Способ совместного получения протамин-сульфата и дезоксирибонуклеиновой кислоты
Союз Советских
Социалистических
iii1 473726
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Республик
i/<л+фЬЬ,. (G1) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 15.09.72 (21) 1828486/28-13 с присоединением заявки № (32) Приоритет
Опубликовано 14.06.75. Бюллетенo ¹ 22
Дата опубликования описания 18.09.75 (51) Ч. Кл. С 07g 7/00
С 07 51/50
Государственный комитет
Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
{53);ч ДК 615.739.6 (088.8) (72) Авторы изобретения
Н. И. Супрунов, В. А. Рассказов, Б. А. Алексеенко и В. И, Головлев (71) Заявитель
Институт биологически активных веществ Дальневосточдщ научного центра АН СССР г (54) СПОСОБ СОВМЕСТНОГО ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТАМИН4
СУЛЬФАТА И ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ
Изобретение относится к области медицины.
Известен способ получения протаминсульфата из молок лососевых рыб, заключающийся в том, что молоки варят, измельчают, обрабатывают ацетоном, экстрагируют серной кислотой и водой, экстракты объединяют, нагревают до 80 С и очищают путем добавления активированного угля, затем раствор обессоливают при помощи ионообменных смол и ацетоном осаждают целевой продукт из элюата.
Известен также способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты, заключающийся и том, что молоки измельчают в присутствии этанола, удаляют спирт, к остатку прибавляют холодную воду и кристаллический хлористый натрий, массу нагревают до 75 — 80 С, отфильтровывают осадок и выделгнот целево . продукт из фильтрата осаждением этанолом.
Предлагаемый способ позволяет одновременно получить протаминсульфат и дезоксирибонуклеиновую кислоту. Это достигается тем, что измельченные молоки, например, лососевых рыб экстрагируют раствором хлористого натрия и выделяют дезоксирибонуклеиновую кислоту из экстракта известными приемами, а отработанные молоки экстрагнруют серной кислото";еляют протаминсульфат известными приемами.
Пример. Отделение РНК. 1 кг свежемороженных молок кеты с содержанием в них протаминсульфата 7,5% и ДНК 21% измельчают в мясорубке, загружают в экстрактор с
5:.е .içëêîé, заливают 3 л 0,15 М раствора хлористого ii;. ::рия и тгцательно перемешивают в течение 10 мин при 0 — 10 С.
Извлечение. Сливают декантацией и промывку проводят еще дважды. Гомогенат про10 пускают через проточную центрифугу и отделяют РНК.
Получение ДНК. После отделения РНК остаток переносят в экстрактор, заливают 5 л
2М раствора хлористого натрия и перемеши15 вают в тече,»е 30 мнн при той же температуре. К раствору добавляют равный объем эта;юла (1: 1) и центрпфугируют. Осадок, содертка. 1нй Д11К, для очистки смешивают в соотношении 1: 1 со смесью хлороформ-изоамило20 вь:,"; спирт (24: 1) н перемешивают в течение
15 мин прн 0 — 10=С. Очистку ДНК проводят трижды. Смесь центрифугируют. Водную фазу оорабатывают этанолом в соотношении
1: 1 и оса>. д,".ют Д1!К. Для удаления хлори25 стого натрия ДНК трпждьг (по 500 мл) про3:ывают 70%-ным раствором этанола, затем
500 мл 96 1 „ -ного э,енола. Сушку ДНК ведут сз cсью сшlрт-эфир (1: 1) . ДНК осторожно переносят ià эмалированный противень и су
30 L a". в сушильном шкафу прп 30 С, 473720
Составитель С. Малютина
Текред 3. Тараненко
Редактор А. Пейсоченко
1(орректоры: T. Фисенко и А. Степанова
Заказ 2259 15 Изд. ¹ 1541 Тираж 529 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2
Выход целевого продукта от исходного сырого сырья составляет 11,3%.
Получение протаминсульфата. Остаток после отделения ДНК центрифугированием обрабатывают 5% -ным раствором серной кислоты в соотношении 1: 5 (вес: объем) и при медленном перемешивании оставляют на
ЗО мин. Затем раствор подают в центрифугу для отделения кислых белков. Полученный раствор переносят на друк-фильтр и протаминсульфат осаждают ацетоном в соотношении 1: 3. Осадок сырца протаминсульфата очищают многократным растворением в горячей воде, подщелоченной 25%-ным раствором аммиака до рН 8 — 9, и центрифугированием при 100 об/мин.
Очищенный раствор протаминсульфата смешивают с ацетоном в соотношении 1: 2 и препарат отделяют на друк-фильтре. Протаминсульфат сушат в сушильном шкафу при ЗО—
40 C.
5 Выход протаминсульфата от исходного сырья составляет 4,6%.
Предмет изобретения
Способ совместного получения протамин10 сульфата и дезоксирибонуклеиновой кислоты, отличающийся тем, что измельченные молоки, например, лососевых рыб экстрагируют раствором хлористого натрия и выделяют дезоксирибонуклеиновую кислоту из экстрак15 та известными приемами, а отработанные молоки экстрагируют серной кислотой и выделяют протаминсульфат известными приемами.
