Стимулятор процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению клатратного комплекса 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином. Применение клатратного комплекса 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином, в качестве стимулятора процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани при сокращении численности клеточной популяции быстро обновляющихся и резервных стволовых сперматогоний, при соотношении 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен к β-циклодекстрину от 1:1 до 1:10, в мас.%. Вышеописанный способ позволяет эффективно стимулировать процессы репаративной регенерации тестикулярной ткани при сокращении численности клеточной популяции быстро обновляющихся и резервных стволовых сперматогоний. 4 табл., 9 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к андрологии и может быть использовано в фармакологии с целью усиления процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани при сокращении численности клеточной популяции быстро обновляющихся и резервных (стволовых) сперматогоний при нарушениях фертильности.
Изобретение также относится к ветеринарии и может быть использовано для лечения млекопитающих с нарушенной фертильностью.
В качестве стимулятора процесса репаративной регенерации и приводящего к увеличению источников пролиферативного пула сперматогенеза – резервных сперматогоний при тестикулярной недостаточности используется клатратный комплекс β-циклодекстрина с 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантеном. Данное изобретение позволяет преодолеть нарушения фертильности за счет повышения численности стволовых и полустволовых сперматогониев, увеличения пула тестостерон-синтезирующих клеток (клеток Лейдига), а также клеток Сертоли в тестикулах, играющих важную роль в гормональной регуляции сперматогенеза.
По некоторым данным, в структуре бесплодия мужской фактор составляет до 50%, женский 45–50%. Изучение показателей спермограммы за последние 10 лет свидетельствует о снижении числа сперматозоидов в эякуляте и ухудшении показателей спермы [Машина М.А., Шарапова Е.И., Кузьмин В.Н. Проблемы изменения репродуктивного поведения и реализации репродуктивной функции. Журнал Лечащий врач, 2014, № 12]. Бесплодие представляет серьезную медицинскую и социально-экономическую проблему.
Мужское бесплодие возникает в результате многочисленных патологических процессов, приводящих к патозооспермии, таких как врожденные аномалии развития половой системы, эндокринные нарушения, воспалительные заболевания дополнительных половых желез, токсические влияния, в том числе ятрогенные к числу которых относится целый ряд лекарственных препаратов, в частности, противоопухолевых [Пшеничникова Т.Я. Бесплодие в браке. – М:Медицина, 1991. – 320 с.; Тикстинский О.Л., Михайличенко В.В. Андрология. – СПб, 1999. – 380 с.].
Необратимые изменения в извитом семенном канальце, приводящие к патозооспермии, могут быть связаны с истощением пролиферативного пула сперматогенеза, источником которого является популяция сперматогоний, а именно, стволовых (резервных) клеток [Липатова Н.А. Лабораторные критерии фертильности эякулята // Клиническая лабораторная диагностика. – 1998. – Т.5. – С. 11-15; Сухоруков В.С., Шамшад Д.С. Определение степени зрелости сперматогенного пласта крысы при его регенерации и в процессе созревания интактного семенника// Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. – 1989. – Т.97, №9. – 89 с.]. Это клетки-родоначальники, делятся только при повреждении и являются основой пролиферативного пула сперматогенеза. Для образования стволовых сперматогоний необходимо наличие ниш, которые формируют клетки Сертоли (клетки микроокружения) [Биология стволовых клеток и клеточные технологии. / Под ред. М.А. Пальцева. – М.: Медицина, Шико, 2009. – Т.2. – 456 с]. Последние утрачивают способность к делению в зрелых извитых семенных канальцах [Курносова Т.Р., Вербицкий М.Ш., Сухих Г.Т., Молнар Е.М. Современные представления о структурных основах репаративной регенерации семенника млекопитающих животных и человека. // Бюлл. эксперим. биол. и мед. – 1994. - №4. – С. 396-399]. Регенерация семенных канальцев в целом возможна только одним путем – путем формирования семенных канальцев незрелого типа из регенерационной зоны, которая содержит клетки Сертоли и первичные половые детерминанты, дающие начало новым сперматогониям. Недостаточность регенераторного потенциала семенника приводит к атрофии ткани в целом и служит причиной бесплодия.
Поиск путей преодоления мужского бесплодия, обусловленного повреждением источников пролиферативного пула сперматогенеза (стволовых сперматогоний), является в настоящее время одной из актуальных проблем репродуктивной медицины. С целью защиты сперматогоний от цитостатического повреждения используется криоконсервация семенной жидкости [Auger J., Kuntsmann J., Czuglik F. et al. Conservation du sperme avant treatment anticancerenx. Une mesure efficce pour preserverles chances de conception future // Contacept.-fertil.-sex. – 1993. – Vol.21, №10. – P. 749-752]. Однако, в силу ограниченной доступности для большинства пациентов, криоконсервация не нашла широкого применения. В настоящее время начаты исследования по созданию искусственных мужских половых клеток. Современные репродуктивные технологии, предлагающие такие способы восстановления сперматогенеза, как трансплантация сперматогониальных стволовых клеток, трансплантация клеток Сертоли только начинают развиваться.
