Препарат и композиция для лечения злокачественных опухолей

Группа изобретений относится к области медицины и фармацевтики. Первое изобретение – применение (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она или его фармацевтически приемлемой соли для лечения пациента с раком, получающего одно или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемой соли(ей), выбранных из 5-фторурацила, тегафур/гимерацил/отерацила калия, гемцитабина, паклитаксела, цисплатина, эверолимуса, MK2206 и транс-3-амино-1-метил-3-(4-(3-фенил-5H-имидазо[1,2-c]пиридо[3,4-e][1,3]оксазин-2-ил)фенил)циклобутанола, гефитиниба. Второе изобретение – способ лечения опухоли, включающий введение указанных комбинаций пациенту, который нуждается в этом. Группа изобретений обеспечивает синергетический эффект противоопухолевых комбинаций. 2 н. и 24 з.п. ф-лы, 32 ил., 4 табл., 12 пр.

 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к комбинированному препарату и фармацевтической композиции для лечения злокачественной опухоли. Более конкретно, настоящее изобретение относится к препарату и композиции для лечения злокачественной опухоли путем совместного использования специфического ингибитора FGFR и противоопухолевого средства.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Поскольку средняя ожидаемая продолжительность жизни в последние годы возросла, смерть от рака, то есть, злокачественных опухолей, стала составлять высокий процент от смертных случаев, вызываемых болезнями. Способы лечения злокачественных опухолей ориентировочно подразделяют на хирургические операции, лучевую терапию и химиотерапию. В качестве лекарственных средств для использования в химиотерапии, то есть, противоопухолевых средств, были разработаны антиметаболиты, противоопухолевые антибиотики, алкалоидные противоопухолевые средства и лекарственные средства на основе платины, а также молекулярно-направленные лекарственные средства на основе антител или низкомолекулярных соединений.

Известна связь некоторых аберрантных сигнальных путей с канцерогенезом, и также сообщалось о связи между аберрантной сигнализацией фактора роста фибробластов (FGF)/рецептора фактора роста фибробластов (FGFR) и различными видами рака у человека. Считается, что аберрантная активация сигнализации FGF/FGFR при раковых заболеваниях человека связана с избыточной экспрессией и/или амплификацией гена FGFR, генными мутациями типа хромосомной транслокации, либо аутокринным или паракринным механизмом, связанным с избыточной экспрессией его лигандов FGF (НПЛ 1, НПЛ 2 и НПЛ 3). Кроме того, такую аберрантную сигнализацию считают частичной причиной устойчивости рака человека к лечению существующими химиотерапевтическими противоопухолевыми средствами или другими ингибиторами тирозинкиназных рецепторов (НПЛ 4).

Соответственно, ожидается, что терапевтические средства, направленные на сигнализацию FGF/FGFR, могут быть препаратами, усиливающими терапевтические эффекты существующих химиотерапевтических противоопухолевых средств или молекулярно-направленных лекарственных средств, включая другие ингибиторы тирозинкиназных рецепторов, или эффективными терапевтическими средствами, используемыми отдельно или в сочетании с другими лекарственными средствами для лечения форм рака, которые устойчивы или не отвечают на эти лекарственные средства. Множество ингибиторов FGFR в настоящее время находится в клинической разработке в качестве противоопухолевых средств. Например, AZD4547 проходит тестирование на совместное использование с другими противоопухолевыми средствами, такими как 5-FU, цисплатин, анти-EGFR антитело и доцетаксел (НПЛ 5 и НПЛ 6). Кроме того, было высказано предположение, что совместное использование пиримидинового антиметаболита гемцитабина с ингибитором FGFR является многообещающим (НПЛ 7).

В то же время, есть сообщения о наличии ингибирующих FGFR свойств у двузамещенных алкинильных производных бензола (ПЛ 1). Также есть сообщения о том, что данные соединения эффективны против форм рака, характеризующихся специфическими мутациями FGFR2 (ПЛ 2), и что их болюсное введение может быть полезным в качестве схемы лечения (ПЛ 3).

ЦИТИРУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА

Патентная литература

ПЛ 1: WO 2013/108809

ПЛ 2: WO 2015/008844

ПЛ 3: WO 2015/008839

Не патентная литература

НПЛ 1: J. Clin. Oncol. 24, 3664-3671 (2006)

НПЛ 2: Mol. Cancer Res. 3, 655-667 (2005)

НПЛ 3: Cancer Res., 2085-2094 (2010)

НПЛ 4: Nature. 26; 487 (7408): 505-9 (2012)

НПЛ 5: Clin Cancer Res. 2572-83 (2013)

НПЛ 6: Oncotarget. 2009-22 (2015)

НПЛ 7: Drug Resistance Updates 9 (2006), 1-18

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Техническая проблема

Даже высокоэффективные противоопухолевые средства должны быть использованы с осторожностью, и в некоторых случаях не могут быть использованы, если эти средства имеют сильные побочные эффекты или являются высокотоксичными. Также известно, что такие противоопухолевые средства могут отличаться по производимому эффекту у разных пациентов или их эффекты могут снижаться при долгосрочном введении одного и того же средства.

Целью настоящего изобретения является предложение нового способа лечения рака с использованием ингибитора FGFR, который обладает превосходным противоопухолевым действием и имеет меньше побочных эффектов.

Решение проблемы

Автор настоящего изобретения изучил возможность совместного использования соединения, представленного формулой (I), и дополнительного соединения, обладающего противоопухолевым эффектом, и установил, что такое совместное использование значительно усиливает противоопухолевый эффект, без существенного увеличения токсичности, в сравнении с ситуацией, когда соединение, представленное формулой (I), или дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, используют отдельно.

По настоящему изобретению предложено следующее [1] - [36]:

[1] Комбинированный препарат для лечения злокачественной опухоли, включающий соединение, представленное формулой (I)

где R₁ является одинаковым или разным, и каждый представляет собой C₁-C₆ алкил;

X₁ и X₂ независимо представляют собой N или CH;

Y представляет собой группу, представленную формулой (A)

(где двухвалентный фрагмент, представленный

,

представляет собой азотсодержащий C₃-C₁₀ гетероциклоалкилен),

группу, представленную формулой (B)

(где двухвалентный фрагмент, представленный

,

представляет собой C₃-C₁₀ циклоалкилен), или

группу, представленную формулой (C)

(где двухвалентный фрагмент, представленный

,

представляет собой C₆-C₁₂ арилен);

R₂ представляет собой водород, C₂-C₆ алкинил, -C(=O)OR_x, -C(=O)N(R_x)(R_y), гидрокси-C₁-C₆ алкил, ди(C₁-C₆ алкил)амино-C₁-C₆ алкил или C₂-C₉ гетероарил, необязательно имеющий R₃;

R₃ представляет собой C₁-C₆ алкил или ди(C₁-C₆ алкил)амино-C₁-C₆ алкил;

Z представляет собой -C(R₄)=C(R₅)(R₆) или -C≡C-R₇;

R₄, R₅ и R₆ являются одинаковыми или разными, и каждый представляет собой водород, галоген, C₁-C₆ алкил, необязательно имеющий R₈, или группу, представленную формулой (D)

(где одновалентный фрагмент, представленный

,

представляет собой азотсодержащий C₃-C₁₀ гетероциклоалкил),

R₇ представляет собой водород, C₁-C₆ алкил или гидрокси-C₁-C₆ алкил;

R₈ представляет собой -OR_x или -N(R_x)(R_y);

R₉ представляет собой C₁-C₆ алкил, галоген или -OR_x;

R_x и R_y являются одинаковыми или разными, и каждый представляет собой водород, C₁-C₆ алкил, C₃-C₁₀ циклоалкил, ди(C₁-C₆ алкил)амино-C₁-C₆ алкил или C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкил;

l равно целому числу от 0 до 3;

m равно целому числу от 1 до 3; и

n равно целому числу от 0 до 2; или

его соль; и

одно или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемую соль(и), выбранных из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства.

[2] Комбинированный препарат по п. [1], отличающийся тем, что соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он или его фармацевтически приемлемую соль.

[3] Комбинированный препарат по п. [1] или [2], отличающийся тем, что дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой пиримидиновый антиметаболит, алкалоидное противоопухолевое средство, лекарственное средство на основе платины или молекулярно-направленное лекарственное средство.

[4] Комбинированный препарат по п. [3], отличающийся тем, что пиримидиновый антиметаболит выбирают из группы, состоящей из 5-фторурацила, тегафур/гимерацил/отерацила калия, капецитабина и гемцитабина.

[5] Комбинированный препарат по п. [3], при этом (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве от 000,1 до 10 молей на моль пиримидинового антиметаболита.

[6] Комбинированный препарат по п. [3], отличающийся тем, что алкалоидное противоопухолевое средство выбирают из группы, состоящей из паклитаксела, доцетаксела, иринотекана и винбластина.

[7] Комбинированный препарат по п. [3], при этом (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве от 0,01 до 200 молей на моль алкалоидного противоопухолевого средства.

[8] Комбинированный препарат по п. [3], отличающийся тем, что лекарственное средство на основе платины выбирают из группы, состоящей из цисплатина, карбоплатина и оксалиплатина.

[9] Комбинированный препарат по п. [3], при этом (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве от 0,001 до 50 молей на моль лекарственного средства на основе платины.

[10] Комбинированный препарат по п. [3], отличающийся тем, что молекулярно-направленное лекарственное средство выбирают из группы, состоящей из низкомолекулярного молекулярно-направленного лекарственного средства и молекулярно-направленного лекарственного средства на основе антитела.

[11] Комбинированный препарат по п. [10], отличающийся тем, что молекулярно-направленное лекарственное средство на основе антитела выбирают из группы, состоящей из рамуцирумаба и бевацизумаба.

[12] Комбинированный препарат по п. [10], при этом (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве от 0,005 до 1 мг на мг молекулярно-направленного лекарственного средства на основе антитела.

[13] Комбинированный препарат по п. [10], отличающийся тем, что низкомолекулярное молекулярно-направленное лекарственное средство выбирают из группы, состоящей из эверолимуса, MK2206 и транс-3-амино-1-метил-3-(4-(3-фенил-5H-имидазо[1,2-c]пиридо[3,4-e][1,3]оксазин-2-ил)фенил)циклобутанола.

[14] Комбинированный препарат по п. [10], при этом (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве от 1 до 1000 молей на моль низкомолекулярного молекулярно-направленного лекарственного средства.

[15] Комбинированный препарат по п. [1] или [2], отличающийся тем, что дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой антифолат.

[16] Комбинированный препарат по п. [15], отличающийся тем, что антифолат представляет собой метотрексат.

[17] Комбинированный препарат по п. [1] или [2], отличающийся тем, что дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемая соль представляет собой алкилирующее средство.

[18] Комбинированный препарат по любому из пунктов [1] - [17], при этом соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль и дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно.

[19] Комбинированный препарат по любому из пунктов [1] - [18], при этом соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль и дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль вводят одним и тем же путем введения или вводят разными путями введения.

[20] Фармацевтическая композиция, содержащая соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль и одно или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемую соль(и), выбранных из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства.

[21] Усилитель противоопухолевого эффекта для одного или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемой соли(ей), выбранных из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства, содержащий соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента.

[22] Противоопухолевое средство, содержащее соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль, используемое в сочетании с одним или более дополнительными соединениями, обладающими противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемой солью(солями), выбранными из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства.

[23] Противоопухолевое средство, содержащее соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль, предназначенное для лечения пациента с раком, получающего одно или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемую соль(и), выбранных из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства.

[24] Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли в производстве усилителя противоопухолевого эффекта для одного или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемой соли(ей), выбранных из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства.

[25] Применение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для усиления противоопухолевого эффекта одного или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемой соли(ей), выбранных из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства.

[26] Способ лечения опухоли, включающий введение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли и одного или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемой соли(ей), выбранных из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства, пациенту, который нуждается в этом.

[27] Набор для лечения злокачественной опухоли, включающий соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль и одно или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемую соль(и), выбранных из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства.

[28] Комбинированный препарат по любому из пунктов [1] - [19], фармацевтическая композиция по п. [20], усилитель противоопухолевого эффекта по п. [21], противоопухолевое средство по п. [22] или [23], применение по п. [24] или [25], или способ по п. [26], при этом опухоль выбирают из группы, состоящей из рака легкого, рака пищевода, рака желудка, рака двенадцатиперстной кишки, рака печени, печеночно-клеточного рака, рака желчных протоков, рака поджелудочной железы, колоректального рака, рака молочной железы, рака тела матки, рака яичника, рака почки, рака мочевого пузыря, рака предстательной железы, опухоли яичка, рака щитовидной железы, опухоли костей или мягких тканей, лейкоза, злокачественной лимфомы, множественной миеломы, рака головы и шеи, опухоли головного мозга и рака кожи.

[29] Комбинированный препарат по любому из пунктов [1] - [19], фармацевтическая композиция по п. [20], усилитель противоопухолевого эффекта по п. [21], противоопухолевое средство по п. [22] или [23], применение по п. [24] или [25], или способ по п. [26], при этом опухоль выбирают из группы, состоящей из рака желудка, рака желчных протоков, рака тела матки, рака мочевого пузыря и опухоли головного мозга.

[30] Комбинированный препарат по любому из пунктов [1] - [19], фармацевтическая композиция по п. [20], усилитель противоопухолевого эффекта по п. [21], противоопухолевое средство по п. [22] или [23], применение по п. [24] или [25], или способ по п. [26], при этом опухоль представляет собой рак желудка, и дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль выбирают из группы, состоящей из паклитаксела, доцетаксела, тегафур/гимерацил/отерацила калия, 5-фторурацила, гемцитабина, капецитабина, оксалиплатина, цисплатина и рамуцирумаба.

[31] Комбинированный препарат по любому из пунктов [1] - [19], фармацевтическая композиция по п. [20], усилитель противоопухолевого эффекта по п. [21], противоопухолевое средство по п. [22] или [23], применение по п. [24] или [25], или способ по п. [26], при этом опухоль представляет собой рак желчных протоков, и дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль выбирают из группы, состоящей из гемцитабина и цисплатина.

[32] Комбинированный препарат по любому из пунктов [1] - [19], фармацевтическая композиция по п. [20], усилитель противоопухолевого эффекта по п. [21], противоопухолевое средство по п. [22] или [23], применение по п. [24] или [25], или способ по п. [26], при этом опухоль представляет собой рак мочевого пузыря, и дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль выбирают из группы, состоящей из метотрексата, гемцитабина, паклитаксела, доцетаксела, винбластина, цисплатина, карбоплатина, доксорубицина и атезолизумаба.

[33] Комбинированный препарат по любому из пунктов [1] - [19], фармацевтическая композиция по п. [20], усилитель противоопухолевого эффекта по п. [21], противоопухолевое средство по п. [22] или [23], применение по п. [24] или [25], или способ по п. [26], при этом опухоль представляет собой опухоль головного мозга, и дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль выбирают из группы, состоящей из иринотекана, бевацизумаба и темозоломида.

[34] Комбинированный препарат по любому из пунктов [1] - [19], фармацевтическая композиция по п. [20], усилитель противоопухолевого эффекта по п. [21], противоопухолевое средство по п. [22] или [23], применение по п. [24] или [25], или способ по п. [26], при этом опухоль представляет собой рак эндометрия, и дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль выбирают из группы, состоящей из 5-фторурацила, гемцитабина, цисплатина, карбоплатина, паклитаксела, доксорубицина и циклофосфамида.

[35] Комбинированный препарат по любому из пунктов [1] - [19], фармацевтическая композиция по п. [20], усилитель противоопухолевого эффекта по п. [21], противоопухолевое средство по п. [22] или [23], применение по п. [24] или [25], или способ по п. [26], при этом в опухоли, подлежащей лечению, FGFR является мутантным.

