Способ и приспособление для подсчета лейкоцитов на сухом мазке крови

 

Клд,се 30 а, 4 ъ" вол

- АВТОРСКОЕ СВИДЕТЕЛЬСТВО НА ИЗОБРЕТЕНИЕ

ОПИСАНИЕ способа и приспособления для подсчета форменных элементов крови.

К авторскому свидетельству К. Г. Карасева, заявленному

28 февраля 1936 года {спр. о перв. № 188000).

0 выдаче авторского свидетельства опубликовано 31 августа 1936 года.

Сосчитыванне кровяных телец произ- I водится гла:ным образом при помощи счетных камер разных авторов; ТомаЫейса, Бюркера, Предтеченского и, ! др., с разными сетками.

Счетная камера, при всех своих по- ложительных качествах, не лишена це- лого ряда очень существенных недо- статков. Пропускйая способность ее I очень ограничена. Камера не может I

I полностью удовлетворить важнейшим запросам при массовом гематологичезком исследовании, например, при обследовании большого количества отдельных групп населения, рабочих различных промышленных предприятий, шахт, физкультурников и т; д. №териал, исследуемый однократно в камере, в дальнейшем уничтожается, и в сомнительных случаях не может быть проверен илн повторно иссле- дован. Подсчет форменных элементов в камере неразрывно связан с наличием микроскопа, а также другой аппаратуры и реактивов на месте в момент исследования, что иногда не может быть выполнимым.

Имея и ряд других недостатков, камеры, при различного рода оплошностях, часто ломаются и пока относительно дороги.

Все это неуклонно приводит к необходимости изыскания способов расширения рамок, установленных счетной камерой, при гематологических исследованиях.

В основу предлагаемого способа взяты следующие четыре положения:

1. Точное объемное измерение количества крови для производства мазка.

2. Распределение взятой крови на площади определенного размера.

3. Возможность сосчитывания клеток крови на сухих мазках при помощи унифицированного измерения площади, на которой производится подсчет.

4. Достаточная точность результатов подсчета для научно-исследовательских и практических целей н техническая доступность метода.

Самым основным в предлагаемом способе является особый металлически и прибор, состоящий нз двух частей.

Фиг. 1 — 4 представляют -общий вид прибора; фиг. 5 — 10 представляют детали нижней, ббльшей по размерам, части, имеющей некоторое сходство с кассетой, куда вкладывается предметное стекло сначала для нанесения на нем мазка, а затем, после соответствующей обработки,— для подсчета клеток крови на сухом и крашеном, мазке. В этой части имеется два круглых отверстия — одно, диаметр которого равен 15,96 мм на нижней, другое, значительно большее отверстие,— на верхней стороне. Верхняя, меньшая по размерам, часть, представленная на фиг. 11 — 16, состоит из двух вложенных одно в другое колец. В нижнем кольце, для измерения площади, на которой производится сосчитывание форменных элементов крови, вделана нанесенная на прозрачной целлюлоидной пленке сетка (фиг. 16). Верхняя часть вкладывается в верхнее круглое отвер стие нижней части.

На фиг. 2 изображена сетка, состоящая из 16 мм, распределенных на площади, равной 1 см, следующим образом: 4 мм - помещены в средине, следующие 4 мм по углам и остальные 8 мм — по 2 мм на каждой стороне, Все внешние стороны отдельных квадратных миллиме- тров ограничены тройными линиями,: а все внутренние — одной линией. Кроме того, каждый миллиметр в свою очередь делится четырьмя двойными линиями, проходящими по две пары перпендикулярно друг к другу. Благодаря тройным и двойным линиям в каждом квадратном миллиметре получается

16 малых квадратиков размером в

0,01мм и 9 средних квадратов размером в 0,04 мм .

Таким образом во всех 16 мм - имеется

256 малых квадратиков и 144 средних квадрата. Линии сетки для большей контрастности и отчетливой видимости покрашены и обрезаны в нижнюю сгорону, т. е. к мазку. Целлюлоидная пленка, на которой нанесена сетка, так прикреплена к металлическому ободку, что когда последний вкладывается в верхнее отверстие нижней части счетной пластинки, то сетка ложится плотно на мазок, нанесенный на предметное стекло.

Способ употребления прибора следующий. Когда предметное стекло вкладывается внутрь нижней части описанного выше металлического прибора и

1 вынимается из него, верхняя часть последнего, чтобы не повредить сетки и мазка, должна быть обязательно отделена, а нижнее круглое отверстие пластинки обращено вверх. Затем, как, обычно делается, уколом дезинфицированных мочки уха или пальца снимается первая капля и из свободно выступившей второй капли при помощи градуированной и проверенной пипетки набирается 10 мм крови. Взятая кровь выпускается из микро пипетки на предметное стекло приблизительно в центре круглого отверстия металлического прибора.