В настоящее время зарегистрированные средства фармакотерапии, обладающие свойствами воздействовать на региональные стволовые клетки и стимулировать в них процессы репарации, отсутствуют. В мировой литературе имеются единичные работы. В частности, отечественными авторами было установлено, что стимуляция репаративной регенерации семенников может осуществляться с помощью гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ) [Дыгай А.М., Жданов В.В. Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор. Фармакологические аспекты. – М.: Издательство РАМН, 2010. – 138 с; Боровская Т.Г, Дыгай А.М., Жданов В.В., Румпель О.А., Пахомова А.В., Перова А.В., Зюзьков Г.Н., Гольдберг В.Е. – Пат. РФ № 2406527. Способ коррекции нарушений сперматогенеза, вызванных цитостатическим воздействием. – 2010; Borovskaya T.G., Goldberg V.E., Poluektova M.E. et al. The remote consequences of cytostatic preparations of different groups on spermatogenesis and ways of their decrease // Abstracts of the 5th Congress of the World Association of Reproductive Medicine. – Moscow, 2010. – P. 592]. Рекомбинатный Г-КСФ – препарат Нейпоген является стимулятором лейкопоэза и производится фирмой «F. Hoffmann-La Roche», Швейцария. Существенными недостатками этого лекарственного средства являются:
- наличие побочных эффектов (тошнота/рвота, боль в мышцах и костях, дизурия, алопеция, диарея, кожная сыпь, воспаление слизистых оболочек, лихорадка, утомляемость, головные боли, кашель, анорексия, лейкоцитоз и др.);
- сложный и дорогой метод его получения (негликозилированный протеин, состоящий из 175 аминокислот, вырабатываемый лабораторным штаммом бактерии Escherichia coli, в которую методами генной инженерии введен ген гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека);
- неудобный и трудоемкий способ приготовления, применения препарата и требует особых условий хранения (выпускается в виде иньекционного раствора для внутривенного и подкожного введения; применение осуществляется под пристальным наблюдением врача; храниться при температуре 2–8 °C).
В результате проведенных нами экспериментальных исследований обнаружено неизвестное до сих пор свойство фармацевтической композиции 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином - стимулировать процессы репаративной регенерации, приводящего к увеличению источников пролиферативного пула сперматогенеза – резервных сперматогоний при тестикулярной недостаточности.
Свойство фармацевтической композиции 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином усиливать процессы репаративной регенерации тестикулярной ткани при сокращении численности клеточной популяции быстро обновляющихся и резервных (стволовых) сперматогоний при нарушениях фертильности является для специалиста фактом неочевидным и не вытекает из уровня техники в данной области, не обнаружено в патентной и научно-медицинской литературе. Выше указанное свойство фармацевтической композиции 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином может быть использовано в практическом здравоохранении и ветеринарии для повышения качества лечения. Таким образом, предлагаемое техническое решение соответствует критериям патентоспособности изобретения, а именно «новизна», «изобретательский уровень» и «промышленная применимость».
Технической проблемой, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является расширение арсенала средств, предназначенных для стимуляции процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани при сокращении численности клеточной популяции быстро обновляющихся и резервных (стволовых) сперматогоний.
Техническим результатом настоящего изобретения является изыскание нового средства, которое одновременно обладает следующими характеристиками:
- устраняет нарушения фертильности за счет повышения численности стволовых и полустволовых сперматогониев, увеличения пула тестостерон-синтезирующих клеток (клеток Лейдига), а также клеток Сертоли в тестикулах, играющих важную роль в гормональной регуляции сперматогенеза;
- удобный способ применения (прием внутрь), не требует особых условий хранения (при комнатной температуре) сохраняет стабильность при хранении как минимум 1,5 лет и, следовательно, обладает улучшенными физико-химическими свойствами.
Для решения технической проблемы и достижения технического результата предлагается применение 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена в качестве стимулятора процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани при сокращении численности клеточной популяции быстро обновляющихся и резервных (стволовых) сперматогоний.
Предлагается фармацевтическая композиция, усиливающая процессы репаративной регенерации и приводящего к увеличению источников пролиферативного пула сперматогенеза (резервных сперматогоний) при тестикулярной недостаточности, которая содержит в качестве активного компонента 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен в эффективном количестве.
Активный компонент фармацевтической композиции 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен может быть представлен в виде клатратного комплекса с β-циклодекстрином или может содержать дополнительно β-циклодекстрин в соотношениях от 1:1 – до 1:10.
Предлагается лекарственный препарат для усиления процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани при сокращении численности клеточной популяции быстро обновляющихся и резервных (стволовых) сперматогоний при нарушениях фертильности, который в качестве активного компонента содержит указанную фармацевтическую композицию.
Указанный лекарственный препарат может применяться в форме таблеток, с содержанием 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена от 2 до 10%, а остальное - один или более наполнитель(и). Таблетки сформированы посредством прессовки или формовки.
Лекарственный препарат может также применятся в форме желатиновых капсул, при следующем соотношении компонентов:
- 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен от 2 до 10 %;
- наполнитель(и) или носитель(и) - остальное.
Лекарственный препарат может быть выполнен в виде растворов, эмульсий, суспензий и др., с содержанием активного компонента от 0,025 до 1%; остальное - наполнитель(и) или носитель(и).
Предлагаемое изобретение можно использовать в качестве средства для стимуляции процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани при сокращении численности клеточной популяции быстро обновляющихся и резервных (стволовых) сперматогоний.
Сущность изобретения поясняется примерами конкретного выполнения, в которых:
«Комплекс» – клатратный комплекс β-циклодекстрина с 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантеном в соотношении 10:1, полученный стандартным способом /патент RU2451680, C07D 345/00, опубл. 27.05.2012г./.
Усиления процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани при сокращении численности клеточной популяции быстро обновляющихся и резервных (стволовых) сперматогоний у самцов крыс популяции Вистар под влиянием заявляемых средств при цитотоксическом воздействии продемонстрировано в двух сериях экспериментов. В настоящем изобретении, если не указано иное, концентрации представлены в мас.%.
ПРИМЕР. Клатратный комплекс 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином («Комплекс») как средство, способное стимулировать регенераторные способности тестикулярной ткани при сокращении численности клеточной популяции быстро обновляющихся и резервных (стволовых) сперматогоний оценивалось в экспериментах на крысах популяции Вистар при цитотоксическом воздействии «Паклитакселом».
Эксперименты проведены на 50 крысах-самцах Вистар, возраст 3 месяца. Животные содержались в стандартных пластиковых клетках (не более 10 особей в каждой) с мелкой древесной стружкой, на стандартном рационе – гранулированный корм ПК 120-3 (согласно приказу № 1179 МЗ СССР от 10.10.83).