[36] Комбинированный препарат по любому из пунктов [1] - [19], фармацевтическая композиция по п. [20], усилитель противоопухолевого эффекта по п. [21], противоопухолевое средство по п. [22] или [23], применение по п. [24] или [25], или способ по п. [26], при этом опухоль, подлежащая лечению, имеет устойчивость к дополнительному соединению, обладающему противоопухолевым эффектом.

В настоящую спецификацию входит содержание Японской патентной заявки № 2016-042662, на основании которой испрашивается приоритет по настоящей заявке.

ПОЛЕЗНЫЕ ЭФФЕКТЫ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к способу лечения рака, отличающемуся сильными противоопухолевыми эффектами (в частности, циторедуктивным эффектом и замедляющим опухолевый рост эффектом (продлевающим жизнь эффектом)), и в то же время способствующему снижению частоты возникновения побочных эффектов противоопухолевого средства. Таким образом, результатом применения данного способа может являться долгосрочное выживание пациентов, страдающих раком.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фигура 1A представляет противоопухолевые эффекты соединения 1 и тегафур/гимерацил/отерацила калия (S-1), используемых раздельно или совместно. Показаны относительные объемы опухолей (ООО) в группах введения препаратов и в контрольной группе.

Фигура 1B представляет противоопухолевые эффекты соединения 1 и S-1, используемых раздельно или совместно. Показана степень изменения массы тела мышей в группах введения препаратов и в контрольной группе.

Фигура 1C представляет противоопухолевые эффекты соединения 1 и S-1, используемых раздельно или совместно. Показаны эффекты (П/К (%)) соединения 1 и S-1, используемых раздельно или совместно, в день 15.

Фигура 2A представляет противоопухолевые эффекты соединения 1 и паклитаксела, используемых раздельно или совместно. Показаны относительные объемы опухолей (ООО) в группах введения препаратов и в контрольной группе.

Фигура 2B представляет противоопухолевые эффекты соединения 1 и паклитаксела, используемых раздельно или совместно. Показана степень изменения массы тела мышей в группах введения препаратов и в контрольной группе.

Фигура 2C представляет противоопухолевые эффекты соединения 1 и паклитаксела, используемых раздельно или совместно. Показаны эффекты (П/К (%)) соединения 1 и паклитаксела, используемых раздельно или совместно, в день 15.

Фигура 3A представляет противоопухолевые эффекты соединения 1 и цисплатина, используемых раздельно или совместно. Показаны относительные объемы опухолей (ООО) в группах введения препаратов и в контрольной группе.

Фигура 3B представляет противоопухолевые эффекты соединения 1 и цисплатина, используемых раздельно или совместно. Показана степень изменения массы тела мышей в группах введения препаратов и в контрольной группе.

Фигура 3C представляет противоопухолевые эффекты соединения 1 и цисплатина, используемых раздельно или совместно. Показаны эффекты (П/К (%)) соединения 1 и цисплатина, используемых раздельно или совместно, в день 11.

Фигура 4A представляет противоопухолевые эффекты соединения 1 и гемцитабина, используемых раздельно или совместно. Показаны относительные объемы опухолей (ООО) в группах введения препаратов и в контрольной группе.

Фигура 4B представляет противоопухолевые эффекты соединения 1 и гемцитабина, используемых раздельно или совместно. Показана степень изменения массы тела мышей в группах введения препаратов и в контрольной группе.

Фигура 4C представляет противоопухолевые эффекты соединения 1 и гемцитабина, используемых раздельно или совместно. Показаны эффекты (П/К (%)) соединения 1 и гемцитабина, используемых раздельно или совместно, в день 15.

Фигура 5A представляет противоопухолевые эффекты соединения 1 и эверолимуса, используемых раздельно или совместно. Показаны относительные объемы опухолей (ООО) в группах введения препаратов и в контрольной группе.

Фигура 5B представляет противоопухолевые эффекты соединения 1 и эверолимуса, используемых раздельно или совместно. Показана степень изменения массы тела мышей в группах введения препаратов и в контрольной группе.

Фигура 5C представляет противоопухолевые эффекты соединения 1 и эверолимуса, используемых раздельно или совместно. Показаны эффекты (П/К (%)) соединения 1 и эверолимуса, используемых раздельно или совместно, в день 15.

Фигура 6A представляет эффект совместного использования соединения 1 и 5-FU на скорость роста клеток линии SNU-16 (5-FU:соединение 1=1250:1).

Фигура 6B представляет эффект совместного использования соединения 1 и 5-FU на скорость роста клеток линии SNU-16 (5-FU:соединение 1=1000:1).

Фигура 6C представляет эффект совместного использования соединения 1 и 5-FU на скорость роста клеток линии SNU-16 (5-FU:соединение 1=500:1).

Фигура 7A представляет эффект используемого в сочетании соединения 1 на различные клетки карцином в виде значений коэффициента сочетания. Показан эффект сочетания соединения 1 с разными концентрациями 5-FU.

Фигура 7B представляет эффект используемого в сочетании соединения 1 на различные клетки карцином в виде значений коэффициента сочетания. Показан эффект сочетания соединения 1 с разными концентрациями цисплатина.

Фигура 7C представляет эффект используемого в сочетании соединения 1 на различные клетки карцином в виде значений коэффициента сочетания. Показан эффект сочетания соединения 1 с разными концентрациями паклитаксела.

Фигура 7D представляет эффект используемого в сочетании соединения 1 на различные клетки карцином в виде значений коэффициента сочетания. Показан эффект сочетания соединения 1 с разными концентрациями гемцитабина.

Фигура 8A показывает индукцию апоптоза при совместном использовании ингибитора AKT MK2206 и соединения 1. Показан эффект сочетания соединения 1 с разными концентрациями MK2206.

Фигура 8B показывает индукцию апоптоза при совместном использовании ингибитора AKT MK2206 и соединения 1. Показан эффект сочетания разных концентраций соединения 1 с MK2206.

Фигура 9 показывает индукцию апоптоза в человеческих клетках рака эндометрия линии AN3CA при совместном использовании ингибитора AKT MK2206 и соединения 1.

Фигура 10A демонстрирует эффект совместного использования соединения 1 и эверолимуса на выживаемость человеческих клеток рака эндометрия линии AN3CA.

Фигура 10B демонстрирует эффект совместного использования соединения 1 и MK2206 на выживаемость человеческих клеток рака эндометрия линии AN3CA.

Фигура 11 демонстрирует эффект совместного использования соединения 1 и эверолимуса или MK2206 на фосфорилирование белков AKT, ERK, mTOR и S6 в человеческих клетках рака эндометрия линии AN3CA.

Фигура 12A показывает состояние EGFR в человеческих клетках немелкоклеточного рака легкого линий HCC4006, NCI-H1650 и NCI-H322.

Фигура 12B демонстрирует эффект совместного использования соединения 1 и гефитиниба на выживаемость клеток линии HCC4006.

Фигура 12C демонстрирует эффект совместного использования соединения 1 и гефитиниба на выживаемость клеток линии NCI-H1650.

Фигура 12D демонстрирует эффект совместного использования соединения 1 и гефитиниба на выживаемость клеток линии NCI-H322.

ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

Первый вариант осуществления настоящего изобретения относится к комбинированному препарату для лечения злокачественной опухоли, содержащему соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль и одно или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемую соль(и), выбранных из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства, в качестве активных ингредиентов.

В настоящей спецификации термин «C₁-C₆ алкил» означает неразветвленную или разветвленную алкильную группу, содержащую 1-6 атомов углерода. Конкретные примеры включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, гексил и тому подобное. Предпочтительно, C₁-C₆ алкил представляет собой неразветвленную или разветвленную алкильную группу, содержащую 1-4 атома углерода (C₁-C₄ алкильную группу), и более предпочтительно, метил, этил, изопропил и трет-бутил.

В данной спецификации термин «C₃-C₁₀ циклоалкил» означает моноциклическую или полициклическую циклоалкильную группу, содержащую 3-10 атомов углерода, и предпочтительно, моноциклическую циклоалкильную группу, содержащую 3-6 атомов углерода (C₃-C₆ циклоалкильную группу). Конкретные примеры включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, декалил и тому подобное. Предпочтительными являются циклопропил и циклобутил.

В данной спецификации двухвалентный фрагмент, представленный

,

группы, представленной формулой (A)

(где R₂ и l являются такими, как указано выше),

представляет собой C₃-C₁₀ двухвалентную гетероциклоалкиленовую группу, содержащую по меньшей мере один атом азота в кольце и дополнительно содержащую 0-2 одинаковых или разных гетероатомов, выбранных из атомов кислорода и серы, в кольце (азотсодержащую C₃-C₁₀ гетероциклоалкиленовую группу), и предпочтительно представляет собой C₃-C₅ гетероциклоалкиленовую группу, содержащую 1-3 атома азота в кольце и дополнительно содержащую 0-1 атом кислорода в кольце (азотсодержащую C₃-C₅ гетероциклоалкиленовую группу). Конкретные примеры включают азетидинилен, пирролидинилен, пиперидинилен, пиперазинилен, морфолинилен, октагидрохинолинилен, октагидроиндолилен и тому подобное. Из них предпочтительными являются азетидинилен, пирролидинилен, пиперидинилен, пиперазинилен и морфолинилен.

Группа, представленная формулой (A)

,

представляет собой двухвалентную азотсодержащую C₃-C₁₀ гетероциклоалкиленовую группу, представленную

,

где атом азота имеет одну валентность, и другая валентность занята заместителем (-(CH₂)_l-), и заместитель R₂ находится на кольце.

В данной спецификации двухвалентный фрагмент, представленный

,

группы, представленной формулой (B)

(где R₂ и l являются такими, как указано выше),

представляет собой моноциклическую или полициклическую двухвалентную циклоалкиленовую группу, содержащую 3-10 атомов углерода (C₃-C₁₀ циклоалкиленовую группу), и предпочтительно, моноциклическую двухвалентную циклоалкиленовую группу, содержащую 3-6 атомов углерода (C₃-C₆ циклоалкиленовую группу). Конкретные примеры включают циклопропилен, циклобутилен, циклопентилен, циклогексилен, циклогептилен, декалилен и тому подобное. Предпочтительными являются циклопропилен и (1,2- или 1,3-)циклобутилен.

Формула (B)

означает двухвалентную C₃-C₁₀ циклоалкиленовую группу, представленную

,

где одна валентность занята соседней аминогруппой (NH) и другая валентность занята заместителем (-(CH₂)_l-), и заместитель R₂ находится на кольце.

В настоящей спецификации двухвалентный фрагмент, представленный

,

группы, представленной формулой(C)

(где R₂ и l являются такими, как указано выше),

представляет собой двухвалентную ариленовую группу, содержащую 6-12 атомов углерода (C₆-C₁₂ ариленовую группу). Конкретные примеры включают фенилен, нафтилен, бифенилен и тому подобное. Предпочтительным является фенилен.

Формула (C)

означает двухвалентную C₆-C₁₂ ариленовую группу, представленную

,

где одна валентность занята соседней аминогруппой (NH) и другая валентность занята заместителем (-(CH₂)_l-), и заместитель R₂ находится на кольце.

В данной спецификации одновалентный фрагмент, представленный

,

группы, представленной формулой(D)

(где R₉, m и n являются такими, как указано выше),

означает C₃-C₁₀ гетероциклоалкильную группу, содержащую по меньшей мере один атом азота в кольце и дополнительно содержащую 0-2 одинаковых или разных гетероатома, выбранных из атомов кислорода и серы, в кольце (азотсодержащую C₃-C₁₀ гетероциклоалкиленовую группу), и предпочтительно представляет собой C₃-C₅ гетероциклоалкиленовую группу, содержащую 1-3 атома азота в кольце и дополнительно содержащую 0-1 атом кислорода в кольце (азотсодержащую C₃-C₅ гетероциклоалкиленовую группу). Конкретные примеры включают азетидинил, пирролидинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолино, октагидрохинолинил, октагидроиндолинил и тому подобное. Предпочтительными являются азетидинил, пирролидинил, пиперидинил, пиперазинил и морфолино группы.

Формула (D)

означает азотсодержащую C₃-C₁₀ гетероциклоалкиленовую группу, представленную

,

где атом азота связан с заместителем (-(CH₂)_m-), и n заместителей (-(R₉)_n) находятся на кольце.

В данной спецификации «C₂-C₉ гетероарил» означает моноциклическую или бициклическую C₂-C₉ гетероарильную группу, содержащую 1-3 одинаковых или разных гетероатомов, выбранных из атомов азота, кислорода и серы; и предпочтительно представляет собой моноциклическую C₂-C₅ гетероарильную группу, содержащую 1-3 одинаковых или разных гетероатомов, выбранных из атомов азота, кислорода и серы (C₂-C₅ гетероарильную группу). Конкретные примеры включают тиенил, фурил, пирролил, триазолил, имидазолил, пиразолил, оксадиазолил, изотиазолил, изоксазолил, пиридил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, изобензофурил, индолизинил, изоиндолил, индолил, индазолил, хинолил, изохинолил, фталазинил, нафтиридинил и тому подобное. Предпочтительным является 1,3,4-оксадиазолил.

В данной спецификации термин «C₂-C₆ алкинил» означает неразветвленную или разветвленную C₂-C₆ алкинильную группу, имеющую по меньшей мере одну углерод-углеродную тройную связь. Конкретные примеры включают этинил, 2-пропинил, 2-гексинил и тому подобное. Предпочтительным является этинил.

В настоящей спецификации термин «гидрокси-C₁-C₆ алкил» означает неразветвленную или разветвленную C₁-C₆ алкильную группу, содержащую одну гидроксильную группу. Конкретные примеры включают гидроксиметил, гидроксиэтил, гидроксипропил, гидроксибутил, гидроксипентил, гидроксигексил и тому подобное. Из них предпочтительными являются гидроксиметил, 2-гидроксиэтил, 2-гидроксипропил и 2-гидроксибутил.

В данной спецификации термин «ди(C₁-C₆ алкил)амино-C₁-C₆ алкильная группа» означает неразветвленную или разветвленную C₁-C₆ алкильную группу, содержащую аминогруппу, имеющую две неразветвленные или разветвленные C₁-C₆ алкильные группы. Предпочтительной является неразветвленная или разветвленная C₁-C₄ алкильная группа, содержащая аминогруппу, имеющую две неразветвленные или разветвленные C₁-C₄ алкильные группы (ди(C₁-C₄ алкил)амино-C₁-C₄ алкильная группа). Конкретные примеры включают диметиламинометил, диметиламиноэтил, диметиламинопропил, диметиламинобутил, диметиламинопентил, диметиламиногексил, диэтиламинометил, диэтиламиноэтил, диэтиламинопропил, диэтиламинобутил, диэтиламинопентил, диэтиламиногексил, дипропиламинометил, дибутиламинометил, дипентиламинометил, дигексиламинометил, этил(метил)аминометил и тому подобное. Предпочтительными являются диметиламинометил и диэтиламиноэтил.

В данной спецификации термин «C₁-C₆ алкокси-C₁-C₆ алкил» означает неразветвленную или разветвленную C₁-C₆ алкильную группу, имеющую неразветвленную или разветвленную C₁-C₆ алкокси группу. Предпочтительно, она представляет собой неразветвленную или разветвленную C₁-C₄ алкильную группу, имеющую неразветвленную или разветвленную C₁-C₄ алкокси группу (C₁-C₄ алкокси-C₁-C₄ алкильную группу). Конкретные примеры таких групп включают метоксиметил, метоксиэтил, метоксипропил, метоксибутил, метоксипентил, метоксигексил, этоксиметил, этоксиэтил, этоксипропил, этоксибутил, этоксипентил, этоксигексил, пропоксиметил, бутоксиметил, пентилоксиметил, гексилоксиметил и тому подобное. Из них предпочтительным является 2-метоксиэтил.

