Способ выделения изолированных клеток из челюсти


G01N1/28 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2776930:

федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Северный государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, стоматологии и цитологии. Обрабатывают фиксированные в формалине заранее измельченные образцы челюстей при температуре 20°С 50% гидроксидом калия. Затем гомогенизируют материал струей воды из пипетки Пастера, с последующим суспендированием и проведением не менее пяти циклов гомогенизации и центрифугирования материала при 1500 оборотов в минуту в течение 5 минут, до достижения уровня рН надосадочной жидкости 6,0. Переносят материал на стекла для дальнейшего изучения. При этом перед обработкой щелочным раствором челюсть подвергают действию декальцинирующего раствора СофтиДек на основе этилендиаминтетраацетата (ЭДТА), предварительно разбавленного в 2 раза дистиллированной водой, придающего челюстям форму, позволяющую измельчить, провести обработку раствором щелочи и выделить изолированные клетки для дальнейшего изучения. Способ позволяет расширить возможности выделения изолированных клеток челюсти для последующего изучения их морфологии.

 

Изобретение относится к гистологии, стоматологии, и может быть использовано для выделения изолированных клеток из челюсти.

Известен метод выделения клеток из пульпы зуба ферментативным способом. Для этого зуб помещают в чашку Петри диаметром 60 мм, где проводят предварительное промывание пульпарной камеры зуба 2 мл 0,5% раствора коллагеназы II типа, после чего зуб находится в 2 мл 0,5% раствора коллагеназы II типа в течение 1 часа при 37°С. Затем выделенные клетки в 2 мл раствора коллагеназы II типа собирают в пробирку объемом 15 мл, куда для остановки процесса ферментации было добавляют питательную среду DMEM/F12 (ПанЭко) [1]. Недостатками указанного способа является использование ферментов. Также известен способ культивирования клеток пульпы, полученных путем помещения удаленных зубов в раствор фосфатно-солевого буфера со смесью антибиотиков. После этого равномерной механической нагрузкой зубы раскалывают с помощью молоточка и свинцовой пластинки и в последующем осторожно стерильным пинцетом извлекают цельную пульпу. В стерильных условиях пульпу измельчают и переносят в шестилуночный планшет для дальнейшего культивирования [2]. Недостатками указанного способа является проведение эксперимента в стерильных условиях, а также использование молоточка для равномерного раскола, что является затруднительным.

Прототипом заявленного изобретения является способ получения препаратов изолированных клеток дермы [3]. Положительными в данном способе являются возможность выделения клеточных компонентов из дермы, широкий спектр применения. Недостатком указанного способа является то, что он позволяет выделять клеточные структуры только из мягких тканей.

Задача предлагаемого изобретения: расширение лабораторных возможностей выделения клеток из челюстей. Технический результат предлагаемого изобретения: снижение затрат в ходе выделения изолированных клеток челюсти, возможность получения качественных клеточных структур.

Указанная задача в предлагаемом способе достигается тем, что фиксированную в формалине челюсть переносят в декальцинирующую жидкость на 10 суток, затем переносят в пробирку, заливают 1 мл 50% раствора гидроксида калия, через час челюсть достают, нарезают микротомным лезвием на мелкие фрагменты, переносят в свежий 50% раствор гидроксида калия в количестве 1 мл на 15 часов при температуре 20°С, промывают дистиллированной водой пятикратно при температуре 20°С, гомогенизируют материал струей воды из пипетки Пастера, с последующим суспендированием, с проведением не менее пяти циклов гомогенизации и центрифугирования материала при 1500 оборотов в минуту в течение 5 минут до достижения уровня рН надосадочной жидкости 6,0, доводят объем образца до 1 мл и переносят на предметное стекло.

