных параметров активированного образца ОТП и воздействие на образец ОТП с добавленными ионами кальция одним или более электрическими импульсами, генерируемыми в соответствии с установленными значениями параметров электрического импульса, с получением активированного образца ОТП, содержащего один или более факторов роста и имеющего указанные заданные параметры (варианты).

Способ прогнозирования исхода ожоговой болезни у пациентов с тяжелой термической травмой // 2738303

Изобретение относится к медицине. Способ прогнозирования исхода ожоговой болезни у пациентов с тяжелой термической травмой включает забор венозной крови у пациента в первые сутки после травмы до начала антикоагулянтной терапии с получением плазмы свободной от тромбоцитов, последующим измерением стационарной скорости роста сгустка Vst (мкм/мин), плотности сгустка D (усл.ед.) и определением коэффициента К по формуле К=(Vst×100)/D, при получении значения К<0,025 прогнозируют неблагоприятный исход на 1-3 сутки, при получении значения К>0,25 прогнозируют неблагоприятный исход с 4 по 10 сутки, при получении значения К=0,1-0,2 прогнозируют благоприятный исход у пациентов с термической травмой.

Способ оценки развития и прогрессирования церебральной микроангиопатии (болезни мелких сосудов) // 2737772

Изобретение относится к области медицины, а именно к неврологии, и предназначено для прогнозирования риска развития церебральной микроангиопатии. Для оценки риска развития и прогрессирования церебральной микроангиопатии исследуемую кровь после удаления из нее плазмы в количестве 80 мкл помещают в 120 мкл 0,73% раствора хлорида натрия и в 15 мг сахарозы и оставляют на 60 минут для экспозиции при комнатной температуре.

Способ прогнозирования риска развития диастолической дисфункции левого желудочка у больных с ожирением // 2774023

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития диастолической дисфункции левого желудочка у больных с ожирением. Проводят определение значений метаболических факторов риска и профибротических факторов - глюкозы, холестерина липопротеинов низкой плотности (ХС ЛПНП), триглицеридов (ТГ), рецептора к лептину, лептина, матричной металлопротеиназы 3 типа (ММР-3), свободных жирных кислот (СЖК), проколлагена I С-концевого пропептида (PICP), толщины эпикардиальной жировой ткани (тЭЖТ).