В данной спецификации примеры «галогена» включают хлор, бром, фтор и йод. Предпочтительным является фтор.

В формуле (I) предпочтительными являются следующие сочетания X₁ и X₂. (1) Когда X₂ представляет собой N, X₁ представляет собой N или CH. (2) Когда X₂ представляет собой CH, X₁ представляет собой CH.

В формуле (I) l предпочтительно равно 0 или 1.

В формуле (I) Y предпочтительно представляет собой группу, представленную формулой (A)

(где R₂ и l являются такими, как указано выше), или группу, представленную формулой (C)

(где R₂ и l являются такими, как указано выше). Более предпочтительно, двухвалентный фрагмент, представленный

,

группы, представленной формулой (A), представляет собой пирролидинилен, азетидинилен или пиперидинилен, или двухвалентный фрагмент, представленный

,

группы, представленной формулой (C), представляет собой фенилен.

В формуле (I) предпочтительными являются следующие сочетания Y и Z. Когда Y представляет собой группу, представленную формулой (A)

(где R₂ и l являются такими, как указано выше),

Z представляет собой -C(R₄)=C(R₅)(R₆) или -C≡C-R₇. Когда Y представляет собой группу, представленную следующей формулой (B) или (C):

,

(где R₂ и l являются такими, как указано выше), Z представляет собой -C(R₄)=C(R₅)(R₆).

В формуле (I) R₁ предпочтительно представляет собой C₁-C₄ алкил, и более предпочтительно метил или этил.

В формуле (I) R₂ предпочтительно представляет собой водород, C₂-C₆ алкинил, -C(=O)OR_x, гидрокси-C₁-C₄ алкил или C₂-C₉ гетероарил, необязательно имеющий R₃, и более предпочтительно этинил, метоксикарбонил, гидроксиметил или 1,3,4-оксадиазолил, необязательно имеющий R₃.

В формуле (I) R₃ предпочтительно представляет собой C₁-C₄ алкил или ди(C₁-C₄ алкил)амино-C₁-C₄ алкил, и более предпочтительно метил или диметиламинометил.

В формуле (I) R₄ предпочтительно представляет собой водород или галоген, более предпочтительно водород или фтор, и даже более предпочтительно водород.

В формуле (I) R₅ и R₆ предпочтительно представляют собой водород, C₁-C₄ алкильную группу, необязательно имеющую R₈, или группу, представленную формулой (D)

(где R₉, m и n являются такими, как указано выше), и более предпочтительно водород, метил, имеющий R₈, или группу, представленную формулой (D)

(где R₉, m и n являются такими, как указано выше).

В формуле (I) m предпочтительно равно 1.

В формуле (I) R₉ предпочтительно представляет собой C₁-C₄ алкил, фтор или гидрокси, и более предпочтительно метил, фтор или гидрокси.

В формуле (I) n предпочтительно равно 0 или 1.

В формуле (I) R₇ предпочтительно представляет собой водород, C₁-C₄ алкил или гидрокси-C₁-C₄ алкил, и более предпочтительно водород, гидроксиметил, метил или 2-гидрокси-2-метилэтил.

В формуле (I) R₈ предпочтительно представляет собой гидрокси или -N(R_x)(R_y). В данной формуле R_x и R_y предпочтительно представляют собой водород, C₁-C₄ алкил, C₃-C₁₀ циклоалкил или C₁-C₄ алкокси-C₁-C₄ алкил, и более предпочтительно водород, метил, этил, трет-бутил, изопропил, циклопропил, циклобутил или 2-метоксиэтил.

Предпочтительными соединениями по настоящему изобретению являются соединения, представленные формулой (I), где R₁ представляет собой C₁-C₄ алкил; X₁ и X₂ независимо представляют собой N или CH; Y представляет собой группу, представленную следующей формулой (A) или (C):

;

R₂ представляет собой водород, C₂-C₆ алкинил, -C(=O)OR_x, гидрокси-C₁-C₄ алкил или C₂-C₉ гетероарил, необязательно имеющий R₃; R₃ представляет собой C₁-C₄ алкил или ди(C₁-C₄ алкил)амино-C₁-C₄ алкил; Z представляет собой -C(R₄)=C(R₅)(R₆) или -C≡C-R₇; R₄ представляет собой водород или галоген; R₅ и R₆ являются одинаковыми или разными, и каждый представляет собой водород, C₁-C₄ алкил, необязательно имеющий R₈, или группу, представленную формулой (D)

;

R₇ представляет собой водород, C₁-C₄ алкил или гидрокси-C₁-C₄ алкил; R₈ представляет собой гидрокси или -N(R_x)(R_y); R₉ представляет собой C₁-C₄ алкил, фтор или гидрокси; R_x и R_y являются одинаковыми или разными, и каждый представляет собой водород, C₁-C₄ алкил, C₃-C₁₀ циклоалкил или C₁-C₄ алкокси-C₁-C₄ алкил; и l равно 0 или 1, m равно 1 и n равно 0 или 1.

Более предпочтительными соединениями по настоящему изобретению являются соединения, представленные формулой (I), где R₁ представляет собой C₁-C₄ алкил, X₁ и X₂ являются такими, что (1) когда X₂ представляет собой N, X₁ представляет собой N или CH, и (2) когда X₂ представляет собой CH, X₁ представляет собой CH; в Y двухвалентный фрагмент, представленный

,

группы, представленной формулой (A)

,

представляет собой пирролидинилен, азетидинилен или пиперидинилен, или двухвалентный фрагмент, представленный

,

группы, представленной формулой (C)

,

представляет собой фенилен;

(a) когда Y представляет собой группу, представленную формулой (A)

(где R₂ представляет собой водород, этинил, метоксикарбонил, гидроксиметил или 1,3,4-оксадиазолил, необязательно имеющий R₃; R₃ представляет собой C₁-C₄ алкил и l равно 0 или 1), Z представляет собой -C(R₄)=C(R₅)(R₆) или -C≡C-R₇,

(b) когда Y представляет собой группу, представленную формулой (C)

(где R₂ представляет собой водород и l равно 0 или 1), Z представляет собой -C(R₄)=C(R₅)(R₆); R₄ представляет собой водород или фтор; R₅ и R₆ являются одинаковыми или разными, и каждый представляет собой водород, C₁-C₄ алкил, необязательно имеющий R₈, или группу, представленную формулой (D)

;

R₇ представляет собой водород, гидроксиметил, метил или 2-гидрокси-2-метилэтил; R₈ представляет собой -N(R_x)(R_y); R₉ представляет собой C₁-C₄ алкил, фтор или гидрокси; R_x и R_y являются одинаковыми или разными, и каждый представляет собой водород, C₁ C₄ алкил, C₃-C₁₀ циклоалкил или C₁-C₄ алкокси-C₁-C₄ алкил, m равно 1 и n равно 0 или 1.

Даже более предпочтительными соединениями по настоящему изобретению являются соединения, представленные формулой (I), где R₁ представляет собой метил или этил; X₁ и X₂ являются такими, что (1) когда X₂ представляет собой N, X₁ представляет собой N или CH, и (2) когда X₂ представляет собой CH, X₁ представляет собой CH; в Y двухвалентный фрагмент, представленный

,

представляет собой пирролидинилен, азетидинилен, пиперидинилен, или двухвалентный фрагмент, представленный

,

представляет собой фенилен;

(a) когда Y представляет собой группу, представленную формулой (A)

(где R₂ представляет собой водород, этинил, метоксикарбонил, гидроксиметил или 1,3,4-оксадиазолил, необязательно имеющий метил; и l равно 0 или 1), Z представляет собой -C(R₄)=C(R₅)(R₆) или -C≡C-R₇,

(b) когда Y представляет собой группу, представленную формулой (C)

(где R₂ представляет собой водород; и l равно 1), Z представляет собой -C(R₄)=C(R₅)(R₆); R₄ представляет собой водород; R₅ и R₆ являются одинаковыми или разными, и каждый представляет собой водород, метил, имеющий R₈, или одновалентный фрагмент, представленный

,

группы, представленной формулой (D)

,

представляет собой пирролидинил, пиперидинил, азетидинил, пиперазинил или морфолинил; R₇ представляет собой водород, гидроксиметил, метил или 2-гидрокси-2-метилэтил; R₈ представляет собой -N(R_x)(R_y); R₉ представляет собой метил, фтор или гидрокси; и R_x и R_y являются одинаковыми или разными, и каждый представляет собой водород, метил, этил, трет-бутил, изопропил, циклопропил, циклобутил или 2-метоксиэтил; и m равно 1, и n равно 0 или 1.

Конкретные примеры предпочтительных соединений в качестве соединения формулы (I) включают следующие:

(1) (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,

(2) (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ин-1-он,

(3) (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диэтоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,

(4) 1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,

(5) 1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)азетидин-1-ил)-4-гидроксибут-2-ин-1-он,

(6) 1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)азетидин-1-ил)-4-(диметиламино)бут-2-ен-1-он,

(7) 1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)азетидин-1-ил)-4-(циклопропиламино)бут-2-ен-1-он,

(8) 1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)азетидин-1-ил)-4-(изопропиламино)бут-2-ен-1-он,

(9) 1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)азетидин-1-ил)-4-(этил(метил)амино)бут-2-ен-1-он,

(10) 1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)азетидин-1-ил)-4-(циклобутиламино)бут-2-ен-1-он,

(11) 1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)азетидин-1-ил)-4-(диэтиламино)бут-2-ен-1-он,

(12) 1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)азетидин-1-ил)-4-(трет-бутиламино)бут-2-ен-1-он,

(13) 1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)азетидин-1-ил)-4-(изопропил(метил)амино)бут-2-ен-1-он,

(14) 1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)азетидин-1-ил)-4-(пиперидин-1-ил)бут-2-ен-1-он (соединение примера 20),

(15) (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)азетидин-1-ил)-4-(3-фторпирролидин-1-ил)бут-2-ен-1-он,

(16) (R)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)азетидин-1-ил)-4-(3-фторпирролидин-1-ил)бут-2-ен-1-он,

(17) 1-((2S,4S)-4-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,

(18) 1-(2S,4S)-4-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)-2-этинилпирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,

(19) (S)-1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-1-ил)-4-(диметиламино)бут-2-ен-1-он,

(20) (S)-1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,

(21) (S)-1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-1-ил)-4-(пирролидин-1-ил)бут-2-ен-1-он,

(22) (S)-1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-1-ил)-4-(4-гидроксипиперидин-1-ил)бут-2-ен-1-он,

(23) (S)-1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-1-ил)бут-2-ин-1-он,

(24) (S)-1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-1-ил)-4-гидрокси-4-метилпент-2-ин-1-он,

(25) 1-((S)-3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-1-ил)-4-((S)-3-фторпирролидин-1-ил)бут-2-ен-1-он,

(26) (S)-1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-1-ил)-4-(пиперидин-1-ил)бут-2-ен-1-он,

(27) 1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)азетидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,

(28) 1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)азетидин-1-ил)-4-(диметиламино)бут-2-ен-1-он,

(29) 1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)азетидин-1-ил)-4-(пирролидин-1-ил)бут-2-ен-1-он,

(30) 1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)азетидин-1-ил)-4-(азетидин-1-ил)бут-2-ен-1-он,

(31) 1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)азетидин-1-ил)-4-(этил(метил)амино)бут-2-ен-1-он,

(32) 1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)азетидин-1-ил)-4-(изопропиламино)бут-2-ен-1-он,

(33) 1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)азетидин-1-ил)-4-(диэтиламино)бут-2-ен-1-он,

(34) 1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)азетидин-1-ил)-4-((2-метоксиэтил)(метил)амино)бут-2-ен-1-он,

(35) 1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)азетидин-1-ил)-4-(4-гидроксипиперидин-1-ил)бут-2-ен-1-он,

(36) (S)-1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)азетидин-1-ил)-4-(3-гидроксипирролидин-1-ил)бут-2-ен-1-он,

(37) (R)-1-(3-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)азетидин-1-ил)-4-(3-гидроксипирролидин-1-ил)бут-2-ен-1-он,

(38) (2S,4S)-метил-1-акрилоил-4-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)пирролидин-2-карбоксилат,

(39) 1-((2S,4S)-4-(4-амино-5-((3,5-диметоксифенил)этинил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-(1,3,4-оксадиазол-2-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он, и

(40) (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пирроло[3,2-c]пиридин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он.

Из них предпочтительным является (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он.

Соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль в вышеописанном комбинированном препарате по настоящему изобретению можно синтезировать на основе способа получения, описанного, например, в WO 2013/108809 (ПЛ 1), хотя способ получения не ограничен конкретно этим способом.

(S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он, который является одним примером соединения, представленного формулой (I), представляет собой двузамещенное алкинильное производное бензола, имеющее структуру, описанную ниже. В настоящей спецификации ради удобства соединение называют «соединением 1». Соединение 1 описано в качестве иллюстративного соединения 2 в WO 2013/108809.

В настоящем изобретении соединение, представленное формулой (I), может быть использовано непосредственно или в форме фармацевтически приемлемой соли. Фармацевтически приемлемая соль соединения, представленного формулой (I), не имеет конкретных ограничений, и примеры ее включают соли присоединения с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота и серная кислота, органическими кислотами, такими как уксусная кислота, лимонная кислота, виннокаменная кислота и малеиновая кислота; соли со щелочными металлами, такими как калий и натрий; соли со щелочноземельными металлами, такими как кальций и магний; и соли с органическими основаниями, такие как соли аммония, соли этиламина и альгинат.

Соединение, представленное формулой (I), представляет собой противоопухолевое средство, которое обладает превосходным ингибирующим FGFR эффектом и вызывает меньше побочных эффектов, а также, при совместном использовании с различными дополнительными соединениями, обладающими противоопухолевыми эффектами, проявляет эффект усиления противоопухолевых эффектов дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, без заметного возрастания токсичности.

Соответственно, комбинированный препарат по настоящему изобретению включает одно или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемую соль(и), которые отличаются от соединения, представленного формулой (I). Примеры числа дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемых солей, включают одно или более, предпочтительно одно. Дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль выбирают из антиметаболита (пуринового антиметаболита, пиримидинового антиметаболита, антифолата и так далее), алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства (низкомолекулярного молекулярно-направленного лекарственного средства, молекулярно-направленного лекарственного средства на основе антитела и так далее), противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства.