Указанный способ осуществляется следующим образом. Фиксированную в гистологическом забуференном 10% нейтральном формалине челюсть, полученную от лабораторного животного, или ее фрагмент помещают в декальцинирующий раствор СофтиДек на основе этилендиаминтетраацетата (ЭДТА), предварительно разбавленный в 2 раза дистиллированной водой, на 10 суток с периодическим перемешиванием (можно использовать шейкер или любые другие перемешивающие устройства) при комнатной температуре. По истечении времени, образец переносят в емкость с 1 мл 50% раствора гидроксида калия, через 1 час челюсть или ее фрагмент достают и нарезают микротомным лезвием на мелкие фрагменты толщиной не более 3 мм, помещают полученные фрагменты в емкость со свежим раствором 50% раствора гидроксида калия в объеме 1 мл и оставляют при комнатной температуре на 24 часа. После этого удаляют раствор щелочи путем аспирации пипеткой Пастера и наливают дистиллированную воду при температуре 20°С в объеме 5 мл. Гомогенизируют материал при помощи струи воды из пипетки Пастера объемом 2 мл в течение 3 минут, доводят объем воды в пробирке до 10 мл и центрифугируют в течение 5 минут при 1500 оборотах в минуту. После центрифугирования аспирируют воду из пробирки таким образом, чтобы осадок на дне пробирки находился в объеме жидкости, не превышающем 0,5 мл, измеряют рН при помощи универсальной индикаторной бумаги, добавляют дистиллированную воду до объема 5 мл и повторно гомогенизируют материал способом, описанным выше. Цикл гомогенизации и центрифугирования повторяют до достижения уровня рН надосадочной жидкости 6,0, но не менее пяти раз. После достижения целевого уровня рН 6,0 в надосадочной жидкости суспендируют полученный материал путем многократного пассажа содержимого пробирки пипеткой Пастера, полученную суспензию переносят на предметное стекло для последующего изучения.

Способ позволяет расширить возможности выделения изолированных клеток челюсти для последующего изучения их морфологии.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Лямина, С.В., Калиш, С.В., Рунова, Г.С., Малышев, И.Ю. Выделение мезенхимальных стволовых клеток из пульпы зуба и их характеристика // Современные проблемы науки и образования. - 2017. - Т. 5, С. 189-189.

2. Сагитов И.И., Шафигуллина А.К., Салеева Г.Т., Гомзикова М.О., Ризванов А.А., Киясов А.П. Получение популяции эктомезенхимных клеток со свойствами стволовых и прогениторных клеток из пульпы постоянных зубов // Гены и клетки. - 2014. - Т. 9. - №3.

3. Кашутин С.Л., Журавлёв Л.М., Вилова К.Г., Мизгирёв Д.В., Зашихин А.Л. Способ получения препаратов изолированных клеток дермы. Патент №2617237, заявка 2015124695, 23.06.2015, Бюллетень №12.

Способ выделения изолированных клеток из челюсти, заключающийся в обработке фиксированных в формалине заранее измельченных образцов челюстей при температуре 20°С 50% гидроксидом калия, гомогенизации материала струей воды из пипетки Пастера, с последующим суспендированием, проведением не менее пяти циклов гомогенизации и центрифугирования материала при 1500 оборотов в минуту в течение 5 минут, проведением циклов гомогенизации и центрифугирования до достижения уровня рН надосадочной жидкости 6,0, с переносом материала на стекла для дальнейшего изучения, отличающийся тем, что перед обработкой щелочным раствором челюсть подвергают действию декальцинирующего раствора СофтиДек на основе этилендиаминтетраацетата (ЭДТА), предварительно разбавленного в 2 раза дистиллированной водой, придающего челюстям форму, позволяющую измельчить, провести обработку раствором щелочи и выделить изолированные клетки для дальнейшего изучения.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к способу раздельного получения печеночной, кишечной и пояснично-кишечной лимфы. Способ раздельного получения печеночной, кишечной и пояснично-кишечной лимфы включает забор лимфы из грудного лимфатического протока на шее, при этом перед забором лимфы осуществляют из лапаротомического доступа вскрытие забрюшинного пространства, рассекают задний листок брюшины и лигируют цистерны грудного лимфатического протока для разделения потоков лимфы, формируемых разными органами, причем печеночную лимфу получают путем забора лимфы из грудного лимфатического протока на шее, а кишечную и пояснично-кишечную - путем пункции одноименных лимфатических стволов, каудальнее наложенной лигатуры.
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано для определения показаний к программной релапаротомие путем исследования перитонеального экссудата больного распространенным гнойным перитонитом. В течение 48 часов через каждые 24 часа после первичной или очередной санации брюшной полости определяют коэффициент поверхностного натяжения и плотность перитонеального экссудата.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования нутриционной недостаточности у больных раком желудка или лимфомой Ходжкина. Для этого оценивают следующие показатели: проведение химиотерапии, лучевой терапии, большой объем хирургического лечения <3 месяцев назад - 2 балла; трансплантация костного мозга и стволовых гемопоэтических клеток - 3 балла; пациент, находящийся в отделении реанимации и интенсивной терапии с оценкой по шкале АРАСНЕ-II>10, - 3 балла; непреднамеренная потеря веса >5% за 3 месяца - 1 балл, непреднамеренная потеря веса >5% за 2 месяца - 2 балла, непреднамеренная потеря веса >5% за 1 месяц - 3 балла; суточное потребление пищи на 50-75% от потребностей в питании за прошедшую неделю - 1 балл, суточное потребление пищи на 25-49% от потребностей в питании за прошедшую неделю - 2 балла, суточное потребление пищи 0-24% от потребности к питанию - 3 балла; общий белок <60 г/л - 2 балла; альбумин <30 г/л - 2 балла; СРБ >5 г/л - 1 балл; абсолютное число лимфоцитов <1,5×10*9/л - 1 балл; наличие саркопении по КТ для мужчин <52,4 см2/м2, для женщин <38,5 см2/м2 - 3 балла; ограниченная подвижность, постельный режим из-за ограничений, имеющихся у больного, или по предписанию врача - 1 балл; возраст пациента ≥70 лет - 1 балл.