До проведения эксперимента животные проходили карантин в виварии в течение 5 дней. Далее определялась масса тела животных и их распределение по группам. «Паклитаксел» вводился 30-ти крысам-самцам опытных групп однократно внутривенно в максимально допустимой дозе (МПД) – 5,0 мг/кг массы тела. Доза «Паклитаксела» выбрана с учетом опыта клинического применения и была рассчитана для животных методом графического пробит-анализа при наблюдении за ними в течение 30 суток.
Клатратный комплекс 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином вводился внутрижелудочно в течение 10-ти дней соответственно через 1 месяц после введения «Паклитаксела» в следующих дозах: 0,3 и 1,0 мг/кг массы тела. Препарат сравнения «Нейпоген» вводился подкожно в течение 5-ти дней в дозе 100 мкг/кг через 1 месяц после введения «Паклитаксела». Животные контрольной группы получали «Паклитаксел» и дистиллированную воду в эквивалентном объеме. Через 2 и 3 месяца после введения «Паклитаксела» определяли массу тела крыс, затем их умерщвляли дислокацией шейных позвонков (по 5 животных на каждый срок эксперимента), выделяли семенник и эпидидимис. Далее определяли общее количество половых клеток, приходящихся на эпидидимис, процент их подвижных форм [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. / Под ред. Хабриева Р.У. - М.: Медицина, 2005]. При подсчете общего количества сперматозоидов (ОКС), приходящихся на придаток, использовали гомогенизированную клеточную взвесь эпидидимиса. Семенники фиксировали для проведения гистологического анализа в жидкости Карнуа. Затем были приготовлены парафиновые срезы. Депарафинированные срезы толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилин-эозином. На срезе семенника определяли: численность клеточной популяции сперматогоний, количество клеток Сертоли и Лейдига [Саноцкий И.В., Фоменко В.И. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм.- М.:Наука, 1979. -210с]. Эндокринную активность семенника вычисляли как соотношение количества клеток Лейдига к клеткам Сертоли. На основании подсчета клеток Сертоли вычисляли степень зрелости сперматогенного пласта [Сухоруков В.С., Шамшад Д.С. Определение степени зрелости сперматогенного пласта крысы при его регенерации и в процессе созревания интактного семенника// Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. – 1989. – Т.97, №9. – 89 с].
При выборе сроков исследований учитывали длительность сперматогенеза у крыс, которая составляет 3 месяца. Срок 2 месяца после введения препарата соответствует, по времени проявления, воздействию на активно обновляющиеся сперматогонии, 3 месяца – на стволовые (резервные сперматогонии, которые делятся при повреждении).
«Паклитаксел» вводился внутривенно, «Нейпоген» – подкожно, что соответствует способам их применения в клинике. «Комплекс» вводился внутрижелудочно, что соответствует предполагаемому клиническому применению - приему внутрь.
Доза и режим введения препарата «Нейпоген» основаны на данных, полученных в исследованиях по стимулирующему действию препарата на регенераторные процессы в семенниках [Боровская Т.Г, Дыгай А.М., Жданов В.В., Румпель О.А., Пахомова А.В., Перова А.В., Зюзьков Г.Н., Гольдберг В.Е. – Патент на изобретение РФ № 2406527. Способ коррекции нарушений сперматогенеза, вызванных цитостатическим воздействием. – 2010].
Крысы были рандомизированы на группы с учетом их массы тела:
1. Фон. Интактные животные (n=10);
2. Контроль. Крысам (n=10) вводился «Паклитаксел» однократно внутривенно в максимально переносимой дозе (МПД) – 5,0 мг/кг массы тела и дистиллированная вода;
3. Клатратный комплекс β-циклодекстрина с 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантеном («Комплекс»). Крысам (n=10) вводился внутрижелудочно испытуемый препарат в дозе 0,3 мг/кг в течение 10-ти дней, начиная через 1 месяца после введения «Паклитаксела»;
4. Клатратный комплекс β-циклодекстрина с 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантеном («Комплекс»). Крысам (n=10) вводился внутрижелудочно испытуемый препарат в дозе 1,0 мг/кг в течение 10-ти дней, начиная через 1 месяца после введения «Паклитаксела»;
5. Препарат сравнения. Крысам (n=10) вводился подкожно «Нейпоген» (Г-КСФ) в дозе 100 мкг/кг массы тела 1 раз в день в течение 5-ти дней через 1 месяц после введения «Паклитаксела».
Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистически с помощью непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни [Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. – М.: Медицина, 1978. – С.72-75].
Первая серия эксперимента
Оценка состояния репродуктивной системы крыс-самцов через 2 месяца после сочетанного введения «Паклитаксела» и препарата «Комплекс»
Результаты оценки массы тела крыс, общего количества половых клеток, приходящихся на эпидидимис, процента подвижных форм зрелых спермиев через 2 месяца после введения «Паклитаксела» и «Комплекса» представлены в табл. 1. Установлено, что масса тела животных в начале эксперимента и через 2 месяца после введения цитостатического препарата во всех сравниваемых группах не отличалась (Р>0,05). Полученные данные свидетельствуют о том, что в начале эксперимента была осуществлена качественная рандомизация животных по массе тела, а также о том, что в течение 2-х месяцев эксперимента, все оказываемые фармакологические воздействия не приводили к изменению массы тела животных.
Общее количество половых клеток (приходящихся на эпидидимис), процент их подвижных форм у интактных животных находились в пределах возрастной нормы (возраст крыс 5-6 месяца) [Боровская Т.Г., Гольдберг В.Е., Щемерова Ю.А., Полуэктова М.Е., Тимина Е.А., Перова А.В. Влияние ингибиторов топоизомеразной активности на морфологические и функциональные показатели сперматогенеза крыс // Бюлл. эксперим. биол. и мед. – 2005. –Прил.№1. – С. 28-30]. Через 2 месяца после введения крысам-самцам «Паклитаксела», отмечалось статистически значимое снижение общего количества клеток, приходящихся на эпидидимис, а также процента их подвижных форм.
