Способ получения сорбента

 

1 се;.о аатен нс: к;,нчвскаЖ библи.,тт;ка МЬ

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

<>479782

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к а вт. свид-ву— (22) Заявлено 13.07.73 (21) 1950669/23-5 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет—

Опубликовано 05.08.75. Бюллетень № 29

Дата опубликования описания 15.01,76 (51) М. Кл. С 08b 15/06

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 661.728.8 (088.8) (72) Авторы изобретения

В. П. Демушкин и М, А. Иванов (71) Заявитель Институт химии природных соединений им, М. М. Шемякина (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕНТА

Изобретение относится к способу получения сорбентов на основе простых эфиров целлюлозы, содержащих изотиоцианатные группы, которые можно использовать для получения водонерастворимых ферментов.

Водонерастворимые ферменты широко используются в пищевой, химической, микробиологической промышленности, а также в лабораторных исследованиях.

Для получения сорбентов на основе простых эфиров целлюлозы используют азидный метод, диазотирование и ряд реакций по гидроксильной группе целлюлозы. Недостатком этих методов является то, что при связывании многих ферментов активность полученных водонерастворимых ферментов значительно уменьшается по сравнению с активностью исходных ферментов, что связано, повидимому, с малой избирательностью реакции.

Цель изобретения — получение сорбентов на основе целлюлозного материала, содержащего изотиоцианатную группу, пригодного для ковалентного связывания с ферментами в мягких условиях.

Способ получения сорбента на основе простых эфиров целлюлозы состоит в том, что аминопроизводные целлюлозы обрабатывают сероуглеродом при температуре 25 — 80 С и изобутилхлорформиатом при 35 — 40 С.

Пример.

1. Получение изотиоцианата аминоэтилцеллюлозы (АЭ-целлюлозы) .

200 мг АЭ-целлюлозы (0,25 мэкв/г) суспен5 дируют в 1,85 мл 0,3 М водного раствора

NaOH в круглодонной колбе с обратным холодильником, перемешивая на магнитной мешалке. К суспензии прибавляют 0,3 мл (3,7 моль) сероуглерода и перемешивают

l0 30 мин при комнатной температуре, после чего смесь медленно нагревают до 80 С и перемешивают при этой температуре 1,5 час.

При этом происходит окрашивание смолы в розовый цвет.

15 Реакционную смесь охлаждают до 35—

40 С, вносят 0,44 мл (3,7 иоль) изобутилхлор формиата и перемеш и вают 30 мин. Через нвкоторое врвмя после внесения нзобутилхлорформиата окраска исчезает.

Изотиоцианатное производное аминоэтилцеллюлозы отделяют центрифугированием.

Смолу промывают водой, этиловым спиртом и эфиром, высушивают в вакууме над Р20,-,, Выход 190 мг.,По данным элементарного анализа в образце содержится 0,24 мэкв/г изотиоцианатных групп.

II. Получение изотиоцианатного производного на основе карбоксиметилцеллюлозы (КМ-целлюлозы) .

479782

Составитель И. Павленко

Техред 3. Тараненко

Редактор Л. Ушакова

Корректор В. Гутман

Заказ 1092/1845 Изд. № 913 Тираж 496 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Я-35, Раушсхая наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фил. пред. «Патент»

500 мг КМ-целлюлозы (Н+ — форма, 1 мэкв/г) суспендируют в 5 мл воды и при перемешивании приливают растворы 86 мг

1,8-диаминооктана (0,59 моль) в 4 мл воды и

250 мг (0,6 моль) и-толуолсульфоната циклогексил-P- (N- (N-метил морфолиний) ) -этил кар бодиимида в 4 мл воды. Суспензию перемешивают 16 час при комнатной температуре, Осадок смолы отделяют центрифугированием, промывают водой, этиловым спиртом, эфиром и высушивают в вакууме над Р20з. Выход

490 мг. Содержание азота,0,535 мэкв/г.

Изотиоцианатное производное 8-аминооктиламида карбоксиметилцеллюлозы синтезируют аналогично п. I. Содержание серы

0,115 мэкв/г.

III. Синтез изотиоцианата и-аминобензилцеллюлозы проводят аналогично п. I.

IV. Ковалентное связывание пиримидилрибонуклеазы с полученными сорбентами.

50 мг изотиоцианата аминоэтилцеллюлозы суспендируют в 1 мл 0,1 М боратного буфера (pH 8,7) и приливают 1 мл раствора пиримидилрибонуклеазы (13,4 ое/мл, 280 нм). Смесь перемешивают б час при комнатной темпера. туре. Осадок смолы промывают 2 раза по

1 мл 0,3 М раствором NaCI, водой до отсутствия Cl (по качественной реакции с АдКОз).

Супернатанты объединяют и определяют оптическое поглощение при 280 нм. Количество белка, связанного сорбентом, вычисляют по разности оптических поглощений, оно составляет 102 мг/г сорбента.

Анализ ферментативной активности показал, что активность водонерастворимого фермента составляет 95 — 100% от исходной активности.

15 Предмет изобретения

Способ получения сорбента обработкой целлюлозного материала модифицирующими агентами, отличающийся тем, что, с целью получения сорбента с высокой ферментативной активностью, в качестве целлюлозного материала используют аминопроизводные простых эфиров целлюлозы и последовательно проводят обработку сероуглеродом при 25 — 80 С и изобутилхлорформиатом при 35 — 40 С.