Изобретение относится к области медицины и токсикологии. Пробу сыворотки крови у пациента в объеме 5 мкл помещают на горизонтально расположенное стекло, предварительно обработанное этиловым или изопропиловым спиртом; осуществляют ее гидратацию путем высушивания на воздухе при температуре 22°С в течение 8 часов; выполняют анализ структурности полученной фации под микроскопом при суммарном увеличении ×100 по установлению следующих показателей: общая степень кристаллизации; средняя длина трещин в периферическом кольце; толщина зоны переходного кольца и средняя величина площади кристаллита центральной зоны.
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, и может быть использовано для диагностики сепсиса у больных острыми лейкозами с сопутствующей тромбоцитопенией. Для этого у больных острыми лейкозами с подозрением на развитие сепсиса оценивают показатели, необходимые для расчета баллов по шкале SOFA.

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной онкологии, и может быть использовано при фотодинамической обработке клеток для приготовления клеточных препаратов. Способ включает обработку клеток фотосенсибилизатором и последующую их фотоактивацию.

Настоящее изобретение относится к области медицины, в частности к диагностике болезни Паркинсона на доклинической стадии. Способ ранней доклинической диагностики болезни Паркинсона предусматривает измерение в слезной жидкости у пациента без нарушения двигательной функции концентрации биомаркеров, представляющих собой норадреналин, адреналин и дофамин.

Изобретение относится к области птицеводства и может быть использовано для отбора образцов пера молодняка кур-несушек при исследовании на элементный состав. Способ включает выщипывание махового перья крыла пера массой не менее 0,4 грамма и корректировку по длине с учётом скорости отрастания пера, отмеряемого от проксимального края стержня, за изучаемый возрастной период, которое рассчитывается по формуле: L=3,3×I, где L – проксимальное отрастание пера, мм; 3,3 – скорость отрастания маховых перьев у молодняка кур-несушек в возрасте 10-50 суток, мм/сут; I – оцениваемый возрастной период, сут.

Изобретение относится к области медицины, а именно дерматовенерологии и косметологии. Перед назначением лечения определяют анамнестические данные: длительность заболевания, в годах, плотность волос на 1 см2, средний диаметр волос и биохимические показатели: содержание АТФ и активность сульфотрансферазы (СТ) в луковицах волос, при этом эффективность терапии миноксидилом прогнозируют по значениям дискриминантных функций: ДФ1 и ДФ2.
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинским биотехнологиям. Ацеллюлярные матриксы погружают во флакон для стерилизации, добавляют стерилизующий раствор 0,5% надуксусной кислоты в соотношении 1:4, устанавливают на шейкер и запускают его в режиме работы платформы 150 движений в минуту на 60 минут при комнатной температуре.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложены варианты способа определения риска развития токсичности у индивида, включающие анализ количества экспрессирующих рекомбинантный рецептор клеток в образце крови индивида, которому ранее вводили дозу экспрессирующих рекомбинантный рецептор клеток.
Наверх