Таблица 1 - Морфологические и функциональные показатели зрелых спермиев и семенников крыс через 2 месяца после введения препарата «Паклитаксел»
| Показатели | Фон | Контроль | «Комплекс» 0,3 мг/кг | «Комплекс» 1,0 мг/кг | Г-КСФ |
| Масса тела животного в начале эксперимента (г) |
352,6±19,8 | 352,4±2,58 | 353,6±18,78 | 353,4±5,55 | 354,4±23,06 |
| Масса тела животного в конце эксперимента (г) |
445,2±10,7 | 456,6±9,87 | 464,8±23,64 | 445,4±9,33 | 457,6±40,24 |
| Количество подвижных форм сперматозоидов (%) |
84,8±1,69 | 63,7±1,36 # | 75,8±4,82* | 69,2±3,60 # | 81,7±3,30 * |
| Общее количество сперматозоидов (абс.ед.) |
55,0±1,82 | 43,80±2,22 # | 51,6±2,87 * | 52,4±2,42 * | 76,8±6,16 #* |
Примечание: здесь и далее
# - статистическая значимость различий по сравнению с фоном
* - статистическая значимость различий по сравнению с контролем («Паклитакселом»).
Снижение общего количества половых клеток и их подвижности, наблюдаемые в эти сроки исследования в группе крыс, получивших «Паклитаксел», свидетельствует (с учетом длительности сперматогенеза у крыс) о токсическом действии препарата на полустволовые сперматогонии. Данные литературы подтверждают тот факт, что сперматогонии являются мишенью действия «Паклитаксела» [Сухачева Т.В., Богуш Т.А., Коломиец О.Л. Повреждающее действие таксола на сперматогенез мыши. // Бюлл. эксперим. биол. и мед.- 2001.- Т.132, №11. - С. 554-560].
ОКС, в группе крыс, получавших «Комплекс» в обеих исследуемых дозах (0,3 и 1,0 мг/кг) через 1 месяц после введения «Паклитаксела», статистически значимо возрастало (на 18-19,6 % соответственно) по сравнению с контролем («Паклитаксел»), и достигало фоновых значений. Введение препарата сравнения (Г-КСФ) также приводило к возрастанию (на 75 %) этого показателя по сравнению с контролем. При этом ОКС превышало фоновые значения.
Процент подвижных форм в группе крыс, получавших «Комплекс» в дозе 0,3 мг/кг через 1 месяц после введения «Паклитаксела», возрастал по сравнению с контролем («Паклитаксел») и не отличался от фона. При введении препарата «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг значение этого показателя оказалось ниже фона. Введение препарата сравнения Г-КСФ приводило к достоверному возрастанию процента подвижных форм по сравнению с контролем. Этот показатель достигал уровня фоновых значений.
Таким образом, через 2 месяца после введения «Паклитаксела» выявляется тестикулярная недостаточность, признаками которой являются олигоспермия и астеноспермия. Судя по срокам проявления, она обусловлена токсическим действием на делящиеся сперматогонии (полустволовые клетки). Введение препарата «Комплекс» оказывало положительное влияние на состояние сперматогенеза крыс, получивших «Паклитаксел», о чем свидетельствует увеличение продуктивности сперматогенеза (возрастание ОКС в обеих дозах, увеличение доли подвижных форм – «Комплекс», доза 0,3 мг/кг).
Установлено (табл. 2), что через 2 месяца после введения «Паклитаксела» численность клеточной популяции сперматогоний оказалась сниженной (составила 69,7% от фоновых значений). При введении препарата «Комплекс» в дозе 0,3 мг/кг через 1 месяц после введения «Паклитаксела» количество сперматогоний так же было статистически значимо снижено, по сравнению с фоном и не отличалось от значений контроля. У крыс, получавших «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг, этот показатель оказался статистически значимо выше (на 17%) по сравнению с контролем, хотя и не достигал значений интактных животных. Сходные данные были получены при введении препарата сравнения.
Определение количества тестостерон продуцирующих клеток (клеток Лейдига) показало, что во всех экспериментальных группах оно оказалось сходным с таковым у интактных животных (табл. 2).
При подсчете количества клеток микроокружения (клеток Сертоли) выявилось их статистически значимое снижение в группе крыс, получавших «Паклитаксел». У животных, получавших препарат «Комплекс» в обеих используемых дозах, этот показатель возрастал по сравнению с контролем. Статистически значимое возрастание количества клеток Сертоли по сравнению с контролем выявилось и при введении препарата сравнения. Этот показатель оказался выше фоновых значений.
При изучении эндокринной активности семенника, который высчитывается по отношению количества клеток Лейдига к клеткам Сертоли, установлено, что она была сходной почти во всех исследуемых группах животных, за исключением крыс, получавших Г-КСФ через 1 месяц после введения «Паклитаксела». Животные этой группы характеризовались пониженной эндокринной активностью, как по сравнению с контролем, так и фоном. Последнее обусловлено, очевидно, тем, что на фоне введения Г-КСФ существенно возрастало количества клеток Сертоли.
