Способы прогнозирования жизнеспособности клеток

Группа изобретений относится к биотехнологии и клеточной биологии, а именно к прогнозированию влияния концентрации сенсибилизирующего средства на жизнеспособность клеток и прогнозированию жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе. Для этого определяют жизнеспособность клеток при совокупности условий испытания в испытательном сосуде для культивирования, причем совокупность условий испытания определена набором параметров, где совокупность условий проведения испытания выбирают на основании полнофакторного скрининга и/или прописанного центрального композиционного плана; прогнозируют влияния концентрации сенсибилизирующего средства на жизнеспособность клеток, а также жизнеспособность клеток в промышленном биореакторе на основании жизнеспособности клеток в испытательном сосуде для культивирования при совокупности условий; культивируют клетки в производственном биореакторе с использованием концентрации сенсибилизирующего средства, которая, по прогнозам, приведет к удельной гибели клеток менее 40% в сутки при культивировании клеток в производственном биореакторе, клеточно-специфической продукции LDH менее 150 нЕд/клетку во время культивирования клетки в производственном биореакторе или кажущейся скорости роста более 1% в день во время культивирования клеток в производственном биореакторе. Группа изобретений обеспечивает точное прогнозирование влияния концентрации сенсибилизирующего средства на жизнеспособность клеток, а также прогнозирование жизнеспособности клеток; точное определение набора условий, которые можно применять для культивирования клетки в промышленном биореакторе. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 15 ил., 3 пр.

 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Данная заявка испрашивает приоритет по предварительной заявке на патент США с регистрационным номером 62/644339, поданной 16 марта 2018 г., и по предварительной заявке на патент США с регистрационным номером 62/645755, поданной 20 марта 2018 г.; полное содержание каждой из этих заявок включено в данный документ посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к способам повышения жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе, а также областям биотехнологии и клеточной биологии.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Интенсификация процессов обеспечивает множество преимуществ для получения рекомбинантных терапевтических белков. Одной из стратегий интенсификации процессов является поддержание высоких значений плотности клеток для повышения продуцирования рекомбинантного белка, что дополнительно требует большого потребления кислорода. Барботирование кислорода в промышленном биореакторе приводит к пенообразованию в промышленном биореакторе. Пенообразование часто происходит как в интенсифицированных периодических процессах с подпиткой, так и в перфузионных процессах. Поэтому в таких процессах обычно добавляют противовспенивающие средства. Однако добавление и накопление противовспенивающих средств может сделать клетки чувствительными к усилию сдвига, что приводит к увеличению числа погибших клеток.

Таким образом, существует необходимость в разработке модели для определения приемлемых условий культивирования клеток в промышленном биореакторе среди различных параметров культивирования клеток, например, усилия сдвига, компонентов среды и добавок, а также концентрации противовспенивателя.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ

Настоящее изобретение основано, например, на открытии того, что заявленные в данном документе способы, в которых используются данные, полученные в испытательном сосуде для культивирования (например, встряхиваемой колбе с дефлекторами), можно применять для точного прогнозирования влияния концентрации сенсибилизирующего средства на жизнеспособность клеток в промышленном биореакторе, точного выбора условия, которое является оптимальным для жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе, прогнозирования жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе и точного определения набора условий, которые можно применять для культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к способам прогнозирования влияния концентрации сенсибилизирующего средства на жизнеспособность клеток в промышленном биореакторе. Способы включают (a) определение жизнеспособности клеток при совокупности условий испытания в испытательном сосуде для культивирования, где совокупность условий испытания определена набором параметров; и (b) прогнозирование влияния концентрации сенсибилизирующего средства на жизнеспособность клеток в промышленном биореакторе на основании жизнеспособности клеток в испытательном сосуде для культивирования при совокупности условий.

В некоторых вариантах осуществления набор параметров предусматривает сдвиговое напряжение, концентрацию сенсибилизирующего средства и концентрацию вещества-протектора.

В некоторых вариантах осуществления совокупность условий проведения испытания выбирают на основании полнофакторного скрининга и/или прописанного центрального композиционного плана.

В некоторых вариантах осуществления сенсибилизирующее средство представляет собой противовспенивающее средство.

В некоторых вариантах осуществления противовспениватель представляет собой противовспениватель на основе полидиметилсилоксана или симетикон.

В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования имеет объем от приблизительно 5 мл до приблизительно 5 л или имеет объем от приблизительно 10 мл до приблизительно 500 мл. В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу с дефлекторами.

В некоторых вариантах осуществления промышленный биореактор имеет объем от приблизительно 5 л до приблизительно 20000 л или имеет объем от приблизительно 50 л до приблизительно 10000 л. В некоторых вариантах осуществления промышленный биореактор представляет собой перфузионный биореактор или биореактор периодического действия с подпиткой.

В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно обеспечивает удельный коэффициент гибели клеток, составляющий менее 40% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно обеспечивает удельный коэффициент гибели клеток, составляющий менее 20% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 150 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 100 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 1% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 5% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления клетка содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую рекомбинантный терапевтический белок.

В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают сбор рекомбинантного терапевтического белка. В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают очистку рекомбинантного терапевтического белка. В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают составление рецептуры с очищенным рекомбинантным терапевтическим белком.

В некоторых вариантах осуществления клетка представляет собой бактериальную клетку, дрожжевую клетку или клетку млекопитающего.

В некоторых вариантах осуществления жизнеспособность клеток определяют путем измерения концентрации дегидрогеназы молочной кислоты (LDH) в испытательном сосуде для культивирования.

В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу с дефлекторами, и совокупность условий испытания включает одно или несколько из:

(a) перемешивания вращением со скоростью от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 400 об/мин;

(b) концентрации сенсибилизирующего средства, составляющей от приблизительно 0 ppm до приблизительно 5000 ppm; и

(c) концентрации вещества-протектора, составляющей от приблизительно 1 г/л до приблизительно 10 г/л.

В некоторых вариантах осуществления вещество-протектор представляет собой полоксамер, полоксамин или полиол Pluronic.

В некоторых вариантах осуществления полоксамер представляет собой полоксамер-188, полоксамер-401, полоксамер-402 или полоксамер-407.

В некоторых вариантах осуществления полоксамин представляет собой полоксамин-904 или полоксамин-908.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам повышения жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе. Способы включают:

(a) определение жизнеспособности клеток при совокупности условий испытания в испытательном сосуде для культивирования, где совокупность условий определена набором параметров;

(b) выбор условия, которое является оптимальным для жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе, на основании жизнеспособности клеток в испытательном сосуде для культивирования при совокупности условий; и

(c) культивирование клетки в промышленном биореакторе при выбранном условии.

В некоторых вариантах осуществления набор параметров включает сдвиговое напряжение, концентрацию сенсибилизирующего средства и концентрацию вещества-протектора.

В некоторых вариантах осуществления совокупность условий проведения испытания выбирают на основании полнофакторного скрининга и/или прописанного центрального композиционного плана.

В некоторых вариантах осуществления сенсибилизирующее средство представляет собой противовспенивающее средство. В некоторых вариантах осуществления противовспениватель представляет собой противовспениватель на основе полидиметилсилоксана или симетикон.

В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования имеет объем от приблизительно 5 мл до приблизительно 5 л.

В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования имеет объем от приблизительно 10 мл до приблизительно 500 мл. В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу с дефлекторами.

В некоторых вариантах осуществления промышленный биореактор имеет объем от приблизительно 5 л до приблизительно 20000 л. В некоторых вариантах осуществления промышленный биореактор имеет объем от приблизительно 50 л до приблизительно 10000 л. В некоторых вариантах осуществления промышленный биореактор представляет собой перфузионный биореактор или биореактор периодического действия с подпиткой.

В некоторых вариантах осуществления стадия (c) приводит к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему менее 40% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. В некоторых вариантах осуществления стадия (c) приводит к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему менее 20% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. В некоторых вариантах осуществления стадия (c) приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 150 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. В некоторых вариантах осуществления стадия (c) приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 100 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. В некоторых вариантах осуществления стадия (c) приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 1% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. В некоторых вариантах осуществления стадия (c) приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 5% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления клетка содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую рекомбинантный терапевтический белок.

В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают сбор рекомбинантного терапевтического белка. В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают очистку рекомбинантного терапевтического белка. В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают составление рецептуры с очищенным рекомбинантным терапевтическим белком.

В некоторых вариантах осуществления клетка представляет собой бактериальную клетку, дрожжевую клетку или клетку млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления жизнеспособность клеток определяют путем измерения концентрации дегидрогеназы молочной кислоты (LDH) в испытательном сосуде для культивирования.

В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу с дефлекторами, и совокупность условий испытания включает одно или несколько из:

(a) перемешивания вращением со скоростью от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 400 об/мин;

(b) концентрации сенсибилизирующего средства, составляющей от приблизительно 0 ppm до приблизительно 5000 ppm; и

(c) концентрации вещества-протектора, составляющей от приблизительно 1 г/л до приблизительно 10 г/л.

В некоторых вариантах осуществления вещество-протектор представляет собой полоксамер, полоксамин или полиол Pluronic. В некоторых вариантах осуществления полоксамер представляет собой полоксамер-188, полоксамер-401, полоксамер-402 или полоксамер-407. В некоторых вариантах осуществления полоксамин представляет собой полоксамин-904 или полоксамин-908.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам прогнозирования жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе. Способы включают:

(a) выбор набора параметров, включающего по меньшей мере два параметра;

(b) определение жизнеспособности клеток при совокупности условий испытания, определенных набором параметров в испытательном сосуде для культивирования; и

(c) прогнозирование жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе на основании жизнеспособности клеток в испытательном сосуде для культивирования при совокупности условий.

В некоторых вариантах осуществления набор параметров включает сдвиговое напряжение, концентрацию сенсибилизирующего средства и концентрацию вещества-протектора.

В некоторых вариантах осуществления совокупность условий испытания выбирают на основании полнофакторного скрининга и/или прописанного центрального композиционного плана.

В некоторых вариантах осуществления сенсибилизирующее средство представляет собой противовспенивающее средство.

В некоторых вариантах осуществления противовспениватель представляет собой противовспениватель на основе полидиметилсилоксана. В некоторых вариантах осуществления противовспениватель представляет собой симетикон.

В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования имеет объем от приблизительно 5 мл до приблизительно 5 л.

В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования имеет объем от приблизительно 10 мл до приблизительно 500 мл.

В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу с дефлекторами.

В некоторых вариантах осуществления промышленный биореактор имеет объем от приблизительно 5 л до приблизительно 20000 л или имеет объем от приблизительно 50 л до приблизительно 10000 л.

В некоторых вариантах осуществления промышленный биореактор представляет собой перфузионный биореактор или биореактор периодического действия с подпиткой.

В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему менее 40% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему менее 20% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 150 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 100 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 1% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 5% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления клетка содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую рекомбинантный терапевтический белок.

В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают сбор рекомбинантного терапевтического белка. В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают очистку рекомбинантного терапевтического белка. В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают составление рецептуры с очищенным рекомбинантным терапевтическим белком.

В некоторых вариантах осуществления клетка представляет собой бактериальную клетку, дрожжевую клетку или клетку млекопитающего.

В некоторых вариантах осуществления жизнеспособность клеток определяют путем измерения концентрации дегидрогеназы молочной кислоты (LDH) в испытательном сосуде для культивирования.

В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу с дефлекторами, и совокупность условий испытания включает одно или несколько из:

(a) перемешивания вращением со скоростью от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 400 об/мин;

(b) концентрации сенсибилизирующего средства, составляющей от приблизительно 0 ppm до приблизительно 5000 ppm; и

(c) концентрации вещества-протектора, составляющей от приблизительно 1 г/л до приблизительно 10 г/л.

В некоторых вариантах осуществления вещество-протектор представляет собой полоксамер, полоксамин или полиол Pluronic. В некоторых вариантах осуществления полоксамер представляет собой полоксамер-188, полоксамер-401, полоксамер-402 или полоксамер-407. В некоторых вариантах осуществления полоксамин представляет собой полоксамин-904 или полоксамин-908.

В другом аспекте настоящее изобретение также предусматривает способы культивирования клетки в промышленном биореакторе, включающие культивирование клетки в жидкой культуральной среде при одном или нескольких из следующих условий:

a) промышленный биореактор характеризуется P/V (Вт/м³) от приблизительно 1,0 до приблизительно 110,0 (например, от приблизительно 10,0 до приблизительно 100,0, от приблизительно 20,0 до приблизительно 80,0, от приблизительно 40,0 до приблизительно 60,0 или приблизительно 6,0);

b) промышленный биореактор характеризуется показателем объем воздуха на объем жидкости в минуту (VVM) (мин.^-1) от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,10 (например, от приблизительно 0, 02 до приблизительно 0,08, от приблизительно 0,04 до приблизительно 0,06 или приблизительно 0,06);

c) среда содержит сенсибилизирующее средство в концентрации от приблизительно 0 ppm до приблизительно 5000 ppm (например, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 1000 ppm до приблизительно 2000 ppm или приблизительно 100 ppm); и

h) жидкая культуральная среда содержит вещество-протектор в концентрации, которая составляет от приблизительно 1 г/л до приблизительно 15 г/л (например, от приблизительно 2 г/л до приблизительно 10 г/л, от приблизительно 3 г/л до приблизительно 7 г/л, от приблизительно 4 г/л до приблизительно 6 г/л или приблизительно 5 г/л).

В некоторых вариантах осуществления сенсибилизирующее средство представляет собой противовспенивающее средство.

В некоторых вариантах осуществления противовспениватель представляет собой противовспениватель на основе полидиметилсилоксана. В некоторых вариантах осуществления противовспениватель представляет собой симетикон.

В некоторых вариантах осуществления вещество-протектор представляет собой полоксамер, полоксамин или полиол Pluronic.

В некоторых вариантах осуществления полоксамер представляет собой полоксамер-188, полоксамер-401, полоксамер-402 или полоксамер-407. В некоторых вариантах осуществления полоксамин представляет собой полоксамин-904 или полоксамин-908.

В некоторых вариантах осуществления промышленный биореактор имеет объем от приблизительно 5 л до приблизительно 20000 л. В некоторых вариантах осуществления промышленный биореактор имеет объем от приблизительно 50 л до приблизительно 10000 л. В некоторых вариантах осуществления промышленный биореактор представляет собой перфузионный биореактор или биореактор периодического действия с подпиткой.

В некоторых вариантах осуществления способы приводят к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему менее 40% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. В некоторых вариантах осуществления способы приводят к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему менее 20% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. В некоторых вариантах осуществления способы приводят к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 150 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. В некоторых вариантах осуществления способы приводят к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 100 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. В некоторых вариантах осуществления способы приводят к кажущейся скорости роста, составляющей более 1% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. В некоторых вариантах осуществления способы приводят к кажущейся скорости роста, составляющей более 5% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления клетка содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую рекомбинантный терапевтический белок.

В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают сбор рекомбинантного терапевтического белка. В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают очистку рекомбинантного терапевтического белка. В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают составление рецептуры с очищенным рекомбинантным терапевтическим белком.

В некоторых вариантах осуществления клетка представляет собой бактериальную клетку, дрожжевую клетку или клетку млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления жизнеспособность клеток определяют путем измерения концентрации дегидрогеназы молочной кислоты (LDH) в испытательном сосуде для культивирования.

Используемая в данном документе форма единственного числа существительного обозначает один или несколько объектов конкретного существительного. Например, фраза "клетка" обозначает "одну или несколько клеток".

Термин "вещество-протектор" означает средство, которое понижает чувствительность клетки (например, чувствительность клетки млекопитающего) к сдвиговому напряжению в ходе культивирования в сосуде (например, испытательном сосуде для культивирования или промышленном биореакторе). Неограничивающие примеры веществ-протекторов включают, например, полоксамеры (например, полоксамер-188, полоксамер-401, полоксамер-402 и полоксамер-407), полоксамины (например, полоксамин-904 или полоксамин-908) и полиолы Pluronic. Дополнительные примеры веществ-протекторов описаны в данном документе и известны из уровня техники.

Термин "сенсибилизирующее средство" означает средство, которое добавляют в жидкую культуральную среду культуры клеток (например, клеточной культуры млекопитающего) и/или оно присутствует там, и которое повышает чувствительность клеток к сдвиговому напряжению в ходе культивирования в сосуде (например, испытательном сосуде для культивирования или промышленном биореакторе). Неограничивающие примеры сенсибилизирующих средств включают противовспениватель (например, противовспениватель на основе полидиметилсилоксана или симетикон). Дополнительные примеры сенсибилизирующих средств описаны в данном документе и известны из уровня техники.

Термин "клетка млекопитающего" означает любую клетку любого млекопитающего или любую клетку, полученную из любого млекопитающего (например, человека, хомяка, мыши, зеленой мартышки, крысы, свиньи, коровы или кролика). Например, клетка млекопитающего может представлять собой иммортализованную клетку. В некоторых вариантах осуществления клетка млекопитающего представляет собой дифференцированную клетку. В некоторых вариантах осуществления клетка млекопитающего представляет собой недифференцированную клетку. Неограничивающие примеры клеток млекопитающих описаны в данном документе. Дополнительные примеры клеток млекопитающих известны из уровня техники.

Термин "культивирование" или "культивирование клетки" означает поддержание или пролиферацию клетки млекопитающего при контролируемом наборе физических условий.

Термин "культура клеток" или "клеточная культура" означает жидкую культуральную среду, содержащую некоторое количество клеток, которые сохраняются или пролиферируют при контролируемом наборе физических условий.

Термин "жидкая культуральная среда" означает жидкость, которая содержит достаточно питательных веществ для обеспечения роста или пролиферации клетки (например, клетки млекопитающего) in vitro. Например, жидкая культуральная среда может содержать одно или несколько из аминокислот (например, 20 аминокислот), пурина (например, гипоксантина), пиримидина (например, тимидина), холина, инозитола, тиамина, фолиевой кислоты, биотина, кальция, никотинамида, пиридоксина, рибофлавина, тимидина, цианокобаламина, пирувата, липоевой кислоты, магния, глюкозы, натрия, калия, железа, меди, цинка и бикарбоната натрия. В некоторых вариантах осуществления жидкая культуральная среда может содержать сыворотку крови млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления жидкая культуральная среда не содержит сыворотку или другой продукт, извлеченный из организма млекопитающего (жидкая культуральная среда с определенным составом). В некоторых вариантах осуществления жидкая культуральная среда может содержать следы металлов, гормон роста млекопитающих и/или фактор роста млекопитающих. Другим примером жидкой культуральной среды является минимальная среда (например, среда, содержащая только неорганические соли, источник углерода и воду). Неограничивающие примеры жидкой культуральной среды описаны в данном документе. Дополнительные примеры жидкой культуральной среды известны из уровня техники и являются коммерчески доступными. Жидкая культуральная среда может содержать клетки млекопитающего при любой плотности. Например, в контексте данного документа в объеме жидкой культуральной среды, удаляемой из биореактора, может практически не содержаться клеток млекопитающего.

Термин "жидкая культуральная среда, не содержащая компонентов животного происхождения" означает жидкую культуральную среду, которая не содержит каких-либо компонентов (например, белков или сыворотки), полученных от млекопитающего.

Термин "жидкая культуральная среда, не содержащая сыворотку крови" означает жидкую культуральную среду, которая не содержит сыворотку крови млекопитающего.

Термин "жидкая культуральная среда, содержащая сыворотку крови" означает жидкую культуральную среду, которая содержит сыворотку крови млекопитающего.

Термин "жидкая культуральная среда с определенным химическим составом" является устоявшимся в области техники термином и означает жидкую культуральную среду, в которой известны все химические компоненты. Например, жидкая культуральная среда с определенным химическим составом не содержит фетальную бычью сыворотку, альбумин бычьей сыворотки или альбумин человеческой сыворотки, поскольку эти препараты чаще всего содержат сложную смесь альбуминов и липидов.

Термин "жидкая культуральная среда, не содержащая белков" означает жидкую культуральную среду, которая не содержит какого-либо белка (например, какого-либо выявляемого белка).

Термин "перфузионный биореактор" означает биореактор, содержащий некоторое количество клеток (например, клеток млекопитающих) в первой жидкой культуральной среде, где культивирование клеток, присутствующих в биореакторе, включает периодическое или непрерывное удаление первой жидкой культуральной среды и, одновременно с этим или вскоре после этого, добавление в биореактор практически такого же объема второй жидкой культуральной среды. В некоторых примерах вторая жидкая культуральная среда может быть такой же, как и первая жидкая культуральная среда. В некоторых примерах постепенно изменяют (например, увеличивают или уменьшают) объем первой жидкой культуральной среды, удаляемой и добавляемой в течение дискретных периодов (например, приблизительно 24-часового периода, периода, составляющего от приблизительно 1 минуты до приблизительно 24 часов, или периода, составляющего более 24 часов), в ходе периода культивирования (например, ежедневная подпитка культуральной средой). Доля сред, удаляемых и заменяемых каждый день, может меняться в зависимости от конкретных клеток, подлежащих культивированию, исходной плотности посева и плотности клеток в конкретный момент времени. "RV" или "объем реактора" означает объем культуральной среды, присутствующей в начале процесса культивирования (например, общий объем культуральной среды, присутствующей после посева).

Термин "биореактор периодического действия с подпиткой" является устоявшимся в области техники термином и означает биореактор, содержащий некоторое количество клеток (например, клеток млекопитающего) в первой жидкой культуральной среде, где культивирование клеток, присутствующих в биореакторе, включает периодическое или непрерывное добавление второй жидкой культуральной среды к первой жидкой культуральной среде без существенного или значительного отделения первой жидкой культуральной среды или второй жидкой культуральной среды от клеточной культуры. Вторая жидкая культуральная среда может быть такой же, как и первая жидкая культуральная среда. В некоторых примерах периодической культуры с подпиткой вторая жидкая культуральная среда представляет собой концентрированную форму первой жидкой культуральной среды. В некоторых примерах периодической культуры с подпиткой вторую жидкую культуральную среду добавляют в виде сухого порошка. В некоторых примерах периодической культуры с подпиткой вторая жидкая культуральная среда имеет совершенно иной состав по сравнению с первой жидкой культуральной средой.

Термин "биореактор периодического действия с подпиткой и концентрированием" является устоявшимся в области техники термином и означает биореактор, содержащий некоторое количество клеток (например, клеток млекопитающего) в первой жидкой культуральной среде, где культивирование клеток, присутствующих в биореакторе, включает периодическое или непрерывное добавление второй жидкой культуральной среды к первой жидкой культуральной среде с существенным или значительным отделением первой жидкой культуральной среды или второй жидкой культуральной среды от клеточной культуры, без удаления при этом продукта из биореактора. Вторая жидкая культуральная среда может быть такой же, как и первая жидкая культуральная среда. В некоторых примерах концентрированной периодической культуры с подпиткой вторая жидкая культуральная среда представляет собой концентрированную форму первой жидкой культуральной среды. В некоторых примерах концентрированной периодической культуры с подпиткой вторую жидкую культуральную среду добавляют в виде сухого порошка. В некоторых примерах концентрированной периодической культуры с подпиткой вторая жидкая культуральная среда имеет совершенно иной состав, чем состав первой жидкой культуральной среды.

"Перемешивание вращением" является термином, хорошо известным в данной области техники, и относится к перемещению встряхиваемой колбы в целом круговыми движениями, например, по часовой стрелке или против часовой стрелки, например, для увеличения концентрации растворенного O2 в жидкой культуральной среде, содержащейся там. Перемешивание можно осуществлять с применением любого известного из уровня техники способа, например с помощью прибора, благодаря которому встряхиваемая колба перемещается круговыми или эллипсоидальными движениями, как, например, ротационный шейкер. Иллюстративные устройства, которые можно применять для выполнения перемешивания вращением, описаны в данном документе. Дополнительные примеры таких устройств также известны из уровня техники и являются коммерчески доступными.

Термин "встряхиваемая колба" означает сосуд (например, стерильный сосуд), способный удерживать объем жидкой культуральной среды, который имеет по меньшей мере одну газопроницаемую поверхность (например, край, который имеет газопроницаемый элемент, например мембрану, которая также может выступать в качестве стерильного барьера) и/или по меньшей мере одну крышку с отверстием, и по меньшей мере часть его формы напоминает усеченный конус. Например, встряхиваемая колба может быть встряхиваемой колбой с дефлекторами, или колбой Эрленмейера, или любым их модифицированным вариантом, признанным в данной области техники.

Термин "промышленный биореактор" является устоявшимся в области техники термином и означает крупный биореактор (например, с внутренним объемом более 5 л, 1000 л, 5000 л, 10000 л, 20000 л, 50000 л или 100000 л). Например, производственный биореактор может представлять собой перфузионный биореактор.

Термин "испытательный сосуд для культивирования" является устоявшимся в области техники термином и означает небольшой биореактор (например, относительно промышленного биореактора) с объемом от приблизительно 2 мл до приблизительно 500 мл. В некоторых примерах соотношение высоты и ширины тестового сосуда для культивирования примерно соответствует соотношению высоты и ширины промышленного биореактора в способах, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу (например, встряхиваемую колбу с дефлекторами). Дополнительные примеры тестового сосуда для культивирования описаны в данном документе и известны из уровня техники.

Термин "периодическое культивирование" является устоявшимся в области техники термином и предусматривает сосуд (например, биореактор), содержащий некоторое количество клеток (например, клеток млекопитающего) в жидкой культуральной среде, где культивирование клеток, присутствующих в сосуде (например, биореакторе), не включает добавления существенного или значительного количества свежей жидкой культуральной среды к клеточной культуре и не включает отделения существенного или значительного количества жидкой культуральной среды от клеточной культуры в ходе культивирования.

Термин "периодическое культивирование с подпиткой" является устоявшимся в области техники термином и предусматривает сосуд (например, промышленный биореактор), содержащий некоторое количество клеток (например, клеток млекопитающего) в жидкой культуральной среде, где культивирование клеток, присутствующих в сосуде (например, промышленном биореакторе), включает периодическое или постоянное добавление свежей жидкой культуральной среды в сосуд без существенного или значительного удаления жидкой культуральной среды из сосуда в ходе культивирования. Свежая жидкая культуральная среда может быть такой же, как жидкая культуральная среда, присутствующая в сосуде в момент начала культивирования. В некоторых примерах периодического культивирования с подпиткой свежая жидкая культуральная среда представляет собой концентрированную форму жидкой культуральной среды, присутствующей в сосуде в момент начала культивирования. В некоторых примерах периодической культуры с подпиткой свежую культуральную среду добавляют в виде сухого порошка. В некоторых примерах периодического культивирования с подпиткой свежая культуральная среда имеет совершенно иной состав по сравнению с жидкой культуральной средой, присутствующей в сосуде в момент начала культивирования.

Описанные в данном документе способы обеспечивают ряд преимуществ. Например, с их помощью можно приводить в соответствие разные масштабы, прогнозировать ∆параметры и оптимизировать существующую область проектных параметров. Также с их помощью можно улучшать прогнозируемость/согласованность производительности в разных масштабах, создавать более показательные модели небольшого масштаба, повышать надежность процесса, улучшать устойчивость к усилию сдвига для интенсификации процесса и разработать руководства касательно добавления сенсибилизирующего средства и вещества-протектора при различных профилях усилия сдвига (ФИГ. 12).

Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют такое же значение, которое обычно понятно специалисту в той области техники, к которой относится настоящее изобретение. Способы и материалы, описанные в данном документе, предназначены для применения в настоящем изобретении; при этом также можно применять другие подходящие способы и материалы, известные из уровня техники. Материалы, способы и примеры являются лишь иллюстративными и не предназначены для ограничения. Все публикации, патентные заявки, патенты, последовательности, записи в базах данных и другие ссылочные материалы, упомянутые в данном документе, включены посредством ссылки во всей своей полноте. В случае противоречий настоящее описание, в том числе определения, будут иметь преимущественную силу.

Другие признаки и преимущества настоящего изобретения станут очевидны из нижеследующих подробного описания и фигур, а также из формулы изобретения.

ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

ФИГ. 1 представляет собой схему, на которой показано, как пузырьки в среде для культивирования клеток могут вызывать гибель клеток.

ФИГ. 2 представляет собой схему, на которой проиллюстрировано, что добавление противовспенивателя (приведенного в качестве примера сенсибилизирующего средства) может выводить рабочие условия за пределы приемлемого рабочего пространства.

ФИГ. 3 представляет собой схему, на которой показана взаимосвязь между удельным продуцированием лактатдегидрогеназы (LDH) и показателем смертности клеток.

ФИГ. 4 представляет собой схему, на которой показана взаимосвязь между веществами-протекторами, сенсибилизирующими средствами и перемешиванием вращением и влияние веществ-протекторов, сенсибилизирующих средств и перемешивания на удельное продуцирование LDH в клеточной культуре.

ФИГ. 5 представляет собой схему, на которой показано, что удельное продуцирование LDH является результатом концентрации сенсибилизирующего средства, концентрации вещества-протектора и перемешивания вращением (напряжения сдвига).

На ФИГ. 6 показан полнофакторный план для трех выбранных параметров: концентрации сенсибилизирующего средства, концентрации вещества-протектора и перемешивания вращением (напряжения сдвига). На верхней панели показан полнофакторный план (2³), где ответ представляет удельное продуцирование LDH (показатель смертности), а факторами являются усилие сдвига, концентрация вещества-протектора и концентрация сенсибилизирующего средства. На средней панели показано, что неудовлетворительный результат привел к предельному значению, существует большая протяженность между точкой неудовлетворительного результата и остальными данными, точку неудовлетворительного результата сложно моделировать, и предельное значение исключено (неэффективная область). На нижней панели показано, что центральные точки плохо прогнозируются (указание кривизны, ответ, вероятно, нелинейный, и увеличение числа оборотов в минуту не масштабируется линейно).