В данном контексте термин «дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемая соль» не должен включать соединение, представленное формулой (I), поскольку соединение, представленное формулой (I), является противоопухолевым средством, действие которого основано на эффекте ингибирования FGFR. Дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, не имеет конкретных ограничений, и примеры его включают антиметаболиты (пуриновые антиметаболиты, антифолаты и пиримидиновые антиметаболиты), алкалоидные противоопухолевые средства, лекарственные средства на основе платины, молекулярно-направленные лекарственные средства (низкомолекулярные молекулярно-направленные лекарственные средства, молекулярно-направленные лекарственные средства на основе антител и ингибиторы иммунных контрольных точек), противоопухолевые антибиотики, алкилирующие средства и, более конкретно, включают

пуриновые антиметаболиты, такие как флударабин, кладрибин, и неларабин;

пиримидиновые антиметаболиты, такие как 5-фторурацил (5-FU), тегафур/гимерацил/отерацил калия (TS-1 или S-1, торговое наименование: «TS-1»), тегафур/урацил (UFT, торговое наименование: «UFT»), трифлуридин/типирацил гидрохлорид (TAS-102, торговое наименование: «LONSURF»), капецитабин, доксифлуридин, 5-фтор-2'-дезоксиуридин (FdUrd), гемцитабин и цитарабин;

антифолаты, такие как пеметрексед и метотрексат;

алкалоидные противоопухолевые средства, такие как паклитаксел (продаваемый под торговыми наименованиями «таксол», «абраксан» и так далее; паклитаксел включает такие производные, как альбумин-связанный паклитаксел (например, ABI-007) и ПЭГ-связанный паклитаксел), доцетаксел (торговое наименование «таксотер» и так далее), кабацитаксел, эрибулин, иринотекан, ногитекан, этопозид, винорелбин, винкристин и винбластин;

лекарственные средства на основе платины, такие как цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин и недаплатин;

низкомолекулярные молекулярно-направленные лекарственные средства, такие как иматиниб, гефитиниб, эрлотиниб, лапатиниб, сунитиниб, дазатиниб, эверолимус, темсиролимус, селуметиниб, траметиниб, сорафениб, афатиниб, регорафениб, дабрафениб, вемурафениб, транс-3-амино-1-метил-3-(4-(3-фенил-5H-имидазо[1,2-c]пиридо[3,4-e][1,3]оксазин-2-ил)фенил)циклобутанол (в настоящей спецификации называемый «соединение 2»), и их фармацевтически приемлемые соли, а также 8-[4-(1-аминоциклобутил)фенил]-9-фенил-1,2,4-триазолo[3,4-f][1,6]нафтиридин-3(2H)-он (MK2206) и его фармацевтически приемлемые соли;

молекулярно-направленные лекарственные средства на основе антител, такие как трастузумаб, цетуксимаб, бевацизумаб, панитумумаб, велтузумаб, ритуксимаб и рамуцирумаб;

ингибиторы иммунных контрольных точек, такие как ниволумаб, пембролизумаб, атезолизумаб, дурвалумаб, авелумаб, ипилимумаб, тремелимумаб и абатацепт;

противоопухолевые антибиотики, такие как доксорубицин, даунорубицин, эпирубицин, актиномицин D и митомицин C; и

алкилирующие средства, такие как циклофосфамид, дакарбазин, темозоломид, нимустин, бусульфан, прокарбазин и мелфалан.

Вышеописанные низкомолекулярные молекулярно-направленные лекарственные средства включают средства, имеющие различные механизмы действия. Например, известно, что гефитиниб проявляет противоопухолевый эффект за счет ингибирования EGFR, и его называют ингибитором EGFR. Также известно, что сигнальные пути MAPK, PI3K/AKT/mTOR и NF-κB аберрантно активированы в разных раковых клетках. Ингибиторы этих сигнальных путей также могут быть использованы в качестве противоопухолевых средств по настоящему изобретению.

Примеры ингибиторов AKT, которые, как известно, проявляют противоопухолевый эффект за счет ингибирования AKT, могут включать

транс-3-амино-1-метил-3-(4-(3-фенил-5H-имидазо[1,2-c]пиридо[3,4-e][1,3]оксазин-2-ил)фенил)циклобутанол (соединение 2) и его фармацевтически приемлемые соли, и

8-[4-(1-аминоциклобутил)фенил]-9-фенил-1,2,4-триазолo[3,4-f][1,6]нафтиридин-3(2H)-он (MK2206) и его фармацевтически приемлемые соли.

Вышеописанное соединение 2 представляет собой соединение, описанное в примере 32 в WO 2012/137870, и может быть синтезировано способом, описанным в указанном документе.

Примеры ингибиторов mTOR, которые, как известно, проявляют противоопухолевый эффект за счет ингибирования mTOR, могут включать эверолимус.

Примеры пиримидиновых антиметаболитов включают вышеуказанные соединения. Предпочтительно, пиримидиновый антиметаболит представляет собой 5-фторурацил (5-FU), тегафур/гимерацил/отерацил калия или гемцитабин, более предпочтительно, тегафур/гимерацил/отерацил калия или гемцитабин, и особенно предпочтительно, тегафур/гимерацил/отерацил калия.

Примеры алкалоидного противоопухолевого средства включают вышеуказанные соединения. Предпочтительно, алкалоидное противоопухолевое средство представляет собой паклитаксел.

Примеры лекарственного средства на основе платины включают вышеуказанные соединения. Предпочтительно, лекарственное средство на основе платины представляет собой цисплатин.

Примеры низкомолекулярного молекулярно-направленного лекарственного средства включают вышеуказанные соединения. Предпочтительно, низкомолекулярное молекулярно-направленное лекарственное средство представляет собой ингибитор AKT, ингибитор mTOR или ингибитор EGFR, и более предпочтительно, ингибитор AKT или ингибитор mTOR.

Примеры дополнительного соединения, обладающего противоопухолевым эффектом, включают вышеуказанные соединения. Дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, предпочтительно представляет собой пиримидиновый антиметаболит, алкалоидное противоопухолевое средство, лекарственное средство на основе платины или низкомолекулярное молекулярно-направленное лекарственное средство. Более предпочтительно, дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой пиримидиновый антиметаболит, растительное алкалоидное противоопухолевое средство, лекарственное средство на основе платины, ингибитор AKT или ингибитор mTOR. Даже более предпочтительно, дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой тегафур/гимерацил/отерацил калия, гемцитабин, паклитаксел, цисплатин, эверолимус или транс-3-амино-1-метил-3-(4-(3-фенил-5H-имидазо[1,2-c]пиридо[3,4-e][1,3]оксазин-2-ил)фенил)циклобутанол (соединение 2) или его фармацевтически приемлемую соль, 8-[4-(1-аминоциклобутил)фенил]-9-фенил-1,2,4-триазолo[3,4-f][1,6]нафтиридин-3(2H)-он (MK2206) или его фармацевтически приемлемую соль, или эверолимус, и особенно предпочтительно, тегафур/гимерацил/отерацил калия или паклитаксел. Альтернативно, дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, может быть предоставлено в виде производного или в виде комплекса, без уменьшения его фармакологического эффекта или с целью усиления его фармакологического эффекта, например, с целью улучшения фармакокинетики in vivo, улучшения доставки к целевому сайту или уменьшения распада.

Соответствующие механизмы действия, дозы и терапевтические мишени вышеуказанных противоопухолевых средств известны, и специалисты в данной области могут получать данные противоопухолевые средства наряду с необходимой информацией.

Как известно специалистам в данной области, даже лекарственные препараты с превосходным противоопухолевым эффектом могут причинять дополнительные страдания пациентам из-за вызываемых ими побочных эффектов. Комбинированный препарат по настоящему изобретению может способствовать уменьшению дозы и частоты дозирования лекарственных средств за счет противоопухолевого эффекта и, следовательно, может быть эффективным для уменьшения побочных эффектов.

Злокачественная опухоль, которую можно лечить комбинированным препаратом по настоящему изобретению, не имеет конкретных ограничений, и примеры включают эпителиальный рак (рак дыхательной системы, рак желудочно-кишечного тракта, рак мочеполовой системы, рак секреторной системы, рак молочной железы и так далее), саркому, опухоль гемопоэтической системы, опухоль центральной нервной системы и опухоль периферической нервной системы.

Конкретные примеры рака дыхательной системы включают рак легкого (немелкоклеточный рак легкого, мелкоклеточный рак легкого и так далее). Конкретные примеры рака желудочно-кишечного тракта включают рак пищевода, рак желудка, рак двенадцатиперстной кишки, рак печени, печеночно-клеточный рак, рак желчных протоков (рак желчного пузыря, холангиокарциному, внутрипеченочную холангиокарциному, внепеченочную холангиокарциному и так далее), рак поджелудочной железы и колоректальный рак (рак толстой кишки, рак прямой кишки и так далее). Конкретные примеры рака мочеполовой системы включают рак яичника, рак тела матки (рак шейки матки, рак эндометрия и так далее), рак почки, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы и опухоль яичка. Конкретные примеры рака секреторной системы включают рак щитовидной железы. Конкретные примеры саркомы включают опухоль костей или мягких тканей. Конкретные примеры опухоли гемопоэтической системы включают лейкоз, злокачественную лимфому и множественную миелому. Конкретные примеры опухоли центральной нервной системы включают рак головы и шеи и опухоль головного мозга. Конкретные примеры опухоли периферической нервной системы включают рак кожи.

Даже более предпочтительно, злокачественная опухоль, подлежащая лечению, по настоящему изобретению представляет собой рак легкого, рак пищевода, рак желудка, рак желчных протоков (рак желчного пузыря, холангиокарциному, внутрипеченочную холангиокарциному или внепеченочную холангиокарциному), рак эндометрия, рак мочевого пузыря, рак молочной железы, остеосаркому, саркому мягких тканей, множественную миелому или опухоль головного мозга, и особенно предпочтительно, рак желудка, рак желчных протоков (рак желчного пузыря, холангиокарциному, внутрипеченочную холангиокарциному или внепеченочную холангиокарциному), рак эндометрия, рак мочевого пузыря или опухоль головного мозга.

Примеры дополнительного соединения, обладающего противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемой соли, которые предпочтительно могут быть использованы в комбинированном препарате по настоящему изобретению для лечения рака желудка по настоящему изобретению, включают пиримидиновые антиметаболиты, алкалоидные противоопухолевые средства, лекарственные средства на основе платины и противоопухолевые антибиотики. Такое дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль предпочтительно выбирают из группы, состоящей из паклитаксела, доцетаксела, тегафур/гимерацил/отерацила калия, 5-фторурацила, гемцитабина, капецитабина, оксалиплатина, цисплатина и рамуцирумаба, и более предпочтительно, оно представляет собой тегафур/гимерацил/отерацил калия или паклитаксел.

Примеры дополнительного соединения, обладающего противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемой соли, которые предпочтительно могут быть использованы в комбинированном препарате по настоящему изобретению для лечения рака желчных протоков по настоящему изобретению, включают пиримидиновые антиметаболиты и лекарственные средства на основе платины, предпочтительно гемцитабин и цисплатин.

Примеры дополнительного соединения, обладающего противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемой соли, которые предпочтительно могут быть использованы в комбинированном препарате по настоящему изобретению для лечения рака мочевого пузыря по настоящему изобретению, включают пиримидиновые антиметаболиты, антифолаты, алкалоидные противоопухолевые средства, лекарственные средства на основе платины, противоопухолевые антибиотики и ингибиторы иммунных контрольных точек. Такое дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль предпочтительно выбирают из группы, состоящей из метотрексата, гемцитабина, паклитаксела, доцетаксела, винбластина, цисплатина, карбоплатина, доксорубицина и атезолизумаба.

Примеры дополнительного соединения, обладающего противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемой соли, которые предпочтительно могут быть использованы в комбинированном препарате по настоящему изобретению для лечения опухоли головного мозга по настоящему изобретению, включают молекулярно-направленные лекарственные средства на основе антител, алкалоидные противоопухолевые средства и алкилирующие средства. Такое дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль предпочтительно выбирают из группы, состоящей из иринотекана, бевацизумаба и темозоломида.

Примеры дополнительного соединения, обладающего противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемой соли, которые предпочтительно могут быть использованы в комбинированном препарате по настоящему изобретению для лечения рака эндометрия по настоящему изобретению, включают пиримидиновые антиметаболиты, лекарственные средства на основе платины, алкалоидные противоопухолевые средства, противоопухолевые антибиотики и алкилирующие средства. Такое дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль предпочтительно выбирают из группы, состоящей из 5-фторурацила, гемцитабина, цисплатина, карбоплатина, паклитаксела, доксорубицина и циклофосфамида.

В комбинированном препарате по настоящему изобретению соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль и одно или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемая соль(и), выбранных из пиримидинового антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины и молекулярно-направленного лекарственного средства, могут быть сформулированы раздельно в нескольких препаратах или могут быть совместно сформулированы в одном препарате. Кроме того, комбинированный препарат по настоящему изобретению может дополнительно содержать активный ингредиент, отличный от соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли и дополнительного соединения, обладающего противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемой соли, но предпочтительно представляет собой комбинированный препарат, содержащий только соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль и дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активных ингредиентов.

Когда соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль и дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемая соль содержатся в качестве активных ингредиентов в препаратах, фармацевтический носитель может быть добавлен к каждому активному ингредиенту, при необходимости, с образованием разных подходящих лекарственных форм для профилактических и терапевтических целей. Примеры лекарственной формы включают пероральные препараты, инъекции, суппозитории, мази и пластыри. Предпочтительными являются пероральные препараты. Пероральные препараты могут находиться в такой форме, как таблетки, капсулы, гранулы, порошки и сиропы, и не имеют конкретных ограничений. Такие лекарственные формы могут быть изготовлены способами, хорошо известными специалистам в данной области. Препараты или фармацевтические композиции могут дополнительно содержать подходящий носитель, такой как эксципиент, разбавитель, наполнитель или разрыхлитель, соответствующий лекарственным формам, или при необходимости.

Суточная доза соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли может варьироваться в зависимости от состояния здоровья, массы тела, возраста и пола пациента и так далее, и не может быть указана обобщенно. Как правило, суточная доза для взрослого человека (масса тела: 60 кг) составляет примерно от 1 до 1000 мг, предпочтительно примерно от 10 до 500 мг, и более предпочтительно примерно от 20 до 300 мг соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли.

В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве примерно 1-200 мг в сутки, предпочтительно 2-100 мг в сутки, более предпочтительно 4-50 мг в сутки, и даже более предпочтительно 10-40 мг в сутки.

В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве примерно 2-1000 мг в сутки, предпочтительно 10-500 мг в сутки, более предпочтительно 20-200 мг в сутки, и даже более предпочтительно 50-160 мг в сутки.

Когда соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль и дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемая соль сформулированы раздельно в виде двух или более разных препаратов, препарат, содержащий соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль, и препарат, содержащий дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль, можно вводить одновременно, раздельно или последовательно. Интервал между введением доз при раздельном введении не имеет конкретных ограничений и может быть выбран так, чтобы были оптимально достигнуты соответствующие эффекты соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли и дополнительного соединения, обладающего противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемой соли, а также эффект от их совместного использования. В случае последовательного введения препарат, содержащий соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль, и препарат, содержащий дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль, можно вводить в любом порядке.

При использовании комбинированного препарата по настоящему изобретению препарат, содержащий соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль, и препарат, содержащий дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль, можно вводить одним и тем же или разными путями введения. Например, оба из препарата, содержащего соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль, и препарата, содержащего дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль, можно вводить перорально. Альтернативно, например, препарат, содержащий соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль, можно вводить перорально, при этом препарат, содержащий дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль, можно вводить внутривенной инъекцией. Путь введения может быть соответствующим образом определен в зависимости от активных ингредиентов, которые предстоит вводить, и с учетом степени прогрессирования злокачественной опухоли у пациента, общего состояния здоровья пациента и так далее.

Комбинированный препарат по настоящему изобретению можно вводить пациенту до или после операции, и также можно вводить неоперабельному пациенту. Комбинированный препарат по настоящему изобретению может дополнительно включать лекарственное средство для усиления противоопухолевого эффекта и также может включать лекарственное средство для уменьшения побочных эффектов.

В одном аспекте настоящего изобретения для лечения рака желудка, например, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль и пиримидиновый антиметаболит тегафур/гимерацил/отерацил калия можно использовать совместно, и оба лекарственных средства можно вводить перорально в качестве активных ингредиентов в комбинированном препарате или в качестве активных ингредиентов в фармацевтической композиции, описанной ниже.

В другом аспекте настоящего изобретения для лечения рака желудка, например, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль и алкалоидное противоопухолевое средство паклитаксел можно использовать совместно, и соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить перорально, при этом паклитаксел можно вводить внутривенно.

В одном аспекте настоящего изобретения для лечения рака желчных протоков, например, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль и алкалоидное противоопухолевое средство гемцитабин можно использовать совместно, и соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить перорально, при этом гемцитабин можно вводить внутривенно.

В другом аспекте настоящего изобретения для лечения рака желчных протоков, например, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль и лекарственное средство на основе платины цисплатин можно использовать совместно, и соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить перорально, при этом цисплатин можно вводить внутривенно.