Таблица 2 - Морфологические и функциональные показатели семенников крыс через 2 месяца после введения «Паклитаксела»
| Показатели | Фон | Контроль | «Комплекс» 0,3 мг/кг | «Комплекс» 1,0 мг/кг | Г-КСФ |
| Количество сперматогоний (абс.ед.) | 18,03±0,32 | 12,57±0,46 # | 13,49±0,51 # | 14,70±0,36 # * | 16,41±0,10 #* |
| Количество клеток Лейдига (абс.ед.) | 15,75±0,36 | 15,65±1,24 | 15,92±0,62 | 15,84±0,68 | 15,12±0,58 |
| Количество клеток Сертоли (абс.ед.) | 2,75±0,02 | 2,58±0,06 # | 2,94±0,07 * | 2,82±0,08 * | 4,89±0,18 #* |
| Эндокринная активность (усл.ед.) | 5,73±0,12 | 6,10±0,56 | 5,42±0,22 | 5,64±0,32 | 3,11±0,19 #* |
| Степень зрелости сперматогенного пласта | 6,07±0,00 | 5,49±0,01 # | 5,42±0,01 # * | 5,44±0,01 # * | 5,07±0,03 #* |
При определении степени зрелости сперматогенного пласта, являющейся основным показателем, характеризующим степень выраженности процессов репаративной регенерации ткани, оказалось, что при введении как одного цитостатического препарата, так и всех изучаемых соединений, её значения достоверно снижались по сравнению с фоном. Это свидетельствует о том, что в семенниках всех животных, получавших цитостатический препарат происходили процессы репаративной регенерации тестикулярной ткани за счет образования новых канальцев. Однако, при введении препарата «Комплекс» (в обеих примененных дозах) через 1 месяц после введения «Паклитаксела», а также препарата сравнения степень зрелости сперматогенного пласта оказалась ниже контрольных значений (соответственно, на 10,8; 10,4; и 23,0 %). Полученные данные свидетельствуют о том, что «Комплекс», как и препарат сравнения, обладает способностью стимулировать процессы репаративной регенерации сперматогенной ткани. Безусловно, это должно привести к возрастанию продуктивности сперматогенеза через 3 месяца после введения цитостатического препарата. Судя по проценту от фона, степень зрелости сперматогенного пласта у крыс, получавших Г-КСФ, оказалась выше, по сравнению с таковой при использовании препарата «Комплекс». Так как, этот показатель вычисляется на основании количества клеток Сертоли, то отмеченный эффект Г-КСФ, является результатом значительного возрастания их числа по сравнению с фоном.
Таким образом, через 2 месяца после цитостатического воздействия «Паклитаксела» на тестикулярную ткань, в семенниках крыс выявлялись признаки регенерации тестикулярной ткани, но в группах терапии обновление ткани, судя по степени зрелости сперматогенного пласта, происходило более интенсивно. Эффективность препарата сравнения оказалась по данному показателю выше таковой у «Комплекса» (обе дозы), что, очевидно, обусловлено существенным возрастанием количества клеток Сертоли. На фоне введения препарата «Комплекс» (в дозе 1,0 мг/кг) через 1 месяц после введения «Паклитаксела» отмечается повышение, как и при использовании Г-КСФ, количества сперматогоний, что является, по-видимому, следствием повышенной интенсивности репаративных процессов.
Вторая серия эксперимента
Оценка состояния репродуктивной системы крыс-самцов через 3 месяца после введения «Паклитаксела»
Результаты оценки массы тела крыс, количество общих половых клеток, приходящихся на эпидидимис, процента подвижных форм зрелых спермиев через 3 месяца после введения «Паклитаксела» и препарата «Комплекс» представлены в табл. 3. Установлено, что масса тела животных в начале эксперимента и через 3 месяца после введения цитостатического препарата во всех сравниваемых группах не различалась (Р>0,05). Полученные данные свидетельствуют о том, что в начале эксперимента была осуществлена качественная рандомизация животных по массе тела, а также о том, что в течение 3-х месяца эксперимента все оказываемые фармакологические воздействия не приводили к существенному снижению массы тела животных.
У крыс, получавших «Паклитаксел», ОКС, приходящихся на эпидидимис, оставалось статистически значимо сниженным (57% от фоновых значений). Это свидетельствует о выраженной недостаточности сперматогенеза в срок, соответствующий проявлению воздействия на стволовые сперматогонии. ОКС в группе крыс, получавших сочетанное введение «Паклитаксела» и препарата «Комплекс» в обеих исследуемых дозах (0,3 и 1,0 мг/кг), оказалось выше, соответственно, на 96 и 69% по сравнению с контролем («Паклитаксел»). ОКС при введении препарата «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг статистически значимо не отличалось от фоновых значений. Введение препарата сравнения (Г-КСФ) также приводило к возрастанию этого показателя (на 72%), по сравнению с контролем, и не отличалось от фоновых показателей. Обращает внимание на себя тот факт, что в группе крыс, получавших «Комплекс» в дозе 0,3 мг/кг, ОКС статистически значимо превышало фоновые значения.
Процент подвижных форм в группе крыс, получавших сочетанное введение «Паклитаксела» и препарата «Комплекс» в обеих исследуемых дозах (0,3 и 1,0 мг/кг), оказался на уровне контрольных значений. Введение препарата сравнения (Г-КСФ) приводило к статистически значимому возрастанию процента подвижных форм по сравнению с контролем. Этот показатель достигал фоновых значений. Полученные данные свидетельствуют о том, что введение препарата «Комплекс» через 3 месяца после начала эксперимента приводило к увеличению продуктивности сперматогенеза и его эффективность, судя по ОКС, была выше, чем у препарата сравнения. Однако эффективность Г-КСФ на подвижность спермиев оказалась выше.
Таблица 3 - Морфологические и функциональные показатели зрелых спермиев крыс через 3 месяца после сочетанного введения препаратов «Комплекс» и «Паклитаксел»
| Показатели | Фон | Контроль | «Комплекс» 0,3 мг/кг | «Комплекс» 1,0 мг/кг | Г-КСФ |
| Масса животного в начале эксперимента (г) |
352,2±14,87 | 352,6±4,06 | 352,8±14,12 | 352,6±13,94 | 352,2±21,36 |
| Масса животного в конце эксперимента (г) |
488,0±17,47 | 490,0±10,17 | 491,0±5,55 | 490,2±6,18 | 489,8±8,67 |
| Количество подвижных форм сперматозоидов (%) |
84,0±1,41 | 59,7±1,78 # | 66,3±3,73 # | 64,3±2,20 # | 78,0±2,55 * |
| Общее количество сперматозоидов (абс.ед.) |
77,0±5,17 | 44,0±2,07 # | 86,2±3,17 *# | 74,3±2,75 * | 75,6±2,11 * |
Через 3 месяца после введения «Паклитаксела» сперматогенный эпителий животных выглядел изреженным по сравнению с таковым у интактных крыс. Между канальцами располагалось небольшое число клеток Лейдига.