ФИГ. 7 представляет собой схему, на которой показан полнофакторный план, объединенный с прописанным центральным композиционным планом для выбранных параметров: концентрации сенсибилизирующего средства, концентрации вещества-протектора и перемешивания вращением (напряжения сдвига).

ФИГ. 8 представляет собой схему, на которой показаны преимущества полнофакторного плана, объединенного с прописанным центральным композиционным планом.

ФИГ. 9 представляет собой схему, на которой проиллюстрировано, что способы, описанные в данном документе, можно применять для определения области низкой продуктивности (светлое окрашивание) и области неудовлетворительных результатов работы (темное окрашивание).

ФИГ. 10 представляет собой схему, на которой проиллюстрированы способы нормализации напряжения сдвига в зависимости от масштаба посредством удельного продуцирования LDH и способы прогнозирования влияния изменений параметров (Δпараметра).

ФИГ. 11 представляет собой схему, на которой проиллюстрировано, как модели, описанные в данном документе, можно применять для оптимизации рабочих условий промышленного биореактора. Данные показывают, что рабочее условие (прямоугольник, заполненный незакрашенными квадратами) в данное время выполняется, но может быть дополнительно оптимизировано (прямоугольник светлого цвета справа от большой стрелки) (например, в ходе процесса допускается увеличение диапазона значений концентрации сенсибилизирующего средства и повышается устойчивость к выходу пены за пределы сосуда).

На ФИГ. 12 перечислены возможности и польза моделей, описанных в данном документе. Модель может совмещать различные масштабы, прогнозировать изменения параметров и оптимизировать существующие пространства проектных параметров. Модель также предусматривает улучшение прогнозируемости/согласованности производительности в зависимости от масштаба (например, создание более показательных моделей небольшого масштаба и расширение понимания влияния усилия сдвига в зависимости от масштаба в дополнение к традиционным методикам). Модель также предусматривает повышенную надежность процесса (например, улучшенную устойчивость к усилию сдвига для интенсификации процесса и улучшенное руководство касательно концентрации сенсибилизирующего средства и концентрации вещества-протектора, добавляемых при различных профилях усилия сдвига).

ФИГ. 13A представляет собой график, на котором сравниваются значения наблюдаемого удельного продуцирования LDH в испытательных лабораторных сосудах и значения прогнозируемого удельного продуцирования LDH.

На ФИГ. 13B показаны данные эксперимента, описанного в примере 2.

На ФИГ. 13C перечислены значения наблюдаемого удельного продуцирования LDH с прогнозируемыми значениями.

На ФИГ. 14 сравниваются наблюдаемое влияние противовспенивающих средств на удельное продуцирование LDH и прогнозируемое влияние противовспенивающих средств на удельное продуцирование LDH.

ФИГ. 15A представляет собой график, на котором сравниваются значения наблюдаемого удельного продуцирования LDH в испытательных промышленных биореакторах и прогнозируемые значения.

На ФИГ. 15B перечислены значения наблюдаемого удельного продуцирования LDH в испытательных промышленных биореакторах и прогнозируемые значения.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Настоящее изобретение относится к способам оптимизации интенсификации процесса получения белков или полипептидов. В одном аспекте настоящее изобретение относится к модели небольшого испытательного сосуда для культивирования (например, встряхиваемой колбы с дефлекторами), которая может охарактеризовать рабочее пространство, определенное различными рабочими параметрами, например, концентрацией вещества-протектора (например, полоксамера-188), сенсибилизирующим средством (например, противовспенивателем), напряжением сдвига (например, скоростью перемешивания или скоростью барботирования кислорода), компонентами среды и добавками, pH, временем и пр. В частности, описанные в данном документе способы можно применять для прогнозирования влияния таких рабочих параметров на рост и жизнеспособность клеточной культуры в промышленном биореакторе. Чтобы установить взаимосвязь между показателями напряжения сдвига небольших моделей и более крупных моделей, применяли ортогональные подходы, а прогнозируемые характеристики рабочего пространство подтверждали данными при работе в лабораторном масштабе и промышленном масштабе.

Таким образом, в данном документе предложены способы прогнозирования влияния концентрации сенсибилизирующего средства на жизнеспособность клеток в промышленном биореакторе, способы повышения жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе, способы прогнозирования жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе и способы культивирования клетки в промышленном биореакторе. Неограничивающие аспекты данных способов описаны в данном документе и могут объединяться без ограничения.

Интенсификация процесса

Интенсификация процесса относится к усовершенствованиям в отношении изготовления и обработки за счет оптимизации существующих рабочих схем так, чтобы процесс производства мог стать более точным и более эффективным. Такие усовершенствования могут привнести различные преимущества, например, увеличение биомассы, повышение объемной производительности, оптимизацию использования производственных мощностей, снижение стоимости товаров, сохранение на том же уровне или улучшение показателя постоянства качества продукта, уменьшение занимаемой оборудованием площади и/или сокращение числа проводимых операций. На молекулярном уровне интенсификация процесса может также включать более интенсивное перемешивание, улучшение кинетики реакции и/или увеличение выхода и специфичности.

Настоящее изобретение относится к интенсификации процесса для получения белков или полипептидов (например, рекомбинантных терапевтических белков, рекомбинантных белков или рекомбинантных полипептидов). Одной из стратегий по увеличению производства рекомбинантных терапевтических белков или полипептидов является повышение значений плотности клеток. Высокие значения плотности клеток обычно требуют большого расхода кислорода, а требуемое барботирование кислорода часто приводит к проблемам пенообразования (т. е. пузырькам). Как показано на ФИГ. 1, пузырьки могут привести к гибели клеток, например, из-за контакта клеток с пузырьками, прикрепления пузырьков к клеткам или гибели клеток в результате разрушающей силы от разрыва пузырька. С помощью формулы 1 показана взаимосвязь между показателем смертности клеток, объемной аэрацией и размером пузырьков.

(Формула 1)

Таким образом, в процессе культивирования клеток часто добавляют противовспенивающие средства. Однако добавление и/или накопление противовспенивающих средств может оказывать отрицательное действие на характеристики клеточной культуры (например, характеристики клеточной культуры млекопитающего). В некоторых случаях добавление и накопление противовспенивающих средств может приводить к увеличению показателя смертности клеток, в частности в промышленном масштабе (в масштабе промышленного биореактора). Таким образом, важно оценить влияние рабочих параметров или изменений таких рабочих параметров (например, противовспенивающих средств или некоторых других параметров) в промышленном масштабе (в масштабе промышленного биореактора).

Сенсибилизирующие средства, перемешивание и вещества-протекторы

Поскольку исследовать влияние различных рабочих параметров в промышленном масштабе (в масштабе промышленного биореактора) чрезмерно дорого, пробные эксперименты, как правило, сперва проводят в испытательных сосудах для культивирования (например, встряхиваемых колбах, лабораторных ферментерах или опытных ферментерах). Такие испытательные сосуды для культивирования можно использовать для того, чтобы исследовать влияние различных параметров, например, перемешивания, концентрации сенсибилизирующего средства, концентрации вещества-протектора, температуры, pH, состава питательных веществ, загрузки биомассы и стратегии подпитки, в небольшом масштабе и соотнести наблюдаемые эффекты с эффектами в промышленном масштабе (масштабе промышленного биореактора). Во многих традиционных способах для того, чтобы соотнести результаты в испытательных сосудах для культивирования с эффектами в промышленном масштабе (масштабе промышленного биореактора) часто применяют соотношение мощность/объем (P/V), объемный коэффициент массопередачи (kLa), скорость конца лопасти, продолжительность перемешивания, вычислительную гидродинамику (CFD).

Среди таких различных параметров особенно сложно масштабировать параметры сенсибилизирующего средства (например, концентрации сенсибилизирующего средства). В некоторых вариантах осуществления любого из способов, описанных в данном документе, сенсибилизирующее средство может представлять собой противовспенивающее средство (например, симетикон, эмульсию на основе симетикона или масло на основе полидиметилсилоксана (PDMS)). Описание противовспенивающих средств можно найти, например, в Brečević et al. "Mechanism of antifoaming action of simethicone," J. Appl. Toxicol. 14(3):207-211, 1994; и Bergeron, et al. "Polydimethylsiloxane (PDMS)-based antifoams," Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects 122(1-3):103-120, 1997; оба из которых включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

Дополнительные примеры сенсибилизирующих средств включают, например, сенсибилизирующие средства на основе органических масел, сенсибилизирующие средства на основе силиконовых масел и смешанные жидко-твердые смеси/эмульгированные сенсибилизирующие средства (например, коллоидный диоксид кремния, масляные комбинированные противовспениватели). Сенсибилизирующее средство может представлять собой регулирующее пенообразование средство на основе силикона, например, противовспенивающее вещество ACP-0100 XIAMETER®, противовспенивающее вещество ACP-1500 XIAMETER®, противовспенивающую эмульсию AFE-1510 XIAMETER®, противовспенивающую эмульсию AFE-1520 XIAMETER®, противовспенивающую эмульсию AFE-1530 XIAMETER®, противовспенивающее вещество ACP-1400 XIAMETER®, противовспенивающую эмульсию AFE-0700 XIAMETER®, порошкообразный противовспениватель ACP-1920 XIAMETER® и жидкость на основе силикона PMX-200 XIAMETER®. Дополнительные примеры сенсибилизирующих средств включают эмульсию Antifoam С Dow Corning®, Antifoam 204 (Sigma Aldrich), Antifoam A (Sigma Aldrich), эмульсию Antifoam B (Sigma Aldrich), эмульсию Antifoam C (Sigma Aldrich), эмульсию Antifoam Y-30 (Sigma Aldrich), Antifoam O-30 (Sigma Aldrich) и Antifoam SE-15 (Sigma Aldrich). Неограничивающим примером органического несиликонового полиэфирного сенсибилизирующего средства на основе полипропилена является Antifoam 204. Неограничивающим примером эмульсии на основе симетикона является Antifoam EX-Cell. Неограничивающие примеры смешанных жидко-твердых противовспенивателей включают силиконовое масло (PDMS), соединение A, модифицированный CA (MCA), эмульсию A (EA) и аналог EA (AEA), описанные в Marinova et al., Langmuir 17:2426-2436, 2001. Неограничивающие примеры противовспенивателей на основе полидиметилсилоксана (PMSA) описаны в Bergeron et al., Colloids and Surfaces A: Physiochemical and Engineering Aspects 122:103-120, 1997.

Дополнительные примеры сенсибилизирующих средств известны из уровня техники. См., например, Rashmika et al., Biotechnol. Prog. 34(1):262-270, 2018.

Некоторые другие параметры, например, наличие дефлекторов, размер колбы, перемешивание, также оказывают влияние на чувствительность клетки к усилию сдвига. Из-за взаимодействий с другими параметрами данные параметры сенсибилизирующего средства (например, концентрация противовспенивающего средства) часто имеют нелинейную зависимость в процессе увеличения масштаба и геометрически не связаны между различными масштабами. Таким образом, традиционные модели обычно нецелесообразны в отношении прогнозирования влияния параметров сенсибилизирующего средства в промышленном масштабе.

Еще больше усложняет прогнозирование то, что параметр сенсибилизирующего средства может изменяться на протяжение всего периода производства. Например, в ходе процесса производства (например, культивирования клетки в промышленном биореакторе) повышается плотность клеток, и необходимо барботировать большее количество кислорода. Поэтому требуется больше противовспенивающих средств, которые и добавляют в промышленный биореактор. Повышенная концентрация противовспенивающих средств делает клетки еще более чувствительными к сдвиговому напряжению и быстро выводит рабочие условия за пределы допустимого рабочего пространства (ФИГ. 2).

Кроме того, вещества-протекторы могут защищать клетки от повышенного сдвигового напряжения и их часто добавляются в жидкую культуральную среду. Повышенная концентрация вещества-протектора может быть необходима для ослабления отрицательного воздействия сенсибилизирующих средств, но взаимодействие веществ-протекторов с другими параметрами усложняет определение точного количества вещества-протектора, которое необходимо. Некоторые общеизвестные вещества-протекторы включают, например, полоксамер, полоксамин и/или полиол Pluronic. В некоторых вариантах осуществления вещество-протектор представляет собой полоксамер (например, полоксамер-188, полоксамер-401, полоксамер-402 или полоксамер-407). В некоторых других вариантах осуществления вещество-протектор представляет собой полоксамин (например, полоксамин-904 или полоксамин-908). В некоторых дополнительных вариантах осуществления вещество-протектор представляет собой полиол Pluronic (например, L-61, L-121, P-103, P-123, P-84, P-104, P-65, P-105, L-35, F-127, F-38, F-68 или F-108) или обратный полиол Pluronic (например, 25 R-2, 25 R-4, 25 R-5, 25 R-8, 10 R-5 или 10 R-8). Подробное описание типичных веществ-протекторов можно найти, например, в Moghimi et al., "Poloxamers and poloxamines in nanoparticle engineering and experimental medicine," Trends in Biotechnology 18(10):412-420, 2000; Murhammer et al., "Structural features of nonionic polyglycol polymer molecules responsible for the protective effect in sparged animal cell bioreactors," Biotechnology Progress 6(2):142-148, 1990; Murhammer, "Pluronic polyols, cell protection," Encyclopedia of Bioprocess Technology (1999); каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

Моделирование на основании факторного эксперимента и центрального композиционного плана

Настоящее изобретение предусматривает способы моделирования для сбора данных о влиянии (например, на жизнеспособность клеток, показатель смертности клеток, продуцирование рекомбинантного терапевтического белка или выход) различных рабочих параметров, например, веществ-протекторов (компонент среды/добавка, например, Рluronic), сенсибилизирующих средств (например, противовспенивающие средства) и сдвигового напряжения (перемешивание) для целей оптимизации реакторов любого масштаба на основании результатов, полученных на примере моделей испытательных сосудов для культивирования.

В одном аспекте способы, описанные в данном документе, можно применять для прогнозирования жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе. Способы предусматривают выбор набора параметров, включающего по меньшей мере два (например, три, четыре, пять или шесть) параметра; определение жизнеспособности клеток при совокупности условий испытания, определенной набором параметров в испытательном сосуде для культивирования (например, любом из испытательных сосудов для культивирования, описанных в данном документе); и прогнозирование жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе на основании жизнеспособности клеток в испытательном сосуде для культивирования при совокупности условий. На основании прогноза можно определить условия, соответствующие повышенной жизнеспособности клеток. Также в данном документе предложены способы прогнозирования влияния концентрации сенсибилизирующего средства на жизнеспособность клеток в промышленном биореакторе. Способы предусматривают определение жизнеспособности клеток при совокупности условий испытания в испытательном сосуде для культивирования, где совокупность условий испытания определена набором параметров; и прогнозирование влияния концентрации сенсибилизирующего средства на жизнеспособность клеток в промышленном биореакторе на основании жизнеспособности клеток в испытательном сосуде для культивирования при совокупности условий.

Испытательный сосуд для культивирования может представлять собой центрифужную пробирку (например, центрифужную пробирку с дефлекторами), колбу (например, встряхиваемую колбу с объемом приблизительно 3 л) (например, встряхиваемую колбу с дефлекторами), автоматизированный лабораторный ферментер (Ambr 15 и Amber 250 от Sartorius), лабораторный ферментер или опытный ферментер. В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования может иметь объем менее 5 л, менее 3 л, менее 1 л, менее 500 мл или менее 100 мл (например, менее 1 л или от 50 мл до 500 мл). В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования имеет объем (внутренний объем) от приблизительно 5 мл до приблизительно 5 л (например, от приблизительно 10 мл до приблизительно 500 мл или от приблизительно 2,5 л до приблизительно 3,5 л). Например, испытательный сосуд для культивирования может иметь объем (внутренний объем) от приблизительно 5 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 5 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 5 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 5 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 5 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 5 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 5 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 5 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 5 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 5 мл до приблизительно 900 мл,

от приблизительно 5 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 450 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 350 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 60 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 50 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 40 мл,

от приблизительно 5 мл до приблизительно 30 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 25 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 20 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 15 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 10 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 10 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 10 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 10 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 10 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 10 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 10 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 10 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 10 мл до приблизительно 1 л,

от приблизительно 10 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 450 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 350 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 250 мл,

от приблизительно 10 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 60 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 50 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 40 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 30 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 25 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 20 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 15 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 15 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 15 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 15 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 15 мл до приблизительно 3,0 л,

от приблизительно 15 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 15 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 15 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 15 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 15 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 450 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 350 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 60 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 50 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 40 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 30 мл,

от приблизительно 15 мл до приблизительно 25 мл, от приблизительно 15 мл до приблизительно 20 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 20 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 20 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 20 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 20 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 20 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 20 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 20 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 20 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 20 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 700 мл,

от приблизительно 20 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 450 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 350 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 60 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 50 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 40 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 30 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 25 мл,

от приблизительно 25 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 25 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 25 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 25 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 25 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 25 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 25 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 25 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 25 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 25 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 500 мл,

от приблизительно 25 мл до приблизительно 450 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 350 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 60 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 50 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 40 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 30 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 30 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 30 мл до приблизительно 4,0 л,

от приблизительно 30 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 30 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 30 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 30 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 30 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 30 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 30 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 450 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 350 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 250 мл,

от приблизительно 30 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 60 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 50 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 40 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 40 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 40 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 40 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 40 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 40 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 40 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 40 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 40 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 40 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 700 мл,

от приблизительно 40 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 450 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 350 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 60 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 50 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 50 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 50 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 50 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 50 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 50 мл до приблизительно 2,5 л,

от приблизительно 50 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 50 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 50 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 50 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 450 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 350 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 250 мл,

от приблизительно 50 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 60 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 60 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 60 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 60 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 60 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 60 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 60 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 60 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 60 мл до приблизительно 1 л,

от приблизительно 60 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 450 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 350 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 100 мл,

от приблизительно 60 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 80 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 80 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 80 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 80 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 80 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 80 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 80 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 80 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 80 мл до приблизительно 900 мл,

от приблизительно 80 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 450 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 350 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 200 мл,

от приблизительно 80 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 100 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 100 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 100 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 100 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 100 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 100 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 100 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 100 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 100 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 800 мл,

от приблизительно 100 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 450 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 350 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 150 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 150 мл до приблизительно 4,0 л,

от приблизительно 150 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 150 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 150 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 150 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 150 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 150 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 150 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 600 мл,

от приблизительно 150 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 450 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 350 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 200 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 200 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 200 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 200 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 200 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 200 мл до приблизительно 2,5 л,

от приблизительно 200 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 200 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 200 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 200 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 200 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 200 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 200 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 200 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 200 мл до приблизительно 450 мл, от приблизительно 200 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 200 мл до приблизительно 350 мл, от приблизительно 200 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 200 мл до приблизительно 250 мл,

от приблизительно 250 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 250 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 250 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 250 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 250 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 250 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 250 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 250 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 250 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 250 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 250 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 250 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 250 мл до приблизительно 600 мл,

от приблизительно 250 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 250 мл до приблизительно 450 мл, от приблизительно 250 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 250 мл до приблизительно 350 мл, от приблизительно 250 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 300 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 300 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 300 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 300 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 300 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 300 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 300 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 300 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 300 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 300 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 300 мл до приблизительно 800 мл,

от приблизительно 300 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 300 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 300 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 300 мл до приблизительно 450 мл, от приблизительно 300 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 300 мл до приблизительно 350 мл, от приблизительно 350 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 350 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 350 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 350 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 350 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 350 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 350 мл до приблизительно 2 л,

от приблизительно 350 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 350 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 350 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 350 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 350 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 350 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 350 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 350 мл до приблизительно 450 мл, от приблизительно 350 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 400 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 400 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 400 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 400 мл до приблизительно 3,5 л,

от приблизительно 400 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 400 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 400 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 400 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 400 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 400 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 400 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 400 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 400 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 400 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 400 мл до приблизительно 450 мл, от приблизительно 450 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 450 мл до приблизительно 4,5 л,

от приблизительно 450 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 450 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 450 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 450 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 450 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 450 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 450 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 450 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 450 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 450 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 450 мл до приблизительно 600 мл,

от приблизительно 450 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 500 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 500 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 500 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 500 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 500 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 500 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 500 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 500 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 500 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 500 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 500 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 500 мл до приблизительно 700 мл,

от приблизительно 500 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 600 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 600 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 600 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 600 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 600 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 600 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 600 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 600 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 600 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 600 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 600 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 600 мл до приблизительно 700 мл,

от приблизительно 700 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 700 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 700 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 700 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 700 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 700 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 700 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 700 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 700 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 700 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 700 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 800 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 800 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 800 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 800 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 800 мл до приблизительно 3,0 л,

от приблизительно 800 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 800 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 800 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 800 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 800 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 900 мл до приблизительно 5 л, от приблизительно 900 мл до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 900 мл до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 900 мл до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 900 мл до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 900 мл до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 900 мл до приблизительно 2 л, от приблизительно 900 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 900 мл до приблизительно 1 л, от приблизительно 1 л до приблизительно 5 л, от приблизительно 1 л до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 1 л до приблизительно 4,0 л,

от приблизительно 1 л до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 1 л до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 1 л до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 1 л до приблизительно 2 л, от приблизительно 1 л до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 1,5 л до приблизительно 5 л, от приблизительно 1,5 л до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 1,5 л до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 1,5 л до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 1,5 л до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 1,5 л до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 1,5 л до приблизительно 2 л, от приблизительно 2 л до приблизительно 5 л, от приблизительно 2 л до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 2 л до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 2 л до приблизительно 3,5 л,

от приблизительно 2 л до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 2 л до приблизительно 2,5 л, от приблизительно 2,5 л до приблизительно 5 л, от приблизительно 2,5 л до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 2,5 л до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 2,5 л до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 2,5 л до приблизительно 3,0 л, от приблизительно 3,0 л до приблизительно 5 л, от приблизительно 3,0 л до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 3,0 л до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 3,0 л до приблизительно 3,5 л, от приблизительно 3,5 л до приблизительно 5 л, от приблизительно 3,5 л до приблизительно 4,5 л, от приблизительно 3,5 л до приблизительно 4,0 л, от приблизительно 4,0 л до приблизительно 5 л, от приблизительно 4,0 л до приблизительно 4,5 л или от приблизительно 4,5 л до приблизительно 5,0 л. В некоторых вариантах осуществления соотношение высоты и ширины тестового сосуда для культивирования является приблизительно таким же, как соотношение высоты и ширины промышленного биореактора.

В некоторых вариантах осуществления объем жидкой культуральной среды, находящейся в испытательном сосуде для культивирования (в ходе культивирования), может находиться в диапазоне от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 700 мл,

от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 60 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 50 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 40 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 30 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 25 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 20 мл,

от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 10 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 5 мл, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 2,5 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 300 мл,

от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 60 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 50 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 40 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 30 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 25 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 20 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 10 мл, от приблизительно 2,5 мл до приблизительно 5 мл,

от приблизительно 5 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 5 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 5 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 5 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 5 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 5 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 5 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 250 мл,

от приблизительно 5 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 60 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 50 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 40 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 30 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 25 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 20 мл, от приблизительно 5 мл до приблизительно 10 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 10 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 10 мл до приблизительно 1,3 л,

от приблизительно 10 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 10 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 10 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 10 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 150 мл,

от приблизительно 10 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 60 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 50 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 40 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 30 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 25 мл, от приблизительно 10 мл до приблизительно 20 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 20 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 20 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 20 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 20 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 20 мл до приблизительно 1,0 л,

от приблизительно 20 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 60 мл,

от приблизительно 20 мл до приблизительно 50 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 40 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 30 мл, от приблизительно 20 мл до приблизительно 25 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 25 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 25 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 25 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 25 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 25 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 25 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 200 мл,

от приблизительно 25 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 60 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 50 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 40 мл, от приблизительно 25 мл до приблизительно 30 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 30 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 30 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 30 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 30 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 30 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 30 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 700 мл,

от приблизительно 30 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 60 мл,

от приблизительно 30 мл до приблизительно 50 мл, от приблизительно 30 мл до приблизительно 40 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 40 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 40 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 40 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 40 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 40 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 40 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 500 мл,

от приблизительно 40 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 60 мл, от приблизительно 40 мл до приблизительно 50 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 50 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 50 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 50 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 50 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 50 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 50 мл до приблизительно 900 мл,

от приблизительно 50 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 100 мл,

от приблизительно 50 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 50 мл до приблизительно 60 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 60 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 60 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 60 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 60 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 60 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 60 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 500 мл,

от приблизительно 60 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 100 мл, от приблизительно 60 мл до приблизительно 80 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 80 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 80 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 80 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 80 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 80 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 80 мл до приблизительно 900 мл,

от приблизительно 80 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 80 мл до приблизительно 100 мл,

от приблизительно 100 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 100 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 100 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 100 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 100 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 100 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 100 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 600 мл,

от приблизительно 100 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 100 мл до приблизительно 150 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 150 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 150 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 150 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 150 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 150 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 150 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 400 мл,

от приблизительно 150 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 150 мл до приблизительно 200 мл, от приблизительно 200 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 200 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 200 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 200 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 200 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 200 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 200 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 200 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 200 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 200 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 200 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 200 мл до приблизительно 400 мл,

от приблизительно 200 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 200 мл до приблизительно 250 мл, от приблизительно 250 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 250 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 250 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 250 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 250 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 250 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 250 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 250 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 250 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 250 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 250 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 250 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 250 мл до приблизительно 300 мл,

от приблизительно 300 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 300 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 300 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 300 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 300 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 300 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 300 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 300 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 300 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 300 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 300 мл до приблизительно 500 мл, от приблизительно 300 мл до приблизительно 400 мл, от приблизительно 400 мл до приблизительно 1,5 л,

от приблизительно 400 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 400 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 400 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 400 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 400 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 400 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 400 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 400 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 400 мл до приблизительно 600 мл, от приблизительно 400 мл до приблизительно 500 мл,

от приблизительно 500 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 500 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 500 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 500 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 500 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 500 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 500 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 500 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 500 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 500 мл до приблизительно 600 мл,

от приблизительно 600 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 600 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 600 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 600 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 600 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 600 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 600 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 600 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 600 мл до приблизительно 700 мл, от приблизительно 700 мл до приблизительно 1,5 л,

от приблизительно 700 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 700 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 700 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 700 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 700 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 700 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 700 мл до приблизительно 800 мл, от приблизительно 800 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 800 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 800 мл до приблизительно 1,3 л,

от приблизительно 800 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 800 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 800 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 800 мл до приблизительно 900 мл, от приблизительно 900 мл до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 900 мл до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 900 мл до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 900 мл до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 900 мл до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 900 мл до приблизительно 1,0 л, от приблизительно 1,0 л до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 1,0 л до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 1,0 л до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 1,0 л до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 1,0 л до приблизительно 1,1 л, от приблизительно 1,1 л до приблизительно 1,5 л,

от приблизительно 1,1 л до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 1,1 л до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 1,1 л до приблизительно 1,2 л, от приблизительно 1,2 л до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 1,2 л до приблизительно 1,4 л, от приблизительно 1,2 л до приблизительно 1,3 л, от приблизительно 1,3 л до приблизительно 1,5 л, от приблизительно 1,3 л до приблизительно 1,4 л или от приблизительно 1,4 л до приблизительно 1,5 л.

В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу, например встряхиваемую колбу с дефлекторами. Встряхиваемая колба может иметь объем, например, от приблизительно 250 мл до приблизительно 300 мл, от приблизительно 300 мл до приблизительно 400 мл или от приблизительно 400 мл до приблизительно 500 мл. Встряхиваемая колба может содержать по меньшей мере одну газопроницаемую поверхность (например, по меньшей мере одну поверхность с газопроницаемой мембраной, которая также может выступать в качестве стерильного барьера) и/или по меньшей мере одну крышку с отверстием. Со своей наружной поверхности встряхиваемая колба может иметь такое строение, которое обеспечивает устойчивое размещение встряхиваемой колбы в инкубаторе для культуры тканей (например, роторном инкубаторе).

На внутреннюю поверхность встряхиваемой колбы может быть нанесено по меньшей мере одно покрытие (например, по меньшей мере одно покрытие в виде желатина, коллагена, поли-L-орнитина, полистирола и ламинина). Типичные встряхиваемые колбы, которые можно применять в любом из способов, описанных в данном документе, можно приобрести у Corning Inc. (Тьюксбери, Массачусетс), Presens (Бреннбю, Дания), Nalge-Nunc International (Рочестер, Нью-Йорк). Типичные встряхиваемые колбы включают встряхиваемые колбы с дефлекторами, или колбы Эрленмейера, или любые их модифицированные варианты, признанные в данной области техники. Дополнительные примеры встряхиваемых колб (например, различные формы и размеры встряхиваемых колб) и покрытий внутренней поверхности встряхиваемых колб известны из уровня техники, и их можно применять в способах по настоящему изобретению.