В одном аспекте настоящего изобретения для лечения рака мочевого пузыря, например, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль и лекарственное средство на основе платины цисплатин можно использовать совместно, и соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить перорально, при этом цисплатин можно вводить внутривенно.

В одном аспекте настоящего изобретения для лечения опухоли головного мозга, например, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль и алкилирующее средство темозоломид можно использовать совместно, и соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить перорально, при этом темозоломид можно вводить внутривенно или перорально.

В одном аспекте настоящего изобретения для лечения рака эндометрия, например, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль и лекарственное средство на основе платины цисплатин, пиримидиновый антиметаболит гемцитабин или молекулярно-направленное лекарственное средство эверолимус можно использовать совместно, при этом путь введения и частоту дозирования каждого лекарственного средства можно выбирать соответствующим образом.

Пропорции для введения или смешивания соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли и дополнительного соединения, обладающего противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемой соли не имеют конкретных ограничений при условии, что пропорции будут находиться в диапазоне, который обеспечивает оказание усиливающего эффекта на противоопухолевый эффект. Соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве примерно 0,001-1000 молей, предпочтительно примерно 0,01-100 молей, в расчете на свободную форму соединения, на моль дополнительного соединения, обладающего противоопухолевым эффектом.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой пиримидиновый антиметаболит, например, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,001-10 молей, и более предпочтительно 0,01-1 моля, на моль пиримидинового антиметаболита.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой алкалоидное противоопухолевое средство, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,01-200 молей, и более предпочтительно 0,1-100 молей, на моль алкалоидного противоопухолевого средства.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой лекарственное средство на основе платины, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,001-50 молей, и более предпочтительно 0,01-10 молей, на моль лекарственного средства на основе платины.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой низкомолекулярное молекулярно-направленное лекарственное средство, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 1-1000 молей, и более предпочтительно 10-100 молей, на моль низкомолекулярного молекулярно-направленного лекарственного средства.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой ингибитор mTOR, например, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 1-1000 молей, и более предпочтительно 10-100 молей, на моль ингибитора mTOR.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой молекулярно-направленное лекарственное средство на основе антитела, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,005-1 мг, и более предпочтительно 0,01-0,5 мг, на мг молекулярно-направленного лекарственного средства на основе антитела.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой тегафур/гимерацил/отерацил калия (пиримидиновый антиметаболит), например, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 0,01-10 молей, предпочтительно 0,1-2 молей, на моль тегафура. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,01-1 моля, и более предпочтительно 0,05-0,5 моля, на моль тегафура. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,01-10 молей, и более предпочтительно 0,1-3 молей, на моль тегафура.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой 5-фторурацил (пиримидиновый антиметаболит), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 0,0001-1 моля, предпочтительно 0,0005-0,5 моля, на моль 5-фторурацила. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,0001-0,1 моля, и более предпочтительно 0,005-0,05 моля, на моль 5-фторурацила. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,0001-1 моля, и более предпочтительно 0,001-0,5 моля, на моль 5-фторурацила.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой капецитабин (пиримидиновый антиметаболит), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 0,001-1 моля, предпочтительно 0,005-0,1 моля, на моль капецитабина. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,001-0,1 моля, и более предпочтительно 0,005-0,05 моля, на моль капецитабина. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,005-0,5 моля, и более предпочтительно 0,01-0,1 моля, на моль капецитабина.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой гемцитабин (пиримидиновый антиметаболит), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 0,001-1 моля, предпочтительно 0,005-0,1 моля, на моль гемцитабина. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,001-0,1 моля, и более предпочтительно 0,005-0,05 моля, на моль гемцитабина. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,005-1 моля, и более предпочтительно 0,01-0,1 моля, на моль гемцитабина.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой паклитаксел (алкалоидное противоопухолевое средство), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 0,01-10 молей, предпочтительно 0,05-5 молей, на моль паклитаксела. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,01-1 моля, и более предпочтительно 0,05-0,5 моля, на моль паклитаксела. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,1-10 молей, и более предпочтительно 0,2-5 молей, на моль паклитаксела.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой доцетаксел (алкалоидное противоопухолевое средство), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 0,05-10 молей, предпочтительно 0,1-5 молей, на моль доцетаксела. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,05-1 моля, и более предпочтительно 0,1-0,5 моля, на моль доцетаксела. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,1-10 молей, и более предпочтительно 0,5-5 молей, на моль доцетаксела.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой иринотекан (алкалоидное противоопухолевое средство), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 0,01-2 молей, предпочтительно 0,02-1 моля, на моль иринотекана. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,01-1 моля, и более предпочтительно 0,02-0,1 моля, на моль иринотекана. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,05-2 молей, и более предпочтительно 0,1-1 моля, на моль иринотекана.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой винбластин (алкалоидное противоопухолевое средство), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 1-200 молей, предпочтительно 5-100 молей, на моль винбластина. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 1-30 молей, и более предпочтительно 5-20 молей, на моль винбластина. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 5-200 молей, и более предпочтительно 10-100 молей, на моль винбластина.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой цисплатин (лекарственное средство на основе платины), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 0,01-50 молей, предпочтительно 0,05-10 молей, на моль цисплатина. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,01-10 молей, и более предпочтительно 0,05-2 молей, на моль цисплатина. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,1-10 молей, и более предпочтительно 0,2-6 молей, на моль цисплатина.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой оксалиплатин (лекарственное средство на основе платины), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 0,01-5 молей, предпочтительно 0,05-2 молей, на моль оксалиплатина. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,01-1 моля, и более предпочтительно 0,05-0,5 моля, на моль оксалиплатина. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,05-5 молей, и более предпочтительно 0,1-2 молей, на моль оксалиплатина.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой карбоплатин (лекарственное средство на основе платины), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 0,001-1 моля, предпочтительно 0,01-0,5 моля, на моль карбоплатина. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,001-0,1 моля, и более предпочтительно 0,01-0,1 моля, на моль карбоплатина. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,01-1 моля, и более предпочтительно 0,05-0,5 моля, на моль карбоплатина.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой эверолимус (низкомолекулярное молекулярно-направленное лекарственное средство), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 1-1000 молей, предпочтительно 10-100 молей, на моль эверолимуса.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой рамуцирумаб (молекулярно-направленное лекарственное средство на основе антитела), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 0,01-1 мг, предпочтительно 0,02-0,5 мг, на мг рамуцирумаба. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,01-0,2 мг, и более предпочтительно 0,02-0,1 мг, на мг рамуцирумаба. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,02-1 мг, и более предпочтительно 0,05-0,5 мг, на моль рамуцирумаба.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой бевацизумаб (молекулярно-направленное лекарственное средство на основе антитела), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 0,005-1 мг, предпочтительно 0,01-0,5 мг, на мг бевацизумаба. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,005-0,1 мг, и более предпочтительно 0,01-0,1 мг, на мг бевацизумаба. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,01-1 мг, и более предпочтительно 0,05-0,5 мг, на мг бевацизумаба.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой атезолизумаб (ингибитор иммунных контрольных точек), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 0,001-1 мг, предпочтительно 0,01-0,5 мг, на мг атезолизумаба. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,001-0,1 мг, и более предпочтительно 0,01-0,05 мг, на мг атезолизумаба. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,01-1 мг, и более предпочтительно 0,03-0,5 мг, на мг атезолизумаба.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой метотрексат (антифолат), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 0,1-20 молей, предпочтительно 0,2-5 молей, на моль метотрексата. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,1-2 молей, и более предпочтительно 0,2-1 моля, на моль метотрексата. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,5-10 молей, и более предпочтительно 1-5 молей, на моль метотрексата.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой доксорубицин (противоопухолевый антибиотик), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 0,05-20 молей, предпочтительно 0,1-10 молей, на моль доксорубицина. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,05-2 молей, и более предпочтительно 0,1-1 моля, на моль доксорубицина. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,1-20 молей, и более предпочтительно 0,5-10 молей, на моль доксорубицина.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой темозоломид (алкилирующее средство), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 0,001-1 моля, предпочтительно 0,01-0,5 моля, на моль темозоломида. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,001-0,1 моля, и более предпочтительно 0,01-0,05 моля, на моль темозоломида. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,01-1 моля, и более предпочтительно 0,05-0,5 моля, на моль темозоломида.

Когда дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, представляет собой циклофосфамид (алкилирующее средство), соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в количестве 0,001-1 моля, предпочтительно 0,01-0,3 моля, на моль циклофосфамида. В случае ежедневного введения суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,001-0,1 моля, и более предпочтительно 0,01-0,05 моля, на моль циклофосфамида. В случае введения через день суточной дозы соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в диапазоне количеств предпочтительно 0,005-1 моля, и более предпочтительно 0,01-0,2 моля, на моль циклофосфамида.

Во втором варианте осуществления настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль и одно или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемую соль(и), выбранных из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержит соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль и одно или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемую соль(и) в качестве активных ингредиентов в одной и той же композиции, в то время как вышеописанный комбинированный препарат включает эти активные ингредиенты в отдельных препаратах. Пропорции для смешивания соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли и одного или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемой соли(ей) в композиции могут находиться в диапазонах, описанных выше.

В третьем варианте осуществления настоящее изобретение также относится к усилителю противоопухолевого эффекта для одного или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемой соли(ей), выбранных из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства, содержащему соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента.

В четвертом варианте осуществления настоящее изобретение также относится к противоопухолевому средству, содержащему соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль, при этом противоопухолевое средство используют в сочетании с одним или более дополнительными соединениями, обладающими противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемой солью(солями), выбранными из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства.

В пятом варианте осуществления настоящее изобретение также относится к набору для лечения злокачественной опухоли, включающему соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль и одно или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемую соль(и), выбранных из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства.

В шестом варианте осуществления настоящее изобретение также относится к противоопухолевому средству, содержащему соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль, предназначенному для лечения пациента с раком, получающего одно или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемую соль(и), выбранных из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства.

В седьмом варианте осуществления настоящее изобретение также относится к применению соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли в производстве усилителя противоопухолевого эффекта для одного или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемой соли(ей), выбранных из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства.

В восьмом варианте осуществления настоящее изобретение также относится к применению соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли для усиления противоопухолевого эффекта одного или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемой соли(ей), выбранных из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства.

В девятом варианте осуществления настоящее изобретение также относится к способу лечения опухоли, включающему введение соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли и одного или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемой соли(ей), выбранных из антиметаболита, алкалоидного противоопухолевого средства, лекарственного средства на основе платины, молекулярно-направленного лекарственного средства, противоопухолевого антибиотика и алкилирующего средства, пациенту, который нуждается в этом.

Подтверждено, что варианты осуществления настоящего изобретения являются высокоэффективными не только в отношении опухоли, имеющей FGFR дикого типа, но и в отношении опухоли, имеющей амплифицированный или мутантный FGFR. Соответственно, мишень для лечения по настоящему изобретению также включает, но без конкретных ограничений, опухоли, имеющие FGFR дикого типа, либо амплифицированный или мутантный FGFR. Хотя мишень для лечения по настоящему изобретению не ограничена опухолью, имеющей конкретный FGFR дикого типа, предпочтительно она представляет собой опухоль, имеющую FGFR3 дикого типа. Кроме того, хотя мишень для лечения по настоящему изобретению не ограничена опухолью с амплификацией конкретного FGFR, предпочтительно она представляет собой опухоль с амплификацией FGFR1 или FGFR2. Кроме того, хотя мишень для лечения по настоящему изобретению не ограничена опухолью, имеющей мутацию конкретного FGFR, предпочтительно она представляет собой опухоль, имеющую мутацию FGFR2.

Соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно эффективно использовать даже в случае опухоли, имеющей устойчивость в отношении дополнительного соединения, обладающего противоопухолевым эффектом. Например, известно, что эффекты ингибитора EGFR гефитиниба снижаются при долгосрочном использовании. Однако его совместное использование с соединением, представленным формулой (I), или его фармацевтически приемлемой солью может приводить к значительному уменьшению выживаемости клеток опухолей. Кроме того, соединение, представленное формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль можно эффективно использовать даже в случае опухоли, имеющей устойчивость в отношении ингибитора FGFR, отличного от соединения, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли.

ПРИМЕРЫ

Далее настоящее изобретение подробно описано со ссылкой на примеры; однако объем настоящего изобретения не ограничен данными примерами. Хотя настоящее изобретение полностью объяснено с помощью примеров, следует понимать, что специалисты в данной области могут вносить различные изменения или модификации. Соответственно, такие изменения или модификации являются частью настоящего изобретения, не выходя за пределы объема настоящего изобретения. Различные реагенты, используемые в примерах, являются коммерчески доступными продуктами, если не указано иначе.

Пример 1: Измерение противоопухолевого эффекта используемых в сочетании соединения 1 и S-1 на опухоль из человеческих клеток рака желудка линии SNU-16, подкожно имплантированных «голым» мышам

Используя методику, описанную в Clin Cancer Res. 2013; 19 (9): 2572-83, суспензию человеческих клеток рака желудка линии SNU-16 (полученных из Американской коллекции типовых культур) подкожно имплантировали 6-недельным самцам мышей BALB/cAJcl-nu/nu (CLEA Japan, Inc.) в количестве 8 × 10⁶ клеток/мышь. Для разделения мышей на группы (n=10/группе) после имплантации суспензии клеток объем опухолей (ОО) рассчитывали по формуле, приведенной ниже, и мышей, имеющих ОО от 100 до 300 мм³, отбирали и распределяли по группам так, чтобы средний ОО был одинаковым во всех группах. День, когда животных распределяли по группам, был определен, как день 0.

ОО (мм³)=(длинная ось × короткая ось²)/2 (единицами размерности для длинной оси и короткой оси были мм).

Соединение 1 в дозе 5 или 15 мг/кг/день и тегафур/гимерацил/отерацил калия (S-1; молярная пропорция смеси: 1:0,4:1) в дозе 8,3 мг/кг/день (в расчете на тегафур) перорально вводили один раз в день в течение 14 дней.

Используемая доза соединения 1 составляла 15 мг/кг, что соответствует эффективной дозе для данной мышиной модели подкожно имплантированной опухоли, и низкую дозу 5 мг/кг использовали для подтверждения эффекта использования препарата в сочетании. Используемая доза S-1 была определена с учетом максимально переносимой дозы для «голых» мышей, и так далее.

Противоопухолевые эффекты оценивали на основании различий между средними значениями относительного объема опухолей (ООО) в двух группах, сравниваемых в день произведения оценки, в виде индекса. ООО рассчитывали по формуле, приведенной ниже, на основании значений ОО в день измерения и в день разделения на группы. Кроме того, П/К (%) рассчитывали, исходя из средних значений ООО в группах введения препаратов и в контрольной группе.

ООО=(ОО в день измерения)/(ОО в день разделения на группы)

П/К (%)=(средний ООО в каждой группе введения препарата в день оценки)/(средний ООО в контрольной группе в день оценки) × 100

В результате, каждое из лечения соединением 1 (5 и 15 мг/кг) и лечения S-1 (8,3 мг/кг) в отдельности приводило к ингибированию роста подкожно имплантированной опухоли SNU-16, с соответствующими значениями П/К (%) в день оценки, составляющими 83,6%, 69,0% и 84,3%. Напротив, совместное лечение сочетанием 5 или 15 мг/кг соединения 1 и 8,3 мг/кг S-1 приводило к ингибированию роста опухоли в большей степени, чем лечение каждым из препаратов в отдельности, с соответствующими значениями П/К (%), составляющими 54,4% и 43,9%.