Установлено (табл. 4), что через 3 месяца после введения «Паклитаксела» численность клеточной популяции сперматогоний оставалась сниженной и составляла 67% от фоновых значений. Эти данные свидетельствуют о том, что количество сперматогоний с течением времени не возрастает. Источником пополнения этой клеточной популяции являются стволовые сперматогонии, делящиеся при повреждении. Сроком проявления их повреждений, с учетом длительности сперматогенеза, является 3 месяца. В связи с этим, полученный факт свидетельствует о сокращении количества стволовых сперматогоний под действием «Паклитаксела».
Через 3 месяца после сочетанного введения «Паклитаксела» и «Комплекса» сперматогенный эпителий выглядел менее изреженным, чем после введения одного цитостатического препарата. Между канальцами отчетливо выявлялись клетки Лейдига, в количестве, близком к норме.
При сочетанном введении «Паклитаксела» и препарата «Комплекс» в дозе 0,3 мг/кг количество сперматогоний также было статистически значимо сниженным по сравнению с фоном и не отличалось от контрольных значений. У крыс, получавших «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг, этот показатель статистически значимо превышал контрольные значения (на 22%). Сходные данные были получены при сочетанном введении «Паклитаксела» и препарата сравнения.
При подсчете тестостерон продуцирующих клеток (клетки Лейдига) установлено, что в этот срок наблюдения их число в контроле оказалось сниженным по сравнению с фоном (табл.4), что может быть результатом токсического действия препарата на гонадотропные клетки гипофиза. У крыс, получавших сочетанное введение «Паклитаксела» и препаратов: «Комплекс» (в обеих дозах) и Г-КСФ; количество клеток Лейдига не отличалось от фоновых значений. Значение этого показателя у крыс, получавших препарат «Комплекс», превышало таковое в контроле.
При подсчете количества клеток микроокружения (клетки Сертоли) выявлялось их статистически значимое снижение в группе крыс, получавших «Паклитаксел». У животных, получавших «Комплекс» в обеих используемых дозах, а также препарат сравнения, этот показатель превышал значения в контроле. При введении препарата «Комплекс» в обеих дозах число клеток Сертоли превышало фоновые значения.
Изучение показателя эндокринной активности семенника, который высчитывается по отношению количества клеток Лейдига к клеткам Сертоли, показало, что у крыс, получавших один «Паклитаксел», его значения находились на уровне контроля. Эндокринная активность у крыс, которым вводили «Комплекс» (в обеих дозах) и препарат сравнения оказалась статистически значимо сниженной по сравнению с контролем. При введении препарата «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг этот показатель был снижен по сравнению с фоном. Отмеченные эффекты связаны с возрастанием клеток Сертоли.
При определении степени зрелости сперматогенного пласта было установлено, что при введении одного цитостатического препарата его значения статистически значимо снижались по сравнению с фоном. В группе крыс, получавших сочетанное введение цитостатического препарата и корректоров, этот показатель был также ниже фоновых значений. Отмеченные факты свидетельствуют о том, что в семенниках животных экспериментальных групп происходили процессы репаративной регенерации тестикулярной ткани. Однако, при сочетанном введении препарата «Комплекс» (в обеих используемых дозах), а также препарата сравнения степень зрелости сперматогенного пласта оказалась ниже контрольных значений (соответственно на 13, 14 и 10%). Полученные данные свидетельствуют о том, что препарат «Комплекс», как и препарат сравнения, обладает способностью стимулировать процессы образования стволовых сперматогоний. Следует отметить, что наиболее низкие значения этого показателя выявлялись в группе крыс, получавших «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг.
Таблица 4 - Морфологические и функциональные показатели семенников крыс через 3 месяца после сочетанного введения препаратов «Комплекс» и «Паклитаксел»
| Показатели | Фон | Контроль | «Комплекс» 0,3 мг/кг | «Комплекс» 1,0 мг/кг | Г-КСФ |
| Количество сперматогоний (абс.ед.) | 18,44±0,27 | 12,35±0,17 # | 13,18±0,36 # | 15,02±0,44 # * | 16,72±0,14 # * |
| Количество клеток Лейдига (абс.ед.) | 15,45±0,53 | 12,68±0,55 # | 15,51±0,50* | 14,47±0,72* | 14,45±0,92 |
| Количество клеток Сертоли (абс.ед.) | 2,51±0,18 | 2,10±0,09 # | 3,46±0,05*# | 3,70±0,23*# | 2,53±0,13 * |
| Эндокринная активность (усл.ед.) | 7,16±0,78 | 7,06±0,34 | 4,65±0,08 # * | 4,16±0,38 # * | 6,23±0,41 * |
| Степень зрелости сперматогенного пласта | 6,12±0,04 | 5,57±0,02 # | 5,33±0,01*# | 5,28±0,04*# | 5,49±0,02# * |
Введение цитостатического препарата «Паклитаксела» моделирует в семенниках крыс через 2 и 3 месяца после начала эксперимента тестикулярную недостаточность, обусловленную истощением популяции сперматогоний (срок 2 месяца – недостаточность быстро обновляющихся сперматогоний, срок 3 месяца – недостаточность стволовых сперматогоний). О тестикулярной недостаточности свидетельствует снижение продуктивности сперматогенеза (показатель - ОКС). Доказательством того, что это обусловлено истощением источников пролиферативного пула сперматогенеза является снижение численности сперматогоний через 2 и 3 месяца после цитостатического воздействия. Учитывая, что стволовые клетки восполняют численность сперматогоний при повреждении, полученные данные свидетельствуют о частичной гибели под действием «Паклитаксела» стволовых сперматогоний, что подтверждают данные литературы [Сухачева Т.В., Богуш Т.А., Коломиец О.Л. Повреждающее действие таксола на сперматогенез мыши. // Бюлл. эксперим. биол. и мед.- 2001.- Т.132, №11. - С. 554-560].