В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования может подвергаться перемешиванию вращением со скоростью от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 400 об/мин (например, от приблизительно 150 об/мин до приблизительно 350 об/мин или от приблизительно 200 об/мин до приблизительно 300 об/мин). Например, испытательный сосуд для культивирования может подвергаться перемешиванию вращением со скоростью от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 400 об/мин, от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 380 об/мин, от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 360 об/мин, от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 340 об/мин,

от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 320 об/мин, от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 300 об/мин, от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 280 об/мин, от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 260 об/мин, от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 240 об/мин, от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 220 об/мин, от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 200 об/мин, от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 180 об/мин, от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 160 об/мин,

от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 140 об/мин, от приблизительно 140 об/мин до приблизительно 400 об/мин, от приблизительно 140 об/мин до приблизительно 380 об/мин, от приблизительно 140 об/мин до приблизительно 360 об/мин, от приблизительно 140 об/мин до приблизительно 340 об/мин, от приблизительно 140 об/мин до приблизительно 320 об/мин, от приблизительно 140 об/мин до приблизительно 300 об/мин, от приблизительно 140 об/мин до приблизительно 280 об/мин, от приблизительно 140 об/мин до приблизительно 260 об/мин,

от приблизительно 140 об/мин до приблизительно 240 об/мин, от приблизительно 140 об/мин до приблизительно 220 об/мин, от приблизительно 140 об/мин до приблизительно 200 об/мин, от приблизительно 140 об/мин до приблизительно 180 об/мин, от приблизительно 140 об/мин до приблизительно 160 об/мин, от приблизительно 160 об/мин до приблизительно 400 об/мин, от приблизительно 160 об/мин до приблизительно 380 об/мин, от приблизительно 160 об/мин до приблизительно 360 об/мин, от приблизительно 160 об/мин до приблизительно 340 об/мин,

от приблизительно 160 об/мин до приблизительно 320 об/мин, от приблизительно 160 об/мин до приблизительно 300 об/мин, от приблизительно 160 об/мин до приблизительно 280 об/мин, от приблизительно 160 об/мин до приблизительно 260 об/мин, от приблизительно 160 об/мин до приблизительно 240 об/мин, от приблизительно 160 об/мин до приблизительно 220 об/мин, от приблизительно 160 об/мин до приблизительно 200 об/мин, от приблизительно 160 об/мин до приблизительно 180 об/мин, от приблизительно 180 об/мин до приблизительно 400 об/мин,

от приблизительно 180 об/мин до приблизительно 380 об/мин, от приблизительно 180 об/мин до приблизительно 360 об/мин, от приблизительно 180 об/мин до приблизительно 340 об/мин, от приблизительно 180 об/мин до приблизительно 320 об/мин, от приблизительно 180 об/мин до приблизительно 300 об/мин, от приблизительно 180 об/мин до приблизительно 280 об/мин, от приблизительно 180 об/мин до приблизительно 260 об/мин, от приблизительно 180 об/мин до приблизительно 240 об/мин, от приблизительно 180 об/мин до приблизительно 220 об/мин, от приблизительно 180 об/мин до приблизительно 200 об/мин, от приблизительно 200 об/мин до приблизительно 400 об/мин,

от приблизительно 200 об/мин до приблизительно 380 об/мин, от приблизительно 200 об/мин до приблизительно 360 об/мин, от приблизительно 200 об/мин до приблизительно 340 об/мин, от приблизительно 200 об/мин до приблизительно 320 об/мин, от приблизительно 200 об/мин до приблизительно 300 об/мин, от приблизительно 200 об/мин до приблизительно 280 об/мин, от приблизительно 200 об/мин до приблизительно 260 об/мин, от приблизительно 200 об/мин до приблизительно 240 об/мин, от приблизительно 200 об/мин до приблизительно 220 об/мин, от приблизительно 220 об/мин до приблизительно 400 об/мин, от приблизительно 220 об/мин до приблизительно 380 об/мин,

от приблизительно 220 об/мин до приблизительно 360 об/мин, от приблизительно 220 об/мин до приблизительно 340 об/мин, от приблизительно 220 об/мин до приблизительно 320 об/мин, от приблизительно 220 об/мин до приблизительно 300 об/мин, от приблизительно 220 об/мин до приблизительно 280 об/мин, от приблизительно 220 об/мин до приблизительно 260 об/мин, от приблизительно 220 об/мин до приблизительно 240 об/мин, от приблизительно 240 об/мин до приблизительно 400 об/мин, от приблизительно 240 об/мин до приблизительно 380 об/мин, от приблизительно 240 об/мин до приблизительно 360 об/мин, от приблизительно 240 об/мин до приблизительно 340 об/мин,

от приблизительно 240 об/мин до приблизительно 320 об/мин, от приблизительно 240 об/мин до приблизительно 300 об/мин, от приблизительно 240 об/мин до приблизительно 280 об/мин, от приблизительно 240 об/мин до приблизительно 260 об/мин, от приблизительно 260 об/мин до приблизительно 400 об/мин, от приблизительно 260 об/мин до приблизительно 380 об/мин, от приблизительно 260 об/мин до приблизительно 360 об/мин, от приблизительно 260 об/мин до приблизительно 340 об/мин, от приблизительно 260 об/мин до приблизительно 320 об/мин,

от приблизительно 260 об/мин до приблизительно 300 об/мин, от приблизительно 260 об/мин до приблизительно 280 об/мин, от приблизительно 280 об/мин до приблизительно 400 об/мин, от приблизительно 280 об/мин до приблизительно 380 об/мин, от приблизительно 280 об/мин до приблизительно 360 об/мин, от приблизительно 280 об/мин до приблизительно 340 об/мин, от приблизительно 280 об/мин до приблизительно 320 об/мин, от приблизительно 280 об/мин до приблизительно 300 об/мин, от приблизительно 300 об/мин до приблизительно 400 об/мин,

от приблизительно 300 об/мин до приблизительно 380 об/мин, от приблизительно 300 об/мин до приблизительно 360 об/мин, от приблизительно 300 об/мин до приблизительно 340 об/мин, от приблизительно 300 об/мин до приблизительно 320 об/мин, от приблизительно 320 об/мин до приблизительно 400 об/мин, от приблизительно 320 об/мин до приблизительно 380 об/мин,

от приблизительно 320 об/мин до приблизительно 360 об/мин, от приблизительно 320 об/мин до приблизительно 340 об/мин, от приблизительно 340 об/мин до приблизительно 400 об/мин, от приблизительно 340 об/мин до приблизительно 380 об/мин, от приблизительно 340 об/мин до приблизительно 360 об/мин, от приблизительно 360 об/мин до приблизительно 400 об/мин, от приблизительно 360 об/мин до приблизительно 380 об/мин или от приблизительно 380 об/мин до приблизительно 400 об/мин.

В некоторых вариантах осуществления перемешивание вращением в отношении испытательного сосуда для культивирования можно проводить при помощи роторного инкубатора с диаметром выброса (орбиты) от приблизительно 25 мм до приблизительно 50 мм. В некоторых вариантах осуществления в испытательном сосуде для культивирования может иметь место концентрация сенсибилизирующего средства от приблизительно 0 ppm до приблизительно 5000 ppm (например, от приблизительно 0 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 120 ppm или от приблизительно 50 ppm до приблизительно 100 ppm). В некоторых вариантах осуществления в испытательном сосуде для культивирования может иметь место концентрация сенсибилизирующего средства (например, противовспенивателя, например, любого из противовспенивателей, описанных в данном документе) от 0 ppm до приблизительно 200 ppm, от 0 ppm до приблизительно 190 ppm, от 0 ppm до приблизительно 180 ppm, от 0 ppm до приблизительно 170 ppm, от 0 ppm до приблизительно 160 ppm, от 0 ppm до приблизительно 150 ppm, от 0 ppm до приблизительно 140 ppm, от 0 ppm до приблизительно 130 ppm, от 0 ppm до приблизительно 120 ppm, от 0 ppm до приблизительно 110 ppm, от 0 ppm до приблизительно 100 ppm, от 0 ppm до приблизительно 90 ppm, от 0 ppm до приблизительно 80 ppm, от 0 ppm до приблизительно 70 ppm,

от 0 ppm до приблизительно 60 ppm, от 0 ppm до приблизительно 50 ppm, от 0 ppm до приблизительно 40 ppm, от 0 ppm до приблизительно 30 ppm, от 0 ppm до приблизительно 20 ppm, от 0 ppm до приблизительно 10 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 190 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 180 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 170 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 160 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 130 ppm,

от приблизительно 10 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 110 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 100 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 90 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 80 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 70 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 60 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 50 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 40 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 30 ppm,

от приблизительно 10 ppm до приблизительно 20 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 190 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 180 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 170 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 160 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 130 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 110 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 100 ppm,

от приблизительно 20 ppm до приблизительно 90 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 80 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 70 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 60 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 50 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 40 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 30 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 190 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 180 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 170 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 160 ppm,

от приблизительно 30 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 130 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 110 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 100 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 90 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 80 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 70 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 60 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 50 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 40 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 190 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 180 ppm,

от приблизительно 40 ppm до приблизительно 170 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 160 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 130 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 110 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 100 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 90 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 80 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 70 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 60 ppm,

от приблизительно 40 ppm до приблизительно 50 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 190 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 180 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 170 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 160 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 130 ppm,

от приблизительно 50 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 110 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 100 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 90 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 80 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 70 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 60 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 190 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 180 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 170 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 160 ppm,

от приблизительно 60 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 130 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 110 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 100 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 90 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 80 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 70 ppm, от приблизительно 70 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 70 ppm до приблизительно 190 ppm, от приблизительно 70 ppm до приблизительно 180 ppm,

от приблизительно 70 ppm до приблизительно 170 ppm, от приблизительно 70 ppm до приблизительно 160 ppm, от приблизительно 70 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 70 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 70 ppm до приблизительно 130 ppm, от приблизительно 70 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 70 ppm до приблизительно 110 ppm, от приблизительно 70 ppm до приблизительно 100 ppm, от приблизительно 70 ppm до приблизительно 90 ppm, от приблизительно 70 ppm до приблизительно 80 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 190 ppm,

от приблизительно 80 ppm до приблизительно 180 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 170 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 160 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 130 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 110 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 100 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 90 ppm, от приблизительно 90 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 90 ppm до приблизительно 190 ppm,

от приблизительно 90 ppm до приблизительно 180 ppm, от приблизительно 90 ppm до приблизительно 170 ppm, от приблизительно 90 ppm до приблизительно 160 ppm, от приблизительно 90 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 90 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 90 ppm до приблизительно 130 ppm, от приблизительно 90 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 90 ppm до приблизительно 110 ppm, от приблизительно 90 ppm до приблизительно 100 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 190 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 180 ppm,

от приблизительно 100 ppm до приблизительно 170 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 160 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 130 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 110 ppm, от приблизительно 110 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 110 ppm до приблизительно 190 ppm, от приблизительно 110 ppm до приблизительно 180 ppm, от приблизительно 110 ppm до приблизительно 170 ppm, от приблизительно 110 ppm до приблизительно 160 ppm,

от приблизительно 110 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 110 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 110 ppm до приблизительно 130 ppm, от приблизительно 110 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 190 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 180 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 170 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 160 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 130 ppm,

от приблизительно 130 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 130 ppm до приблизительно 190 ppm, от приблизительно 130 ppm до приблизительно 180 ppm, от приблизительно 130 ppm до приблизительно 170 ppm, от приблизительно 130 ppm до приблизительно 160 ppm, от приблизительно 130 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 130 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 190 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 180 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 170 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 160 ppm,

от приблизительно 140 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 190 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 180 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 170 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 160 ppm, от приблизительно 160 ppm до приблизительно 200 ppm,

от приблизительно 160 ppm до приблизительно 190 ppm, от приблизительно 160 ppm до приблизительно 180 ppm, от приблизительно 160 ppm до приблизительно 170 ppm, от приблизительно 170 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 170 ppm до приблизительно 190 ppm, от приблизительно 170 ppm до приблизительно 180 ppm, от приблизительно 180 ppm до приблизительно 200 ppm,

от приблизительно 180 ppm до приблизительно 190 ppm или от приблизительно 190 ppm до приблизительно 200 ppm (где сенсибилизирующее средство присутствует в жидкой культуральной среде, находящейся в испытательном сосуде для культивирования, например, в течение определенного периода времени в ходе культивирования).

В некоторых вариантах осуществления в испытательном сосуде для культивирования может иметь место концентрация сенсибилизирующего средства (например, противовспенивателя, например, любого из противовспенивателей, описанных в данном документе) от 0 ppm до приблизительно 5000 ppm, от 0 ppm до приблизительно 4500 ppm, от 0 ppm до приблизительно 4000 ppm, от 0 ppm до приблизительно 3500 ppm, от 0 ppm до приблизительно 3000 ppm, от 0 ppm до приблизительно 2500 ppm, от 0 ppm до приблизительно 2000 ppm, от 0 ppm до приблизительно 1500 ppm, от 0 ppm до приблизительно 1000 ppm,

от 0 ppm до приблизительно 800 ppm, от 0 ppm до приблизительно 600 ppm, от 0 ppm до приблизительно 500 ppm, от 0 ppm до приблизительно 450 ppm, от 0 ppm до приблизительно 400 ppm, от 0 ppm до приблизительно 350 ppm, от 0 ppm до приблизительно 300 ppm, от 0 ppm до приблизительно 250 ppm, от 0 ppm до приблизительно 200 ppm, от 0 ppm до приблизительно 150 ppm, от 0 ppm до приблизительно 140 ppm, от 0 ppm до приблизительно 120 ppm, от 0 ppm до приблизительно 100 ppm, от 0 ppm до приблизительно 80 ppm, от 0 ppm до приблизительно 60 ppm, от 0 ppm до приблизительно 50 ppm,

от 0 ppm до приблизительно 40 ppm, от 0 ppm до приблизительно 30 ppm, от 0 ppm до приблизительно 20 ppm, от 0 ppm до приблизительно 10 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 2500 ppm,

от приблизительно 10 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 1000 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 800 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 600 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 500 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 450 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 400 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 350 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 300 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 250 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 200 ppm,

от приблизительно 10 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 100 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 80 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 60 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 50 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 40 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 30 ppm, от приблизительно 10 ppm до приблизительно 20 ppm,

от приблизительно 20 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 1000 ppm,

от приблизительно 20 ppm до приблизительно 800 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 600 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 500 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 450 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 400 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 350 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 300 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 250 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 120 ppm,

от приблизительно 20 ppm до приблизительно 100 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 80 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 60 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 50 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 40 ppm, от приблизительно 20 ppm до приблизительно 30 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 2500 ppm,

от приблизительно 30 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 1000 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 800 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 600 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 500 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 450 ppm,

от приблизительно 30 ppm до приблизительно 400 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 350 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 300 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 250 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 100 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 80 ppm,

от приблизительно 30 ppm до приблизительно 60 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 50 ppm, от приблизительно 30 ppm до приблизительно 40 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 3500 ppm,

от приблизительно 40 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 1000 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 800 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 600 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 500 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 450 ppm,

от приблизительно 40 ppm до приблизительно 400 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 350 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 300 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 250 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 100 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 80 ppm,

от приблизительно 40 ppm до приблизительно 60 ppm, от приблизительно 40 ppm до приблизительно 50 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 3000 ppm,

от приблизительно 50 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 1000 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 800 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 600 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 500 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 450 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 400 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 350 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 300 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 250 ppm,

от приблизительно 50 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 100 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 80 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 60 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 4500 ppm,

от приблизительно 60 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 1000 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 800 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 600 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 500 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 450 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 400 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 350 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 300 ppm,

от приблизительно 60 ppm до приблизительно 250 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 100 ppm, от приблизительно 60 ppm до приблизительно 80 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 1000 ppm,

от приблизительно 80 ppm до приблизительно 800 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 600 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 500 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 450 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 400 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 350 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 300 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 250 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 120 ppm,

от приблизительно 80 ppm до приблизительно 100 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 1000 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 800 ppm,

от приблизительно 100 ppm до приблизительно 600 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 500 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 450 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 400 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 350 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 300 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 250 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 150 ppm,

от приблизительно 100 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 100 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 1000 ppm,

от приблизительно 120 ppm до приблизительно 800 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 600 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 500 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 450 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 400 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 350 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 300 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 250 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 150 ppm, от приблизительно 120 ppm до приблизительно 140 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 5000 ppm,

от приблизительно 140 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 1000 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 800 ppm,

от приблизительно 140 ppm до приблизительно 600 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 500 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 450 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 400 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 350 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 300 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 250 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 140 ppm до приблизительно 150 ppm,

от приблизительно 150 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 1000 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 800 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 600 ppm,

от приблизительно 150 ppm до приблизительно 500 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 450 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 400 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 350 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 300 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 250 ppm, от приблизительно 150 ppm до приблизительно 200 ppm, от приблизительно 200 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 200 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 200 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 200 ppm до приблизительно 3500 ppm,

от приблизительно 200 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 200 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 200 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 200 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 200 ppm до приблизительно 1000 ppm, от приблизительно 200 ppm до приблизительно 800 ppm, от приблизительно 200 ppm до приблизительно 600 ppm, от приблизительно 200 ppm до приблизительно 500 ppm, от приблизительно 200 ppm до приблизительно 450 ppm, от приблизительно 200 ppm до приблизительно 400 ppm, от приблизительно 200 ppm до приблизительно 350 ppm, от приблизительно 200 ppm до приблизительно 300 ppm, от приблизительно 200 ppm до приблизительно 250 ppm, от приблизительно 250 ppm до приблизительно 5000 ppm,

от приблизительно 250 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 250 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 250 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 250 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 250 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 250 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 250 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 250 ppm до приблизительно 1000 ppm, от приблизительно 250 ppm до приблизительно 800 ppm, от приблизительно 250 ppm до приблизительно 600 ppm, от приблизительно 250 ppm до приблизительно 500 ppm,

от приблизительно 250 ppm до приблизительно 450 ppm, от приблизительно 250 ppm до приблизительно 400 ppm, от приблизительно 250 ppm до приблизительно 350 ppm, от приблизительно 250 ppm до приблизительно 300 ppm, от приблизительно 300 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 300 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 300 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 300 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 300 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 300 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 300 ppm до приблизительно 2000 ppm,

от приблизительно 300 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 300 ppm до приблизительно 1000 ppm, от приблизительно 300 ppm до приблизительно 800 ppm, от приблизительно 300 ppm до приблизительно 600 ppm, от приблизительно 300 ppm до приблизительно 500 ppm, от приблизительно 300 ppm до приблизительно 450 ppm, от приблизительно 300 ppm до приблизительно 400 ppm, от приблизительно 300 ppm до приблизительно 350 ppm, от приблизительно 350 ppm до приблизительно 5000 ppm,

от приблизительно 350 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 350 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 350 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 350 ppm до приблизительно 3000 ppm,

от приблизительно 350 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 350 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 350 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 350 ppm до приблизительно 1000 ppm, от приблизительно 350 ppm до приблизительно 800 ppm, от приблизительно 350 ppm до приблизительно 600 ppm, от приблизительно 350 ppm до приблизительно 500 ppm, от приблизительно 350 ppm до приблизительно 450 ppm, от приблизительно 350 ppm до приблизительно 400 ppm, от приблизительно 400 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 400 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 400 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 400 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 400 ppm до приблизительно 3000 ppm,

от приблизительно 400 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 400 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 400 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 400 ppm до приблизительно 1000 ppm, от приблизительно 400 ppm до приблизительно 800 ppm, от приблизительно 400 ppm до приблизительно 600 ppm, от приблизительно 400 ppm до приблизительно 500 ppm, от приблизительно 400 ppm до приблизительно 450 ppm, от приблизительно 450 ppm до приблизительно 5000 ppm,

от приблизительно 450 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 450 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 450 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 450 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 450 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 450 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 450 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 450 ppm до приблизительно 1000 ppm, от приблизительно 450 ppm до приблизительно 800 ppm, от приблизительно 450 ppm до приблизительно 600 ppm, от приблизительно 450 ppm до приблизительно 500 ppm,

от приблизительно 500 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 500 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 500 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 500 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 500 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 500 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 500 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 500 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 500 ppm до приблизительно 1000 ppm,

от приблизительно 500 ppm до приблизительно 800 ppm, от приблизительно 500 ppm до приблизительно 600 ppm, от приблизительно 600 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 600 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 600 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 600 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 600 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 600 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 600 ppm до приблизительно 2000 ppm,

от приблизительно 600 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 600 ppm до приблизительно 1000 ppm, от приблизительно 600 ppm до приблизительно 800 ppm, от приблизительно 800 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 800 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 800 ppm до приблизительно 4000 ppm,

от приблизительно 800 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 800 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 800 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 800 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 800 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 800 ppm до приблизительно 1000 ppm, от приблизительно 1000 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 1000 ppm до приблизительно 4500 ppm,

от приблизительно 1000 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 1000 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 1000 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 1000 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 1000 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 1000 ppm до приблизительно 1500 ppm, от приблизительно 1500 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 1500 ppm до приблизительно 4500 ppm,

от приблизительно 1500 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 1500 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 1500 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 1500 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 1500 ppm до приблизительно 2000 ppm, от приблизительно 2000 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 2000 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 2000 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 2000 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 2000 ppm до приблизительно 3000 ppm,

от приблизительно 2000 ppm до приблизительно 2500 ppm, от приблизительно 2500 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 2500 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 2500 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 2500 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 2500 ppm до приблизительно 3000 ppm, от приблизительно 3000 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 3000 ppm до приблизительно 4500 ppm,

от приблизительно 3000 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 3000 ppm до приблизительно 3500 ppm, от приблизительно 3500 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 3500 ppm до приблизительно 4500 ppm, от приблизительно 3500 ppm до приблизительно 4000 ppm, от приблизительно 4000 ppm до приблизительно 5000 ppm, от приблизительно 4000 ppm до приблизительно 4500 ppm или от приблизительно 4500 ppm до приблизительно 5000 ppm (где сенсибилизирующее средство присутствует в жидкой культуральной среде, находящейся в испытательном сосуде для культивирования, например, в течение определенного периода времени в ходе культивирования).

В некоторых вариантах осуществления в испытательном сосуде для культивирования может иметь место концентрация вещества-протектора, которая составляет от приблизительно 1 г/л до приблизительно 10 г/л (например, от приблизительно 2 г/л до приблизительно 8 г/л, от приблизительно 3 г/л до приблизительно 7 г/л, от приблизительно 4 г/л до приблизительно 6 г/л или приблизительно 5 г/л). В некоторых вариантах осуществления в испытательном сосуде для культивирования может иметь место концентрация вещества-протектора (например, любого из веществ-протекторов, описанных в данном документе или известных из уровня техники) от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 10,0 г/л, от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 9,5 г/л, от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 9,0 г/л, от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 8,5 г/л, от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 8,0 г/л, от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 7,5 г/л, от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 7,0 г/л, от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 6,5 г/л,

от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 6,0 г/л, от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 5,5 г/л, от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 5,0 г/л, от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 4,5 г/л, от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 4,0 г/л, от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 3,5 г/л, от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 3,0 г/л, от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 2,5 г/л, от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 2,0 г/л, от приблизительно 1,0 г/л до приблизительно 1,5 г/л, от приблизительно 1,5 г/л до приблизительно 10,0 г/л, от приблизительно 1,5 г/л до приблизительно 9,5 г/л, от приблизительно 1,5 г/л до приблизительно 9,0 г/л, от приблизительно 1,5 г/л до приблизительно 8,5 г/л, от приблизительно 1,5 г/л до приблизительно 8,0 г/л,

от приблизительно 1,5 г/л до приблизительно 7,5 г/л, от приблизительно 1,5 г/л до приблизительно 7,0 г/л, от приблизительно 1,5 г/л до приблизительно 6,5 г/л, от приблизительно 1,5 г/л до приблизительно 6,0 г/л, от приблизительно 1,5 г/л до приблизительно 5,5 г/л, от приблизительно 1,5 г/л до приблизительно 5,0 г/л, от приблизительно 1,5 г/л до приблизительно 4,5 г/л, от приблизительно 1,5 г/л до приблизительно 4,0 г/л, от приблизительно 1,5 г/л до приблизительно 3,5 г/л, от приблизительно 1,5 г/л до приблизительно 3,0 г/л,

от приблизительно 1,5 г/л до приблизительно 2,5 г/л, от приблизительно 1,5 г/л до приблизительно 2,0 г/л, от приблизительно 2,0 г/л до приблизительно 10,0 г/л, от приблизительно 2,0 г/л до приблизительно 9,5 г/л, от приблизительно 2,0 г/л до приблизительно 9,0 г/л, от приблизительно 2,0 г/л до приблизительно 8,5 г/л, от приблизительно 2,0 г/л до приблизительно 8,0 г/л, от приблизительно 2,0 г/л до приблизительно 7,5 г/л, от приблизительно 2,0 г/л до приблизительно 7,0 г/л, от приблизительно 2,0 г/л до приблизительно 6,5 г/л,

от приблизительно 2,0 г/л до приблизительно 6,0 г/л, от приблизительно 2,0 г/л до приблизительно 5,5 г/л, от приблизительно 2,0 г/л до приблизительно 5,0 г/л, от приблизительно 2,0 г/л до приблизительно 4,5 г/л, от приблизительно 2,0 г/л до приблизительно 4,0 г/л, от приблизительно 2,0 г/л до приблизительно 3,5 г/л, от приблизительно 2,0 г/л до приблизительно 3,0 г/л, от приблизительно 2,0 г/л до приблизительно 2,5 г/л, от приблизительно 2,5 г/л до приблизительно 10,0 г/л, от приблизительно 2,5 г/л до приблизительно 9,5 г/л, от приблизительно 2,5 г/л до приблизительно 9,0 г/л, от приблизительно 2,5 г/л до приблизительно 8,5 г/л, от приблизительно 2,5 г/л до приблизительно 8,0 г/л, от приблизительно 2,5 г/л до приблизительно 7,5 г/л, от приблизительно 2,5 г/л до приблизительно 7,0 г/л,

от приблизительно 2,5 г/л до приблизительно 6,5 г/л, от приблизительно 2,5 г/л до приблизительно 6,0 г/л, от приблизительно 2,5 г/л до приблизительно 5,5 г/л, от приблизительно 2,5 г/л до приблизительно 5,0 г/л, от приблизительно 2,5 г/л до приблизительно 4,5 г/л, от приблизительно 2,5 г/л до приблизительно 4,0 г/л, от приблизительно 2,5 г/л до приблизительно 3,5 г/л, от приблизительно 2,5 г/л до приблизительно 3,0 г/л, от приблизительно 3,0 г/л до приблизительно 10,0 г/л, от приблизительно 3,0 г/л до приблизительно 9,5 г/л,

от приблизительно 3,0 г/л до приблизительно 9,0 г/л, от приблизительно 3,0 г/л до приблизительно 8,5 г/л, от приблизительно 3,0 г/л до приблизительно 8,0 г/л, от приблизительно 3,0 г/л до приблизительно 7,5 г/л, от приблизительно 3,0 г/л до приблизительно 7,0 г/л, от приблизительно 3,0 г/л до приблизительно 6,5 г/л, от приблизительно 3,0 г/л до приблизительно 6,0 г/л, от приблизительно 3,0 г/л до приблизительно 5,5 г/л, от приблизительно 3,0 г/л до приблизительно 5,0 г/л, от приблизительно 3,0 г/л до приблизительно 4,5 г/л, от приблизительно 3,0 г/л до приблизительно 4,0 г/л, от приблизительно 3,0 г/л до приблизительно 3,5 г/л, от приблизительно 3,5 г/л до приблизительно 10,0 г/л,

от приблизительно 3,5 г/л до приблизительно 9,5 г/л, от приблизительно 3,5 г/л до приблизительно 9,0 г/л, от приблизительно 3,5 г/л до приблизительно 8,5 г/л, от приблизительно 3,5 г/л до приблизительно 8,0 г/л, от приблизительно 3,5 г/л до приблизительно 7,5 г/л, от приблизительно 3,5 г/л до приблизительно 7,0 г/л, от приблизительно 3,5 г/л до приблизительно 6,5 г/л, от приблизительно 3,5 г/л до приблизительно 6,0 г/л, от приблизительно 3,5 г/л до приблизительно 5,5 г/л, от приблизительно 3,5 г/л до приблизительно 5,0 г/л,

от приблизительно 3,5 г/л до приблизительно 4,5 г/л, от приблизительно 3,5 г/л до приблизительно 4,0 г/л, от приблизительно 4,0 г/л до приблизительно 10,0 г/л, от приблизительно 4,0 г/л до приблизительно 9,5 г/л, от приблизительно 4,0 г/л до приблизительно 9,0 г/л, от приблизительно 4,0 г/л до приблизительно 8,5 г/л, от приблизительно 4,0 г/л до приблизительно 8,0 г/л, от приблизительно 4,0 г/л до приблизительно 7,5 г/л, от приблизительно 4,0 г/л до приблизительно 7,0 г/л, от приблизительно 4,0 г/л до приблизительно 6,5 г/л,

от приблизительно 4,0 г/л до приблизительно 6,0 г/л, от приблизительно 4,0 г/л до приблизительно 5,5 г/л, от приблизительно 4,0 г/л до приблизительно 5,0 г/л, от приблизительно 4,0 г/л до приблизительно 4,5 г/л, от приблизительно 4,5 г/л до приблизительно 10,0 г/л, от приблизительно 4,5 г/л до приблизительно 9,5 г/л, от приблизительно 4,5 г/л до приблизительно 9,0 г/л, от приблизительно 4,5 г/л до приблизительно 8,5 г/л, от приблизительно 4,5 г/л до приблизительно 8,0 г/л, от приблизительно 4,5 г/л до приблизительно 7,5 г/л,

от приблизительно 4,5 г/л до приблизительно 7,0 г/л, от приблизительно 4,5 г/л до приблизительно 6,5 г/л, от приблизительно 4,5 г/л до приблизительно 6,0 г/л, от приблизительно 4,5 г/л до приблизительно 5,5 г/л, от приблизительно 4,5 г/л до приблизительно 5,0 г/л, от приблизительно 5,0 г/л до приблизительно 10,0 г/л, от приблизительно 5,0 г/л до приблизительно 9,5 г/л, от приблизительно 5,0 г/л до приблизительно 9,0 г/л, от приблизительно 5,0 г/л до приблизительно 8,5 г/л, от приблизительно 5,0 г/л до приблизительно 8,0 г/л, от приблизительно 5,0 г/л до приблизительно 7,5 г/л, от приблизительно 5,0 г/л до приблизительно 7,0 г/л, от приблизительно 5,0 г/л до приблизительно 6,5 г/л,

от приблизительно 5,0 г/л до приблизительно 6,0 г/л, от приблизительно 5,0 г/л до приблизительно 5,5 г/л, от приблизительно 5,5 г/л до приблизительно 10,0 г/л, от приблизительно 5,5 г/л до приблизительно 9,5 г/л, от приблизительно 5,5 г/л до приблизительно 9,0 г/л, от приблизительно 5,5 г/л до приблизительно 8,5 г/л, от приблизительно 5,5 г/л до приблизительно 8,0 г/л, от приблизительно 5,5 г/л до приблизительно 7,5 г/л, от приблизительно 5,5 г/л до приблизительно 7,0 г/л, от приблизительно 5,5 г/л до приблизительно 6,5 г/л,

от приблизительно 5,5 г/л до приблизительно 6,0 г/л, от приблизительно 6,0 г/л до приблизительно 10,0 г/л, от приблизительно 6,0 г/л до приблизительно 9,5 г/л, от приблизительно 6,0 г/л до приблизительно 9,0 г/л, от приблизительно 6,0 г/л до приблизительно 8,5 г/л, от приблизительно 6,0 г/л до приблизительно 8,0 г/л, от приблизительно 6,0 г/л до приблизительно 7,5 г/л, от приблизительно 6,0 г/л до приблизительно 7,0 г/л, от приблизительно 6,0 г/л до приблизительно 6,5 г/л, от приблизительно 6,5 г/л до приблизительно 10,0 г/л,

от приблизительно 6,5 г/л до приблизительно 9,5 г/л, от приблизительно 6,5 г/л до приблизительно 9,0 г/л, от приблизительно 6,5 г/л до приблизительно 8,5 г/л, от приблизительно 6,5 г/л до приблизительно 8,0 г/л, от приблизительно 6,5 г/л до приблизительно 7,5 г/л, от приблизительно 6,5 г/л до приблизительно 7,0 г/л, от приблизительно 7,0 г/л до приблизительно 10,0 г/л, от приблизительно 7,0 г/л до приблизительно 9,5 г/л, от приблизительно 7,0 г/л до приблизительно 9,0 г/л, от приблизительно 7,0 г/л до приблизительно 8,5 г/л,

от приблизительно 7,0 г/л до приблизительно 8,0 г/л, от приблизительно 7,0 г/л до приблизительно 7,5 г/л, от приблизительно 7,5 г/л до приблизительно 10,0 г/л, от приблизительно 7,5 г/л до приблизительно 9,5 г/л, от приблизительно 7,5 г/л до приблизительно 9,0 г/л, от приблизительно 7,5 г/л до приблизительно 8,5 г/л, от приблизительно 7,5 г/л до приблизительно 8,0 г/л, от приблизительно 8,0 г/л до приблизительно 10,0 г/л, от приблизительно 8,0 г/л до приблизительно 9,5 г/л, от приблизительно 8,0 г/л до приблизительно 9,0 г/л, от приблизительно 8,0 г/л до приблизительно 8,5 г/л, от приблизительно 8,5 г/л до приблизительно 10,0 г/л, от приблизительно 8,5 г/л до приблизительно 9,5 г/л,

от приблизительно 8,5 г/л до приблизительно 9,0 г/л, от приблизительно 9,0 г/л до приблизительно 10,0 г/л, от приблизительно 9,0 г/л до приблизительно 9,5 г/л или от приблизительно 9,5 г/л до приблизительно 10,0 г/л (где вещество-протектор присутствует в жидкой культуральной среде, находящейся в испытательном сосуде для культивирования, например, в течение определенного периода времени в ходе культивирования).

