Способ определения зоокумарина в тканях животных

 

!

< 549743

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 12.08.75 (21) 2167488/13 с присоединением заявки— (23) Приоритет— (43) Опубликовано 05.03.77. Бюллетень ¹ 9 (45) Дата опубликования описания 30.05.77 (51) М.Кл. - б 01 N 33/16

Государственный комитет

Совета Министров СССР (53) УДК, Л 616-018 (088.8) оо аелам изобретений и открытий (72) Авторы изобретения

М. Ф. Болоховец, В. В. Ермаков и Д. Ф. Траханов

Всесоюзный научно-исследовательский институт санитарной ветеринарии (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЗООКУМАРИ НА

В ТКАНЯХ )К И ВОТ Н ЫХ

Изобретение относится к хроматографическпм методам определения зоокумарина в органах и тканях животных.

Целью изобретения является способ определения зоокумарина в тканях животных.

Эта цель достигается тем, что,проводят гомогенизацию ткани, экстракцию хлороформом, очистку экстракта на колонке о киси алюминия, элюирование,вещества апетоном с 2%-ным растворам гидроокиси натрия, хроматографирование в закрепленном гипсом тонком слое, на пример силикагеля, в системе гексан — ацетон (2: 1) и выявление зоокумарина диазонированным 2,4-дихлоранилином и парами аммиака.

Способ осуществляют, следующим образом.

Для определения зоокумарина 25 г гомосенизираванного образца (мясо, кровь, патматериал и тка ни животных);помещают в колбу Зрленмейера ем к. 250 мл,;куда вносят

10 лл 1 н. серной кислоты. Содержимое перемешивают, добавляют 75 мл хлороформа и встряхивают на механическом встряхивателе

40 минут. Затем в колбу, вносят через фильтровальную воронку неоольшими порциями (во избежание комков) 65 г сульфата .натрия, Выделившийся хлороформный экстракт фильтруют в колбоч ку емкостью 100 мл через тампон стекловаты (или обычной ваты). Извлечение препарата повторяют еще раз, используя 50 мл хлороформа и встряхивая образец

15 минут.

Экстракт фильтруют через ватный тампон, присоединяя,к,первой фракции, а затем пропускают через колонку, которую готовят следую щим образом:,в нижнюю часть колонки помещают слой ваты (1 см), вносят 10 г окиси алюминия и промывают 20 лл хлороформа.

После того, как весь экстракт опустился до адсорбента, колонку промы вают 100 мл чистого хлороформа и 20 мл ацетона. Зоокумарин элюируют 50 мл смеси ацетона и 2% раствора гидроокиси натрия (47:3). Элюат собирают в фарфоровую чашку № 10, добавляют 0,2 лл ледяной уксусной кислоты и выпаривают на кипящей водяной бане. Остаток растворяют в 0,5 мл ацетона и наносят микропипеткой или пипеткой Пастера на пластину типа «Силуфол» или с спликагелем КСК (14 г адсорбента 100 120 меш. смешивают с 1 г гипса, 40 мл воды и смесь наносят на ,пластиночки 9Х12 c,è в 0,5 мм). Одновременно готовят свидетели, внося в фарфоровую чашку 10 — 20 лкг вещества (0,5 — 1 мл рабочего раствора зооиу,марина). Образцы наносят на пластинки в следующей .последовательности: свидетель (5 мкг), образец (1 повторность), образец (II повторность), свидетель (10 мкг).

Размер .пятен не должен превышать 0,5 см.

Зо Места нанесения проб располагают íà рас549743

А

Х =Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Текред Л. Кочемирова Корректор И. Симкина

Редактор В. Трофимов

Заказ 276/932 Изд. № 481 Тираж 1054 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Я-35, Раушская наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фил. пред. «Патент» стоянии 1)5 — 2 сч От края пластинки, и Они не должны погружаться,в растворитель. В камеру для хроматографирования (эксикатор) наливают 60 мл смеси тексана и ацетона (2: 1) и через 20,чин помещают пластинку в вертикальном положении. Хроматотраф1!рова: —;IIå про водят,при комнатной температуре не ниже 20 С. Камеру герметично закрывают, и после того ка|к раст)воритель поднимается на высоту 8 — 9 см, пластинку вынимают, отме- 10 чают фронт растворителя и,помещают в сушильный шка)ф при 105 С на 3 минуты. Затем пластинку опрыскивают из,пульверизатора хромогенны)м реагентом (смешивают 25 мл

1% раствора нитрита натрия с 25 мл насы- 15 щенного раствора 2,4-дихлоранилина в 0,33 и соляной кислоте), вновь высушивают при тех же условиях и,помещают в эксикатор над ларами аммиака на 1 минуту. Зоокумарин проявляется в виде коричневых пятен на желтом фоне,с Rf=0,4 — 0,5,в тонком слое силикагеля и с Rf=0,29 — 0,35 на силуфоле. Количество пестицида в пробе определяют сравнением окраски и площади пятна свидетелей и образца. Кон центрацию зоокумарина в образце вы- 25 числяют,по формуле: где Х вЂ” содержание зооцида в исследуемой ,пробе, в мг/кг, А — содержание зоокумарина в анализируемой навеске, мкг, Р— вес пробы, г.

Изобретение имеет социальное и народнохозяйственное значение lIIpH диа гноствке и предупреждении отра влений сельскохозяйст вег!Ных животных.

Способ определения зоокумарина в тканях животных, о т л и ч а ю щ и й,с я тем, что проводят гомогенизацию ткани, экстракцию хлороформом, очистку э!Кстракта на колонке окиси алюминия, элюирование,вещества ацетоIoM I: 2%-ным раствором гидроокиси натрия, хроматотра)фирование в закрепленном гипсом тонком слое, например силика геля, в системе гексан — ацетон (2: 1) и выявление зоокумарина диазонированным 2,4-дихлоранилином и парами аммиака.