Ингибирующий рост опухоли эффект соединения 1 и S-1, используемых в сочетании, превосходил прогнозируемый компьютерной программой эффект совместного использования обоих лекарственных средств (П/К=70,5% и 58,2%) на основании эффекта каждого лекарственного средства, используемого отдельно, в качестве индекса, свидетельствуя о том, что совместное использование приводит к синергетическим эффектам (P <0,05; метод Блисса, критерий Стьюдента). Данные результаты представлены на Фигурах 1A и 1C. С другой стороны, средняя степень изменения массы тела в группе используемых в сочетании соединения 1/S-1 существенно не отличалась от степени изменения массы тела в группе введения каждого лекарственного средства (Фигура 1B).

Пример 2: Измерение противоопухолевого эффекта используемых в сочетании соединения 1 и паклитаксела на опухоль из человеческих клеток рака желудка линии SNU-16, подкожно имплантированных «голым» мышам

Аналогично методике примера 1, суспензию человеческих клеток рака желудка линии SNU-16 подкожно имплантировали 6-недельным самцам мышей BALB/cAJcl-nu/nu (CLEA Japan, Inc.) в количестве 8 × 10⁶ клеток/мышь. Для разделения мышей на группы (n=10/группе) после имплантации суспензии клеток мышей, имеющих объем опухоли (ОО) от 100 до 300 мм³, отбирали и распределяли по группам так, чтобы средний ОО был одинаковым во всех группах.

Соединение 1 перорально вводили ежедневно в дозе 5 или 15 мг/кг/день в течение 14 дней один раз в день. Паклитаксел вводили в одной дозе 60 мг/кг/день, исходя из максимально растворимого количества для вводимого раствора, путем инъекции в хвостовую вену в день 1.

Противоопухолевые эффекты оценивали на основании различий между средними значениями относительного объема опухолей (ООО) в двух группах, сравниваемых в день произведения оценки, в виде индекса. Кроме того, П/К (%) рассчитывали, исходя из средних значений ООО в группах введения препаратов и в контрольной группе.

В результате, каждое из лечения соединением 1 (5 и 15 мг/кг) и лечения паклитакселом (60 мг/кг) в отдельности приводило к ингибированию роста подкожно имплантированной опухоли SNU-16, с соответствующими значениями П/К (%) в день оценки, составляющими 83,6%, 69,0% и 12,9%. Напротив, совместное лечение сочетанием 5 или 15 мг/кг соединения 1 и 60 мг/кг паклитаксела приводило к ингибированию роста опухоли в большей степени, чем лечение каждым из препаратов в отдельности, с соответствующими значениями П/К (%), составляющими 3,1% и 1,5%.

Ингибирующий рост опухоли эффект соединения 1 и паклитаксела, используемых в сочетании, превосходил прогнозируемый компьютерной программой эффект совместного использования обоих лекарственных средств (П/К=10,8% и 8,9%) на основании эффекта каждого лекарственного средства, используемого отдельно, в качестве индекса, свидетельствуя о том, что совместное использование приводит к синергетическим эффектам (P <0,05; метод Блисса, критерий Стьюдента). Данные результаты представлены на Фигурах 2A и 2C. С другой стороны, временное снижение массы тела наблюдали у мышей после введения паклитаксела, что указывало на побочный эффект паклитаксела. Средняя степень изменения массы тела в группе используемых в сочетании соединения 1/паклитаксела существенно не отличалась от степени изменения массы тела в группе введения каждого лекарственного средства (Фигура 2B).

Пример 3: Измерение противоопухолевого эффекта используемых в сочетании соединения 1 и цисплатина на опухоль из человеческих клеток рака эндометрия линии AN3CA, подкожно имплантированных «голым» мышам

Используя методику, описанную в Gynecol Oncol. 2014; 132 (2): 468-73, суспензию человеческих клеток рака эндометрия линии AN3CA (полученных из Американской коллекции типовых культур) подкожно имплантировали 6-недельным самкам мышей BALB/cAJcl-nu/nu (CLEA Japan, Inc.) в количестве 1 × 10⁷ клеток/мышь. Привитую опухоль извлекали из мышей, измельчали на фрагменты размером 2 квадратных мм, а затем подкожно имплантировали 6-недельным самкам мышей BALB/cAJcl-nu/nu. Для разделения мышей на группы (n=6/группе) после имплантации опухоли мышей, имеющих объем опухоли (ОО) от 100 до 300 мм³, отбирали и распределяли по группам так, чтобы средний ОО был одинаковым во всех группах.

Соединение 1 перорально вводили ежедневно в дозе 15 мг/кг/день в течение 14 дней один раз в день. Цисплатин вводили в дозе 7 мг/кг/день в хвостовую вену в день 1. Доза 7 мг/кг цисплатина соответствовала максимально переносимой дозе при однократном введении «голым» мышам.

Противоопухолевые эффекты оценивали на основании различий между средними значениями относительного объема опухолей (ООО) в двух группах, сравниваемых в день произведения оценки, в виде индекса. Кроме того, П/К (%) рассчитывали, исходя из средних значений ООО в группах введения препаратов и в контрольной группе.

В результате, каждое из лечения соединением 1 (15 мг/кг) и лечения цисплатином (7 мг/кг) в отдельности приводило к ингибированию роста подкожно имплантированной опухоли AN3CA, с соответствующими значениями П/К (%) в день оценки, составляющими 46,0% и 53,0%. Напротив, совместное лечение сочетанием 15 мг/кг соединения 1 и 7 мг/кг цисплатина приводило к ингибированию роста опухоли в большей степени, чем лечение каждым из препаратов в отдельности, с соответствующим значением П/К (%), составляющим 14,9%.

Ингибирующий рост опухоли эффект соединения 1 и цисплатина, используемых в сочетании, был статистически значимо усилен в сравнении с эффектом каждого лекарственного средства, используемого отдельно (P <0,05; критерий Аспина-Уэлча). Кроме того, ингибирующий рост опухоли эффект соединения 1 и цисплатина, используемых в сочетании, превосходил прогнозируемый компьютерной программой эффект совместного использования обоих лекарственных средств (П/К=24,4%) на основании эффекта каждого лекарственного средства, используемого отдельно, в качестве индекса (метод Блисса). Данные результаты представлены на Фигурах 3A и 3C. С другой стороны, временное снижение массы тела наблюдали у мышей после введения цисплатина, что указывало на побочный эффект цисплатина. Изменение массы тела мышей с течением времени не увеличивалось при совместном использовании соединения 1 и цисплатина, в сравнении с изменением массы тела мышей, получавших только цисплатин (Фигура 3B).

Пример 4: Измерение противоопухолевого эффекта используемых в сочетании соединения 1 и гемцитабина на опухоль из человеческих клеток рака эндометрия линии AN3CA, подкожно имплантированных «голым» мышам

Аналогично методике примера 3, суспензию человеческих клеток рака эндометрия линии AN3CA подкожно имплантировали 6-недельным самкам мышей BALB/cAJcl-nu/nu (CLEA Japan, Inc.) в количестве 1 × 10⁷ клеток/мышь. Привитую опухоль извлекали из мышей, измельчали на фрагменты размером 2 квадратных мм, а затем подкожно имплантировали 6-недельным самкам мышей BALB/cAJcl-nu/nu. Для разделения мышей на группы (n=6/группе) после имплантации опухоли мышей, имеющих объем опухоли (ОО) от 100 до 300 мм³, отбирали и распределяли по группам так, чтобы средний ОО был одинаковым во всех группах.

Соединение 1 перорально вводили ежедневно в дозе 15 мг/кг/день в течение 14 дней. Гемцитабин вводили в дозе 100 мг/кг/день в хвостовую вену в день 1 и день 8. Гемцитабин использовали в дозе 100 мг/кг, при которой можно было ожидать эффект лекарственного средства, на основании статьи в J Pharmacol. Exp Ther., 2008; 325: 484-490, и так далее.

Противоопухолевые эффекты оценивали на основании различий между средними значениями относительного объема опухолей (ООО) в двух группах, сравниваемых в день произведения оценки, в виде индекса. Кроме того, П/К (%) рассчитывали, исходя из средних значений ООО в группах введения препаратов и в контрольной группе.

Каждое из лечения соединением 1 (15 мг/кг) и лечения гемцитабином (100 мг/кг) в отдельности приводило к ингибированию роста подкожно имплантированной опухоли AN3CA, с соответствующими значениями П/К (%) в день оценки, составляющими 42,1% и 75,5%. Напротив, совместное лечение сочетанием 15 мг/кг соединения 1 и 100 мг/кг гемцитабина приводило к ингибированию роста опухоли в большей степени, чем лечение каждым из препаратов в отдельности, с соответствующим значением П/К (%), составляющим 24,7%.

Ингибирующий рост опухоли эффект соединения 1 и гемцитабина, используемых в сочетании, имел тенденцию к превышению эффекта соединения 1, используемого отдельно (P=0,0594; критерий Аспина-Уэлча) и также статистически значимо превышал эффект гемцитабина, используемого отдельно (P <0,05; критерий Аспина-Уэлча). Ингибирующий рост опухоли эффект соединения 1 и гемцитабина, используемых в сочетании, превосходил прогнозируемый компьютерной программой эффект совместного использования обоих лекарственных средств (П/К=31,8%) на основании эффекта каждого лекарственного средства, используемого отдельно, в качестве индекса (метод Блисса). Данные результаты представлены на Фигурах 4A и 4C. С другой стороны, изменение массы тела мышей с течением времени заметно не увеличивалось при совместном использовании соединения 1 и гемцитабина, в сравнении с изменением массы тела мышей, получавших только гемцитабин (Фигура 4B).

Пример 5: Измерение противоопухолевого эффекта используемых в сочетании соединения 1 и эверолимуса на опухоль из человеческих клеток рака эндометрия линии AN3CA, подкожно имплантированных «голым» мышам

Аналогично методике примера 3, суспензию человеческих клеток рака эндометрия линии AN3CA подкожно имплантировали 6-недельным самкам мышей BALB/cAJcl-nu/nu (CLEA Japan, Inc.) в количестве 1 × 10⁷ клеток/мышь. Привитую опухоль извлекали из мышей, измельчали на фрагменты размером 2 квадратных мм, а затем подкожно имплантировали 6-недельным самкам мышей BALB/cAJcl-nu/nu. Для разделения мышей на группы (n=6/группе) после имплантации опухоли мышей, имеющих объем опухоли (ОО) от 100 до 300 мм³, отбирали и распределяли по группам так, чтобы средний ОО был одинаковым во всех группах.

Соединение 1 перорально вводили ежедневно в дозе 15 и 50 мг/кг/день в течение 14 дней. Эверолимус перорально вводили ежедневно в дозе 2 мг/кг/день в течение 14 дней. Эверолимус использовали в дозе 2 мг/кг, при которой можно было ожидать эффект лекарственного средства, на основании статьи в Neoplasia, 2013; 15: 1391-1399, и так далее.

Противоопухолевые эффекты оценивали на основании различий между средними значениями относительного объема опухолей (ООО) в двух группах, сравниваемых в день произведения оценки, в виде индекса. Кроме того, П/К (%) рассчитывали, исходя из средних значений ООО в группах введения препаратов и в контрольной группе.

Каждое из лечения соединением 1 (15 и 50 мг/кг) и лечения эверолимусом (2 мг/кг) в отдельности приводило к ингибированию роста подкожно имплантированной опухоли AN3CA, с соответствующими значениями П/К (%) в день оценки, составляющими 33,3%, 12,6% и 27,1%. Напротив, совместное лечение сочетанием 15 или 50 мг/кг соединения 1 и 2 мг/кг эверолимуса приводило к ингибированию роста опухоли в большей степени, чем лечение каждым из препаратов в отдельности, с соответствующими значениями П/К (%), составляющими 5,1% и 1,9%.

Ингибирующий рост опухоли эффект соединения 1 и эверолимуса, используемых в сочетании, был статистически значимо усилен в сравнении с эффектом каждого лекарственного средства, используемого отдельно (P <0,05; критерий Аспина-Уэлча). Кроме того, ингибирующий рост опухоли эффект соединения 1 и эверолимуса, используемых в сочетании, превосходил прогнозируемый компьютерной программой эффект совместного использования обоих лекарственных средств (П/К=9,0% и 3,4%) на основании эффекта каждого лекарственного средства, используемого отдельно, в качестве индекса (метод Блисса). Данные результаты представлены на Фигурах 5A и 5C. С другой стороны, изменение массы тела мышей с течением времени заметно не увеличивалось при совместном использовании соединения 1 и эверолимуса, в сравнении с изменением массы тела мышей, получавших только эверолимус (Фигура 5B).

Пример 6: Оценка ингибирующего рост опухоли эффекта используемых в сочетании соединения 1 и 5-FU in vitro

A. Материалы и методы

Используя методику, описанную в Clin Cancer Res. 2013; 19 (9): 2572-83, человеческие клетки рака желудка линии SNU-16 культивировали в среде RPMI-1640, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки. Клетки поддерживали при 37°C в атмосфере с 5% CO₂ и субкультивировали в соотношении от 1:5 до 1:20 1-2 пересевами в неделю.

Анализ выживаемости клеток

Измерения показателей выживаемости клеток проводили с использованием CellTiter-Glo (производства Promega Corp.). Клетки собирали обычным способом, затем суспендировали в среде RPMI-1640, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки, и высевали в 96-луночный планшет. Количество клеток, внесенных в лунку, составляло 2000 клеток/80 мкл. После инкубации при 37°C в течение 24 часов в атмосфере с 5% CO₂ 10 мкл среды, содержащей соединение 1 и 5-FU или растворитель (ДМСО), добавляли в каждую лунку. Использовали 10 концентраций соединения 1, полученных при серийном 3-кратном разведении, с наивысшей конечной концентрацией, составляющей 100 мкМ. Использовали по 10 концентраций 5-FU, полученных при каждом из 3 серийных 3-кратных разведений, с наивысшими конечными концентрациями, составляющими 80, 100 и 200 мкМ. В дополнение к группам для каждого лекарственного средства в отдельности, параллельно готовили группы из двух лекарственных средств, добавленных одновременно. После добавления лекарственных средств в лунки клетки инкубировали при 37°C в течение 72 часов в атмосфере с 5% CO₂. Для определения выживаемости клеток добавляли 100 мкл раствора CellTiter-Glo в каждую лунку, инкубировали клетки при комнатной температуре в течение 10 минут, а затем измеряли интенсивность хемилюминесценции в каждой лунке на планшетном ридере (ARVO). Показатели выживаемости клеток при добавлении лекарственного средства рассчитывали, как процентную долю относительно контрольной группы (100%), в соответствии со следующей формулой:

Выживаемость клеток (%)=(Интенсивность хемилюминесценции при добавлении лекарственного средства)/(Интенсивность хемилюминесценции в контрольной группе) × 100

Кроме того, значения ПФ (пораженной фракции) клеток рассчитывали путем вычитания 1/100 показателя выживаемости клеток из 1.

Концентрацию, при которой каждое лекарственное средство вызывало ингибирование клеточного роста на 50% (IC₅₀), определяли с использованием программы анализа медианного эффекта CalcuSyn 2.0 (CalcuSyn, Inc.). Затем определяли значение индекса сочетания (ИС) для каждой комбинированной концентрации лекарственных средств. Наличие или отсутствие комбинаторного эффекта двух лекарственных средств оценивали, как антагонистический, аддитивный и синергетический эффект, когда значение ИС было более 1, было равно 1 и было менее 1, соответственно (Таблица 1; Pharmacol Rev. 2006; 58 (3): 621-81, BMC Complement Altern Med. 2013; 13: 212, и Anticancer Res. 2005; 25 (3B): 1909-17).

Таблица 1

Диапазон ИС (верхний предел)	Описание
0,1	Очень сильная синергия
0,3	Сильная синергия
0,7	Синергия
0,85	Умеренная синергия
0,9	Слабая синергия
1	Почти аддитивность
1,2	Слабый антагонизм
1,45	Умеренный антагонизм
3,3	Антагонизм
10	Сильный антагонизм
>10	Очень сильный антагонизм

Сочетания концентраций соединения 1 и 5-FU, которые приводили к получению величины ПФ=0,5 (соответствующей ED₅₀), 0,75 (соответствующей ED₇₅) или 0,9 (соответствующей ED₉₀), получали на основании значений ПФ для клеток SNU-16, рассчитанных для комбинированных концентраций соединения 1 и 5-FU, и использовали для построения линейной кривой при помощи программы CalcuSyn (HULINKS Inc.) для получения ИС.