Промышленный биореактор может представлять собой перфузионный биореактор, биореактор периодического действия с подпиткой или биореактор периодического действия с подпиткой и концентрированием. В некоторых вариантах осуществления промышленный биореактор может иметь объем от приблизительно 5 л до приблизительно 20000 л (например, от приблизительно 50 л до приблизительно 10000 л). В некоторых вариантах осуществления промышленный биореактор может иметь объем более 5 л, более 10 л, более 50 л, более 100 л, более 1000 л, более 2000 л, более 5000 л, более 20000 л, более 100000 л или более 150000 л (например, более 1000 л). В некоторых вариантах осуществления промышленный биореактор может иметь объем от приблизительно 5 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 9500 л,

от приблизительно 5 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 4000 л,

от приблизительно 5 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 2000 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 1000 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 900 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 800 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 700 л,

от приблизительно 5 л до приблизительно 600 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 500 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 400 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 300 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 250 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 200 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 150 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 100 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 80 л,

от приблизительно 5 л до приблизительно 60 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 50 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 25 л, от приблизительно 5 л до приблизительно 10 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 9500 л,

от приблизительно 10 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 4000 л,

от приблизительно 10 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 2000 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 1000 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 900 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 800 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 700 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 600 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 500 л,

от приблизительно 10 л до приблизительно 400 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 300 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 250 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 200 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 150 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 100 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 80 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 60 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 50 л, от приблизительно 10 л до приблизительно 25 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 18000 л,

от приблизительно 25 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 8000 л,

от приблизительно 25 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 2500 л,

от приблизительно 25 л до приблизительно 2000 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 1000 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 900 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 800 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 700 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 600 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 500 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 400 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 300 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 250 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 200 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 150 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 100 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 80 л,

от приблизительно 25 л до приблизительно 60 л, от приблизительно 25 л до приблизительно 50 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 8500 л,

от приблизительно 50 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 3000 л,

от приблизительно 50 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 2000 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 1000 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 900 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 800 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 700 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 600 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 500 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 400 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 300 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 250 л,

от приблизительно 50 л до приблизительно 200 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 150 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 100 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 80 л, от приблизительно 50 л до приблизительно 60 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 10000 л,

от приблизительно 60 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 4500 л,

от приблизительно 60 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 2000 л,

от приблизительно 60 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 1000 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 900 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 800 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 700 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 600 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 500 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 400 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 300 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 250 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 200 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 150 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 100 л, от приблизительно 60 л до приблизительно 80 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 16000 л,

от приблизительно 80 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 4500 л,

от приблизительно 80 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 2000 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 1000 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 900 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 800 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 700 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 600 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 500 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 400 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 300 л,

от приблизительно 80 л до приблизительно 250 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 200 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 150 л, от приблизительно 80 л до приблизительно 100 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 8500 л,

от приблизительно 100 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 3000 л,

от приблизительно 100 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 2000 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 1000 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 900 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 800 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 700 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 600 л,

от приблизительно 100 л до приблизительно 500 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 400 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 300 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 250 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 200 л, от приблизительно 100 л до приблизительно 150 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 9000 л,

от приблизительно 150 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 3500 л,

от приблизительно 150 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 2000 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 1000 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 900 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 800 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 700 л,

от приблизительно 150 л до приблизительно 600 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 500 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 400 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 300 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 250 л, от приблизительно 150 л до приблизительно 200 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 18000 л,

от приблизительно 200 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 5500 л,

от приблизительно 200 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 2000 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 1000 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 900 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 800 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 700 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 600 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 500 л,

от приблизительно 200 л до приблизительно 400 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 300 л, от приблизительно 200 л до приблизительно 250 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 8000 л,

от приблизительно 250 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 2500 л,

от приблизительно 250 л до приблизительно 2000 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 1000 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 900 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 800 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 700 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 600 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 500 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 400 л, от приблизительно 250 л до приблизительно 300 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 20000 л,

от приблизительно 300 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 6000 л,

от приблизительно 300 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 2000 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 1000 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 900 л,

от приблизительно 300 л до приблизительно 800 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 700 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 600 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 500 л, от приблизительно 300 л до приблизительно 400 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 10000 л,

от приблизительно 400 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 2000 л,

от приблизительно 400 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 1000 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 900 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 800 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 700 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 600 л, от приблизительно 400 л до приблизительно 500 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 14000 л,

от приблизительно 500 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 4500 л,

от приблизительно 500 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 2000 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 1000 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 900 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 800 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 700 л, от приблизительно 500 л до приблизительно 600 л,

от приблизительно 600 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 6500 л,

от приблизительно 600 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 2000 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 1000 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 900 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 800 л, от приблизительно 600 л до приблизительно 700 л,

от приблизительно 700 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 6500 л,

от приблизительно 700 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 2000 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 1000 л,

от приблизительно 700 л до приблизительно 900 л, от приблизительно 700 л до приблизительно 800 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 10000 л,

от приблизительно 800 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 4500 л,

от приблизительно 800 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 2000 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 1000 л, от приблизительно 800 л до приблизительно 900 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 7500 л,

от приблизительно 900 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 2000 л,

от приблизительно 900 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 900 л до приблизительно 1000 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 9000 л,

от приблизительно 1000 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 4000 л,

от приблизительно 1000 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 2000 л, от приблизительно 1000 л до приблизительно 1500 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 12000 л,

от приблизительно 1500 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 1500 л до приблизительно 2000 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 20000 л,

от приблизительно 2000 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 9000 л,

от приблизительно 2000 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 4000 л,

от приблизительно 2000 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 2000 л до приблизительно 2500 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 9500 л,

от приблизительно 2500 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 4500 л,

от приблизительно 2500 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 2500 л до приблизительно 3000 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 9500 л,

от приблизительно 3000 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 3000 л до приблизительно 3500 л, от приблизительно 3500 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 3500 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 3500 л до приблизительно 16000 л,

от приблизительно 3500 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 3500 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 3500 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 3500 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 3500 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 3500 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 3500 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 3500 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 3500 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 3500 л до приблизительно 6500 л,

от приблизительно 3500 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 3500 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 3500 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 3500 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 3500 л до приблизительно 4000 л, от приблизительно 4000 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 4000 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 4000 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 4000 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 4000 л до приблизительно 12000 л,

от приблизительно 4000 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 4000 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 4000 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 4000 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 4000 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 4000 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 4000 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 4000 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 4000 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 4000 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 4000 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 4000 л до приблизительно 4500 л, от приблизительно 4500 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 4500 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 4500 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 4500 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 4500 л до приблизительно 12000 л,

от приблизительно 4500 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 4500 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 4500 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 4500 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 4500 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 4500 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 4500 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 4500 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 4500 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 4500 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 4500 л до приблизительно 5000 л, от приблизительно 5000 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 5000 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 5000 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 5000 л до приблизительно 14000 л,

от приблизительно 5000 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 5000 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 5000 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 5000 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 5000 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 5000 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 5000 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 5000 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 5000 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 5000 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 5000 л до приблизительно 5500 л, от приблизительно 5500 л до приблизительно 20000 л,

от приблизительно 5500 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 5500 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 5500 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 5500 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 5500 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 5500 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 5500 л до приблизительно 9000 л,

от приблизительно 5500 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 5500 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 5500 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 5500 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 5500 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 5500 л до приблизительно 6000 л, от приблизительно 6000 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 6000 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 6000 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 6000 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 6000 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 6000 л до приблизительно 10000 л,

от приблизительно 6000 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 6000 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 6000 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 6000 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 6000 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 6000 л до приблизительно 7000 л, от приблизительно 6000 л до приблизительно 6500 л, от приблизительно 6500 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 6500 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 6500 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 6500 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 6500 л до приблизительно 12000 л,

от приблизительно 6500 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 6500 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 6500 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 6500 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 6500 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 6500 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 6500 л до приблизительно 7000 л,

от приблизительно 7000 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 7000 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 7000 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 7000 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 7000 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 7000 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 7000 л до приблизительно 9500 л,

от приблизительно 7000 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 7000 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 7000 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 7000 л до приблизительно 7500 л, от приблизительно 7500 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 7500 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 7500 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 7500 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 7500 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 7500 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 7500 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 7500 л до приблизительно 9000 л,

от приблизительно 7500 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 7500 л до приблизительно 8000 л, от приблизительно 8000 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 8000 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 8000 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 8000 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 8000 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 8000 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 8000 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 8000 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 8000 л до приблизительно 8500 л, от приблизительно 8500 л до приблизительно 20000 л,

от приблизительно 8500 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 8500 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 8500 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 8500 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 8500 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 8500 л до приблизительно 9500 л, от приблизительно 8500 л до приблизительно 9000 л, от приблизительно 9000 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 9000 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 9000 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 9000 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 9000 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 9000 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 9000 л до приблизительно 9500 л,

от приблизительно 9500 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 9500 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 9500 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 9500 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 9500 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 9500 л до приблизительно 10000 л, от приблизительно 10000 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 10000 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 10000 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 10000 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 10000 л до приблизительно 12000 л, от приблизительно 12000 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 12000 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 12000 л до приблизительно 16000 л,

от приблизительно 12000 л до приблизительно 14000 л, от приблизительно 14000 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 14000 л до приблизительно 18000 л, от приблизительно 14000 л до приблизительно 16000 л, от приблизительно 16000 л до приблизительно 20000 л, от приблизительно 16000 л до приблизительно 18000 л или от приблизительно 18000 л до приблизительно 20000 л.

В некоторых вариантах осуществления рабочие параметры могут быть представлены любым параметром, который относится к жизнеспособности клеток или гибели клеток (например, сдвиговое напряжение, концентрация сенсибилизирующего средства, концентрация вещества-протектора, температура, pH, состав питательных веществ, нагрузка биомассы и стратегия подпитки). Жизнеспособность клеток или показатель смертности клеток можно измерять при помощи клеток, которые могут экспрессировать лактатдегидрогеназу (LDH). Когда погибает клетка, которая может экспрессировать LDH, LDH из клетки высвобождается в жидкую культуральную среду. Таким образом, жизнеспособность клеток или показатель смертности клеток можно измерять ортогонально при помощи LDH, и они пропорциональны удельному продуцированию LDH (sLDHp) (ФИГ. 3).

На ФИГ. 4 показано, как Рluronic (например, вещества-протекторы), сенсибилизирующее средство и усилие сдвига (например, перемешивание) могут влиять на удельное продуцирование LDH. Как показано на ФИГ. 4, вещества-протекторы могут уменьшать степень присоединения пузырьков к клеткам и повышать выносливость клеток, поддерживая при этом высокую жизнеспособность клеток и защищая клетки от гибели. Напротив, сенсибилизирующие средства могут увеличивать число присоединений пузырьков к клеткам и снижать выносливость клеток, снижая таким образом жизнеспособность клеток. Поскольку такие параметры взаимосвязаны друг с другом, зачастую очень сложно спрогнозировать точное влияние сенсибилизирующих средств, перемешивания и/или веществ-протекторов при помощи традиционных моделей.

На ФИГ. 5 показано, что удельное продуцирование LDH в модели небольшого масштаба зависит от концентрации сенсибилизирующего средства, концентрации вещества-протектора и перемешивания. Из-за взаимного влияния таких параметров удельное продуцирование LDH обычно не имеет линейной зависимости с любым из таких параметров. Влияние таких параметров на удельное продуцирование LDH можно определять при помощи плана факторного эксперимента, например, плана полнофакторного эксперимента или плана дробного факторного эксперимента.

План факторного эксперимента включает проведение экспериментов при наборе условий, при этом условия определены набором параметров (например, рабочими параметрами). В наборе условий каждый параметр может иметь два или более уровней. Целью плана факторного эксперимента является изучение основного влияния и влияния взаимодействия различных параметров (например, концентрации сенсибилизирующего средства, концентрации вещества-протектора и перемешивания). Термин "план полнофакторного эксперимента" относится к плану эксперимента, который включает все возможные комбинации различных уровней среди всех параметров. Например, в случае трех параметров (т. е. факторов), каждый из которых принимает два уровня, план полнофакторного эксперимента будет иметь всего 8 комбинаций и обычно называется планом факторного эксперимента 2³ (ФИГ. 6). Напротив, термин "планы дробных факторных экспериментов" относится к планам экспериментов, состоящим из тщательно выбранного поднабора (некоторой части) прогонов эксперимента из плана полнофакторного эксперимента. Поднабор выбирают так, чтобы использовать принцип разреженности эффектов для раскрытия информации о наиболее важных особенностях изучаемой проблемы, используя при этом некоторую часть усилий плана полнофакторного эксперимента с точки зрения прогонов эксперимента и ресурсов. При выполнении плана факторного эксперимента можно определить нерабочую область (например, комбинацию значений параметров, которые приводят к сбою работы). План факторного эксперимента известен в данной области техники и описан, например, в Box, G. E.; Hunter, W. G.; Hunter, J. S. (2005). Statistics for Experimenters: Design, Innovation, and Discovery (2-е изд.). Wiley. ISBN 0-471-71813-0; Vicente, Gemma, et al. "Application of the factorial design of experiments and response surface methodology to optimize biodiesel production." Industrial crops and products 8.1 (1998): 29-35; Vandervoort, Jo, and Annick Ludwig. "Biocompatible stabilizers in the preparation of PLGA nanoparticles: a factorial design study." International journal of pharmaceutics 238.1-2 (2002): 77-92; каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

В типичном плане факторного эксперимента центральные точки (например, интересующие области) зачастую плохо прогнозируются. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления план факторного эксперимента можно использовать в сочетании с центральным композиционным планом (например, прописанным центральным композиционным планом, описанным центральным композиционным планом или гранецентрированным центральным композиционным планом) (ФИГ. 7). Центральный композиционный план представляет собой план эксперимента, который содержит внедренный план факторного эксперимента или план дробного факторного эксперимента с центральными точками, которые дополняются группой точек на оси, что позволяет оценить кривизну. Композиционный план известен в данной области техники, и подробное описание касаемо центрального композиционного плана можно найти, например, в Box, G. E.; Hunter, W. G.; Hunter, J. S. (2005). Statistics for Experimenters: Design, Innovation, and Discovery (2-е изд.). Wiley. ISBN 0-471-71813-0; Ahmadi, M., et al. "Application of the central composite design and response surface methodology to the advanced treatment of olive oil processing wastewater using Fenton's peroxidation." Journal of Hazardous Materials 123.1-3 (2005): 187-195; каждый из которых включен в данный документ посредством ссылкой во всей своей полноте.

В некоторых вариантах осуществления условия проведения испытаний выбирают на основании полнофакторного скрининга и центрального композиционного плана (например, прописанного центрального композиционного плана). За счет объединения полнофакторного скрининга и центрального композиционного плана выбранные условия проведения испытания могут максимизировать интересующие области и минимизировать области возможного неудовлетворительного результата (ФИГ. 8 и ФИГ. 9).

Результаты экспериментов для таких условий испытания в испытательных сосудах для культивирования обеспечивают расчетный профиль, который показывает взаимосвязь между выбранными параметрами. Как только профиль модели небольшого масштаба определен, модель небольшого масштаба можно использовать для прогнозирования отсутствующих значений. Например, зная концентрацию противовспенивателя или сдвиговое напряжение, можно прогнозировать, сколько Рluronic потребуется для работы. Такая взаимосвязь определяется корреляцией между показателями скорости роста и смертности клеток при различных масштабах (например, небольшом масштабе, лабораторном, промышленном и пр.).

В некоторых вариантах осуществления расчетный профиль модели небольшого масштаба можно применять для сопоставления точек данных, собранных при другом масштабе (например, промышленном масштабе). Поскольку концентрации сенсибилизирующего средства и веществ-протекторов известны, исходя из профиля (ФИГ. 10) можно определить сдвиговое напряжение в модели небольшого масштаба, которое соответствует сдвиговому напряжению в промышленном биореакторе. На основании сдвигового напряжения, которое соответствует сдвиговому напряжению в промышленном биореакторе, и концентрации сенсибилизирующего средства можно определить влияние изменения концентрации вещества-протектора (Δ[вещество-протектор]), исходя из расчетного профиля (ФИГ. 11). Например, как показано на ФИГ. 11, крайняя левая точка (круг), левая центральная точка (круг), правая центральная точка (круг) и крайняя правая точка (круг) - все характеризуются одинаковыми сдвиговым напряжением и концентрацией сенсибилизирующего средства. Заштрихованная область представляет нерабочее пространство. За счет повышения концентрации вещества-протектора (от правой центральной точки (круг) до крайней правой точки (круг), со стрелкой, изображенной между этими двумя точками) можно увеличить приемлемый диапазон значений концентрации сенсибилизирующего средства, что приводит к лучшей устойчивости к сенсибилизирующему средству.

Таким образом, в некоторых вариантах осуществления модель, описанную в данном документе, можно применять для определения эффектов взаимодействия между различными параметрами. С помощью традиционных моделей обычно изучают влияние каждого параметра по отдельности. С помощью моделей, описанных в данном документе, можно изучать влияние трех параметров одновременно, а не влияние каждого параметра по отдельности. Следовательно, с помощью такой модели, описанной в данном документе, можно прогнозировать, какой предположительно будет характеристика клеточной культуры при изменении какого-либо одного параметра.

Кроме того, такие традиционные масштабируемые параметры обычно не позволяют спрогнозировать характеристики клеточной культуры. С помощью модели, описанной в данном документе, можно спрогнозировать рабочий диапазон с более четкими указаниями, что приводит к меньшей вероятности неудовлетворительного результата при переходе к промышленному масштабу, при этом она дает возможность произвести масштабирование, как только другие традиционные параметры будут находиться в соответствии (P/V, скорость конца лопасти, время перемешивания, K_La).

В некоторых других вариантах осуществления модели, описанные в данном документе, можно применять для установления рабочего пространства для реакторов при любом масштабе, задавая любой отдельный параметр или комбинацию параметров (например, Рluronic, противовспениватель и усилие сдвига). Модель можно применять для определения максимального количества противовспенивающих средств, которое клеточная культура может выдерживать до получения неудовлетворительного результата, для заданного условия усилия сдвига.

В некоторых вариантах осуществления модель можно применять для определения максимального количества противовспенивающих средств, которое может выдерживать Рluronic в определенной концентрации, прежде чем утратить свою эффективность, для заданного условия усилия сдвига.

В некоторых вариантах осуществления модель можно применять для тестирования различных типов противовспенивающих средств (Antifoam C, подверженный автоклавированию противовспениватель, подверженные воздействию излучения противовспениватели и пр.) относительно различных типов Рluronic.

В некоторых вариантах осуществления модель может быть независимой от диапазона плотности клеток и не должна применяться только к интенсифицированным перфузионным культурам, поскольку в ней используется LDH для нормализации согласно масштабу.

В некоторых вариантах осуществления с помощью модели можно также тестировать концентрации противовспенивателей либо при полном добавлении (1-разовая порция вначале), либо при ежедневном добавлении.

В некоторых вариантах осуществления модель можно также применять для исследования кинетики после дезактивации противовспенивателей и ее влияния на клеточную культуру.

Клетки

Способы, предусмотренные в данном документе, можно применять для культивирования ряда различных клеток (например, клеток млекопитающих, бактериальных клеток и дрожжевых клеток).

Неограничивающие примеры бактериальных клеток включают E. coli, Clostridium difficile, Clostridium sporogenes, Clostridium beijerinkii и Clostridium acetobutylicum. Типичные коммерчески доступные бактериальные клетки, которые можно использовать в любом из способов, описанных в данном документе, включают BL21(DE3) (Novagen), BL21(DE3)-pLysS (Novagen), BL21 Star-pLysS (Invitrogen), BL21-SI (Invitrogen), BL21-AI (Invitrogen), Tuner (Novagen), Tuner pLysS (Novagen), Origami (Novagen), Origami D (Novagen), Origami B pLysS (Novagen), Rosetta (Novagen), Rosetta pLysS (Novagen), Rosetta-gami-pLysS (Novagen), BL21 CodonPlus (Stratagene), AD494 (Novagen), BL21trxB (Novagen), HMS174 (Novagen), NovaBlue (DE3) (Novagen), BLR (Novagen), C41(DE3) (Lucigen), C43(DE3) (Lucigen), Lemo21(DE3) (New England BioLabs), SHuffle T7 (New England BioLabs), ArticExpress (Agilent Technologies) и Artic Express (DE3) (Agilent Technologies).

Неограничивающие примеры дрожжевых клеток включают: S. cerevisiae, S. exiguus и Pichia pastoris. Дополнительные примеры дрожжевых клеток, которые можно использовать в любом из способов, описанных в данном документе, включают дрожжевые клетки рода Saccharomyces, Pichia, Kluyveromyces, Hansenula и Yarrowia. Дополнительные примеры дрожжевых клеток, которые можно использовать в любом из способов, описанных в данном документе, описаны в Nielsen, Methods in Enzymology 536:133-147, 2014.

Неограничивающие примеры клеток млекопитающих, которые можно культивировать с помощью любого из описанных в данном документе способов, включают: клетки яичника китайского хомячка (CHO) (например, клетки CHO DG44, клетки CHO-K1s и клетки CHO-DXB11), Sp2.0, клетки миеломы (например, NS/0), B-клетки, клетки гибридомы, T-клетки, клетки эмбриональных почек человека (HEK) (например, HEK 293E и HEK 293F), эпителиальные клетки почки африканской зеленой мартышки (клетки линии Vero) и эпителиальные клетки почки собаки (кокер-спаниель) Madin-Darby (клетки линии MDCK). Дополнительные клетки млекопитающих, которые можно культивировать с помощью описанных в данном документе способов, известны из уровня техники. В неограничивающих примерах любого из способов, описанных в данном документе, концентрация клеток млекопитающего, присутствующих в испытательном сосуде для культивирования и/или промышленном биореакторе в момент начала культивирования, составляет от приблизительно 0,1×10⁶ клеток/мл до приблизительно 10×10⁶ клеток/мл (например, от приблизительно 0,1×10⁶ клеток/мл до приблизительно 9×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,1×10⁶ клеток/мл до приблизительно 8×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,1×10⁶ клеток/мл до приблизительно 7×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,1×10⁶ клеток/мл до приблизительно 6×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,1×10⁶ клеток/мл до приблизительно 5×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,1×10⁶ клеток/мл до приблизительно 4×10⁶ клеток/мл,

от приблизительно 0,1×10⁶ клеток/мл до приблизительно 3×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,1×10⁶ клеток/мл до приблизительно 2×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,1×10⁶ клеток/мл до приблизительно 1,5×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,1×10⁶ клеток/мл до приблизительно 1,0×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,1×10⁶ клеток/мл до приблизительно 0,8×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,1×10⁶ клеток/мл до приблизительно 0,5×10⁶ клеток/мл,

от приблизительно 0,1×10⁶ клеток/мл до приблизительно 0,3×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 10×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 9×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 8×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 7×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 6×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 5×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 4×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 3×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 2×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 1,5×10⁶ клеток/мл,

от приблизительно 0,2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 1,0×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 0,8×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 0,5×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 10×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 9×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 8×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 7×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 6×10⁶ клеток/мл,

от приблизительно 0,3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 5×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 4×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 3×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 2×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 1,5×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 1,0×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 0,8×10⁶ клеток/мл,

от приблизительно 0,3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 0,5×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 10×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 9×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 8×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 7×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 6×10⁶ клеток/мл,

от приблизительно 0,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 5×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 4×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 3×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 2×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 1,5×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 1,0×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 0,8×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,8×10⁶ клеток/мл до приблизительно 10×10⁶ клеток/мл,

от приблизительно 0,8×10⁶ клеток/мл до приблизительно 9×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,8×10⁶ клеток/мл до приблизительно 8×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,8×10⁶ клеток/мл до приблизительно 7×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,8×10⁶ клеток/мл до приблизительно 6×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,8×10⁶ клеток/мл до приблизительно 5×10⁶ клеток/мл,

от приблизительно 0,8×10⁶ клеток/мл до приблизительно 4×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,8×10⁶ клеток/мл до приблизительно 3×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,8×10⁶ клеток/мл до приблизительно 2×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,8×10⁶ клеток/мл до приблизительно 1,5×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 0,8×10⁶ клеток/мл до приблизительно 1,0×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 1,0×10⁶ клеток/мл до приблизительно 10×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 1,0×10⁶ клеток/мл до приблизительно 9×10⁶ клеток/мл,

от приблизительно 1,0×10⁶ клеток/мл до приблизительно 8×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 1,0×10⁶ клеток/мл до приблизительно 7×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 1,0×10⁶ клеток/мл до приблизительно 6×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 1,0×10⁶ клеток/мл до приблизительно 5×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 1,0×10⁶ клеток/мл до приблизительно 4×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 1,0×10⁶ клеток/мл до приблизительно 3×10⁶ клеток/мл,

от приблизительно 1,0×10⁶ клеток/мл до приблизительно 2×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 1,0×10⁶ клеток/мл до приблизительно 1,5×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 1,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 10×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 1,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 9×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 1,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 8×10⁶ клеток/мл,

от приблизительно 1,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 7×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 1,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 6×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 1,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 5×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 1,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 4×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 1,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 3×10⁶ клеток/мл,

от приблизительно 1,5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 2×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 10×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 9×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 8×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 7×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 6×10⁶ клеток/мл,

от приблизительно 2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 5×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 4×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 2×10⁶ клеток/мл до приблизительно 3×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 10×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 9×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 8×10⁶ клеток/мл,

от приблизительно 3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 7×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 6×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 5×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 3×10⁶ клеток/мл до приблизительно 4×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 4×10⁶ клеток/мл до приблизительно 10×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 4×10⁶ клеток/мл до приблизительно 9×10⁶ клеток/мл,

от приблизительно 4×10⁶ клеток/мл до приблизительно 8×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 4×10⁶ клеток/мл до приблизительно 7×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 4×10⁶ клеток/мл до приблизительно 6×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 4×10⁶ клеток/мл до приблизительно 5×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 10×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 9×10⁶ клеток/мл,

от приблизительно 5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 8×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 7×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 5×10⁶ клеток/мл до приблизительно 6×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 6×10⁶ клеток/мл до приблизительно 10×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 6×10⁶ клеток/мл до приблизительно 9×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 6×10⁶ клеток/мл до приблизительно 8×10⁶ клеток/мл,

от приблизительно 6×10⁶ клеток/мл до приблизительно 7×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 7×10⁶ клеток/мл до приблизительно 10×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 7×10⁶ клеток/мл до приблизительно 9×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 7×10⁶ клеток/мл до приблизительно 8×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 8×10⁶ клеток/мл до приблизительно 10×10⁶ клеток/мл, от приблизительно 8×10⁶ клеток/мл до приблизительно 9×10⁶ клеток/мл или от приблизительно 9×10⁶ клеток/мл до приблизительно 10×10⁶ клеток/мл).