Образование новых сперматогоний в извитом семенном канальце лимитируется количеством клеток микроокружения, которые в зрелых канальцах не размножаются. Репаративная регенерация сперматогенной ткани идет только путем образования новых извитых семенных канальцев из регенераторной зоны, содержащей клетки Сертоли и первичные половые детерминанты, которые, впоследствии становятся сперматогониями. Вновь образующиеся семенные канальца характеризуются повышенным содержанием клеток Сертоли, что не ограничивает размножение сперматогоний. Критерием эффективности репаративной регенерации ткани является, прежде всего, степень зрелости сперматогенного пласта.
Результаты исследований показали, что степень зрелости сперматогенного пласта на фоне введения одного «Паклитаксела» снижается по сравнению с фоновыми значениями, как через 2, так и через 3 месяца после введения цитостатического препарата. Таким образом, в тестикулярной ткани на фоне повреждения идут естественные процессы репаративной регенерации. На фоне введения препарата «Комплекс» (в обеих дозах), этот показатель также снижался, но в большей степени. Что свидетельствует о том, что под действием препарата «Комплекс» происходили более интенсивные, чем при введении одного «Паклитаксела», процессы репаративной регенерации. Сходный по степени выраженности эффект наблюдался при введении препарата сравнения. Наименьшие значения этого показателя выявлялись через 2 месяца после сочетанного введения «Паклитаксела» и препарата сравнения, через 3 месяца – после сочетанного введения «Паклитаксела» и препарата «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг.
В сперматогенном пласте более низкой степени зрелости, клеток микроокружения больше. Это подтверждают полученные результаты: через 2 месяца их число было больше на фоне введения Г-КСФ, через 3 месяца – на фоне введения препарата «Комплекс» (в обеих дозах). Их число через 3 месяца после начала эксперимента оказалось выше, чем у препарата сравнения Г-КСФ. Доказательством последнего служит тот факт, что значения этого показателя на фоне введения препарата «Комплекс» (в обеих дозах) было выше такового у фоновых значений. У крыс, получавших Г-КСФ, количество клеток Сертоли не превышало фоновые значения.
Возрастание клеток Сертоли не ограничивает размножение сперматогоний. Их количество на фоне введения препарата «Комплекс» в обеих дозах возрастало (срок 2 мес – по сравнению с контролем; срок -3 месяца – по сравнению с контролем и фоном). Препарат сравнения приводил к существенному возрастанию этого показателя по сравнению с фоном только через 2 месяца после введения «Паклитаксела».
Возрастание количества сперматогоний должно привести к увеличению продуктивности сперматогенеза (увеличению общего количества сперматозоидов). И действительно, этот показатель в экспериментальных группах возрастал по сравнению с контролем: на фоне введения препарата «Комплекс» (срок 2 и 3 месяца - дозы 0,3 и 1,0 мг/кг); на фоне введения Г-КСФ также отмечалось возрастание продуктивности сперматогенеза (срок 2 и 3 месяца). Через 2 месяца после начала опыта эффективность препарата сравнения по этому показателю оказалась выше. Наибольшее возрастание ОКС (выше уровня фона) выявлялось при введении препарата «Комплекс» в дозе 0,3 мг/кг через 3 месяца после начала опыта. Это может быть связано не только со стимуляцией процессов репаративной регенерации, но и нормализацией количества тестостерон синтезирующих клеток (в этой группе их число практически не отличалось от фоновых значений). Данные литературы свидетельствуют о крайней резистентности клеток Лейдига к фармакологическим воздействиям [Сухоруков В.С., Шамшад Д.С. Определение степени зрелости сперматогенного пласта крысы при его регенерации и в процессе созревания интактного семенника// Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. – 1989. – Т.97, №9. – 89 с]. Между тем, их роль в гормональной регуляции сперматогенеза является неоспоримой.
На модели тестикулярной недостаточности, связанной с истощением пролиферативного пула сперматогенеза (полу- и стволовых сперматогоний), установлено, что препарат «Комплекс» (в обеих дозах) обладает способностью усиливать процессы репаративной регенерации тестикулярной ткани. Наиболее выраженный терапевтический эффект препарата выявлялся на стволовые сперматогонии в дозе 1,0 мг/кг. Эффективность препарата сравнения, как стимулятора образования стволовых сперматогоний, оказалась сопоставимой с таковой у препарата «Комплекс». Вместе с тем при воздействии препарата «Комплекс» выявилось большее, чем при введении Г-КСФ количество клеток Сертоли. Этот факт свидетельствует о большем регенераторном потенциале семенников на фоне введения препарата «Комплекс», чем Г-КСФ.
Проведенные исследования выявили способность препарата «Комплекс» нормализовать уровень тестостерон синтезирующих клеток, что не выявлялось при введении препарата сравнения. Это также может быть одним из преимуществ тестируемого лекарственного средства. Препарат «Комплекс» (доза 0,3 мг/кг) стимулировал сперматогенез в большей степени, чем препарат сравнения, о чем свидетельствуют показатель продуктивности сперматогенеза через 3 месяца после начала эксперимента.
Примеры твердых лекарственных форм включают, например, таблетки, пилюли, желатиновые капсулы и др.
Примеры жидких лекарственных форм для инъекций и парентерального введения включают растворы, эмульсии, суспензии и др.
Композиции, как правило, получают с помощью стандартных процедур, предусматривающих смешение активного соединения с жидким или тонко измельченным твердым носителем.
Готовый лекарственный препарат согласно изобретению в форме таблеток содержат от 2 до 10 % активного соединения и наполнитель(и) или носитель(и). В качестве таковых для таблеток применяются: а) разбавители: свекловичный сахар, лактоза, глюкоза, натрия хлорид, сорбит, маннит, гликоль, фосфат кальция двузамещенный; б) связующие вещества: магниевый силикат алюминия, крахмальная паста, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза и поливинил пиррол и дон; в) разрыхлители: декстроза, агар, альгиновая кислота или ее соли, крахмал, твин.