Полученная таким образом кровь легко распределяется стеклянной (глазной) палочкой на предметном стекле, а благодаря наличию круглого отверстия, как по трафарету, образуется мазок крови, несколько похожий на толстую каплю, площадью около 200 мм, в виде довольно правильного круга.

После этого предметное стекло вынимается из металлического прибора и в горизонтальном положении помещается на стол или пол<у (лучше под стеклянный колпак) для постепенного высушивания на воздухе.

Для подсчета лейкоцитов подсохшие на воздухе мазки гемолизируются дестиллиро ванной водой, промываются в водопроводной воде, налитой в стакан, фиксируются 4 — 5 минут в метиловом алкоголе, подсушиваются и затем красятся.

Красить мазки можно по Гимза или другими красками, которые хорошо окрашива от белые кровяные тельца.

Очень хорошие резул таты получаются при довольно быстрой окраске квасцовым гематоксилином.

В данном способе результаты нодсчета будут сводиться к выражению количества лейкоцитов в одном кубическом миллиметре.

Количество лейкоцитов, содержащееся в 1 ммз при контрольном подсчете во влажной камере, распределяется на сухом мазке с значительной точност;.ю по площади, равной 20 мм .

Измерение площади во время подсчета производится при помощи сетки.

Структура сетки такова, что подсчет форменных элементов крови приходится производить на площади, равной 100 мм в различных и далеко расположенных друг от друга местах. Подсчет производится при помощи сухой системы различных микроскопов. — 3

Удобней пользоваться объективами Отсюда можно вывести следующее слабого увеличения и окулярами силь- правило: ного увеличения. Искомое количество лейкоцитов, обоПо отношению к сетке следует дер- значенное через Х, будет равно сосчижаться тех же правил, которые приме- танному количеству Q, разделенному на няются при подсчете во влажной каме- площадь F, на которой производился ре. Подсчет производится в местах,, подсчет, и умноженному на 20, наприограниченных отдельно расположенны- M2p:

MH по углам сетки 4 ллР, ватем на х местах, ограниченных 4 ллР, располо-, F женными вместе в средине сетки, и; дальше — на местах, ограниченных 2люм"- I Записывать результаты подсчета мож- на каждой из сторон сетки. но после того, когда пройден один ряд

Для получения результатов подсчета малых или средних квадратов или посс достаточной точностью требуется со- ле подсчета во всех каких-либо квасчитывать такое количество лейкоци- . дратах, расположенных в пределах 1 мм - . тов, которое распределилось на пло- Зная размеры площадей на стекле, щади, равной 2 млР, при условии, что; как подсчет, так и запись можно варьиэта площадь является суммой различ- I ровать в различных направлениях, не ных участков мазка. нарушая при этом указанных выше

Чтобы теперь найти количество кле-, основных принципов метода. ток, которое должно распределиться, . на 20 мл-, полученное число следует умножить на 10. Найденное таким об- Предмет изобретения. разом количество лейкоцитов и будет соответствовать количеству в ? м.и", 1. Способ подсчета форменных элепри подсчете во влажной камере. ментов крови, отличающийся тем, что

Понятно, конечно, если меняется ве- определенное количество к:.ови расличина площади, на которой произво- : пределяют на точно размеренной площадится подсчет, то в "àâèñèìîñòè от iди и подсчет производят в сухом мазке. этого изменяется и множитель для по- 2. Приспособление для осуществле. лучения площади, равной 20 млР. ния способа по п. 1, отличающееся

Для пояснения сказанного можно тем, что оно состоит из металлической привести следующие примеры. или иного материала кассеты для предНа 2 мм - составленные из различ-, метного стекла, имеющей в обеих стенУ

1 ных участков мазка, сосчитано 650 лей- ках совпадающие отверстия определенкоцитов. Тогда 650. 10=6500. ной площади, и вставляемой в эти отИли в другом случае: на 4 мм при верстия пластинки, закрытой на нижтех же условиях сосчитано 1300 лей- нем конце прозрачной пластинкой, на коцитов. Тогда 1300 . 5 = 6500. которой нанесена счетная сетка.

Е авторекому евидетельетву К. I . Кзраеева Л 49027 аЗиг. 3

Стиг

ЦЭиг 3 стиг 7

Цлг. 3

СЙ2 иг 5 (Лиг, Я

Юиг.а Д

СГа иг 5

Ц .3 и г

Сли.- Я

Григ 15

Ск- .. З (е:з

СХЗ иг Д

СЬиг. Я . 14 пес .ИЪаце

Тип. „:! ромнолиграф, Там овская, 12. Зак, 4147 — 209