B. Результаты

Совместное использование соединения 1 и 5-FU приводило к синергетическим эффектам в случае всех сочетаний с 3 используемыми соотношениями концентраций (Фигуры 6A - 6C). В частности, синергетические эффекты такой силы, как ИС=0,3-0,4, были обнаружены в диапазоне концентраций 10-200 нМ добавленного соединения 1. В Таблице 2, ниже, приведены значения каждого индекса сочетания, полученного при соотношении 5-FU:соединение 1, составляющем 1250:1, 1000:1 или 500:1, в каждый момент времени, когда ингибирующий клеточный рост эффект совместного использования препаратов составлял 50%, 75% и 90% (ED₅₀, ED₇₅ и ED₉₀).

На основании результатов, описанных выше, был сделан вывод, что предпочтительный эффект совместного использования достигается, когда соединение 1 или его фармацевтически приемлемую соль используют в диапазоне от 0,0008 до 0,002 моля на моль 5-FU.

Таблица 2

Линия клеток	5-FU:Соединение 1	Величина индекса сочетания
ED50	ED75	ED90
SNU-16	1250:1	0,69	0,53	0,43
	1000:1	0,99	0,56	0,32
500:1	0,51	0,40	0,32

Пример 7: Оценка in vitro эффекта используемых в сочетании соединения 1 и 5-FU, паклитаксела, цисплатина или гемцитабина

A. Материалы и методы

Человеческие клетки рака желудка линии SNU-16 (полученные из Американской коллекции типовых культур), человеческие клетки рака молочной железы линии MFM223 (полученные из Европейской коллекции клеточных культур), человеческие клетки рака легкого линии H1581 (полученные из Американской коллекции типовых культур), DMS114 (полученные из Американской коллекции типовых культур) и LK2 (полученные из Клеточного банка научно-исследовательской базы Департамента здравоохранения), человеческие клетки рака эндометрия линии AN3CA (полученные из Американской коллекции типовых культур) и MFE280 (полученные из DS Pharma Biomedical Co., Ltd.), а также человеческие клетки рака мочевого пузыря линии RT112/84 (полученные из Европейской коллекции клеточных культур) культивировали с использованием какой-либо из сред RPMI-1640, DMEM и MEM, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки. Клетки каждой линии поддерживали при 37°C в атмосфере с 5% CO₂ и субкультивировали в соотношении от 1:5 до 1:20 1-2 пересевами в неделю. Названия используемых клеток, карциномы, являющиеся их источником, и информация о мутациях FGFR приведены ниже.

Таблица 3

Линия клеток	Источник, карцинома	Информация об изменениях гена FGFR
SNU-16	Рак желудка	Амплификация FGFR2
MFM223	Рак молочной железы	Амплификация FGFR1,2
H1581	Рак легкого	Амплификация FGFR1
DMS114	Рак легкого	Амплификация FGFR1
LK2	Рак легкого	Амплификация FGFR1
AN3CA	Рак эндометрия	FGFR2 K310R N549K
MFE280	Рак эндометрия	FGFR2 S252W
RT112/84	Рак мочевого пузыря	Избыточная экспрессия ДТ FGFR3, транслокация TACC3

Анализ выживаемости клеток

Измерения показателей выживаемости клеток проводили с использованием CellTiter-Glo. Клетки собирали обычным способом, суспендировали в вышеуказанной среде, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки, а затем высевали в 96-луночный планшет. Количество клеток, внесенных в лунку, составляло 2000 клеток/80 мкл. Клетки инкубировали при 37°C в течение 24 часов в атмосфере с 5% CO₂, а затем 10 мкл среды, содержащей соединение 1 и 5-FU, паклитаксел, цисплатин или гемцитабин, либо растворитель, добавляли в каждую лунку.

С учетом чувствительности клеток к каждому лекарственному средству,

соединение 1 использовали в четырех концентрациях, полученных при 3-кратных серийных разведениях, начиная с 10, 100 и 1000 нМ, и нулевой концентрации (ДМСО);

5-FU использовали в пяти концентрациях, полученных при 3-кратных серийных разведениях, начиная с 10 и 100 мкМ, и нулевой концентрации (ДМСО);

паклитаксел использовали в пяти концентрациях, полученных при 3-кратных серийных разведениях, начиная с 100 нМ, и нулевой концентрации (ДМСО);

цисплатин использовали в пяти концентрациях, полученных при 3-кратных серийных разведениях, начиная с 60 и 166 мкМ, и нулевой концентрации (ДМСО);

гемцитабин использовали в пяти концентрациях, полученных при 3-кратных серийных разведениях, начиная с 30, 100, 300 и 10000 нМ, и нулевой концентрации (ДМСО), и

исследовали каждое сочетание.

После добавления лекарственного средства клетки дополнительно инкубировали при 37°C в течение 72 часов в атмосфере с 5% CO₂. Для определения выживаемости клеток добавляли 100 мкл раствора CellTiter-Glo в каждую лунку, инкубировали клетки при комнатной температуре в течение 10 минут, а затем измеряли интенсивность хемилюминесценции в каждой лунке на планшетном ридере ARVO. Показатели выживаемости клеток при добавлении лекарственного средства рассчитывали, как в примере 6.

Кроме того, значения ПФ (пораженной фракции) клеток рассчитывали путем вычитания 1/100 показателя выживаемости клеток из 1.

Затем определяли значение индекса сочетания (ИС) для каждой комбинированной концентрации лекарственных средств. Наличие или отсутствие эффекта совместного использования двух лекарственных средств оценивали, как антагонистический, аддитивный и синергетический эффект, когда значение ИС было более 1, было равно 1 и было менее 1, соответственно.

Значение ИС при совместном использовании соединения 1 и каждого химиотерапевтического средства рассчитывали для 8 линий клеток, происходящих из 5 разных раковых тканей. Значения ИС для каждого варианта условий представлены на Фигуре 7. На оси абсцисс Фигуры 7 показана концентрация соединения 1 (нМ), и концентрации противоопухолевых средств указаны в подписях к чертежу.

B. Результаты

При использовании соединения 1 в сочетании с 5-FU, паклитакселом, цисплатином или гемцитабином имели место синергетические эффекты совместного использования (ИС <1) в широких диапазонах концентраций химиотерапевтических средств. Что касается концентрации самого соединения 1, синергетические эффекты совместного использования также были установлены для диапазона от 1,1 до 111 нМ. Более того, было подтверждено синергетическое усиление эффектов химиотерапевтических средств соединением 1, независимо от механизмов действия химиотерапевтических средств. Кроме того, различные раковые клетки, на которых был продемонстрирован синергетический эффект совместного использования, имели разные аберрации FGFR (амплификацию, точечную мутацию и транслокацию), это свидетельствовало о том, что синергетические эффекты проявляются независимо от видов аберраций FGFR.

Более конкретно, как показано на Фигуре 7A, при использовании соединения 1 в сочетании с 5-FU имели место синергетические эффекты (ИС <1) в диапазоне концентраций от 11 до 100 нМ добавленного соединения 1, и проявленные синергетические эффекты были сильны (ИС <0,5) в случае человеческих клеток рака легкого линии DMS114.

Как показано на Фигуре 7B, при использовании соединения 1 в сочетании с цисплатином имели место синергетические эффекты (ИС <1) в диапазоне концентраций от 3,3 до 111 нМ добавленного соединения 1.

Как показано на Фигуре 7C, при использовании соединения 1 в сочетании с паклитакселом имели место синергетические эффекты (ИС <1) в диапазоне концентраций от 10 до 33 нМ добавленного соединения 1.

Как показано на Фигуре 7D, при использовании соединения 1 в сочетании с гемцитабином имели место синергетические эффекты (ИС <1) в диапазоне концентраций от 3,7 до 111 нМ добавленного соединения 1, и проявленные синергетические эффекты были сильны (ИС <0,5) в случае человеческих клеток рака эндометрия линии AN3CA.

Пример 8: Оценка эффекта используемых в сочетании соединения 1 и ингибитора AKT

A. материалы и методы

Человеческие клетки рака эндометрия линии AN3CA культивировали в среде MEM, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки. Клетки поддерживали при 37°C в атмосфере с 5% CO₂ и субкультивировали в соотношении от 1:5 до 1:20 1-2 пересевами в неделю.

Анализ выживаемости клеток

Измерения показателей выживаемости клеток проводили с использованием CellTiter-Glo. Клетки собирали обычным способом, суспендировали в вышеуказанной среде, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки, а затем высевали в 96-луночный планшет. Количество клеток, внесенных в лунку, составляло 2000 клеток/80 мкл. Клетки инкубировали при 37°C в течение 24 часов в атмосфере с 5% CO₂, а затем 10 мкл среды, содержащей соединение 1 и ингибитор AKT 8-[4-(1-аминоциклобутил)фенил]-9-фенил-1,2,4-триазолo[3,4-f][1,6]нафтиридин-3(2H)-он (MK2206) дигидрохлорид, или растворитель, добавляли в каждую лунку. Использовали 5 концентраций соединения 1, полученных при серийном 3-кратном разведении, с наивысшей конечной концентрацией, составляющей 0,03 мкМ. Использовали 4 концентрации MK2206 дигидрохлорида, полученные при серийном 3-кратном разведении, с наивысшей концентрацией, составляющей 1 мкМ (в расчете на свободную форму). Группу добавления ДМСО использовали в качестве контроля, и отдельно соединение 1, отдельно MK2206 дигидрохлорид, а также сочетания двух лекарственных средств изучали при каждой концентрации. Клетки дополнительно инкубировали при 37°C в течение 72 часов в атмосфере с 5% CO₂ (день 3). 100 мкл раствора CellTiter-Glo добавляли в каждую лунку, и клетки инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут, с последующим измерением интенсивности хемилюминесценции на планшетном ридере ARVO. На основании полученных данных рассчитывали ингибирующий рост клеток эффект относительно результатов для группы с растворителем.

Степень ингибирования роста клеток для каждой концентрации лекарственного средства рассчитывали, как описано ниже, исходя из отношения между интенсивностью хемилюминесценции в контрольной группе в день 3 (S) и интенсивностью хемилюминесценции в контрольной группе в день добавления лекарственного средства (B), и строили график.

В случае, если интенсивность хемилюминесценции в день 3 (S) была > интенсивности хемилюминесценции в день добавления лекарственного средства (B),

Скорость роста клеток=(Интенсивность хемилюминесценции в день 3, полученная в результате воздействия лекарственного средства A в концентрации X - B)/(S - B).

В случае, если интенсивность хемилюминесценции в день 3 (S) была < интенсивности хемилюминесценции в день добавления лекарственного средства (B),

Скорость роста клеток=(Интенсивность хемилюминесценции в день 3, полученная в результате воздействия лекарственного средства A в концентрации X - B)/B

где лекарственное средство A представляет собой соединение 1 или MK2206 дигидрохлорид, и концентрация X представляет собой любую концентрацию из серии разведений.

B. Результаты

Было установлено, что в случае клеток рака эндометрия линии AN3CA, имеющих мутацию FGFR2, совместное использование соединения 1 и MK2206 дигидрохлорида приводило к усилению ингибирующего рост клеток эффекта в зависимости от концентрации каждого лекарственного средства, в сравнении с ингибирующим рост клеток эффектом каждого лекарственного средства, используемого отдельно (Фигуры 8A и 8B). В частности, было установлено, что при совместном использовании соединения 1 и MK2206 дигидрохлорида в высоких концентрациях (например, сочетания 0,01 мкМ или более высокой концентрации соединения 1 и 0,1 мкМ или более высокой концентрации MK2206) имел место эффект уничтожения клеток, количество которых сокращалось по сравнению с количеством клеток во время добавления лекарственного средства, что свидетельствовало об индукции апоптоза.

На основании результатов, описанных выше, был сделан вывод, что предпочтительный эффект совместного использования достигается, когда соединение 1 или его фармацевтически приемлемую соль используют в диапазоне от 0,001 до 1 моля на моль MK2206.

Пример 9: Оценка эффекта используемых в сочетании соединения 1 и ингибитора AKT (подтверждение индукции апоптоза)

A. Материалы и методы

Человеческие клетки рака эндометрия линии AN3CA культивировали в среде MEM, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки. Клетки поддерживали при 37°C в атмосфере с 5% CO₂ и субкультивировали в соотношении от 1:5 до 1:20 1-2 пересевами в неделю.

Анализ выживаемости клеток

Наличие или отсутствие индукции апоптоза при совместном использовании лекарственных средств анализировали с использованием CellEvent™ зеленого обнаруживающего реагента для каспазы-3/7 (Invitrogen Corp.). Клетки собирали обычным способом, суспендировали в вышеуказанной среде, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки, а затем высевали в 12-луночный планшет. Количество клеток, внесенных в лунку, составляло 1 × 10⁶ клеток/800 мкл. Клетки инкубировали при 37°C в течение 24 часов в атмосфере с 5% CO₂, а затем 100 мкл среды, содержащей соединение 1 и MK2206 дигидрохлорид, или растворитель, добавляли в каждую лунку. Конечная концентрация добавленного соединения 1 составляла 10 нМ. Концентрация MK2206 дигидрохлорида составляла 300 нМ (в расчете на свободную форму). Было проведено сравнение действия этих лекарственных средств, используемых в отдельности (ДМСО добавляли в качестве контроля) или в сочетании. После добавления лекарственного средства клетки инкубировали при 37°C в течение 24 часов в атмосфере 5% CO₂. Апоптоз обнаруживали путем добавления 1 мкл раствора CellEvent™ зеленого обнаруживающего реагента для каспазы-3/7 (Invitrogen Corp.) в каждую лунку с клетками, инкубации клеток при 37°C в течение 30 минут, с последующим получением изображений клеток и измерением флуоресцентных сигналов в светлом поле под флуоресцентным микроскопом. Наблюдаемые флуоресцентные сигналы указывали на индукцию каспазы 3/7, и амплитуда сигналов указывала на наличие или отсутствие индукции гибели клеток вследствие апоптоза.

B. Результаты

Как показано на Фигуре 9, индукцию гибели клеток можно было с трудом обнаружить в группе без добавления лекарственных средств, а также в клетках, к которым добавляли отдельно соединение 1 или MK2206 дигидрохлорид. С другой стороны, изображение с сильной флуоресцентной окраской, свидетельствующей об индукции гибели клеток, было обнаружено в группе добавления соединения 1 и MK2206 дигидрохлорида, что указывало на сильный апоптоз-индуцирующий эффект используемых в сочетании двух лекарственных средств.

Пример 10: Оценка противоопухолевого эффекта используемых в сочетании соединения 1 и ингибитора AKT или ингибитора mTOR

A. Материалы и методы

Человеческие клетки рака эндометрия линии AN3CA культивировали в среде MEM, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки. Клетки поддерживали при 37°C в атмосфере с 5% CO₂ и субкультивировали в соотношении от 1:5 до 1:20 1-2 пересевами в неделю.

