Способ получения l-глютаминазы

 

37I704

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

Союз Советскими

Социалистическими

Республик

Зависимый от патента №

Заявлено 12.11.1971 (№ 1620861/31-16)

Приоритет 20.II.1970, № P 2007792.3, ФРГ

М. Кл. А 61k 19/00

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

Опубликовано 22.11.1973. Бюллетень № 12

УДК 577.155.3(088.8) Дата опубликования описания 8Х.1973

Авторы изобретения

Иностранцы

Клаус Бауэр и Вильфрид Кауфманн (Федеративная Республика Германии) Иностранная фирма

«Фарбенфабрикен Байер АГ» (Федеративная Республика Германии) Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ГЛЮТАМИНАЗЪ|

Изабретение относится к области медицины.

Известен способ получения L-глютаминазы путем обработки клеток продуцента ацетоном с последующей экстракцией водой и выделением фе р мента:из экстракта фракцион ированием органическими растворителями.

Целью изобретения является,распгирение источникав получения фермента.

Достигается это тем, что в,качестве лродуце нта используют штамм АТСС 13985 Pseudoтопаз aureofaciens.

Hip и ме р 1. Выращенную при температуре 30 С скошенную агаровую .культуру из

Pseudomonas aureofaciens АТСС 13985 смывают 4,0 с и 0,9% -ного стерильного раствора

NaC1. 100 см стерильного 2%-ното (IIIo весу) фильтрованного до прозрачности раствора кукурузы в замочной воде (рН 7,0) заражают

2,0 см получен ной суопензии, содержащей бактерии, и вььдерживают в колбе Эрленмейера объемом 1 л в течение 8 час при температуре 30 С на машине для встряхивавия.

Полученная та ким образом культура, выращенная на качалке, служит в качеспве заправочного материала для ферментных культур.

Затем берут 8 л питательно го раствора (на водопроводной воде) следующего состава (г):

L-глютаминовая кислота 64, глицерин 48, молоч ная кислота 24,,КзНP04 9,2, КН2Р04 5,05, MNSO4 1,12, FeSO4 0,048, MnSO4 0,048, NaC1 0,048. С,помощью 1 н. натрового щелока доводят значение рН до 7,0, стерилизуют ь стеклянном ферментере емкостью 10 л в течение 30 ариан при 115 С, и после охлаждения заражают 25 смз,выращенной на качалке культуры Pseudomonas aureofaciens АТСС 13985.

)p Ферментационную исходную смесь подвергают аэрации при температуре 30 С четырьмя лит,рами воздуха в ми нуту при скорости вращения мешалки 200 об/мин. Через 5 — 6 часзначение рН ферментной культуры меняется с

15 7,0 на 7,5. В течение gальней ших 14 час в ipacтущую культуру вводят 1,5 л/мин углекислого газа (С02), в результате чего з|начение рН повышается до 8,0. Активность L-глютаминазы культурного;раствора составляет 8,3 ед/смз.

20 Клетки бактерий центрифугируют, затем из культурального бульона в дистиллированной ваде вторично суспендир уют до объема 0,32 л.

Для коагуляции бактерий суспензию вливают в 8 л ацетона, добавляют затем еще 4 л аце25 тана, и коагулированному клеточному материалу дают осадиться. Затем оставшийся наверху раствор декантируют, осадок п ромывают,овежим ацетоном и сушат в IBBкууме

371704

Составитель T. Головина

Редактор Н. Спиридонова Техред Е. Борисова

Корректор E. Денисова

Зак аз 1271/14 Изд. № 1248 Тираж 467 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

3 при температуре 30 С. П ри этом получают

35,6 г сухого клеточного материала с акти вностью L-тлютаминазы 1,63 ед/мг.

Пример 2. К 8 л культурального бульона, полученного как в примере.1, при энергичном размешивании добавляют 8 л ацетона. Коагулированному клеточному, материалу дают осадиться, затем прозрачный остававшийся наверху раствор дека нтируют, осадок дважды трромывают 4 л свежего ацетона и еще раз незначительным количеством ацетона, и затем сушат

euro в вакууме при температуре 30 С. Получают 39 г сухого клеточного материала с активностью L-глютаминазы 1,2 ед/мг.

Пример 3. Получение сырой глютаминазы посредством осаждения ацетоном. 1200 г, клеточ ното материала с 1,6 ед/мг вещества суспен д ируют в 21 л цитратного буфера со значением рН 5,0, размешивают в течение 2 час п р и комнатной тем пературе и затем, охлаждая, центрифугируют при 20 000 g. Остающийся на верху раствор омепти вают с тем же коли честном ацетона и выпадающий при этом осадок, по сле отстаивания IB течение 1 час, 5 центрифупируют .при 3000 об/мин, промывают ацетоном и сушат.

Экстракцию клеток повторяют. Выход:

321,2 г или 4,2 ед/мг или 75,23%.

10 Пред Mет изобретения

Способ получения L-глютаминазы путем обрабопки клеток продуцента ацетоном с атоследующей экстракцией водой и выделением

15 фермента из эистракта фракционированием органическими:растворителями, отличающийся тем, что, с целью расширения источников получения фермента, в качестве продуцента используют штамм АТСС 13985 Pseudomonas

20 aureofaciens.