ПРИМЕР. 1.1
100 мг таблетки, содержащие по 2 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена
| 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен | 2 мг |
| Лактоза | 53,0 мг |
| Альгиновая кислота | 20,0 мг |
| Лимонная кислота | 5,0 мг |
| Трагакант | 20,0 мг |
ПРИМЕР. 1.2
100 мг таблетки, содержащие по 5 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена
| 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен | 5 мг |
| Лактоза | 50,0 мг |
| Альгиновая кислота | 20,0 мг |
| Лимонная кислота | 5,0 мг |
| Трагакант | 20,0 мг |
ПРИМЕР. 1.3
100 мг таблетки, содержащие по 10 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена
| 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен | 10 мг |
| Лактоза | 45,0 мг |
| Альгиновая кислота | 20,0 мг |
| Лимонная кислота | 5,0 мг |
| Трагакант | 20,0 мг |
Таблетка может быть сформирована посредством прессовки или формовки активного ингредиента с одним или более дополнительными ингредиентами. Получение прессованных таблеток осуществляется на специальной установке. Активный ингредиент в свободной форме, такой, как порошок или гранулы, в количествах 20 г или 50 г или 100 г (количество вещества, необходимое для получения 10000 таблеток) перемешивается со связующим веществом - трагакантом (200 г), смешивается с разбавителем - лактозой (530 г или 500 г или 450 г), в смесь добавляется разрыхляющее вещество - альгиновая кислота (200 г) и отдушка - лимонная кислота (50 г).
Для желатиновых капсул обычно используются дополнительно красители и стабилизаторы. В качестве красителей применяются: тетразин, индиго; в качестве стабилизаторов могут быть представлены: натрия метабисульфит, натрия бензоат. Предлагаемые желатиновые капсулы содержат от 2 до 10 % активного ингредиента.
ПРИМЕР 2.1
1 капсула 2 мг содержит:
Активное вещество:
9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен - 2 мг в пересчете на безводное вещество
Вспомогательные вещества:
Бетадекс (β-циклодекстрин) до массы содержимого 190 мг
Капсулы твердые желатиновые:
Желатин
Титана диоксид (Е171)
ПРИМЕР 2.2
1 капсула 5 мг содержит:
Активное вещество:
9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен - 5 мг в пересчете на безводное вещество
Вспомогательные вещества:
Бетадекс (β-циклодекстрин) до массы содержимого 190 мг
Капсулы твердые желатиновые:
Желатин
Титана диоксид (Е171)
ПРИМЕР 2.3
1 капсула 10 мг содержит:
Активное вещество:
9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен - 10 мг в пересчете на безводное вещество
Вспомогательные вещества:
Бетадекс (β-циклодекстрин) до массы содержимого 190 мг
Капсулы твердые желатиновые:
Желатин
Титана диоксид (Е171)
Активный ингредиент в свободной форме, такой, как порошок или гранулы, в количествах 20 г или 50 г или 100 г (количество вещества, необходимое для получения 10000 капсул) перемешивается с веществом β-циклодекстрин (бетадекс) (1880 г или 1850 г или 1800 г).
Инъекционные формы композиции предпочтительно представляют собой изотонические и масляные растворы, суспензии и содержат от 0,025 до 0,1 % активного ингредиента. Вышеуказанные формы могут стерилизоваться и содержать добавки, такие как консерванты: натрия метабисульфит, бензойная кислота, натрия бензоат, смесь метилпарабена и пропилпарабена; стабилизаторы: абрикосовая и аравийская камедь, декстрин, крахмальный клейстер, метилцеллюлоза, твин; соли, регулирующие осмотическое давление (хлорид натрия), или буферы. Кроме того, они могут содержать другие терапевтически полезные вещества.
ПРИМЕР 3.1
2 мл ампулы, содержащие по 0,5 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена
| 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен | 0,5 мг |
| Соевое масло гидрированное | 2 мл |
ПРИМЕР 3.2
2 мл ампулы, содержащие по 1,0 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена
| 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен | 1,0 мг |
| Соевое масло гидрированное | 2 мл |
ПРИМЕР 3.3
2 мл ампулы, содержащие по 2,0 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена
| 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен | 2,0 мг |
| Соевое масло гидрированное | 2 мл |
Для приготовления инъекционных форм активное соединение (0,5 г или 1 г или 2 г; количества, необходимые для изготовления 1000 ампул) тонко измельчают и смешивают в смесителе с соевым маслом гидрированным (2000 мл). Полученный раствор фасуют в ампулы по 2 мл и стерилизуют паром в течение 30 мин.
Назначаемая для приема доза активного компонента (9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена формулы 1 или его смеси с β-циклодекстрином или клатратного комплекса с β-циклодекстрином) варьирует в зависимости от многих факторов, таких как возраст, пол, масса тела пациента, симптомы и тяжесть заболевания, конкретно назначаемое соединение, способ приема, форма препарата, в виде которой назначается активное соединение.
Обычно, общая назначаемая доза составляет от 1 до 20 мг в день. Общая доза может быть разделена на несколько доз, например, для приема от 1 до 4 раз в день. При оральном назначении интервал общих доз активного вещества составляет от 1 до 20 мг в день, предпочтительно, от 1 до 10 мг. При парентеральном приеме интервал назначаемых доз составляет от 0,5 до 5 мг в день, предпочтительно, от 0,5 до 2 мг. Эффективная терапевтическая доза препарата может быть выбрана лечащим врачом.
Применение клатратного комплекса 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином, в качестве стимулятора процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани при сокращении численности клеточной популяции быстро обновляющихся и резервных стволовых сперматогоний, при соотношении 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен к β-циклодекстрину от 1:1 до 1:10, в мас.%.