Анализ выживаемости клеток

Измерения показателей выживаемости клеток проводили с использованием CellTiter-Glo. Клетки собирали обычным способом, суспендировали в вышеуказанной среде, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки, а затем высевали в 96-луночный планшет. Количество клеток, внесенных в лунку, составляло 2000 клеток/80 мкл. Клетки инкубировали при 37°C в течение 24 часов в атмосфере с 5% CO₂, а затем 10 мкл среды, содержащей соединение 1 и MK2206 дигидрохлорид или ингибитор mTOR эверолимус, либо растворитель, добавляли к клеткам в каждой лунке. Использовали 10 концентраций соединения 1, полученных при серийном 2-кратном разведении, с наивысшей конечной концентрацией, составляющей 0,16 мкМ. Использовали 10 концентраций MK2206 дигидрохлорида, полученных при серийном 2-кратном разведении, с наивысшей конечной концентрацией, составляющей 6,4 мкМ (в расчете на свободную форму). Использовали 10 концентраций эверолимуса, полученных при серийном 2-кратном разведении, с наивысшей конечной концентрацией, составляющей 0,032 мкМ. ДМСО добавляли в качестве контроля, и изучали эффект использования каждого лекарственного средства отдельно или в сочетании с соединением 1. После добавления к клеткам лекарственного средства клетки дополнительно инкубировали при 37°C в течение 72 часов в атмосфере с 5% CO₂. 100 мкл раствора CellTiter-Glo добавляли в каждую лунку, и клетки инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут, с последующим измерением хемилюминесценции на планшетном ридере ARVO. Ингибирующие рост клеток эффекты относительно группы с растворителем рассчитывали на основании полученных данных аналогично методике примеров 7 и 8.

Концентрацию, при которой каждое лекарственное средство вызывало ингибирование клеточного роста на 50% (IC₅₀), определяли с использованием программы анализа медианного эффекта CalcuSyn 2.0 (CalcuSyn, Inc.) аналогично методике примера 6. Затем определяли значение индекса сочетания (ИС) для каждой комбинированной концентрации лекарственных средств.

Сочетания концентраций соединения 1 и MK2206 дигидрохлорида или эверолимуса, которые приводили к получению величины ПФ=0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8 или 0,9, получали на основании значений ПФ, рассчитанных для комбинированных концентраций соединения 1 и MK2206 дигидрохлорида или эверолимуса в случае клеток AN3CA, и использовали для построения линейной кривой при помощи программы CalcuSyn для получения ИС.

B. Результаты

Значения ИС для сочетаний концентраций соединения 1 и MK2206 дигидрохлорида или эверолимуса, которые приводили к получению ПФ=0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8 или 0,9, были рассчитаны и приведены в Таблице 4. В таблице молярные соотношения между лекарственными средствами показаны в скобках. Было установлено, что совместное использование соединения 1 и эверолимуса или MK2206 дигидрохлорида приводит к сильным синергетическим эффектам (ИС <0,3) во всех протестированных диапазонах концентраций лекарственных средств (Фигуры 10A и 10B и Таблица 4).

На основании результатов, описанных выше, был сделан вывод, что предпочтительный эффект совместного использования достигается, когда соединение 1 или его фармацевтически приемлемую соль используют в количестве 5 молей на моль эверолимуса.

Также был сделан вывод, что предпочтительный эффект совместного использования достигается, когда соединение 1 или его фармацевтически приемлемую соль используют в количестве 0,025 моля на моль MK2206.

Таблица 4

Лекарственное средство		Эверолимус:Соединение 1 (1:5)
ПФ	0,4	0,270
	0,5	0,264
	0,6	0,260
	0,7	0,257
	0,8	0,255
	0,9	0,258
Лекарственное средство		MK2206:Соединение 1 (1:0,025)
ПФ	0,4	0,256
	0,5	0,195
	0,6	0,149
	0,7	0,111
	0,8	0,078
	0,9	0,046

Пример 11: Влияние используемых в сочетании соединения 1 и ингибитора AKT или ингибитора mTOR на путь MAPK/ERK и путь PI3K/AKT

A. Материалы и методы

Человеческие клетки рака эндометрия линии AN3CA выращивали в среде MEM, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки. Клетки поддерживали при 37°C в атмосфере с 5% CO₂ и субкультивировали в соотношении от 1:5 до 1:20 1-2 пересевами в неделю.

Вестерн-блоттинг

Уровни внутриклеточного фосфорилирования ERK, AKT, mTOR и S6 определяли методом вестерн-блоттинга. Клетки собирали обычным способом, суспендировали в вышеуказанной среде, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки, а затем высевали в 12-луночный планшет. Количество клеток, внесенных в лунку, составляло 1 × 10⁶ клеток/800 мкл. Клетки инкубировали при 37°C в течение 24 часов в атмосфере с 5% CO₂, а затем 100 мкл среды, содержащей соединение 1 и MK2206 дигидрохлорид или эверолимус, либо растворитель, добавляли в каждую лунку. Соединение 1 добавляли к клеткам в конечных концентрациях 10 и 100 нМ. Аналогично, MK2206 дигидрохлорид добавляли в конечной концентрации 5 мкМ (в расчете на свободную форму) и эверолимус добавляли в конечной концентрации 3 нМ. Изучали эффекты каждого лекарственного средства в отдельности и каждого сочетания. ДМСО добавляли в качестве контроля в конечной концентрации 0,2%.

Клетки инкубировали при 37°C в течение 2 часов в атмосфере с 5% CO₂. Затем получали клеточные лизаты в RIPA буфере [состав: 50 мМ Tris-HCl (pH 8,0), 150 мМ NaCl, 5 мМ ЭДТА, 1% (по массе) Nonidet P-40, 0,1% (по массе) дезоксихолата натрия и 0,1% (по массе) SDS]. Количества фосфорилированного AKT, фосфорилированного ERK, фосфорилированного mTOR, фосфорилированного S6 и GAPDH определяли обычным методом вестерн-блоттинга.

B. Результаты

Как показано на Фигуре 11, соединение 1 в обеих концентрациях 10 и 100 нМ сильно ингибировало фосфорилирование ERK в клетках AN3CA, обработанных соединением 1 в течение 24 часов. С другой стороны, обработка только MK2206 дигидрохлоридом или эверолимусом приводила к ингибированию фосфорилирования AKT или фосфорилирования mTOR, соответственно. Совместное использование соединения 1 и MK2206 дигидрохлорида приводило к ингибированию как фосфорилирования ERK, так и фосфорилирования AKT. В частности, сильное ингибирование фосфорилирования белка S6 имело место только при использовании сочетания лекарственных средств. Что касается совместного использования соединения 1 и эверолимуса, то совокупное ингибирование фосфорилирования ERK и фосфорилирования белка S6 наблюдали только при совместном использовании обоих лекарственных средств.

На основании результатов, описанных выше, был сделан вывод, что предпочтительный эффект совместного использования достигается, когда соединение 1 или его фармацевтически приемлемую соль используют в диапазоне от 0,002 до 0,02 моля на моль эверолимуса.

Также был сделан вывод, что предпочтительный эффект совместного использования достигается, когда соединение 1 или его фармацевтически приемлемую соль используют в диапазоне от 0,002 до 0,02 моля на моль MK2206.

Пример 12: Активация пути FGF/FGFR, ответственного за устойчивость к ингибитору EGFR, и эффект добавления соединения 1

A. Материалы и методы

Человеческие клетки рака легкого линий HCC4006 (полученные из Американской коллекции типовых культур), NCI-H1650 (полученные из Американской коллекции типовых культур) и NCI-H322 (полученные из DS Pharma Biomedical Co., Ltd.) культивировали в среде RPMI, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки. Клетки каждой линии поддерживали при 37°C в атмосфере с 5% CO₂ и субкультивировали в соотношении от 1:5 до 1:20 1-2 пересевами в неделю.

Анализ выживаемости клеток

Измерения показателей выживаемости клеток проводили с использованием CellTiter-Glo. Клетки собирали обычным способом, суспендировали в вышеуказанной среде, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки, и высевали в 96-луночный планшет. Количество клеток, внесенных в лунку, составляло 2000 клеток/70 мкл. Клетки инкубировали при 37°C в течение 24 часов в атмосфере с 5% CO₂, а затем 10 мкл среды, содержащей соединение 1, ингибитор EGFR гефитиниб, растворитель (ДМСО) или 2 лекарственных средства: соединение 1 и гефитиниб, добавляли в каждую лунку. Для изучения эффектов на активацию пути FGF/FGFR в клетках лиганд FGF2 или FGF7 добавляли к клеткам и сравнивали с контролем без добавления. Использовали 10 концентраций соединения 1 и гефитиниба, полученных при серийных 3-кратных разведениях, с наивысшими конечными концентрациями, составляющими 100 нМ и 10 мкМ, соответственно. ДМСО добавляли в контрольную лунку, и 10 нг/мл FGF2 или 100 нг/мл FGF7 добавляли к среде.

Клетки инкубировали при 37°C в течение 72 часов в атмосфере с 5% CO₂. Затем 100 мкл раствора CellTiter-Glo добавляли в каждую лунку, и клетки инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут, с последующим измерением интенсивности хемилюминесценции на планшетном ридере (ARVO). На основании полученных данных рассчитывали ингибирующие рост клеток эффекты относительно группы с растворителем.

B. Результаты

Клетки линий HCC4006 и NCI-H1650 рака легкого имеют дефицит экзона 9 EGFR, чувствительного к ингибитору EGFR (Фигура 12A). Добавление лиганда FGFR FGF7 ослабляет лекарственный эффект гефитиниба (Фигуры 12B и 12C). Когда активация FGFR при добавлении FGF была ингибирована за счет добавления к нему соединения 1, эффект гефитиниба восстанавливался до такого же уровня, как в отсутствие лиганда, или дополнительно усиливался. Аналогичные эффекты соединения 1 были обнаружены в экспрессирующих FGFR клетках линии NCI-H322, не имеющих мутацию EGFR (Фигура 12D). Эти результаты продемонстрировали, что совместное использование соединения 1 и ингибитора EGFR является эффективным в лечении рака легкого, при котором сигналы FGF/FGFR являются причиной устойчивости или низкой чувствительности к ингибитору EGFR.

На основании результатов, описанных выше, был сделан вывод, что предпочтительный эффект совместного использования достигается, когда соединение 1 или его фармацевтически приемлемую соль используют в диапазоне от 0,01 до 1 моля на моль гефитиниба.

ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬ

Настоящее изобретение может способствовать значительному усилению противоопухолевого эффекта в сравнении с ситуацией, когда общеизвестные противоопухолевые средства вводят отдельно, и эффект также может иметь место в случае опухолей, имеющих устойчивость к лекарственному средству; таким образом, возможности химиотерапии при лечении злокачественных опухолей могут быть значительно расширены.

Все публикации, патенты и патентные заявки, цитированные в настоящем документе, включены в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.

1. Применение (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она или его фармацевтически приемлемой соли для лечения пациента с раком, получающего одно или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемой соли(ей), выбранных из 5-фторурацила, тегафур/гимерацил/отерацила калия, гемцитабина, паклитаксела, цисплатина, эверолимуса, MK2206 и транс-3-амино-1-метил-3-(4-(3-фенил-5H-имидазо[1,2-c]пиридо[3,4-e][1,3]оксазин-2-ил)фенил)циклобутанола, гефитиниба.

2. Применение по п. 1, где (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она или его фармацевтически приемлемую соль и дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно.

3. Применение по п. 1, где (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она или его фармацевтически приемлемую соль и дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль вводят одним и тем же путем введения или вводят разными путями введения.

4. Применение по п. 1, где (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она или его фармацевтически приемлемая соль применяется в количестве от 0,0001 до 1 молей на моль 5-фторурацила.

5. Применение по п. 1, где (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она или его фармацевтически приемлемая соль применяется в количестве от 0,01 до 10 молей на моль тегафура.

6. Применение по п. 1, где (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она или его фармацевтически приемлемая соль применяется в количестве от 0,001 до 1 молей на моль гемцитабина.

7. Применение по п. 1, где (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она или его фармацевтически приемлемая соль применяется в количестве от 0,01 до 10 молей на моль паклитаксела.

8. Применение по п. 1, где (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она или его фармацевтически приемлемая соль применяется в количестве от 0,01 до 50 молей на моль цисплатина.

9. Применение по п. 1, где (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она или его фармацевтически приемлемая соль применяется в количестве от 1 до 1000 молей на моль эверолимуса.

10. Применение по п. 1, где (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она или его фармацевтически приемлемая соль применяется в количестве от 1 до 1000 молей на моль МК2206.

11. Применение по п. 1, где (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она или его фармацевтически приемлемая соль применяется в количестве от 1 до 1000 молей на моль транс-3-амино-1-метил-3-(4-(3-фенил-5H-имидазо[1,2-c]пиридо[3,4-e][1,3]оксазин-2-ил)фенил)циклобутанола.

12. Применение по п. 1, где (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она или его фармацевтически приемлемая соль применяется в количестве от 1 до 1000 молей на моль гефитиниба.

13. Применение по п. 1, где опухоль выбирают из группы, состоящей из рака легкого, рака пищевода, рака желудка, рака двенадцатиперстной кишки, рака печени, печеночно-клеточного рака, рака желчных протоков, рака поджелудочной железы, колоректального рака, рака молочной железы, рака тела матки, рака яичника, рака почки, рака мочевого пузыря, рака предстательной железы, опухоли яичка, рака щитовидной железы, опухоли костей или мягких тканей, лейкоза, злокачественной лимфомы, множественной миеломы, рака головы и шеи, опухоли головного мозга и рака кожи.

14. Способ лечения опухоли, включающий введение (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она или его фармацевтически приемлемой соли и одного или более дополнительных соединений, обладающих противоопухолевым эффектом, или их фармацевтически приемлемой соли(ей), выбранных из 5-фторурацила, тегафур/гимерацил/отерацила калия, гемцитабина, паклитаксела, цисплатина, эверолимуса, MK2206 и транс-3-амино-1-метил-3-(4-(3-фенил-5H-имидазо[1,2-c]пиридо[3,4-e][1,3]оксазин-2-ил)фенил)циклобутанола, гефитиниба, пациенту, который нуждается в этом.

15. Способ по п. 14, при этом (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он или его фармацевтически приемлемую соль,и дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль вводят одновременно, раздельно или последовательно.

16. Способ по п. 14, при этом (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он или его фармацевтически приемлемую соль и дополнительное соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемую соль вводят одним и тем же путем введения или вводят разными путями введения.

17. Способ по п. 14, где (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве от 0,0001 до 1 моля на моль 5-фторурацила.

18. Способ по п. 14, где (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве от 0,01 до 10 молей на моль тегафура.

19. Способ по п. 14, где (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве от 0,001 до 1 молей на моль гемцитабина.

20. Способ по п. 14, где (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве от 0,01 до 10 молей на моль паклитаксела.

21. Способ по п. 14, при этом (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве от 0,01 до 50 молей на моль цисплатина.

22. Способ по п. 14, при этом (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве от 1 до 1000 молей на моль эверолимуса.

23. Способ по п. 14, при этом (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве от 1 до 1000 молей на моль МК2206.

24. Способ по п. 14, при этом (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве от 1 до 1000 молей на моль транс-3-амино-1-метил-3-(4-(3-фенил-5H-имидазо[1,2-c]пиридо[3,4-e][1,3]оксазин-2-ил)фенил)циклобутанола.

25. Способ по п. 14, при этом (S)-1-(3-(4-амино-3-((3,5-диметоксифенил)этинил)-1H-пиразолo[3,4-d]пиримидин-1-ил)пирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-он или его фармацевтически приемлемую соль вводят в количестве от 1 до 1000 молей на моль гефитиниба.

26. Способ по п. 14, отличающийся тем, что опухоль выбирают из группы, состоящей из рака легкого, рака пищевода, рака желудка, рака двенадцатиперстной кишки, рака печени, печеночно-клеточного рака, рака желчных протоков, рака поджелудочной железы, колоректального рака, рака молочной железы, рака тела матки, рака яичника, рака почки, рака мочевого пузыря, рака предстательной железы, опухоли яичка, рака щитовидной железы, опухоли костей или мягких тканей, лейкоза, злокачественной лимфомы, множественной миеломы, рака головы и шеи, опухоли головного мозга и рака кожи.