Клетка (например, клетка млекопитающего) может содержать рекомбинантную нуклеиновую кислоту (например, нуклеиновую кислоту, стабильно интегрированную в геном клетки), которая кодирует рекомбинантный терапевтический белок (например, рекомбинантный терапевтический белок, который секретируется клеткой). Неограничивающие примеры рекомбинантных терапевтических белков описаны в данном документе и известны из уровня техники.

Рекомбинантные терапевтические белки

Рекомбинантный терапевтический белок может представлять собой секретируемый белок, который высвобождается клеткой (например, клеткой млекопитающего) в жидкую культуральную среду клеточной культуры. Например, последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая растворимый рекомбинантный белок, может содержать последовательность, которая кодирует сигнальный пептид для секреции на N- или С-конце рекомбинантного белка, который отщепляется ферментом, присутствующим в клетке (например, клетке млекопитающего), и затем высвобождается в жидкую культуральную среду клеточной культуры. В иных случаях рекомбинантный белок представляет собой растворимый белок, который не секретируется, при этом рекомбинантный белок извлекают из клетки (например, клетки млекопитающего).

Неограничивающие примеры рекомбинантных белков включают иммуноглобулины (в том числе легкие и тяжелые цепи иммуноглобулинов, антитела или фрагменты антител (например, любой из фрагментов антител, описанных в данном документе), ферменты (например, галактозидазу (например, альфа-галактозидазу), Myozyme или Cerezyme), белки (например, эритропоэтин человека, фактор некроза опухоли (TNF) или интерферон альфа или бета), или иммуногенные или антигенные белки, или фрагменты белков (например, белки для применения в вакцине). В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный белок представляет собой сконструированный антигенсвязывающий полипептид, который содержит каркас по меньшей мере одного многофункционального рекомбинантного белка (см., например, рекомбинантные антигенсвязывающие белки, описанные в Gebauer et al., Current Opin. Chem. Biol. 13:245-255, 2009; и в публикации заявки на патент США №2012/0164066 (включенной в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте)). Неограничивающие примеры рекомбинантных белков, которые являются антителами, включают: панитумумаб, омализумаб, абаговомаб, абциксимаб, актоксумаб, адалимумаб, адекатумумаб, афелимомаб, афутузумаб, алацизумаб, алацизумаб, алемтузумаб, алирокумаб, альтумомаб, аматуксимаб, анатумомаб, аполизумаб, атинумаб, тоцилизумаб, базилизимаб, бектумомаб, белимумаб, бевацизумаб, бициромаб, канакинумаб, цетуксимаб, даклизумаб, денсумаб, экулизумаб, эдреколомаб, эфализумаб, эфунгумаб, эртумаксомаб, этарацизумаб, голимумаб, инфликсимаб, натализумаб, паливизумаб, панитумумаб, пертузумаб, ранибизумаб, ритуксимаб, тоцилизумаб и трастузумаб. Дополнительные примеры терапевтических антител известны из уровня техники. Дополнительные неограничивающие примеры рекомбинантных белков включают: алглюкозидазу альфа, ларонидазу, абатацепт, галсульфазу, лютропин альфа, антигемофилический фактор, агалсидазу бета, интерферон бета-1a, дарбепоэтин альфа, тенектеплазу, этанерцепт, фактор свертывания крови IX, фолликулостимулирующий гормон, интерферон бета-1a, имиглюцеразу, дорназу альфа, эпоэтин альфа и альтеплазу.

Секретированный, растворимый рекомбинантный белок можно извлекать из жидкой культуральной среды. Из уровня техники известно множество различных способов отделения жидкой культуральной среды от клеток (например, клеток млекопитающего), включая, например, центрифугирование, фильтрацию, пипетирование и/или аспирацию. Секретируемый рекомбинантный белок затем может быть извлечен из жидкой культуральной среды и дополнительно очищен с применением различных биохимических методик, включая различные типы хроматографии (например, аффинную хроматографию, хроматографию на молекулярных ситах, катионообменную хроматографию или анионообменную хроматографию) и/или фильтрации (например, фильтрацию с отсечением по молекулярной массе).

Для извлечения рекомбинантного белка клетку (например, клетку млекопитающего) можно подвергнуть лизису. Из уровня техники известен широкий спектр способов проведения лизиса клеток (например, клеток млекопитающих), включая, например, обработку ультразвуком и/или проведение лизиса с применением детергентов, ферментов и/или химических веществ. Рекомбинантный белок может быть очищен от лизата клеток (например, лизата клеток млекопитающего) с применением ряда биохимических способов, известных из уровня техники, обычно начиная со стадии центрифугирования для удаления клеточного дебриса, а затем осуществляя одну или несколько дополнительных стадий (например, применяя один или несколько типов хроматографии (например, аффинную хроматографию, хроматографию на молекулярных ситах, катионообменную хроматографию или анионообменную хроматографию) и/или фильтрации (например, фильтрацию с отсечением по молекулярной массе)).

В некоторых вариантах осуществления извлеченный рекомбинантный белок характеризуется по меньшей мере или приблизительно 50% чистотой по весу, например, по меньшей мере или приблизительно 55% чистотой по весу, по меньшей мере 60% чистотой по весу, по меньшей мере 65% чистотой по весу, по меньшей мере 70% чистотой по весу, по меньшей мере 75% чистотой по весу, по меньшей мере 80% чистотой по весу, по меньшей мере 85% чистотой по весу, по меньшей мере 90% чистотой по весу, по меньшей мере 95% чистотой по весу, по меньшей мере 96% чистотой по весу, по меньшей мере 97% чистотой по весу, по меньшей мере 98% чистотой по весу, или по меньшей мере или приблизительно 99% чистотой по весу, или более чем 99% чистотой по весу.

В некоторых вариантах осуществления извлеченный рекомбинантный белок представляет собой рекомбинантный терапевтический белок человека, который обладает одним или несколькими различными биофизическими свойствами по сравнению с таким же нативным белком у человека (например, различия в типе или степени гликозилирования, различия в степени фосфорилирования, различия в степени ацилирования, различия в степени металлирования или стехиометрии металлов и/или различия в связывании кофактора).

Также в данном документе предложен рекомбинантный терапевтический белок, полученный любым из способов, описанных в данном документе.

Жидкие культуральные среды

Жидкие культуральные среды известны из уровня техники. Жидкая культуральная среда может быть дополнена сывороткой крови млекопитающего (например, фетальной телячьей сывороткой и бычьей сывороткой) и/или гормоном роста или фактором роста (например, инсулином, трансферрином и эпидермальным фактором роста). Альтернативно или в дополнение, жидкая культуральная среда может представлять собой жидкую культуральную среду с определенным химическим составом, жидкую культуральную среду, не содержащую компонентов животного происхождения, жидкую культуральную среду, не содержащую сыворотку крови, или жидкую культуральную среду, содержащую сыворотку крови. Неограничивающие примеры жидких культуральных сред с определенным химическим составом, жидких культуральных сред, не содержащих компонентов животного происхождения, жидких культуральных сред, не содержащих сыворотку крови, и жидких культуральных сред, содержащих сыворотку крови, являются коммерчески доступными.

Жидкая культуральная среда, как правило, содержит источник энергии (например, углевод, такой как глюкоза), незаменимые аминокислоты (например, набор из двадцати основных аминокислот плюс цистеин), витамины и/или другие органические соединения, требуемые в низких концентрациях, свободные жирные кислоты и/или микроэлементы. Жидкую культуральную среду можно при необходимости дополнить, например, гормоном или фактором роста млекопитающих (например, инсулином, трансферрином или эпидермальным фактором роста), солями и буферами (например, солями кальция, магния и солями фосфорной кислоты), нуклеозидами и основаниями (например, аденозином, тимидином и гипоксантином), гидролизатами белков и тканей и/или любой комбинацией таких или других добавок.

Неограничивающие примеры жидких культуральных сред, которые особенно применимы в описанных в данном документе способах, включают, например, CD CHO, Opti CHO и Forti CHO (все доступны от Life Technologies; Гранд-Айленд, Нью Йорк), среду Hycell CHO (Thermo Fisher Scientific, Inc.; Уолтем, Массачусетс), среду Ex-cell CD CHO Fusion (Sigma-Aldrich Co.; Сент-Луис, Миссури) и среду Power CHO (Lonza Group, Ltd.; Базель, Швейцария). Компоненты среды, которые также могут оказаться полезными в способах по настоящему изобретению, включают без ограничения гидролизаты с определенным химическим составом (CD), например, CD-пептон, CD-полипептиды (две или больше аминокислот) и CD-факторы роста. Дополнительные примеры жидкой культуральной среды для культуры тканей и компонентов среды известны из уровня техники.

Перфузионное культивирование

Культивирование клетки можно проводить с помощью перфузионного культивирования. Перфузионное культивирование клетки (например, клетки млекопитающего) в сосуде предусматривает удаление из сосуда первого объема первой жидкой культуральной среды (например, характеризующейся любой концентрацией клеток млекопитающего, например, первого объема первой жидкой культуральной среды, которая практически не содержит клеток) и добавление к первой жидкой культуральной среде второго объема второй жидкой культуральной среды. Удаление и добавление можно проводить одновременно или последовательно, или путем их комбинирования. Кроме того, удаление и добавление можно проводить непрерывно (например, со скоростью, при которой удаляют и заменяют объем, составляющий от 0,1% до 800% (например, от 1% до 700%, от 1% до 600%, от 1% до 500%, от 1% до 400%, от 1% до 350%, от 1% до 300%, от 1% до 250%, от 1% до 100%, от 100% до 200%, от 5% до 150%, от 10% до 50%, от 15% до 40%, от 8% до 80% и от 4% до 30%) объема сосуда или объема первой жидкой культуральной среды, в течение любого заданного периода времени (например, в течение 24-часового периода, в течение дискретного периода времени, составляющего от приблизительно 1 часа до приблизительно 24 часов, или в течение дискретного периода времени, составляющего более 24 часов)), или периодически (например, один раз в три дня, один раз в два дня, один раз в сутки, два раза в сутки, три раза в сутки, четыре раза в сутки или пять раз в сутки), или в любой их комбинации. В случае периодического осуществления объем, который удаляют или заменяют (например, в течение приблизительно 24-часового периода, в течение дискретного периода времени, составляющего от приблизительно 1 часа до приблизительно 24 часов, или в течение дискретного периода времени, составляющего более 24 часов), может составлять, например, от 0,1% до 800% (например, от 1% до 700%, от 1% до 600%, от 1% до 500%, от 1% до 400%, от 1% до 300%, от 1% до 200%, от 1% до 100%, от 100% до 200%, от 5% до 150%, от 10% до 50%, от 15% до 40%, от 8% до 80% и от 4% до 30%) объема сосуда или объема первой жидкой культуральной среды. Первый объем удаляемой первой жидкой культуральной среды и второй объем добавляемой второй жидкой культуральной среды в некоторых случаях можно поддерживать примерно одинаковыми в течение каждого 24-часового периода (или, в качестве альтернативы, дискретного периода времени, составляющего от приблизительно 1 часа до приблизительно 24 часов, или дискретного периода времени, составляющего более 24 часов), в течение всего периода культивирования или его части. Как известно из уровня техники, скорость, с которой удаляют первый объем первой жидкой культуральной среды (объем/единица времени), и скорость, с которой добавляют второй объем второй жидкой культуральной среды (объем/единица времени), могут варьироваться. Скорость, с которой удаляют первый объем первой жидкой культуральной среды (объем/единица времени), и скорость, с которой добавляют второй объем второй жидкой культуральной среды (объем/единица времени), могут быть примерно одинаковыми или могут отличаться.

В качестве альтернативы, удаляемый и добавляемый объемы можно изменять (например, постепенно увеличивать) в течение каждого 24-часового периода (или, в качестве альтернативы, дискретного периода времени, составляющего от приблизительно 1 часа до приблизительно 24 часов, или дискретного периода времени, превышающего 24 часа) в ходе периода культивирования. Например, объем удаляемой первой жидкой культуральной среды и объем добавляемой второй жидкой культуральной среды в течение каждого 24-часового периода (или, в качестве альтернативы, дискретного периода времени, составляющего от приблизительно 1 часа до приблизительно 24 часов, или дискретного периода времени, составляющего более 24 часов) в ходе периода культивирования можно увеличивать (например, постепенно или путем ступенчатых приращений) в ходе периода культивирования от значения объема, который составляет от 0,5% до приблизительно 20% объема сосуда или объема первой жидкой культуральной среды, до значения, составляющего от приблизительно 25% до приблизительно 150% объема сосуда или объема первой жидкой культуральной среды.

Квалифицированным специалистам будет понятно, что первая жидкая культуральная среда и вторая жидкая культуральная среда могут представлять собой один и тот же тип среды. В иных случаях первая жидкая культуральная среда и вторая жидкая культуральная среда могут отличаться.

Первый объем первой жидкой культуральной среды можно удалять, например, с помощью механической системы, которая может обеспечивать удаление первого объема первой жидкой культуральной среды из сосуда (например, первого объема первой жидкой культуральной среды, которая практически не содержит клеток, из биореактора). В качестве альтернативы или дополнения, первый объем первой жидкой культуральной среды можно удалять путем обеспечения стекания или пропускания самотеком первого объема первой жидкой культуральной среды через стерильную мембрану с отсечением по молекулярной массе, которое исключает прохождение клетки (например, клетки млекопитающего).

Второй объем второй жидкой культуральной среды можно добавлять к первой жидкой культуральной среде в автоматическом режиме, например, с помощью перфузионного насоса.

В некоторых случаях удаление первого объема первой жидкой культуральной среды (например, первого объема первой жидкой культуральной среды, которая практически не содержит клеток млекопитающего) и добавление к первой жидкой культуральной среде второго объема второй жидкой культуральной среды не осуществляют на протяжении по меньшей мере 1 часа (например, на протяжении 2 часов, на протяжении 3 часов, на протяжении 4 часов, на протяжении 5 часов, на протяжении 6 часов, на протяжении 7 часов, на протяжении 8 часов, на протяжении 9 часов, на протяжении 10 часов, на протяжении 12 часов, на протяжении 14 часов, на протяжении 16 часов, на протяжении 18 часов, на протяжении 24 часов, на протяжении 36 часов, на протяжении 48 часов, на протяжении 72 часов, на протяжении 96 часов или 96 часов спустя) после посева в сосуд клетки (например, клетки млекопитающего).

Культивирование с периодической подпиткой

Культивирование клетки (например, клетки млекопитающего) можно проводить с помощью культивирования с периодической подпиткой. Культивирование клетки (например, клетки млекопитающего) с периодической подпиткой предусматривает, на протяжении большей части периода культивирования, добавление (например, периодическое или непрерывное добавление) к первой жидкой культуральной среде второго объема второй жидкой культуральной среды. Добавление второй жидкой культуральной среды можно осуществлять непрерывно (например, со скоростью, при которой объем увеличивается на величину, составляющую от 0,1% до 300% (например, от 1% до 250%, от 1% до 100%, от 100% до 200%, от 5% до 150%, от 10% до 50%, от 15% до 40%, от 8% до 80% и от 4% до 30%) объема сосуда или объема первой жидкой культуральной среды в течение любого заданного периода времени (например, в течение 24-часового периода, в течение дискретного периода времени, составляющего от приблизительно 1 часа до приблизительно 24 часов, или в течение дискретного периода времени, составляющего более 24 часов)), или периодически (например, один раз в три дня, один раз в два дня, один раз в сутки, два раза в сутки, три раза в сутки, четыре раза в сутки или пять раз в сутки), или в любой их комбинации. В случае периодического осуществления объем, который добавляют (например, в течение приблизительно 24-часового периода, в течение дискретного периода времени, составляющего от приблизительно 1 часа до приблизительно 24 часов, или в течение дискретного периода времени, составляющего более 24 часов), может составлять, например, от 0,1% до 300% (например, от 1% до 200%, от 1% до 100%, от 100% до 200%, от 5% до 150%, от 10% до 50%, от 15% до 40%, от 8% до 80% и от 4% до 30%) объема сосуда или объема первой жидкой культуральной среды. В некоторых случаях второй объем добавляемой второй жидкой культуральной среды можно поддерживать примерно на одинаковом уровне в течение каждого 24-часового периода (или, в качестве альтернативы, дискретного периода времени, составляющего от приблизительно 1 часа до приблизительно 24 часов, или дискретного периода времени, составляющего больше 24 часов) в ходе всего периода культивирования или его части. Как известно из уровня техники, скорость, с которой добавляют второй объем второй жидкой культуральной среды (объем/единица времени), может варьироваться в ходе всего периода культивирования или его части. Например, объем добавляемой второй жидкой культуральной среды можно изменять (например, постепенно увеличивать) в течение каждого 24-часового периода (или, в качестве альтернативы, дискретного периода времени, составляющего от приблизительно 1 часа до приблизительно 24 часов, или дискретного периода времени, составляющего больше 24 часов) в ходе периода культивирования. Например, объем второй жидкой культуральной среды, добавляемый в течение каждого 24-часового периода (или, в качестве альтернативы, дискретного периода времени, составляющего от приблизительно 1 часа до приблизительно 24 часов, или дискретного периода времени, составляющего более 24 часов) в ходе периода культивирования, можно увеличивать (например, постепенно или путем ступенчатых приращений) в ходе периода культивирования от значения объема, который составляет от 0,5% до приблизительно 20% объема сосуда или объема первой жидкой культуральной среды, до значения, составляющего от приблизительно 25% до приблизительно 150% объема сосуда или объема первой жидкой культуральной среды. Скорость потока, с которой добавляют второй объем второй жидкой культуральной среды (объем/единица времени), может быть приблизительно одинаковой на протяжение всего периода культивирования или его части.

Квалифицированным специалистам будет понятно, что первая жидкая культуральная среда и вторая жидкая культуральная среда могут представлять собой один и тот же тип среды. В иных случаях первая жидкая культуральная среда и вторая жидкая культуральная среда могут отличаться. Объем второй жидкой культуральной среды можно добавлять к первой жидкой культуральной среде в автоматическом режиме, например, с помощью перфузионного насоса.

В некоторых случаях добавление к первой жидкой культуральной среде второго объема второй жидкой культуральной среды не осуществляют на протяжении по меньшей мере 1 часа (например, на протяжении 2 часов, на протяжении 3 часов, на протяжении 4 часов, на протяжении 5 часов, на протяжении 6 часов, на протяжении 7 часов, на протяжении 8 часов, на протяжении 9 часов, на протяжении 10 часов, на протяжении 12 часов, на протяжении 14 часов, на протяжении 16 часов, на протяжении 18 часов, на протяжении 24 часов, на протяжении 36 часов, на протяжении 48 часов, на протяжении 72 часов, на протяжении 96 часов или более 96 часов) после посева в сосуд клетки (например, клетки млекопитающего). Среду, в которой культивируют клетки при периодическом культивировании с подпиткой, как правило, собирают в конце периода культивирования и применяют в любом из способов, описанных в данном документе, однако среду, в которой культивируют клетки при периодическом культивировании с подпиткой, также можно собирать в один или несколько моментов времени в ходе периода культивирования и применять в любом из способов, описанных в данном документе.

Квалифицированным специалистам будет понятно, что для осуществления данных способов любые из ряда параметров культивирования (например, сосуды, значения объема, значения скорости или частоты замены объемов культуры, значения частоты перемешивания, значения температуры, среды и значения концентрации CO₂) можно применять в любой комбинации.

Температура

Культивирование можно проводить при температуре от 32ºC до приблизительно 39ºC, например, от приблизительно 32ºC до приблизительно 37ºC. Квалифицированным специалистам будет понятно, что температура может изменяться в конкретный(-е) момент(-ы) времени в способе культивирования (например, в течение одного или нескольких из первого периода времени, второго периода времени и третьего периода времени), например, ежечасно или ежедневно. Например, температуру можно изменять или регулировать (например, повышать или понижать) в пределах приблизительно одного дня, двух дней, трех дней, четырех дней, пяти дней, шести дней, семи дней, восьми дней, девяти дней, десяти дней, одиннадцати дней, двенадцати дней, четырнадцати дней, пятнадцати дней, шестнадцати дней, семнадцати дней, восемнадцати дней, девятнадцати дней или приблизительно двадцати дней или более после исходного посева клетки млекопитающего во встряхиваемую колбу) или в любой момент времени в пределах первого, второго и/или третьего периода времени, описанного в данном документе. Например, температуру можно регулировать в сторону повышения (например, изменять на значение, не превышающее или равное приблизительно 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5 или 10,0ºC). Например, температуру можно регулировать в сторону понижения (например, изменять на значение, не превышающее или равное приблизительно 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5 или 10ºC).

CO₂

Культивирование может предусматривать инкубирование клеточной культуры в атмосфере, содержащей не более или приблизительно 1-15% CO₂ (например, не более или приблизительно 14% CO₂, 12% CO₂, 10% CO₂, 8% CO₂, 6% CO₂, 5% CO₂, 4% CO₂, 3% CO₂, 2% CO₂, или не более или приблизительно 1% CO₂). Культивирование может предусматривать инкубирование клеточной культуры в увлажненной атмосфере (например, при влажности, составляющей по меньшей мере или приблизительно 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 85%, 80%, 85%, 90% или по меньшей мере или приблизительно 95%, или при влажности, составляющей приблизительно 100%).

Измерение жизнеспособности клеток

В данной области техники известен ряд способов и анализов, которые можно применять для определения жизнеспособности клеток клеточной культуры (например, клеточной культуры млекопитающего). Например, в жидкой культуральной среде клеточной культуры можно выявлять лактатдегидрогеназу (LDH). Коммерческие наборы для выявления LDH в жидкой культуральной среде клеточной культуры известны из уровня техники.

Для определения жизнеспособности клеток применяют множество различных красителей, которые не поступают в живые клетки, но селективно поглощаются нежизнеспособными клетками. Неограничивающие примеры таких красителей включают пропидий йодид, трипановый синий и 7-аминоактиномицин D. Жизнеспособность клеток определяют путем визуализации или выявления иным образом окрашивания клеток после инкубации с красителем.

Дополнительные анализы по определению жизнеспособности клеток клеточной культуры включают выявление митохондриальной активности или каспазной активности в клетках (например, резазурин и формазан). Дополнительные способы определения жизнеспособности клеток в культуре клеток известны из уровня техники.

Способы прогнозирования влияния концентрации сенсибилизирующего средства на жизнеспособность клеток в промышленном биореакторе

В данном документе предложены способы прогнозирования влияния концентрации сенсибилизирующего средства (например, любого из сенсибилизирующих средств, описанных в данном документе или известных из уровня техники) на жизнеспособность клеток в промышленном биореакторе, которые включают: (a) определение жизнеспособности клеток при совокупности условий испытания в испытательном сосуде для культивирования (например, любом из испытательных сосудов для культивирования, описанных в данном документе), где совокупность условий испытания определена набором параметров; и (b) прогнозирование влияния концентрации сенсибилизирующего средства на жизнеспособность клеток в промышленном биореакторе (например, любом из промышленных биореакторов, описанных в данном документе) на основании жизнеспособности клеток в испытательном сосуде для культивирования при совокупности условий.

В некоторых вариантах осуществления набор параметров включает, состоит или состоит главным образом из сдвигового напряжения, концентрации сенсибилизирующего средства и концентрации вещества-протектора (например, любого из веществ-протекторов, описанных в данном документе). В некоторых вариантах осуществления данных способов совокупность условий проведения испытания выбирают на основании полнофакторного скрининга и/или прописанного центрального композиционного плана. В некоторых вариантах осуществления любого из данных способов сенсибилизирующее средство представляет собой противовспениватель (например, противовспениватель на основе полидиметилсилоксана, симетикон или любой другой противовспениватель, описанный в данном документе или известный из уровня техники).

В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования (например, любой из приведенных в качестве примера испытательных сосудов для культивирования, описанных в данном документе или известных из уровня техники) имеет объем от приблизительно 5 мл до приблизительно 5 л (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе). В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу, например встряхиваемую колбу с дефлекторами.

В некоторых вариантах осуществления промышленный биореактор (например, любой из приведенных в качестве примера промышленных биореакторов, описанных в данном документе или известных из уровня техники) имеет объем от приблизительно 5 л до приблизительно 20000 л (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе). В некоторых примерах промышленный биореактор представляет собой перфузионный биореактор. В иных примерах промышленный биореактор представляет собой биореактор периодического действия с подпиткой.

Удельный коэффициент гибели клеток, как описано в данном документе, определяется с помощью нижеприведенной формулы:

Удельный коэффициент гибели клеток = (удельное продуцирование LDH)/(содержание LDH на клетку).

Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают культивирование клетки (например, любой из клеток, описанных в данном документе) в промышленном биореакторе с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно обеспечивает удельный коэффициент гибели клеток, составляющий менее 40% в сутки, менее 39% в сутки, менее 38% в сутки, менее 37% в сутки, менее 36% в сутки, менее 35% в сутки, менее 34% в сутки, менее 33% в сутки,

менее 32% в сутки, менее 31% в сутки, менее 30% в сутки, менее 29% в сутки, менее 28% в сутки, менее 27% в сутки, менее 26% в сутки, менее 25% в сутки, менее 24% в сутки, менее 23% в сутки, менее 22% в сутки, менее 21% в сутки, менее 20% в сутки, менее 19% в сутки,

менее 18% в сутки, менее 17% в сутки, менее 16% в сутки, менее 15% в сутки, менее 14% в сутки, менее 13% в сутки, менее 12% в сутки, менее 11% в сутки, менее 10% в сутки, менее 9% в сутки, менее 8% в сутки, менее 7% в сутки, менее 6% в сутки, менее 5% в сутки,

менее 4% в сутки, менее 3% в сутки, менее 2% в сутки или менее 1% в сутки, в ходе культивирования клетки (например, любой из клеток, описанных в данном документе) в промышленном биореакторе. Некоторые варианты осуществления любого из способов, описанных в данном документе, дополнительно включают культивирование клетки (например, любой из клеток, описанных в данном документе) в промышленном биореакторе с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно обеспечивает удельным коэффициентом гибели клеток, составляющий от приблизительно 0,1% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 30% в сутки,

от приблизительно 0,1% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 8% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 6% в сутки,

от приблизительно 0,1% до приблизительно 5% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 4,5% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 4,0% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 3,5% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 3,0% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 2,5% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 2,0% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 1,5% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 1,0% в сутки,

от приблизительно 0,1% до приблизительно 0,5% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 26% в сутки,

от приблизительно 0,5% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 8% в сутки,

от приблизительно 0,5% до приблизительно 6% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 5% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 4,5% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 4,0% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 3,5% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 3,0% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 2,5% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 2,0% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 1,5% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 1,0% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 40% в сутки,

от приблизительно 1,0% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 16% в сутки,

от приблизительно 1,0% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 8% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 6% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 5% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 4,5% в сутки,

от приблизительно 1,0% до приблизительно 4,0% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 3,5% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 3,0% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 2,5% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 2,0% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 1,5% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 30% в сутки,

от приблизительно 1,5% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 8% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 6% в сутки,

от приблизительно 1,5% до приблизительно 5% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 4,5% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 4,0% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 3,5% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 3,0% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 2,5% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 2,0% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 32% в сутки,

от приблизительно 2,0% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 18% в сутки,

от приблизительно 2,0% до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 8% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 6% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 5% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 4,5% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 4,0% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 3,5% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 3,0% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 2,5% в сутки,

от приблизительно 2,5% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 18% в сутки,

от приблизительно 2,5% до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 8% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 6% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 5% в сутки,

от приблизительно 2,5% до приблизительно 4,5% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 4,0% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 3,5% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 3,0% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 32% в сутки,

от приблизительно 3,0% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 14% в сутки,

от приблизительно 3,0% до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 8% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 6% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 5% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 4,5% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 4,0% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 3,5% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 34% в сутки,

от приблизительно 3,5% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 20% в сутки,

от приблизительно 3,5% до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 8% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 6% в сутки,

от приблизительно 3,5% до приблизительно 5% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 4,5% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 4,0% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 30% в сутки,

от приблизительно 4,0% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 16% в сутки,

от приблизительно 4,0% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 8% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 6% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 5% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 4,5% в сутки,

от приблизительно 4,5% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 24% в сутки,

от приблизительно 4,5% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 8% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 6% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 5% в сутки, от приблизительно 5% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 5% до приблизительно 38% в сутки,

от приблизительно 5% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 5% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 5% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 5% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 5% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 5% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 5% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 5% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 5% до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 5% до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 5% до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 5% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 5% до приблизительно 12% в сутки,

от приблизительно 5% до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 5% до приблизительно 8% в сутки, от приблизительно 5% до приблизительно 6% в сутки, от приблизительно 6% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 6% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 6% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 6% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 6% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 6% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 6% до приблизительно 28% в сутки,

от приблизительно 6% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 6% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 6% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 6% до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 6% до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 6% до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 6% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 6% до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 6% до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 6% до приблизительно 8% в сутки,

от приблизительно 8% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 8% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 8% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 8% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 8% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 8% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 8% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 8% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 8% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 8% до приблизительно 22% в сутки,

от приблизительно 8% до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 8% до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 8% до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 8% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 8% до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 8% до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 10% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 10% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 10% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 10% до приблизительно 34% в сутки,

от приблизительно 10% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 10% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 10% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 10% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 10% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 10% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 10% до приблизительно 20% в сутки,

от приблизительно 10% до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 10% до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 10% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 10% до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 12% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 12% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 12% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 12% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 12% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 12% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 12% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 12% до приблизительно 26% в сутки,

от приблизительно 12% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 12% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 12% до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 12% до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 12% до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 12% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 14% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 14% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 14% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 14% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 14% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 14% до приблизительно 30% в сутки,

от приблизительно 14% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 14% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 14% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 14% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 14% до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 14% до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 14% до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 16% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 16% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 16% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 16% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 16% до приблизительно 32% в сутки,

от приблизительно 16% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 16% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 16% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 16% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 16% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 16% до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 16% до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 18% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 18% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 18% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 18% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 18% до приблизительно 32% в сутки,

от приблизительно 18% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 18% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 18% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 18% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 18% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 18% до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 20% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 20% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 20% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 20% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 20% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 20% до приблизительно 30% в сутки,

от приблизительно 20% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 20% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 20% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 20% до приблизительно 22% в сутки, от приблизительно 22% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 22% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 22% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 22% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 22% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 22% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 22% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 22% до приблизительно 26% в сутки,

от приблизительно 22% до приблизительно 24% в сутки, от приблизительно 24% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 24% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 24% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 24% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 24% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 24% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 24% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 24% до приблизительно 26% в сутки, от приблизительно 26% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 26% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 26% до приблизительно 36% в сутки,

от приблизительно 26% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 26% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 26% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 26% до приблизительно 28% в сутки, от приблизительно 28% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 28% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 28% до приблизительно 36% в сутки,

от приблизительно 28% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 28% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 28% до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 30% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 30% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 30% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 30% до приблизительно 34% в сутки,

от приблизительно 30% до приблизительно 32% в сутки, от приблизительно 32% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 32% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 32% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 32% до приблизительно 34% в сутки, от приблизительно 34% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 34% до приблизительно 38% в сутки, от приблизительно 34% до приблизительно 36% в сутки, от приблизительно 36% до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 36% до приблизительно 38% в сутки или от приблизительно 38% до приблизительно 40% в сутки, в ходе культивирования клетки (например, любой из клеток, описанных в данном документе) в промышленном биореакторе.

Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают культивирование клетки (например, любой из клеток, описанных в данном документе) в промышленном биореакторе (например, любом из промышленных биореакторов, описанных в данном документе) с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 150 нЕд./клетка/сутки, менее 145 нЕд./клетка/сутки, менее 140 нЕд./клетка/сутки, менее 135 нЕд./клетка/сутки, менее 130 нЕд./клетка/сутки, менее 125 нЕд./клетка/сутки, менее 120 нЕд./клетка/сутки,

менее 115 нЕд./клетка/сутки, менее 150 нЕд./клетка/сутки, менее 110 нЕд./клетка/сутки, менее 105 нЕд./клетка/сутки, менее 100 нЕд./клетка/сутки, менее 95 нЕд./клетка/сутки, менее 90 нЕд./клетка/сутки, менее 85 нЕд./клетка/сутки, менее 80 нЕд./клетка/сутки, менее 75 нЕд./клетка/сутки, менее 70 нЕд./клетка/сутки, менее 65 нЕд./клетка/сутки, менее 60 нЕд./клетка/сутки, менее 55 нЕд./клетка/сутки, менее 50 нЕд./клетка/сутки,

менее 45 нЕд./клетка/сутки, менее 45 нЕд./клетка/сутки, менее 40 нЕд./клетка/сутки¸ менее 35 нЕд./клетка/сутки, менее 30 нЕд./клетка/сутки, менее 25 нЕд./клетка/сутки, менее 20 нЕд./клетка/сутки, менее 15 нЕд./клетка/сутки, менее 10 нЕд./клетка/сутки,

менее 5 нЕд./клетка/сутки или менее менее 1 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают культивирование клетки (например, любой из клеток, описанных в данном документе) в промышленном биореакторе (например, любом из промышленных биореакторов, описанных в данном документе) с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 1,0 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 2,5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 5 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 10 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 15 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 20 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 25 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 30 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 35 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 40 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 45 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 50 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 55 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 60 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 65 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 70 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 75 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 80 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 85 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 90 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 95 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 100 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 110 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 120 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки,

от приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, от приблизительно 130 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки или от приблизительно 140 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

Скорость роста представлена сложным расчетом роста, который можно определить при помощи нижеприведенного уравнения.

Конечная плотность клеток=Начальная плотность x e^kt,

где k - константа роста, а t - время, указанное в днях.

Кажущаяся скорость роста представляет сумму рассчитанного показателя смертности, добавленного к скорости роста.

Некоторые варианты осуществления любого из способов, описанных в данном документе, дополнительно включают культивирование клетки (например, любой из клеток, описанных в данном документе) в промышленном биореакторе (например, любом из промышленных биореакторов, описанных в данном документе) с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 1% в сутки, более 1,5% в сутки, более 2% в сутки, более 2,5% в сутки, более 3% в сутки, более 3,5% в сутки, более 4,0% в сутки, более 4,5% в сутки, более 5,0% в сутки, более 5,5% в сутки, более 6,0% в сутки, более 6,5% в сутки, более 7,0% в сутки, более 7,5% в сутки, более 8,0% в сутки, более 8,5% в сутки, более 9,0% в сутки, более 9,5% в сутки, более 10,0% в сутки, более 10,5% в сутки, более 11,0% в сутки, более 11,5% в сутки, более 12,0% в сутки,

более 12,5% в сутки, более 13,0% в сутки, более 13,5% в сутки, более 14,0% в сутки, более 14,5% в сутки, более 15,0% в сутки, более 16% в сутки, более 17% в сутки, более 18% в сутки, более 19% в сутки, более 20% в сутки, более 21% в сутки, более 22% в сутки, более 23% в сутки, более 24% в сутки,

более 25% в сутки, более 30% в сутки, более 35% в сутки, более 40% в сутки, более 45% в сутки, более 50% в сутки, более 55% в сутки, более 60% в сутки, более 65% в сутки,

более 70% в сутки, более 75% в сутки, более 80% в сутки, более 85% в сутки, более 90% в сутки, более 95% в сутки, более 100% в сутки, более 105% в сутки, более 110% в сутки, более 115% в сутки, более 120% в сутки, более 125% в сутки, более 130% в сутки, более 135% в сутки, более 140% в сутки,

более 145% в сутки или более 150% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. Некоторые варианты осуществления любого из способов, описанных в данном документе, дополнительно включают культивирование клетки (например, любой из клеток, описанных в данном документе) в промышленном биореакторе (например, любом из промышленных биореакторов, описанных в данном документе) с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно приводит к кажущейся скорости роста, составляющей от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 150% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 115% в сутки,

от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 65% в сутки,

от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 25% в сутки,

от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 0,1% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 10% в сутки,

от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 9,0% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 8,0% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 7,0% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 6,0% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 5,0% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 4,5% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 4,0% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 3,5% в сутки,

от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 3,0% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 2,5% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 2,0% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 1,5% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 1,0% в сутки, от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 0,5% в сутки,

от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 115% в сутки,

от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 70% в сутки,

от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 0,5% до приблизительно 25% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 16% в сутки,

от приблизительно 0,5% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 9,0% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 8,0% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 7,0% в сутки,

от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 6,0% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 5,0% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 4,5% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 4,0% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 3,5% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 3,0% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 2,5% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 2,0% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 1,5% в сутки, от приблизительно 0,5% в сутки до приблизительно 1,0% в сутки,

от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 110% в сутки,

от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 75% в сутки,

от приблизительно 1,0% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 40% в сутки,

от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 25% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 18% в сутки,

от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 1,0% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 9,0% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 8,0% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 7,0% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 6,0% в сутки,

от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 5,0% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 4,5% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 4,0% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 3,5% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 3,0% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 2,5% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 2,0% в сутки, от приблизительно 1,0% в сутки до приблизительно 1,5% в сутки,

от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 110% в сутки,

от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 70% в сутки,

от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 30% в сутки,

от приблизительно 1,5% до приблизительно 25% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 1,5% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 9,0% в сутки,

от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 8,0% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 7,0% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 6,0% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 5,0% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 4,5% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 4,0% в сутки,

от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 3,5% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 3,0% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 2,5% в сутки, от приблизительно 1,5% в сутки до приблизительно 2,0% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 135% в сутки,

от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 105% в сутки,

от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 65% в сутки,

от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 25% в сутки,

от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 2,0% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 9,0% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 8,0% в сутки,

от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 7,0% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 6,0% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 5,0% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 4,5% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 4,0% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 3,5% в сутки,

от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 3,0% в сутки, от приблизительно 2,0% в сутки до приблизительно 2,5% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 110% в сутки,

от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 60% в сутки,

от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 25% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 18% в сутки,

от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 2,5% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 9,0% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 8,0% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 7,0% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 6,0% в сутки,

от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 5,0% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 4,5% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 4,0% в сутки, от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 3,5% в сутки,

от приблизительно 2,5% в сутки до приблизительно 3,0% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 115% в сутки,

от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 85% в сутки,

от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 55% в сутки,

от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 25% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 18% в сутки,

от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 3,0% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 9,0% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 8,0% в сутки,

от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 7,0% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 6,0% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 5,0% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 4,5% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 4,0% в сутки, от приблизительно 3,0% в сутки до приблизительно 3,5% в сутки,

от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 110% в сутки,

от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 70% в сутки,

от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 30% в сутки,

от приблизительно 3,5% до приблизительно 25% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 3,5% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 9,0% в сутки,

от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 8,0% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 7,0% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 6,0% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 5,0% в сутки, от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 4,5% в сутки,

от приблизительно 3,5% в сутки до приблизительно 4,0% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 125% в сутки,

от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 90% в сутки,

от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 50% в сутки,

от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 4,0% до приблизительно 25% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 16% в сутки,

от приблизительно 4,0% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 9,0% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 8,0% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 7,0% в сутки,

от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 6,0% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 5,0% в сутки, от приблизительно 4,0% в сутки до приблизительно 4,5% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 130% в сутки,

от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 95% в сутки,

от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 65% в сутки,

от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 45% в сутки,

от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 25% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 4,5% до приблизительно 14% в сутки,

от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 9,0% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 8,0% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 7,0% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 6,0% в сутки, от приблизительно 4,5% в сутки до приблизительно 5,0% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 135% в сутки,

от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 90% в сутки,

от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 5,0% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 60% в сутки,

от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 5,0% до приблизительно 25% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 20% в сутки,

от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 5,0% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 9,0% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 8,0% в сутки,

от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 7,0% в сутки, от приблизительно 5,0% в сутки до приблизительно 6,0% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 120% в сутки,

от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 100% в сутки,

от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 6,0% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 60% в сутки,

от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 6,0% до приблизительно 25% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 20% в сутки,

от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 6,0% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 9,0% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 8,0% в сутки, от приблизительно 6,0% в сутки до приблизительно 7,0% в сутки,

от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 120% в сутки,

от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 75% в сутки,

от приблизительно 7,0% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 30% в сутки,

от приблизительно 7,0% до приблизительно 25% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 7,0% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 10% в сутки,

от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 9,0% в сутки, от приблизительно 7,0% в сутки до приблизительно 8,0% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 130% в сутки,

от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 95% в сутки,

от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 8,0% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 65% в сутки,

от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 35% в сутки,

от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 8,0% до приблизительно 25% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 8,0% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 8,0% в сутки до приблизительно 9,0% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 140% в сутки,

от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 115% в сутки,

от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 85% в сутки,

от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 9,0% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 35% в сутки,

от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 9,0% до приблизительно 25% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 9,0% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 9,0% в сутки до приблизительно 10% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 135% в сутки,

от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 95% в сутки,

от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 10% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 45% в сутки,

от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 10% до приблизительно 25% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 18% в сутки,

от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 10% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 10% в сутки до приблизительно 12% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 130% в сутки,

от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 100% в сутки,

от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 12% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 60% в сутки,

от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 40% в сутки,

от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 12% до приблизительно 25% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 12% в сутки до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 12% до приблизительно 14% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 140% в сутки,

от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 100% в сутки,

от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 14% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 60% в сутки,

от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 30% в сутки,

от приблизительно 14% до приблизительно 25% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 14% в сутки до приблизительно 16% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 125% в сутки,

от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 95% в сутки,

от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 16% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 55% в сутки,

от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 16% до приблизительно 25% в сутки,

от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 16% в сутки до приблизительно 18% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 105% в сутки,

от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 18% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 65% в сутки,

от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 18% до приблизительно 25% в сутки,

от приблизительно 18% в сутки до приблизительно 20% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 100% в сутки,

от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 20% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 60% в сутки,

от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 20% в сутки до приблизительно 30% в сутки,

от приблизительно 20% до приблизительно 25% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 110% в сутки,

от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 25% до приблизительно 70% в сутки,

от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 50% в сутки,

от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 25% в сутки до приблизительно 30% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 125% в сутки,

от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 85% в сутки,

от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 30% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 45% в сутки,

от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 30% в сутки до приблизительно 35% в сутки, от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 125% в сутки,

от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 85% в сутки,

от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 35% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 45% в сутки,

от приблизительно 35% в сутки до приблизительно 40% в сутки, от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 120% в сутки,

от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 40% до приблизительно 70% в сутки,

от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 40% в сутки до приблизительно 45% в сутки, от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 140% в сутки,

от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 110% в сутки,

от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 45% до приблизительно 70% в сутки,

от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 45% в сутки до приблизительно 50% в сутки, от приблизительно 50% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 50% в сутки до приблизительно 135% в сутки,

от приблизительно 50% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 50% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 50% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 50% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 50% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 50% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 50% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 50% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 50% в сутки до приблизительно 90% в сутки,

от приблизительно 50% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 50% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 50% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 50% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 50% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 50% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 50% в сутки до приблизительно 55% в сутки, от приблизительно 55% в сутки до приблизительно 140% в сутки,

от приблизительно 55% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 55% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 55% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 55% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 55% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 55% в сутки до приблизительно 110% в сутки,

от приблизительно 55% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 55% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 55% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 55% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 55% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 55% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 55% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 55% до приблизительно 70% в сутки,

от приблизительно 55% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 55% в сутки до приблизительно 60% в сутки, от приблизительно 60% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 60% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 60% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 60% в сутки до приблизительно 125% в сутки,

от приблизительно 60% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 60% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 650% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 60% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 60% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 60% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 60% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 60% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 60% в сутки до приблизительно 80% в сутки,

от приблизительно 60% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 60% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 60% в сутки до приблизительно 65% в сутки, от приблизительно 65% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 65% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 65% в сутки до приблизительно 130% в сутки,

от приблизительно 65% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 65% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 65% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 65% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 65% в сутки до приблизительно 105% в сутки,

от приблизительно 65% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 65% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 65% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 65% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 65% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 65% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 65% до приблизительно 70% в сутки, от приблизительно 70% в сутки до приблизительно 140% в сутки,

от приблизительно 70% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 70% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 70% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 70% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 70% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 70% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 70% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 70% в сутки до приблизительно 100% в сутки,

от приблизительно 70% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 70% в сутки до приблизительно 90% в сутки,

от приблизительно 70% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 70% в сутки до приблизительно 80% в сутки, от приблизительно 70% в сутки до приблизительно 75% в сутки, от приблизительно 75% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 75% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 75% в сутки до приблизительно 130% в сутки,

от приблизительно 75% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 75% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 75% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 75% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 75% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 75% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 75% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 75% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 75% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 75% в сутки до приблизительно 80% в сутки,

от приблизительно 80% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 80% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 80% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 80% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 80% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 80% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 80% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 80% в сутки до приблизительно 105% в сутки,

от приблизительно 80% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 80% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 80% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 80% в сутки до приблизительно 85% в сутки, от приблизительно 85% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 85% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 85% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 85% в сутки до приблизительно 125% в сутки,

от приблизительно 85% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 85% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 85% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 85% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 85% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 85% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 85% в сутки до приблизительно 90% в сутки, от приблизительно 90% в сутки до приблизительно 140% в сутки,

от приблизительно 90% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 90% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 90% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 90% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 90% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 90% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 90% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 90% в сутки до приблизительно 100% в сутки,

от приблизительно 90% в сутки до приблизительно 95% в сутки, от приблизительно 95% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 95% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 95% в сутки до приблизительно 130% в сутки,

от приблизительно 95% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 95% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 95% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 95% в сутки до приблизительно 110% в сутки,

от приблизительно 95% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 95% в сутки до приблизительно 100% в сутки, от приблизительно 100% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 100% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 100% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 100% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 100% в сутки до приблизительно 120% в сутки,

от приблизительно 100% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 100% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 100% в сутки до приблизительно 105% в сутки, от приблизительно 105% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 105% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 105% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 105% в сутки до приблизительно 125% в сутки,

от приблизительно 105% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 105% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 105% в сутки до приблизительно 110% в сутки, от приблизительно 110% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 110% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 110% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 110% в сутки до приблизительно 125% в сутки,

от приблизительно 110% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 110% в сутки до приблизительно 115% в сутки, от приблизительно 115% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 115% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 115% в сутки до приблизительно 130% в сутки,

от приблизительно 115% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 115% в сутки до приблизительно 120% в сутки, от приблизительно 120% в сутки до приблизительно 140% в сутки, от приблизительно 120% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 120% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 120% в сутки до приблизительно 125% в сутки, от приблизительно 125% в сутки до приблизительно 140% в сутки,

от приблизительно 125% в сутки до приблизительно 135% в сутки, от приблизительно 125% в сутки до приблизительно 130% в сутки, от приблизительно 130% в сутки до приблизительно 140% в сутки,

от приблизительно 130% в сутки до приблизительно 135% в сутки или от приблизительно 135% в сутки до приблизительно 140% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления данных способов клетка содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую рекомбинантный терапевтический белок. Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают

сбор или извлечение рекомбинантного терапевтического белка. Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают очистку рекомбинантного терапевтического белка. Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают составление рецептуры с очищенным рекомбинантным терапевтическим белком.

В некоторых вариантах осуществления данных способов клетка представляет собой бактерию (например, любую из приведенных в качестве примера бактерий, описанных в данном документе или известных из уровня техники), дрожжевую клетку (например, любую из приведенных в качестве примера дрожжевых клеток, описанных в данном документе или известных из уровня техники) или клетку млекопитающего (например, любую из приведенных в качестве примера клеток млекопитающего, описанных в данном документе или известных из уровня техники).

В некоторых вариантах осуществления данных способов жизнеспособность клеток определяют путем измерения концентрации дегидрогеназы молочной кислоты (LDH) в испытательном сосуде для культивирования.

В некоторых вариантах осуществления испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу с дефлекторами (например, любую из встряхиваемых колб с дефлекторами, описанных в данном документе или известных из уровня техники), и совокупность условий испытания включает одно или несколько из: (a) перемешивания вращением со скоростью от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 400 об/мин (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе); (b) концентрации сенсибилизирующего средства (например, любого из сенсибилизирующих средств, описанных в данном документе или известных из уровня техники), составляющей от приблизительно 0 ppm до приблизительно 120 ppm (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе); и (c) концентрации вещества-протектора (например, любого из веществ-протекторов, описанных в данном документе или известных из уровня техники), составляющей от приблизительно 1 г/л до приблизительно 10 г/л (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе). В некоторых вариантах осуществления вещество-протектор представляет собой полоксамер (например, полоксамер-188, полоксамер-401, полоксамер-402 или полоксамер-407), полоксамин (например, полоксамин-904 или полоксамин-908) или полиол Pluronic.

Способы повышения жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе

В данном документе также предложены способы повышения жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе (например, любом из промышленных биореакторов, описанных в данном документе), которые включают: (a) определение жизнеспособности клеток при совокупности условий испытания в испытательном сосуде для культивирования, где совокупность условий определена набором параметров; (b) выбор условия, которое является оптимальным для жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе, на основании жизнеспособности клеток в испытательном сосуде для культивирования при совокупности условий; и (c) культивирование клетки в промышленном биореакторе при выбранном условии.

В некоторых вариантах осуществления данных способов набор параметров содержит, состоит главным образом или состоит из сдвигового напряжения, концентрации сенсибилизирующего средства (например, любого из сенсибилизирующих средств, описанных в данном документе или известных из уровня техники) и концентрации вещества-протектора (например, любого из веществ-протекторов, описанных в данном документе или известных из уровня техники). В некоторых вариантах осуществления данных способов совокупность условий проведения испытания выбирают на основании полнофакторного скрининга и/или прописанного центрального композиционного плана. В некоторых вариантах осуществления данных способов сенсибилизирующее средство представляет собой противовспениватель (например, противовспениватель на основе полидиметилсилоксана, симетикон или любой другой противовспениватель, описанный в данном документе или известный из уровня техники).

В некоторых вариантах осуществления данных способов испытательный сосуд для культивирования (например, любой из испытательных сосудов для культивирования, описанных в данном документе или известных из уровня техники) имеет объем от приблизительно 5 мл до приблизительно 5 л (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе). В некоторых вариантах осуществления данных способов испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу, например встряхиваемую колбу с дефлекторами (например, любую из встряхиваемых колб с дефлекторами, описанных в данном документе или известных из уровня техники).

В некоторых вариантах осуществления данных способов промышленный биореактор (например, любой из промышленных биореакторов, описанных в данном документе) имеет объем от приблизительно 5 л до приблизительно 20000 л (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе). В некоторых примерах промышленный биореактор представляет собой перфузионный биореактор. В иных примерах промышленный биореактор представляет собой биореактор периодического действия с подпиткой.

В некоторых вариантах осуществления стадия (c) приводит к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему менее 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39% или 40% в сутки, в ходе культивирования клеток в промышленном биореакторе. В некоторых вариантах осуществления стадия (c) приводит к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему от приблизительно 0,1% до приблизительно 40% в сутки (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе), в ходе культивирования клеток в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления стадия (c) приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 150 нЕд./клетка/сутки, менее 145 нЕд./клетка/сутки, менее 140 нЕд./клетка/сутки, менее 135 нЕд./клетка/сутки, менее 130 нЕд./клетка/сутки, менее 125 нЕд./клетка/сутки, менее 120 нЕд./клетка/сутки, менее 115 нЕд./клетка/сутки, менее 150 нЕд./клетка/сутки,

менее 110 нЕд./клетка/сутки, менее 105 нЕд./клетка/сутки, менее 100 нЕд./клетка/сутки, менее 95 нЕд./клетка/сутки, менее 90 нЕд./клетка/сутки, менее 85 нЕд./клетка/сутки, менее 80 нЕд./клетка/сутки, менее 75 нЕд./клетка/сутки, менее 70 нЕд./клетка/сутки, менее 65 нЕд./клетка/сутки, менее 60 нЕд./клетка/сутки, менее 55 нЕд./клетка/сутки,

менее 50 нЕд./клетка/сутки, менее 45 нЕд./клетка/сутки, менее 45 нЕд./клетка/сутки, менее 40 нЕд./клетка/сутки¸ менее 35 нЕд./клетка/сутки, менее 30 нЕд./клетка/сутки,

менее 25 нЕд./клетка/сутки, менее 20 нЕд./клетка/сутки, менее 15 нЕд./клетка/сутки, менее 10 нЕд./клетка/сутки, менее 5 нЕд./клетка/сутки или менее менее 1 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. В некоторых вариантах осуществления данных способов стадия (c) приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе), в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления стадия (c) приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 1% в сутки, более 1,5% в сутки, более 2% в сутки, более 2,5% в сутки, более 3% в сутки, более 3,5% в сутки, более 4,0% в сутки, более 4,5% в сутки, более 5,0% в сутки,

более 5,5% в сутки, более 6,0% в сутки, более 6,5% в сутки, более 7,0% в сутки, более 7,5% в сутки, более 8,0% в сутки, более 8,5% в сутки, более 9,0% в сутки, более 9,5% в сутки, более 10,0% в сутки, более 10,5% в сутки,

более 11,0% в сутки, более 11,5% в сутки, более 12,0% в сутки, более 12,5% в сутки, более 13,0% в сутки, более 13,5% в сутки, более 14,0% в сутки, более 14,5% в сутки,

более 15,0% в сутки, более 16% в сутки, более 17% в сутки, более 18% в сутки, более 19% в сутки, более 20% в сутки, более 21% в сутки, более 22% в сутки, более 23% в сутки,

более 24% в сутки, более 25% в сутки, более 30% в сутки, более 35% в сутки, более 40% в сутки, более 45% в сутки, более 50% в сутки, более 55% в сутки, более 60% в сутки,

более 65% в сутки, более 70% в сутки, более 75% в сутки, более 80% в сутки, более 85% в сутки, более 90% в сутки,

более 95% в сутки, более 100% в сутки, более 105% в сутки, более 110% в сутки, более 115% в сутки, более 120% в сутки, более 125% в сутки, более 130% в сутки, более 135% в сутки,

более 140% в сутки, более 145% в сутки или более 150% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. В некоторых вариантах осуществления данных способов стадия (c) приводит к кажущейся скорости роста, составляющей от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 150% в сутки (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе), в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления данных способов клетка (например, любая из клеток, описанных в данном документе) содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую рекомбинантный терапевтический белок (например, любой из рекомбинантных терапевтических белков, описанных в данном документе). Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают сбор или извлечение рекомбинантного терапевтического белка. Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают очистку рекомбинантного терапевтического белка. Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают составление рецептуры с очищенным рекомбинантным терапевтическим белком. В некоторых вариантах осуществления данных способов клетка представляет собой бактерию (например, любую из приведенных в качестве примера бактерий, описанных в данном документе или известных из уровня техники), дрожжевую клетку (например, любую из приведенных в качестве примера дрожжевых клеток, описанных в данном документе или известных из уровня техники) или клетку млекопитающего (например, любую из приведенных в качестве примера клеток млекопитающего, описанных в данном документе или известных из уровня техники).

В некоторых вариантах осуществления данных способов жизнеспособность клеток определяют путем измерения концентрации дегидрогеназы молочной кислоты (LDH) в испытательном сосуде для культивирования. В некоторых вариантах осуществления данных способов испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу с дефлекторами, и совокупность условий испытания включает одно или несколько (например, два или три) (или состоит из одного или нескольких) из: (a) перемешивания вращением со скоростью от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 400 об/мин (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе); (b) концентрации сенсибилизирующего средства (например, любого из сенсибилизирующих средств, описанных в данном документе или известных из уровня техники), составляющей от приблизительно 0 ppm до приблизительно 120 ppm (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе); и (c) концентрации вещества-протектора (например, любого из веществ-протекторов, описанных в данном документе или известных из уровня техники), составляющей от приблизительно 1 г/л до приблизительно 10 г/л (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе). В некоторых вариантах осуществления данных способов вещество-протектор представляет собой полоксамер (например, полоксамер-188, полоксамер-401, полоксамер-402 или полоксамер-407), полоксамин (например, полоксамин-904 или полоксамин-908) или полиол Pluronic.

Способы прогнозирования жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе

В данном документе также предложены способы прогнозирования жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе (например, любом из промышленных биореакторов, описанных в данном документе), которые включают: (a) выбор набора параметров, включающего по меньшей мере два параметра (например, 2, 3, 4, 5 или 6); (b) определение жизнеспособности клеток при совокупности условий испытания, определенной набором параметров в испытательном сосуде для культивирования (например, любом из испытательных сосудов для культивирования, описанных в данном документе); и (c) прогнозирование жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе на основании жизнеспособности клеток в испытательном сосуде для культивирования при совокупности условий.

В некоторых вариантах осуществления данных способов набор параметров содержит, состоит главным образом из или состоит из сдвигового напряжения, концентрации сенсибилизирующего средства (например, любого из приведенных в качестве примера сенсибилизирующих средств, описанных в данном документе или известных из уровня техники) и концентрации вещества-протектора (например, любого из веществ-протекторов, описанных в данном документе или известных из уровня техники). В некоторых вариантах осуществления данных способов совокупность условий испытания выбирают на основании полнофакторного скрининга и/или прописанного центрального композиционного плана.

В некоторых вариантах осуществления данных способов сенсибилизирующее средство представляет собой противовспениватель (например, противовспениватель на основе полидиметилсилоксана, симетикон или любой другой противовспениватель, описанный в данном документе или известный из уровня техники).

В некоторых вариантах осуществления данных способов испытательный сосуд для культивирования (например, любой из испытательных сосудов для культивирования, описанных в данном документе или известных из уровня техники) имеет объем от приблизительно 5 мл до приблизительно 5 л (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе). В некоторых вариантах осуществления данных способов испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу, например встряхиваемую колбу с дефлекторами (например, любую из встряхиваемых колб с дефлекторами, описанных в данном документе или известных из уровня техники).

В некоторых вариантах осуществления данных способов промышленный биореактор (например, любой из промышленных биореакторов, описанных в данном документе) имеет объем от приблизительно 5 л до приблизительно 20000 л (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе). В некоторых примерах промышленный биореактор представляет собой перфузионный биореактор. В иных примерах промышленный биореактор представляет собой биореактор периодического действия с подпиткой.

Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему менее 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39% или 40% в сутки, в ходе культивирования клеток в промышленном биореакторе. Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему от приблизительно 0,1% до приблизительно 40% в сутки (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе), в ходе культивирования клеток в промышленном биореакторе.

Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 150 нЕд./клетка/сутки, менее 145 нЕд./клетка/сутки,

менее 140 нЕд./клетка/сутки, менее 135 нЕд./клетка/сутки, менее 130 нЕд./клетка/сутки, менее 125 нЕд./клетка/сутки, менее 120 нЕд./клетка/сутки, менее 115 нЕд./клетка/сутки, менее 150 нЕд./клетка/сутки, менее 110 нЕд./клетка/сутки, менее 105 нЕд./клетка/сутки, менее 100 нЕд./клетка/сутки, менее 95 нЕд./клетка/сутки, менее 90 нЕд./клетка/сутки, менее 85 нЕд./клетка/сутки, менее 80 нЕд./клетка/сутки, менее 75 нЕд./клетка/сутки,

менее 70 нЕд./клетка/сутки, менее 65 нЕд./клетка/сутки, менее 60 нЕд./клетка/сутки, менее 55 нЕд./клетка/сутки, менее 50 нЕд./клетка/сутки, менее 45 нЕд./клетка/сутки, менее 45 нЕд./клетка/сутки, менее 40 нЕд./клетка/сутки¸ менее 35 нЕд./клетка/сутки,

менее 30 нЕд./клетка/сутки, менее 25 нЕд./клетка/сутки, менее 20 нЕд./клетка/сутки, менее 15 нЕд./клетка/сутки, менее 10 нЕд./клетка/сутки, менее 5 нЕд./клетка/сутки или менее менее 1 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе), в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 1% в сутки, более 1,5% в сутки, более 2% в сутки, более 2,5% в сутки, более 3% в сутки, более 3,5% в сутки,

более 4,0% в сутки, более 4,5% в сутки, более 5,0% в сутки, более 5,5% в сутки, более 6,0% в сутки, более 6,5% в сутки, более 7,0% в сутки, более 7,5% в сутки, более 8,0% в сутки,

более 8,5% в сутки, более 9,0% в сутки, более 9,5% в сутки, более 10,0% в сутки, более 10,5% в сутки, более 11,0% в сутки, более 11,5% в сутки, более 12,0% в сутки, более 12,5% в сутки,

более 13,0% в сутки, более 13,5% в сутки, более 14,0% в сутки, более 14,5% в сутки, более 15,0% в сутки, более 16% в сутки, более 17% в сутки, более 18% в сутки, более 19% в сутки,

более 20% в сутки, более 21% в сутки, более 22% в сутки, более 23% в сутки, более 24% в сутки, более 25% в сутки, более 30% в сутки, более 35% в сутки, более 40% в сутки, более 45% в сутки, более 50% в сутки, более 55% в сутки, более 60% в сутки, более 65% в сутки, более 70% в сутки,

более 75% в сутки, более 80% в сутки, более 85% в сутки, более 90% в сутки, более 95% в сутки, более 100% в сутки, более 105% в сутки, более 110% в сутки,

более 115% в сутки, более 120% в сутки, более 125% в сутки, более 130% в сутки, более 135% в сутки,

более 140% в сутки, более 145% в сутки или более 150% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к кажущейся скорости роста, составляющей от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 150% в сутки (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе), в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления данных способов клетка (например, любая из клеток, описанных в данном документе) содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую рекомбинантный терапевтический белок (например, любой из рекомбинантных терапевтических белков, описанных в данном документе). Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают сбор или извлечение рекомбинантного терапевтического белка. Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают очистку рекомбинантного терапевтического белка. Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают составление рецептуры с очищенным рекомбинантным терапевтическим белком. В некоторых вариантах осуществления данных способов клетка представляет собой бактерию (например, любую из приведенных в качестве примера бактерий, описанных в данном документе или известных из уровня техники), дрожжевую клетку (например, любую из приведенных в качестве примера дрожжевых клеток, описанных в данном документе или известных из уровня техники) или клетку млекопитающего (например, любую из приведенных в качестве примера клеток млекопитающего, описанных в данном документе или известных из уровня техники).

В некоторых вариантах осуществления данных способов жизнеспособность клеток определяют путем измерения концентрации дегидрогеназы молочной кислоты (LDH) в испытательном сосуде для культивирования. В некоторых вариантах осуществления данных способов испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу с дефлекторами, и совокупность условий испытания включает одно или несколько (например, два или три) (или состоит из одного или нескольких) из: (a) перемешивания вращением со скоростью от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 400 об/мин (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе); (b) концентрации сенсибилизирующего средства (например, любого из сенсибилизирующих средств, описанных в данном документе или известных из уровня техники), составляющей от приблизительно 0 ppm до приблизительно 120 ppm (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе); и (c) концентрации вещества-протектора (например, любого из веществ-протекторов, описанных в данном документе или известных из уровня техники), составляющей от приблизительно 1 г/л до приблизительно 10 г/л (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе). В некоторых вариантах осуществления данных способов вещество-протектор представляет собой полоксамер (например, полоксамер-188, полоксамер-401, полоксамер-402 или полоксамер-407), полоксамин (например, полоксамин-904 или полоксамин-908) или полиол Pluronic.

Способы культивирования клетки в промышленном биореакторе

В данном документе также предложены способы культивирования клетки (например, любой из клеток, описанных в данном документе) в промышленном биореакторе, которые включают культивирование клетки в жидкой культуральной среде при одном или нескольких (например, двух, трех или четырех) из следующих условий:

(a) промышленный биореактор характеризуется P/V (Вт/м³) от приблизительно 1,0 до приблизительно 110 (например, от приблизительно 3,0 до приблизительно 7,0, от приблизительно 4,0 до приблизительно 6,0, от приблизительно 5,0 до приблизительно 6,0 или приблизительно 6,0) (например, от приблизительно 1,0 до приблизительно 110, от приблизительно 1,0 до приблизительно 95,

от приблизительно 1,0 до приблизительно 90, от приблизительно 1,0 до приблизительно 85, от приблизительно 1,0 до приблизительно 80, от приблизительно 1,0 до приблизительно 75, от приблизительно 1,0 до приблизительно 70, от приблизительно 1,0 до приблизительно 65, от приблизительно 1,0 до приблизительно 60, от приблизительно 1,0 до приблизительно 55, от приблизительно 1,0 до приблизительно 50, от приблизительно 1,0 до приблизительно 45, от приблизительно 1,0 до приблизительно 40, от приблизительно 1,0 до приблизительно 35, от приблизительно 1,0 до приблизительно 30, от приблизительно 1,0 до приблизительно 25,

от приблизительно 1,0 до приблизительно 20, от приблизительно 1,0 до приблизительно 18, от приблизительно 1,0 до приблизительно 16, от приблизительно 1,0 до приблизительно 14, от приблизительно 1,0 до приблизительно 12, от приблизительно 1,0 до приблизительно 10, от приблизительно 1,0 до приблизительно 9,0, от приблизительно 1,0 до приблизительно 8,0, от приблизительно 1,0 до приблизительно 7,0, от приблизительно 1,0 до приблизительно 6,0,

от приблизительно 1,0 до приблизительно 5,0, от приблизительно 1,0 до приблизительно 4,0, от приблизительно 1,0 до приблизительно 3,0, от приблизительно 1,0 до приблизительно 2,0, от приблизительно 2,0 до приблизительно 110, от приблизительно 2,0 до приблизительно 95, от приблизительно 2,0 до приблизительно 90, от приблизительно 2,0 до приблизительно 85, от приблизительно 2,0 до приблизительно 80, от приблизительно 2,0 до приблизительно 75, от приблизительно 2,0 до приблизительно 70, от приблизительно 2,0 до приблизительно 65, от приблизительно 2,0 до приблизительно 60, от приблизительно 2,0 до приблизительно 55, от приблизительно 2,0 до приблизительно 50, от приблизительно 2,0 до приблизительно 45, от приблизительно 2,0 до приблизительно 40, от приблизительно 2,0 до приблизительно 35,

от приблизительно 2,0 до приблизительно 30, от приблизительно 2,0 до приблизительно 25, от приблизительно 2,0 до приблизительно 20, от приблизительно 2,0 до приблизительно 18, от приблизительно 2,0 до приблизительно 16, от приблизительно 2,0 до приблизительно 14, от приблизительно 2,0 до приблизительно 12, от приблизительно 2,0 до приблизительно 10, от приблизительно 2,0 до приблизительно 9,0, от приблизительно 2,0 до приблизительно 8,0, от приблизительно 2,0 до приблизительно 7,0, от приблизительно 2,0 до приблизительно 6,0, от приблизительно 2,0 до приблизительно 5,0, от приблизительно 2,0 до приблизительно 4,0,

от приблизительно 2,0 до приблизительно 3,0, от приблизительно 3,0 до приблизительно 110, от приблизительно 3,0 до приблизительно 95, от приблизительно 3,0 до приблизительно 90, от приблизительно 3,0 до приблизительно 85, от приблизительно 3,0 до приблизительно 80, от приблизительно 3,0 до приблизительно 75, от приблизительно 3,0 до приблизительно 70, от приблизительно 3,0 до приблизительно 65, от приблизительно 3,0 до приблизительно 60, от приблизительно 3,0 до приблизительно 55, от приблизительно 3,0 до приблизительно 50, от приблизительно 3,0 до приблизительно 45, от приблизительно 3,0 до приблизительно 40,

от приблизительно 3,0 до приблизительно 35, от приблизительно 3,0 до приблизительно 30, от приблизительно 3,0 до приблизительно 25, от приблизительно 3,0 до приблизительно 20, от приблизительно 3,0 до приблизительно 18, от приблизительно 3,0 до приблизительно 16, от приблизительно 3,0 до приблизительно 14, от приблизительно 3,0 до приблизительно 12, от приблизительно 3,0 до приблизительно 10, от приблизительно 3,0 до приблизительно 9,0, от приблизительно 3,0 до приблизительно 8,0, от приблизительно 3,0 до приблизительно 7,0, от приблизительно 3,0 до приблизительно 6,0, от приблизительно 3,0 до приблизительно 5,0,

от приблизительно 3,0 до приблизительно 4,0, от приблизительно 4,0 до приблизительно 110, от приблизительно 4,0 до приблизительно 95, от приблизительно 4,0 до приблизительно 90, от приблизительно 4,0 до приблизительно 85, от приблизительно 4,0 до приблизительно 80, от приблизительно 4,0 до приблизительно 75, от приблизительно 4,0 до приблизительно 70, от приблизительно 4,0 до приблизительно 65, от приблизительно 4,0 до приблизительно 60, от приблизительно 4,0 до приблизительно 55, от приблизительно 4,0 до приблизительно 50, от приблизительно 4,0 до приблизительно 45, от приблизительно 4,0 до приблизительно 40,

от приблизительно 4,0 до приблизительно 35, от приблизительно 4,0 до приблизительно 30, от приблизительно 4,0 до приблизительно 25, от приблизительно 4,0 до приблизительно 20, от приблизительно 4,0 до приблизительно 18, от приблизительно 4,0 до приблизительно 16, от приблизительно 4,0 до приблизительно 14, от приблизительно 4,0 до приблизительно 12, от приблизительно 4,0 до приблизительно 10, от приблизительно 4,0 до приблизительно 9,0, от приблизительно 4,0 до приблизительно 8,0, от приблизительно 4,0 до приблизительно 7,0, от приблизительно 4,0 до приблизительно 6,0, от приблизительно 4,0 до приблизительно 5,0,

от приблизительно 5,0 до приблизительно 110, от приблизительно 5,0 до приблизительно 95, от приблизительно 5,0 до приблизительно 90, от приблизительно 5,0 до приблизительно 85, от приблизительно 5,0 до приблизительно 80, от приблизительно 5,0 до приблизительно 75, от приблизительно 5,0 до приблизительно 70, от приблизительно 5,0 до приблизительно 65, от приблизительно 5,0 до приблизительно 60, от приблизительно 5,0 до приблизительно 55,

от приблизительно 5,0 до приблизительно 50, от приблизительно 5,0 до приблизительно 45, от приблизительно 5,0 до приблизительно 40, от приблизительно 5,0 до приблизительно 35, от приблизительно 5,0 до приблизительно 30, от приблизительно 5,0 до приблизительно 25,

от приблизительно 5,0 до приблизительно 20, от приблизительно 5,0 до приблизительно 18, от приблизительно 5,0 до приблизительно 16, от приблизительно 5,0 до приблизительно 14, от приблизительно 5,0 до приблизительно 12, от приблизительно 5,0 до приблизительно 10, от приблизительно 5,0 до приблизительно 9,0, от приблизительно 5,0 до приблизительно 8,0, от приблизительно 5,0 до приблизительно 7,0, от приблизительно 5,0 до приблизительно 6,0,

от приблизительно 6,0 до приблизительно 110, от приблизительно 6,0 до приблизительно 95, от приблизительно 6,0 до приблизительно 90, от приблизительно 6,0 до приблизительно 85, от приблизительно 6,0 до приблизительно 80, от приблизительно 6,0 до приблизительно 75, от приблизительно 6,0 до приблизительно 70, от приблизительно 6,0 до приблизительно 65, от приблизительно 6,0 до приблизительно 60, от приблизительно 6,0 до приблизительно 55, от приблизительно 6,0 до приблизительно 50, от приблизительно 6,0 до приблизительно 45, от приблизительно 6,0 до приблизительно 40, от приблизительно 6,0 до приблизительно 35,

от приблизительно 6,0 до приблизительно 30, от приблизительно 6,0 до приблизительно 25, от приблизительно 6,0 до приблизительно 20, от приблизительно 6,0 до приблизительно 18, от приблизительно 6,0 до приблизительно 16, от приблизительно 6,0 до приблизительно 14, от приблизительно 6,0 до приблизительно 12, от приблизительно 6,0 до приблизительно 10, от приблизительно 6,0 до приблизительно 9,0, от приблизительно 6,0 до приблизительно 8,0, от приблизительно 6,0 до приблизительно 7,0,

от приблизительно 7,0 до приблизительно 110, от приблизительно 7,0 до приблизительно 95, от приблизительно 7,0 до приблизительно 90, от приблизительно 7,0 до приблизительно 85, от приблизительно 7,0 до приблизительно 80, от приблизительно 7,0 до приблизительно 75, от приблизительно 7,0 до приблизительно 70, от приблизительно 7,0 до приблизительно 65, от приблизительно 7,0 до приблизительно 60, от приблизительно 7,0 до приблизительно 55, от приблизительно 7,0 до приблизительно 50,

от приблизительно 7,0 до приблизительно 45, от приблизительно 7,0 до приблизительно 40, от приблизительно 7,0 до приблизительно 35, от приблизительно 7,0 до приблизительно 30, от приблизительно 7,0 до приблизительно 25, от приблизительно 7,0 до приблизительно 20, от приблизительно 7,0 до приблизительно 18, от приблизительно 7,0 до приблизительно 16, от приблизительно 7,0 до приблизительно 14, от приблизительно 7,0 до приблизительно 12, от приблизительно 7,0 до приблизительно 10, от приблизительно 7,0 до приблизительно 9,0, от приблизительно 7,0 до приблизительно 8,0, от приблизительно 8,0 до приблизительно 110, от приблизительно 8,0 до приблизительно 95, от приблизительно 8,0 до приблизительно 90, от приблизительно 8,0 до приблизительно 85, от приблизительно 8,0 до приблизительно 80,

от приблизительно 8,0 до приблизительно 75, от приблизительно 8,0 до приблизительно 70, от приблизительно 8,0 до приблизительно 65, от приблизительно 8,0 до приблизительно 60, от приблизительно 8,0 до приблизительно 55, от приблизительно 8,0 до приблизительно 50, от приблизительно 8,0 до приблизительно 45, от приблизительно 8,0 до приблизительно 40, от приблизительно 8,0 до приблизительно 35, от приблизительно 8,0 до приблизительно 30, от приблизительно 8,0 до приблизительно 25, от приблизительно 8,0 до приблизительно 20, от приблизительно 8,0 до приблизительно 18, от приблизительно 8,0 до приблизительно 16, от приблизительно 8,0 до приблизительно 14, от приблизительно 8,0 до приблизительно 12, от приблизительно 8,0 до приблизительно 10, от приблизительно 8,0 до приблизительно 9,0,

от приблизительно 9,0 до приблизительно 110, от приблизительно 9,0 до приблизительно 95, от приблизительно 9,0 до приблизительно 90, от приблизительно 9,0 до приблизительно 85, от приблизительно 9,0 до приблизительно 80, от приблизительно 9,0 до приблизительно 75, от приблизительно 9,0 до приблизительно 70, от приблизительно 9,0 до приблизительно 65, от приблизительно 9,0 до приблизительно 60, от приблизительно 9,0 до приблизительно 55, от приблизительно 9,0 до приблизительно 50, от приблизительно 9,0 до приблизительно 45, от приблизительно 9,0 до приблизительно 40, от приблизительно 9,0 до приблизительно 35, от приблизительно 9,0 до приблизительно 30, от приблизительно 9,0 до приблизительно 25, от приблизительно 9,0 до приблизительно 20, от приблизительно 9,0 до приблизительно 18,

от приблизительно 9,0 до приблизительно 16, от приблизительно 9,0 до приблизительно 14, от приблизительно 9,0 до приблизительно 12, от приблизительно 9,0 до приблизительно 10, от приблизительно 10 до приблизительно 110, от приблизительно 10 до приблизительно 95, от приблизительно 10 до приблизительно 90, от приблизительно 10 до приблизительно 85, от приблизительно 10 до приблизительно 80, от приблизительно 10 до приблизительно 75, от приблизительно 10 до приблизительно 70, от приблизительно 10 до приблизительно 65, от приблизительно 10 до приблизительно 60, от приблизительно 10 до приблизительно 55,

от приблизительно 10 до приблизительно 50, от приблизительно 10 до приблизительно 45, от приблизительно 10 до приблизительно 40, от приблизительно 10 до приблизительно 35, от приблизительно 10 до приблизительно 30, от приблизительно 10 до приблизительно 25, от приблизительно 10 до приблизительно 20, от приблизительно 10 до приблизительно 18, от приблизительно 10 до приблизительно 16, от приблизительно 10 до приблизительно 14, от приблизительно 10 до приблизительно 12,

от приблизительно 12 до приблизительно 110, от приблизительно 12 до приблизительно 95, от приблизительно 12 до приблизительно 90, от приблизительно 12 до приблизительно 85, от приблизительно 12 до приблизительно 80, от приблизительно 12 до приблизительно 75, от приблизительно 12 до приблизительно 70, от приблизительно 12 до приблизительно 65, от приблизительно 12 до приблизительно 60, от приблизительно 12 до приблизительно 55, от приблизительно 12 до приблизительно 50,

от приблизительно 12 до приблизительно 45, от приблизительно 12 до приблизительно 40, от приблизительно 12 до приблизительно 35, от приблизительно 12 до приблизительно 30, от приблизительно 12 до приблизительно 25, от приблизительно 12 до приблизительно 20, от приблизительно 12 до приблизительно 18, от приблизительно 12 до приблизительно 16, от приблизительно 12 до приблизительно 14, от приблизительно 14 до приблизительно 110, от приблизительно 14 до приблизительно 95, от приблизительно 14 до приблизительно 90, от приблизительно 14 до приблизительно 85, от приблизительно 14 до приблизительно 80, от приблизительно 14 до приблизительно 75,

от приблизительно 14 до приблизительно 70, от приблизительно 14 до приблизительно 65, от приблизительно 14 до приблизительно 60, от приблизительно 14 до приблизительно 55, от приблизительно 14 до приблизительно 50, от приблизительно 14 до приблизительно 45, от приблизительно 14 до приблизительно 40, от приблизительно 14 до приблизительно 35, от приблизительно 14 до приблизительно 30, от приблизительно 14 до приблизительно 25, от приблизительно 14 до приблизительно 20,

от приблизительно 14 до приблизительно 18, от приблизительно 14 до приблизительно 16, от приблизительно 16 до приблизительно 110, от приблизительно 16 до приблизительно 95, от приблизительно 16 до приблизительно 90, от приблизительно 16 до приблизительно 85, от приблизительно 16 до приблизительно 80, от приблизительно 16 до приблизительно 75, от приблизительно 16 до приблизительно 70, от приблизительно 16 до приблизительно 65, от приблизительно 16 до приблизительно 60,

от приблизительно 16 до приблизительно 55, от приблизительно 16 до приблизительно 50, от приблизительно 16 до приблизительно 45, от приблизительно 16 до приблизительно 40, от приблизительно 16 до приблизительно 35, от приблизительно 16 до приблизительно 30, от приблизительно 16 до приблизительно 25, от приблизительно 16 до приблизительно 20, от приблизительно 16 до приблизительно 18, от приблизительно 18 до приблизительно 110, от приблизительно 18 до приблизительно 95, от приблизительно 18 до приблизительно 90, от приблизительно 18 до приблизительно 85, от приблизительно 18 до приблизительно 80, от приблизительно 18 до приблизительно 75,

от приблизительно 18 до приблизительно 70, от приблизительно 18 до приблизительно 65, от приблизительно 18 до приблизительно 60, от приблизительно 18 до приблизительно 55, от приблизительно 18 до приблизительно 50, от приблизительно 18 до приблизительно 45, от приблизительно 18 до приблизительно 40, от приблизительно 18 до приблизительно 35, от приблизительно 18 до приблизительно 30, от приблизительно 18 до приблизительно 25, от приблизительно 18 до приблизительно 20, от приблизительно 20 до приблизительно 110, от приблизительно 20 до приблизительно 95, от приблизительно 20 до приблизительно 90, от приблизительно 20 до приблизительно 85,

от приблизительно 20 до приблизительно 80, от приблизительно 20 до приблизительно 75, от приблизительно 20 до приблизительно 70, от приблизительно 20 до приблизительно 65, от приблизительно 20 до приблизительно 60, от приблизительно 20 до приблизительно 55, от приблизительно 20 до приблизительно 50, от приблизительно 20 до приблизительно 45, от приблизительно 20 до приблизительно 40, от приблизительно 20 до приблизительно 35, от приблизительно 20 до приблизительно 30,

от приблизительно 20 до приблизительно 25, от приблизительно 25 до приблизительно 110, от приблизительно 25 до приблизительно 95, от приблизительно 25 до приблизительно 90, от приблизительно 25 до приблизительно 85, от приблизительно 25 до приблизительно 80, от приблизительно 25 до приблизительно 75, от приблизительно 25 до приблизительно 70, от приблизительно 25 до приблизительно 65, от приблизительно 25 до приблизительно 60, от приблизительно 25 до приблизительно 55,

от приблизительно 25 до приблизительно 50, от приблизительно 25 до приблизительно 45, от приблизительно 25 до приблизительно 40, от приблизительно 25 до приблизительно 35, от приблизительно 25 до приблизительно 30, от приблизительно 30 до приблизительно 110, от приблизительно 30 до приблизительно 95, от приблизительно 30 до приблизительно 90, от приблизительно 30 до приблизительно 85, от приблизительно 30 до приблизительно 80, от приблизительно 30 до приблизительно 75, от приблизительно 30 до приблизительно 70, от приблизительно 30 до приблизительно 65, от приблизительно 30 до приблизительно 60, от приблизительно 30 до приблизительно 55,

от приблизительно 30 до приблизительно 50, от приблизительно 30 до приблизительно 45, от приблизительно 30 до приблизительно 40, от приблизительно 30 до приблизительно 35, от приблизительно 35 до приблизительно 110, от приблизительно 35 до приблизительно 95, от приблизительно 35 до приблизительно 90, от приблизительно 35 до приблизительно 85, от приблизительно 35 до приблизительно 80, от приблизительно 35 до приблизительно 75, от приблизительно 35 до приблизительно 70,

от приблизительно 35 до приблизительно 65, от приблизительно 35 до приблизительно 60, от приблизительно 35 до приблизительно 55, от приблизительно 35 до приблизительно 50, от приблизительно 35 до приблизительно 45, от приблизительно 35 до приблизительно 40, от приблизительно 40 до приблизительно 110, от приблизительно 40 до приблизительно 95, от приблизительно 40 до приблизительно 90, от приблизительно 40 до приблизительно 85, от приблизительно 40 до приблизительно 80,

от приблизительно 40 до приблизительно 75, от приблизительно 40 до приблизительно 70, от приблизительно 40 до приблизительно 65, от приблизительно 40 до приблизительно 60, от приблизительно 40 до приблизительно 55, от приблизительно 40 до приблизительно 50, от приблизительно 40 до приблизительно 45, от приблизительно 45 до приблизительно 110, от приблизительно 45 до приблизительно 95, от приблизительно 45 до приблизительно 90, от приблизительно 45 до приблизительно 85,

от приблизительно 45 до приблизительно 80, от приблизительно 45 до приблизительно 75, от приблизительно 45 до приблизительно 70, от приблизительно 45 до приблизительно 65, от приблизительно 45 до приблизительно 60, от приблизительно 45 до приблизительно 55, от приблизительно 45 до приблизительно 50, от приблизительно 50 до приблизительно 110, от приблизительно 50 до приблизительно 95, от приблизительно 50 до приблизительно 90, от приблизительно 50 до приблизительно 85,

от приблизительно 50 до приблизительно 80, от приблизительно 50 до приблизительно 75, от приблизительно 50 до приблизительно 70, от приблизительно 50 до приблизительно 65, от приблизительно 50 до приблизительно 60, от приблизительно 50 до приблизительно 55, от приблизительно 55 до приблизительно 110, от приблизительно 55 до приблизительно 95, от приблизительно 55 до приблизительно 90, от приблизительно 55 до приблизительно 85, от приблизительно 55 до приблизительно 80, от приблизительно 55 до приблизительно 75, от приблизительно 55 до приблизительно 70, от приблизительно 55 до приблизительно 65, от приблизительно 55 до приблизительно 60,

от приблизительно 60 до приблизительно 110, от приблизительно 60 до приблизительно 95, от приблизительно 60 до приблизительно 90, от приблизительно 60 до приблизительно 85, от приблизительно 60 до приблизительно 80, от приблизительно 60 до приблизительно 75, от приблизительно 60 до приблизительно 70, от приблизительно 60 до приблизительно 65, от приблизительно 65 до приблизительно 110, от приблизительно 65 до приблизительно 95, от приблизительно 65 до приблизительно 90,

от приблизительно 65 до приблизительно 85, от приблизительно 65 до приблизительно 80, от приблизительно 65 до приблизительно 75, от приблизительно 65 до приблизительно 70, от приблизительно 70 до приблизительно 110, от приблизительно 70 до приблизительно 95, от приблизительно 70 до приблизительно 90, от приблизительно 70 до приблизительно 85, от приблизительно 70 до приблизительно 80, от приблизительно 70 до приблизительно 75, от приблизительно 75 до приблизительно 110,

от приблизительно 75 до приблизительно 95, от приблизительно 75 до приблизительно 90, от приблизительно 75 до приблизительно 85, от приблизительно 75 до приблизительно 80, от приблизительно 80 до приблизительно 110, от приблизительно 80 до приблизительно 95, от приблизительно 80 до приблизительно 90, от приблизительно 80 до приблизительно 85, от приблизительно 85 до приблизительно 110, от приблизительно 85 до приблизительно 95, от приблизительно 85 до приблизительно 90,

от приблизительно 90 до приблизительно 110, от приблизительно 90 до приблизительно 95, от приблизительно 95 до приблизительно 110, от приблизительно 95 до приблизительно 105, от приблизительно 95 до приблизительно 100, от приблизительно 100 до приблизительно 110, от приблизительно 100 до приблизительно 105 или от приблизительно 105 до приблизительно 110);

(b) промышленный биореактор характеризуется показателем объем воздуха на объем жидкости в минуту (VVM) (мин.^-1) от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,10 (например, от приблизительно 0,02 до приблизительно 0,08, от приблизительно 0,04 до приблизительно 0,06 или приблизительно 0,06) (например, от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,10, от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,09, от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,08, от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,07,

от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,06, от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,05, от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,04, от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,03, от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,02, от приблизительно 0,02 до приблизительно 0,10, от приблизительно 0,02 до приблизительно 0,09, от приблизительно 0,02 до приблизительно 0,08, от приблизительно 0,02 до приблизительно 0,07,

от приблизительно 0,02 до приблизительно 0,06, от приблизительно 0,02 до приблизительно 0,05, от приблизительно 0,02 до приблизительно 0,04, от приблизительно 0,02 до приблизительно 0,03, от приблизительно 0,03 до приблизительно 0,10, от приблизительно 0,03 до приблизительно 0,09, от приблизительно 0,03 до приблизительно 0,08, от приблизительно 0,03 до приблизительно 0,07, от приблизительно 0,03 до приблизительно 0,06, от приблизительно 0,03 до приблизительно 0,05, от приблизительно 0,03 до приблизительно 0,04, от приблизительно 0,04 до приблизительно 0,10,

от приблизительно 0,04 до приблизительно 0,09, от приблизительно 0,04 до приблизительно 0,08, от приблизительно 0,04 до приблизительно 0,07, от приблизительно 0,04 до приблизительно 0,06, от приблизительно 0,04 до приблизительно 0,05, от приблизительно 0,05 до приблизительно 0,10, от приблизительно 0,05 до приблизительно 0,09, от приблизительно 0,05 до приблизительно 0,08, от приблизительно 0,05 до приблизительно 0,07,

от приблизительно 0,05 до приблизительно 0,06, от приблизительно 0,06 до приблизительно 0,10, от приблизительно 0,06 до приблизительно 0,09, от приблизительно 0,06 до приблизительно 0,08, от приблизительно 0,06 до приблизительно 0,07, от приблизительно 0,07 до приблизительно 0,10, от приблизительно 0,07 до приблизительно 0,09, от приблизительно 0,07 до приблизительно 0,08, от приблизительно 0,08 до приблизительно 0,10,

от приблизительно 0,08 до приблизительно 0,09 или от приблизительно 0,09 до приблизительно 0,10);

(c) среда содержит сенсибилизирующее средство (например, любое из сенсибилизирующих средств, описанных в данном документе или известных из уровня техники) в концентрации от приблизительно 0 ppm до приблизительно 5000 ppm (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе); и

(d) жидкая культуральная среда содержит вещество-протектор (например, любое из веществ-протекторов, описанных в данном документе или известных из уровня техники) в концентрации от приблизительно 1 г/л до приблизительно 15 г/л (например, любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе, например, от приблизительно 1 г/л до приблизительно 15 г/л, от приблизительно 1 г/л до приблизительно 14 г/л, от приблизительно 1 г/л до приблизительно 13 г/л, от приблизительно 1 г/л до приблизительно 12 г/л, от приблизительно 1 г/л до приблизительно 11 г/л,

от приблизительно 2 г/л до приблизительно 15 г/л, от приблизительно 2 г/л до приблизительно 14 г/л, от приблизительно 2 г/л до приблизительно 13 г/л, от приблизительно 2 г/л до приблизительно 12 г/л, от приблизительно 2 г/л до приблизительно 11 г/л, от приблизительно 3 г/л до приблизительно 15 г/л, от приблизительно 3 г/л до приблизительно 14 г/л, от приблизительно 3 г/л до приблизительно 13 г/л,

от приблизительно 3 г/л до приблизительно 12 г/л, от приблизительно 3 г/л до приблизительно 11 г/л, от приблизительно 4 г/л до приблизительно 15 г/л, от приблизительно 4 г/л до приблизительно 14 г/л, от приблизительно 4 г/л до приблизительно 13 г/л, от приблизительно 4 г/л до приблизительно 12 г/л, от приблизительно 4 г/л до приблизительно 11 г/л, от приблизительно 5 г/л до приблизительно 15 г/л,

от приблизительно 5 г/л до приблизительно 14 г/л, от приблизительно 5 г/л до приблизительно 13 г/л, от приблизительно 5 г/л до приблизительно 12 г/л, от приблизительно 5 г/л до приблизительно 11 г/л, от приблизительно 6 г/л до приблизительно 15 г/л, от приблизительно 6 г/л до приблизительно 14 г/л, от приблизительно 6 г/л до приблизительно 13 г/л, от приблизительно 6 г/л до приблизительно 12 г/л,

от приблизительно 6 г/л до приблизительно 11 г/л, от приблизительно 7 г/л до приблизительно 15 г/л, от приблизительно 7 г/л до приблизительно 14 г/л, от приблизительно 7 г/л до приблизительно 13 г/л, от приблизительно 7 г/л до приблизительно 12 г/л, от приблизительно 7 г/л до приблизительно 11 г/л, от приблизительно 8 г/л до приблизительно 15 г/л, от приблизительно 8 г/л до приблизительно 14 г/л,

от приблизительно 8 г/л до приблизительно 13 г/л, от приблизительно 8 г/л до приблизительно 12 г/л, от приблизительно 8 г/л до приблизительно 11 г/л, от приблизительно 9 г/л до приблизительно 15 г/л, от приблизительно 9 г/л до приблизительно 14 г/л,

от приблизительно 9 г/л до приблизительно 13 г/л, от приблизительно 9 г/л до приблизительно 12 г/л, от приблизительно 9 г/л до приблизительно 11 г/л, от приблизительно 10 г/л до приблизительно 15 г/л, от приблизительно 10 г/л до приблизительно 14 г/л, от приблизительно 10 г/л до приблизительно 13 г/л, от приблизительно 10 г/л до приблизительно 12 г/л, от приблизительно 10 г/л до приблизительно 11 г/л,

от приблизительно 11 г/л до приблизительно 15 г/л, от приблизительно 11 г/л до приблизительно 14 г/л, от приблизительно 11 г/л до приблизительно 13 г/л, от приблизительно 11 г/л до приблизительно 12 г/л, от приблизительно 12 г/л до приблизительно 15 г/л,

от приблизительно 12 г/л до приблизительно 14 г/л, от приблизительно 12 г/л до приблизительно 13 г/л, от приблизительно 13 г/л до приблизительно 15 г/л, от приблизительно 13 г/л до приблизительно 14 г/л или от приблизительно 14 г/л до приблизительно 15 г/л).

При оптимизированных условиях удельный коэффициент гибели клеток может составлять, или предположительно составляет, менее 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39% или 40% в сутки. При оптимизированных условиях удельный коэффициент гибели клеток может составлять от приблизительно 0,1% до приблизительно 40% (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе).

В некоторых вариантах осуществления жизнеспособность клеток можно определять путем измерения концентрации дегидрогеназы молочной кислоты (LDH). Удельное продуцирование LDH клеткой (нЕд./клетка/сутки) может составлять, или предположительно составляет, менее 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 или 200 (например, 150). В некоторых вариантах осуществления продуцирование LDH (нЕд./клетка/сутки) может составлять от приблизительно 0,1 до приблизительно 200 (например, любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе, например, от приблизительно 0,1 до приблизительно 200, от приблизительно 0,1 до приблизительно 190, от приблизительно 0,1 до приблизительно 180, от приблизительно 0,1 до приблизительно 170,

от приблизительно 0,1 до приблизительно 160, от приблизительно 0,5 до приблизительно 200, от приблизительно 0,5 до приблизительно 190, от приблизительно 0,5 до приблизительно 180, от приблизительно 0,5 до приблизительно 170, от приблизительно 0,5 до приблизительно 160, от приблизительно 1,0 до приблизительно 200, от приблизительно 1,0 до приблизительно 190, от приблизительно 1,0 до приблизительно 180, от приблизительно 1,0 до приблизительно 170, от приблизительно 1,0 до приблизительно 160, от приблизительно 2,5 до приблизительно 200, от приблизительно 2,5 до приблизительно 190, от приблизительно 2,5 до приблизительно 180,

от приблизительно 2,5 до приблизительно 170, от приблизительно 2,5 до приблизительно 160, от приблизительно 5,0 до приблизительно 200, от приблизительно 5,0 до приблизительно 190, от приблизительно 5,0 до приблизительно 180, от приблизительно 5,0 до приблизительно 170, от приблизительно 5,0 до приблизительно 160, от приблизительно 10 до приблизительно 200, от приблизительно 10 до приблизительно 190, от приблизительно 10 до приблизительно 180, от приблизительно 10 до приблизительно 170, от приблизительно 10 до приблизительно 160, от приблизительно 20 до приблизительно 200, от приблизительно 20 до приблизительно 190,

от приблизительно 20 до приблизительно 180, от приблизительно 20 до приблизительно 170, от приблизительно 20 до приблизительно 160, от приблизительно 30 до приблизительно 200, от приблизительно 30 до приблизительно 190, от приблизительно 30 до приблизительно 180, от приблизительно 30 до приблизительно 170, от приблизительно 30 до приблизительно 160, от приблизительно 40 до приблизительно 200, от приблизительно 40 до приблизительно 190, от приблизительно 40 до приблизительно 180, от приблизительно 40 до приблизительно 170, от приблизительно 40 до приблизительно 160, от приблизительно 50 до приблизительно 200,

от приблизительно 50 до приблизительно 190, от приблизительно 50 до приблизительно 180, от приблизительно 50 до приблизительно 170, от приблизительно 50 до приблизительно 160, от приблизительно 60 до приблизительно 200, от приблизительно 60 до приблизительно 190, от приблизительно 60 до приблизительно 180, от приблизительно 60 до приблизительно 170, от приблизительно 60 до приблизительно 160, от приблизительно 70 до приблизительно 200, от приблизительно 70 до приблизительно 190, от приблизительно 70 до приблизительно 180, от приблизительно 70 до приблизительно 170, от приблизительно 70 до приблизительно 160,

от приблизительно 80 до приблизительно 200, от приблизительно 80 до приблизительно 190, от приблизительно 80 до приблизительно 180, от приблизительно 80 до приблизительно 170, от приблизительно 80 до приблизительно 160, от приблизительно 90 до приблизительно 200, от приблизительно 90 до приблизительно 190, от приблизительно 90 до приблизительно 180, от приблизительно 90 до приблизительно 170, от приблизительно 90 до приблизительно 160, от приблизительно 100 до приблизительно 200, от приблизительно 100 до приблизительно 190, от приблизительно 100 до приблизительно 180, от приблизительно 100 до приблизительно 170,

от приблизительно 100 до приблизительно 160, от приблизительно 110 до приблизительно 200, от приблизительно 110 до приблизительно 190, от приблизительно 110 до приблизительно 180, от приблизительно 110 до приблизительно 170, от приблизительно 110 до приблизительно 160, от приблизительно 120 до приблизительно 200, от приблизительно 120 до приблизительно 190, от приблизительно 120 до приблизительно 180, от приблизительно 120 до приблизительно 170,

от приблизительно 120 до приблизительно 160, от приблизительно 130 до приблизительно 200, от приблизительно 130 до приблизительно 190, от приблизительно 130 до приблизительно 180, от приблизительно 130 до приблизительно 170, от приблизительно 130 до приблизительно 160, от приблизительно 140 до приблизительно 200, от приблизительно 140 до приблизительно 190, от приблизительно 140 до приблизительно 180, от приблизительно 140 до приблизительно 170,

от приблизительно 140 до приблизительно 160, от приблизительно 150 до приблизительно 200, от приблизительно 150 до приблизительно 190, от приблизительно 150 до приблизительно 180, от приблизительно 150 до приблизительно 170, от приблизительно 150 до приблизительно 160, от приблизительно 160 до приблизительно 200, от приблизительно 160 до приблизительно 190, от приблизительно 160 до приблизительно 180, от приблизительно 160 до приблизительно 170,

от приблизительно 170 до приблизительно 200, от приблизительно 170 до приблизительно 190, от приблизительно 170 до приблизительно 180, от приблизительно 180 до приблизительно 200, от приблизительно 180 до приблизительно 190 или от приблизительно 190 до приблизительно 200).

В некоторых вариантах осуществления кажущаяся скорость роста может составлять, или предположительно составляет, более 1% в сутки, более 1,5% в сутки, более 2% в сутки, более 2,5% в сутки, более 3% в сутки, более 3,5% в сутки, более 4,0% в сутки, более 4,5% в сутки, более 5,0% в сутки, более 5,5% в сутки, более 6,0% в сутки, более 6,5% в сутки, более 7,0% в сутки, более 7,5% в сутки, более 8,0% в сутки, более 8,5% в сутки, более 9,0% в сутки, более 9,5% в сутки, более 10,0% в сутки, более 10,5% в сутки, более 11,0% в сутки, более 11,5% в сутки,

более 12,0% в сутки, более 12,5% в сутки, более 13,0% в сутки, более 13,5% в сутки, более 14,0% в сутки, более 14,5% в сутки,

более 15,0% в сутки, более 16% в сутки, более 17% в сутки, более 18% в сутки, более 19% в сутки, более 20% в сутки, более 21% в сутки, более 22% в сутки, более 23% в сутки, более 24% в сутки,

более 25% в сутки, более 30% в сутки, более 35% в сутки, более 40% в сутки, более 45% в сутки, более 50% в сутки, более 55% в сутки, более 60% в сутки, более 65% в сутки, более 70% в сутки, более 75% в сутки, более 80% в сутки,

более 85% в сутки, более 90% в сутки, более 95% в сутки, более 100% в сутки, более 105% в сутки, более 110% в сутки, более 115% в сутки, более 120% в сутки, более 125% в сутки,

более 130% в сутки, более 135% в сутки, более 140% в сутки, более 145% в сутки или более 150% в сутки. В некоторых вариантах осуществления кажущаяся скорость роста может составлять от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 150% в сутки (например, любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе, например, от приблизительно 0,1% до приблизительно 48%,

от приблизительно 0,1% до приблизительно 46%, от приблизительно 0,1% до приблизительно 44%, от приблизительно 0,1% до приблизительно 42%, от приблизительно 0,5% до приблизительно 50%, от приблизительно 0,5% до приблизительно 48%, от приблизительно 0,5% до приблизительно 46%, от приблизительно 0,5% до приблизительно 44%, от приблизительно 0,5% до приблизительно 42%, от приблизительно 1,0% до приблизительно 50%,

от приблизительно 1,0% до приблизительно 48%, от приблизительно 1,0% до приблизительно 46%, от приблизительно 1,0% до приблизительно 44%, от приблизительно 1,0% до приблизительно 42%, от приблизительно 2,0% до приблизительно 50%, от приблизительно 2,0% до приблизительно 48%, от приблизительно 2,0% до приблизительно 46%, от приблизительно 2,0% до приблизительно 44%, от приблизительно 2,0% до приблизительно 42%,

от приблизительно 4,0% до приблизительно 50%, от приблизительно 4,0% до приблизительно 48%, от приблизительно 4,0% до приблизительно 46%, от приблизительно 4,0% до приблизительно 44%, от приблизительно 4,0% до приблизительно 42%, от приблизительно 6,0% до приблизительно 50%, от приблизительно 6,0% до приблизительно 48%, от приблизительно 6,0% до приблизительно 46%, от приблизительно 6,0% до приблизительно 44%,

от приблизительно 6,0% до приблизительно 42%, от приблизительно 8,0% до приблизительно 50%, от приблизительно 8,0% до приблизительно 48%, от приблизительно 8,0% до приблизительно 46%, от приблизительно 8,0% до приблизительно 44%, от приблизительно 8,0% до приблизительно 42%, от приблизительно 10% до приблизительно 50%, от приблизительно 10% до приблизительно 48%, от приблизительно 10% до приблизительно 46%,

от приблизительно 10% до приблизительно 44%, от приблизительно 10% до приблизительно 42%, от приблизительно 12% до приблизительно 50%, от приблизительно 12% до приблизительно 48%, от приблизительно 12% до приблизительно 46%, от приблизительно 12% до приблизительно 44%, от приблизительно 12% до приблизительно 42%, от приблизительно 14% до приблизительно 50%, от приблизительно 14% до приблизительно 48%,

от приблизительно 14% до приблизительно 46%, от приблизительно 14% до приблизительно 44%, от приблизительно 14% до приблизительно 42%, от приблизительно 16% до приблизительно 50%, от приблизительно 16% до приблизительно 48%, от приблизительно 16% до приблизительно 46%, от приблизительно 16% до приблизительно 44%, от приблизительно 16% до приблизительно 42%, от приблизительно 18% до приблизительно 50%, от приблизительно 18% до приблизительно 48%, от приблизительно 18% до приблизительно 46%, от приблизительно 18% до приблизительно 44%, от приблизительно 18% до приблизительно 42%, от приблизительно 20% до приблизительно 50%, от приблизительно 20% до приблизительно 48%, от приблизительно 20% до приблизительно 46%,

от приблизительно 20% до приблизительно 44%, от приблизительно 20% до приблизительно 42%, от приблизительно 22% до приблизительно 50%, от приблизительно 22% до приблизительно 48%, от приблизительно 22% до приблизительно 46%, от приблизительно 22% до приблизительно 44%, от приблизительно 22% до приблизительно 42%, от приблизительно 24% до приблизительно 50%, от приблизительно 24% до приблизительно 48%,

от приблизительно 24% до приблизительно 46%, от приблизительно 24% до приблизительно 44%, от приблизительно 24% до приблизительно 42%, от приблизительно 26% до приблизительно 50%, от приблизительно 26% до приблизительно 48%, от приблизительно 26% до приблизительно 46%, от приблизительно 26% до приблизительно 44%, от приблизительно 26% до приблизительно 42%, от приблизительно 28% до приблизительно 50%, от приблизительно 28% до приблизительно 48%, от приблизительно 28% до приблизительно 46%, от приблизительно 28% до приблизительно 44%,

от приблизительно 28% до приблизительно 42%, от приблизительно 30% до приблизительно 50%, от приблизительно 30% до приблизительно 48%, от приблизительно 30% до приблизительно 46%, от приблизительно 30% до приблизительно 44%, от приблизительно 30% до приблизительно 42%, от приблизительно 32% до приблизительно 50%, от приблизительно 32% до приблизительно 48%, от приблизительно 32% до приблизительно 46%,

от приблизительно 32% до приблизительно 44%, от приблизительно 32% до приблизительно 42%, от приблизительно 34% до приблизительно 50%, от приблизительно 34% до приблизительно 48%, от приблизительно 34% до приблизительно 46%, от приблизительно 34% до приблизительно 44%,

от приблизительно 34% до приблизительно 42%, от приблизительно 36% до приблизительно 50%, от приблизительно 36% до приблизительно 48%, от приблизительно 36% до приблизительно 46%, от приблизительно 36% до приблизительно 44%, от приблизительно 36% до приблизительно 42%, от приблизительно 38% до приблизительно 50%, от приблизительно 38% до приблизительно 48%, от приблизительно 38% до приблизительно 46%,

от приблизительно 38% до приблизительно 44%, от приблизительно 38% до приблизительно 42%, от приблизительно 40% до приблизительно 50%, от приблизительно 40% до приблизительно 48%, от приблизительно 40% до приблизительно 46%, от приблизительно 40% до приблизительно 44%, от приблизительно 40% до приблизительно 42%, от приблизительно 42% до приблизительно 50%, от приблизительно 42% до приблизительно 48%,

от приблизительно 42% до приблизительно 46%, от приблизительно 42% до приблизительно 44%, от приблизительно 44% до приблизительно 50%, от приблизительно 44% до приблизительно 48%, от приблизительно 44% до приблизительно 46%, от приблизительно 46% до приблизительно 50%, от приблизительно 46% до приблизительно 48% или от приблизительно 48% до приблизительно 50%).

В некоторых вариантах осуществления данных способов сенсибилизирующее средство представляет собой противовспенивающее средство (например, противовспениватель на основе полидиметилсилоксана, симетикон или любой из других противовспенивателей, описанных в данном документе или известных из уровня техники). В некоторых вариантах осуществления вещество-протектор представляет собой полоксамер (например, полоксамер-188, полоксамер-401, полоксамер-402 или полоксамер-407), полоксамин (например, полоксамин-904 или полоксамин-908) или полиол Pluronic.

В некоторых вариантах осуществления данных способов промышленный биореактор (например, любой из приведенных в качестве примера промышленных биореакторов, описанных в данном документе или известных из уровня техники) имеет объем от приблизительно 5 л до приблизительно 20000 л (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе). В некоторых вариантах осуществления данных способов промышленный биореактор представляет собой перфузионный биореактор. В некоторых вариантах осуществления данных способов промышленный биореактор представляет собой биореактор периодического действия с подпиткой.

В некоторых вариантах осуществления способ приводит к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему менее 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39% или 40% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. В некоторых вариантах осуществления способ приводит к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему от приблизительно 0,1% до приблизительно 40% в сутки (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе), в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления способ приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 150 нЕд./клетка/сутки, менее 145 нЕд./клетка/сутки, менее 140 нЕд./клетка/сутки, менее 135 нЕд./клетка/сутки, менее 130 нЕд./клетка/сутки, менее 125 нЕд./клетка/сутки,

менее 120 нЕд./клетка/сутки, менее 115 нЕд./клетка/сутки, менее 150 нЕд./клетка/сутки, менее 110 нЕд./клетка/сутки, менее 105 нЕд./клетка/сутки, менее 100 нЕд./клетка/сутки, менее 95 нЕд./клетка/сутки, менее 90 нЕд./клетка/сутки,

менее 85 нЕд./клетка/сутки, менее 80 нЕд./клетка/сутки, менее 75 нЕд./клетка/сутки, менее 70 нЕд./клетка/сутки, менее 65 нЕд./клетка/сутки, менее 60 нЕд./клетка/сутки, менее 55 нЕд./клетка/сутки, менее 50 нЕд./клетка/сутки, менее 45 нЕд./клетка/сутки, менее 45 нЕд./клетка/сутки, менее 40 нЕд./клетка/сутки¸ менее 35 нЕд./клетка/сутки,

менее 30 нЕд./клетка/сутки, менее 25 нЕд./клетка/сутки, менее 20 нЕд./клетка/сутки, менее 15 нЕд./клетка/сутки, менее 10 нЕд./клетка/сутки,

менее 5 нЕд./клетка/сутки или менее менее 1 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. В некоторых вариантах осуществления данных способов способ приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему от приблизительно 0,1 нЕд./клетка/сутки до приблизительно 150 нЕд./клетка/сутки (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе), в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления способ приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 1% в сутки, более 1,5% в сутки, более 2% в сутки, более 2,5% в сутки, более 3% в сутки, более 3,5% в сутки,

более 4,0% в сутки, более 4,5% в сутки, более 5,0% в сутки, более 5,5% в сутки, более 6,0% в сутки, более 6,5% в сутки, более 7,0% в сутки, более 7,5% в сутки, более 8,0% в сутки,

более 8,5% в сутки, более 9,0% в сутки, более 9,5% в сутки, более 10,0% в сутки, более 10,5% в сутки, более 11,0% в сутки, более 11,5% в сутки, более 12,0% в сутки, более 12,5% в сутки, более 13,0% в сутки, более 13,5% в сутки, более 14,0% в сутки, более 14,5% в сутки, более 15,0% в сутки,

более 16% в сутки, более 17% в сутки, более 18% в сутки, более 19% в сутки, более 20% в сутки, более 21% в сутки,

более 22% в сутки, более 23% в сутки, более 24% в сутки, более 25% в сутки, более 30% в сутки, более 35% в сутки, более 40% в сутки, более 45% в сутки, более 50% в сутки,

более 55% в сутки, более 60% в сутки, более 65% в сутки, более 70% в сутки, более 75% в сутки, более 80% в сутки, более 85% в сутки, более 90% в сутки, более 95% в сутки,

более 100% в сутки, более 105% в сутки, более 110% в сутки, более 115% в сутки, более 120% в сутки,

более 125% в сутки, более 130% в сутки, более 135% в сутки, более 140% в сутки, более 145% в сутки

или более 150% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе. В некоторых вариантах осуществления данных способов способ приводит к кажущейся скорости роста, составляющей от приблизительно 0,1% в сутки до приблизительно 150% в сутки (или любой из поддиапазонов данного диапазона, описанного в данном документе), в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.

В некоторых вариантах осуществления данных способов клетка (например, любая из клеток, описанных в данном документе) содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую рекомбинантный терапевтический белок (например, любой из рекомбинантных терапевтических белков, описанных в данном документе). Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают сбор или извлечение рекомбинантного терапевтического белка. Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают очистку рекомбинантного терапевтического белка. Некоторые варианты осуществления данных способов дополнительно включают составление рецептуры с очищенным рекомбинантным терапевтическим белком.

В некоторых вариантах осуществления данных способов клетка представляет собой бактерию (например, любую из приведенных в качестве примера бактерий, описанных в данном документе или известных из уровня техники), дрожжевую клетку (например, любую из дрожжевых клеток, описанных в данном документе или известных из уровня техники) или клетку млекопитающего (например, любую из клеток млекопитающего, описанных в данном документе или известных из уровня техники).

В некоторых вариантах осуществления данных способов жизнеспособность клеток определяют путем измерения концентрации дегидрогеназы молочной кислоты (LDH) в испытательном сосуде для культивирования.

ПРИМЕРЫ

Настоящее изобретение дополнительно описано в нижеследующих примерах, которые не ограничивают объем настоящего изобретения, описанный в формуле изобретения.

ПРИМЕР 1. Полнофакторный скрининг, объединенный с прописанным центральным композиционным планом, для испытательных сосудов для культивирования

В качестве параметров были выбраны перемешивание вращением (об/мин)³, концентрация сенсибилизирующего средства и концентрация вещества-протектора. План полнофакторного эксперимента, объединенный с прописанным центральным композиционным планом, применяли для определения набора условий испытания (ФИГ. 7). При каждом условии испытания измеряли значения удельного продуцирования LDH. Результаты использовали для получения расчетного профиля выбранных параметров. Определяли области с низкой продуктивностью и области с неудовлетворительным результатом (ФИГ. 9).

ПРИМЕР 2. Прогнозирование значений удельного продуцирования LDH в лабораторном масштабе

Решающие эксперименты проводили в лабораторном масштабе для определения точности способов прогнозирования, описанных в данном документе.

Концентрацию веществ-протекторов в лабораторном масштабе устанавливали на трех различных уровнях. Для каждого уровня испытания проводили в двух лабораторных биореакторах для культивирования. За счет перфузионного процесса измеряли пиковые значения удельного продуцирования LDH и сравнивали с прогнозируемыми значениями.

Фактически наблюдаемые значения в результате экспериментов в лабораторном масштабе очень хорошо совпадали с прогнозируемыми значениями (P<0,0001, R²=0,84) (ФИГ. 13A и ФИГ. 13C). Результаты показали, что способы, описанные в данном документе, можно успешно применять для прогнозирования влияния различных параметров в большем масштабе.

Эксперименты проводили с поддержанием концентрации противовспенивателя за счет добавления противовспенивателя в количестве, находящемся в диапазоне от 30 до 40 ppm в сутки. Концентрации Pluronic регулировали на следующих уровнях: 1,8 г/л (пунктирная линия), 2,8 г/л (сплошная линия, закрашенные круги), 3,8 г/л (сплошная линия, незакрашенные круги). Эксперимент проводили несколько раз. Это демонстрирует способность моделей прогнозировать удельное продуцирование LDH при изменяющихся концентрациях Pluronic.

Эксперименты также проводили с повышением концентрации противовспенивающего средства от 30 ppm до 80 ppm в сутки. Прогнозируемый диапазон LDH составлял 90,19~96,38 и он очень хорошо совпадал с фактически наблюдаемым диапазоном LDH 94,74~99,36 (ФИГ. 14). Результаты показали, что способы, описанные в данном документе, можно успешно применять для прогнозирования влияния противовспенивающих средств.

ПРИМЕР 3. Прогнозирование значений удельного продуцирования LDH в промышленном масштабе

Эксперименты проводили в промышленном масштабе для определения точности модели, описанной в данном документе.

Испытания проводили в трех 50-литровых промышленных биореакторах и двух 100-литровых промышленных биореакторах. В экспериментах проводили испытания в отношении концентраций полоксамера-188 (Pluronic), которые находились в диапазоне от 1,8 г/л до 5,8 г/л.

Фактически наблюдаемые значения для удельного продуцирования LDH достаточно хорошо совпадали с прогнозируемыми значениями (P<0,0001, R²=0,84) (ФИГ. 15A и ФИГ. 15B). Результаты показали, что способы, описанные в данном документе, можно успешно применять для прогнозирования влияния выбранных параметров в промышленном масштабе (в масштабе промышленного биореактора).

ДРУГИЕ ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

Следует понимать, что хотя настоящее изобретение описано в сочетании с его подробным описанием, вышеизложенное описание предназначено для иллюстрации и не ограничивает объем настоящего изобретения, который определяется объемом прилагаемой формулы изобретения. Другие аспекты, преимущества и модификации находятся в пределах объема нижеследующей формулы изобретения.

1. Способ прогнозирования влияния концентрации сенсибилизирующего средства на жизнеспособность клеток в промышленном биореакторе, при этом способ включает:

(a) определение жизнеспособности клеток при совокупности условий испытания в испытательном сосуде для культивирования, причем совокупность условий испытания определена набором параметров, где совокупность условий проведения испытания выбирают на основании полнофакторного скрининга и/или прописанного центрального композиционного плана;

(b) прогнозирование влияния концентрации сенсибилизирующего средства на жизнеспособность клеток в промышленном биореакторе на основании жизнеспособности клеток в испытательном сосуде для культивирования при совокупности условий;

(c) культивирование клетки в производственном биореакторе с использованием концентрации сенсибилизирующего средства, которая, по прогнозам, приведет к:

удельной гибели клеток менее 40% в сутки при культивировании клеток в производственном биореакторе;

клеточно-специфической продукции LDH менее 150 нЕд/клетку во время культивирования клетки в производственном биореакторе; или

кажущейся скорости роста более 1% в день во время культивирования клеток в производственном биореакторе.

2. Способ по п. 1, где набор параметров предусматривает сдвиговое напряжение, концентрацию сенсибилизирующего средства и концентрацию вещества-протектора.

3. Способ по п. 1 или 2, где сенсибилизирующее средство представляет собой противовспенивающее средство.

4. Способ по любому из пп. 1-3, где испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу с дефлекторами и совокупность условий испытания включает одно или несколько из:

(a) перемешивания вращением со скоростью от 125 об/мин до 400 об/мин;

(b) концентрации сенсибилизирующего средства, составляющей от 0 ppm до 120 ppm; и

(c) концентрации вещества-протектора, составляющей от 1 г/л до 10 г/л.

5. Способ по п. 2 или 4, где вещество-протектор представляет собой полоксамер или полоксамин.

6. Способ прогнозирования жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе, при этом способ включает:

(a) выбор набора параметров, включающего по меньшей мере два параметра;

(b) определение жизнеспособности клеток при совокупности условий испытания, определенных набором параметров в испытательном сосуде для культивирования, где совокупность условий проведения испытания выбирают на основании полнофакторного скрининга и/или прописанного центрального композиционного плана;

(c) прогнозирование жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе на основании жизнеспособности клеток в испытательном сосуде для культивирования при совокупности условий;

(d) культивирование клетки в производственном биореакторе с использованием условий, которые, по прогнозам, приведут к:

удельной гибели клеток менее 40% в сутки при культивировании клеток в производственном биореакторе;

клеточно-специфической продукции LDH менее 150 нЕд/клетку во время культивирования клетки в производственном биореакторе; или

кажущейся скорости роста более 1% в день во время культивирования клеток в производственном биореакторе.

7. Способ по п. 6, где набор параметров предусматривает сдвиговое напряжение, концентрацию сенсибилизирующего средства и концентрацию вещества-протектора.

8. Способ по п. 7, где сенсибилизирующее средство представляет собой противовспенивающее средство.

9. Способ по любому из пп. 6-8, где испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу с дефлекторами и совокупность условий испытания включает одно или несколько из:

(a) перемешивания вращением со скоростью от 125 об/мин до 400 об/мин;

(b) концентрации сенсибилизирующего средства, составляющей от 0 ppm до 120 ppm; и

(c) концентрации вещества-протектора, составляющей от 1 г/л до 10 г/л.

10. Способ по п. 7 или 9, где вещество-протектор представляет собой полоксамер или полоксамин.