as декам изобретеиий и открытий (23) Приоритет (43) Опубликоваио05.09.77.Бюллетень № 33 (5:!! УДК 547.689, .6.07 (088,8) (45) Дата оп)/бликования описания 13.10.77::

В, М, Рыжкова, Г. А. Клубничкина, А. А, Шпингис, Г. С, Гриненко, Т. И, Гусарова, Ф, Я, Лейбельман и С. Ф. Морозова (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский химико-фармацевтический институт им. Серго Орджоникидзе (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 21-AUETATA бд -ФТОР-16с, 17оС -ИЗОПРОПИЛИДЕНДИОКСИПРЕГНА-1,4-ДИЕНвЂ” 1 1Р, 2 1-ДИОЛ-3, 20-ДИОНА

Изобретение относится к усовершенство-, ванию способа получения 21-ацетата 6сК-фтор;-16ос, 17 с -изопропилидендиоксипрегна-1,4-диен-l 1 р,2 l-диол-3,20-диона, важ»ного полупродукта в синтезе физиологически активных стероидов, - Известен способ получения 21-ацетата

6ос-фтор-1%xс1-17оа-изопропилидендиоксипрегна-l,4- диен-11Я,2l-диол-3,20-диона путем микробиологического гидроксилирова- . >0 ния 6 pê-фтор-16 ос, 17ос -изопропилидендиокснцрегна-1,4-диен-21-ол-3,20-диона с помощью культуры Cunningha rneffa bainiev < или культурыСиип иф4атеИа Ыа1евсиаиа а также микробиологического 1,2-geragpapo-15 вания 6ос -фтор-16ос, 17сс-изопропнлидендиоксицрегн-4-ен-1 1 р, 2 l-дион-3,20-диона с помощью культуры Со1упеЬас1е чим ь птр1ек; . с последующим ацетилированием 21оксигруппы в целевой продукт Однако при 20 постадийном выделении продуктов реакцв "1 гидроксиЛирования и дегидрирования расходуется большое количество растворителей для извлечения стероидов из культуральной жид (ocTH IIpvi низких концентрациях исход- 25 ного субстрата (0,2-0,3 г/л), что усложняет и замедляет процесс.

Целью изобретения является устранение недостатков известного способа и интенсификация процесса.;

Поставленная цель достигается тем, что

11р -гищзоксилирование проводят действием штамм ) eg he ns e И а o wc b j d i e> . а 1, 2-дегидрирование- непосредственно с помощью тцтаъюма. МусоЬас1еивт gfobifovrne.

Согласно изобретению предлагается способ получения 21-ацетата 6ос-фтор-16ос, 17ас -изопропилидендиоксипрегна-1,4-диев-11 р,21-диол 3,20-диона путем микробиологического 11ф-гидроксилировання бсх;-фтор-16,17ос -нзопропилидендиоксипрегн-4-ен.-21-on-3,20- диона действием штамма

Т е ЬетеИа о сЫЙа, с последующим

1,2-дегидрированием непосредственно с пойощью штамма; ЯусоЬас1е (и rn gkobi fonwe и дальнейшим ацетилированием в целевой продукт.

По предлагаемому способу 1,2-дегидрирование можно осуществлять также с помо щвю штамм Cov

57 1489

Ферментацию при этом можно проводить путем дробной подачи стероида в растворе диметипформамида нри конечной концен-.psции его в среде 2%. Это дает возможность

4 поддерживать исходный стероид в течение трансформации в растворенном виде, что обеспечивает его наибопее попную трансформацию.

Гидроксилироваиие и дегидрирование целесообразно вести без постадийного выдепенин промежуточного продукта по совмещенной схе. ме, что поэвопяет использовать гидроксипирувший и дегидрирующий микроорганизмы и единой ферментаиионной стадии, поскольку процессы протекают в одном и том же аппарате на одной и той же исходной среде.

Предлагаемый способ позвопяет получить с удовпетворитепьным выходом (50%) ги за которое суммарное время трансформации (ж

25-35 час вместо 129 час в известном способе) 21-ацетат 6ос -фтор-1áoc,17ac«иэопьопипидендноксипрегна .,"1,4 диен 1 1р, 21-циоп-3,2Î-диона, пригодный дпя следующих стадий синтеза синапара. Я

Трансформирующие культуры выращивают, раздельно на средах, содержащих углеводы, органические источники азота и минеральные сопи, Процесс превращения исходного стеро ида осуществляют поспедоватепьно: сначапа 30 проводят процесс гидроксипирования при пороши гриба Т. о сh dis, затем по окончании рансформации купьтурапьную жидкость, отдепенную от мицепия, стерипизуют, охпаждают и инокупируют культурой С,Gi fax ипил

N gfobiforme Ж 193. Стероид перед подачей растворяют в диметипформамиде и 2,5%-ный раствор его добавляют к выросшему мипепию дробно двумя порциями. Конечная концентрация стероида в среде 0,5 г/п, диме- > типформамида в среде 2%. По окончании цроцесса дегидрирования купьтурапьную жидкость сепарируют и экстрагируют хлористым метипвном.

Пример 1. Культуру грибаTorehidis>> выращивают на суспоагаре на флаконах в течение 2-3 недель при 26-28оС. Споры гриба смывают с поверхности агара стирипьной водой (100 мп! воды на флакон) и споровую суспеязию с двух фпаконов вносят в 7 п 0 стерильной среды спедующего состава: гпюкоэа 30 г, кукурузный экстракт 5 г (сухой вес), пептон 3 г, дрожжевой автопизат 3 г, КН РО 5 г, водопроводная вода1000мп; рН 6,8-7,2. Первый инокупят выращивают в стеклянном ферментере емкостью 1 Оп при подаче воздуха 0,5 .п MHH перемешивании (500 об/мин), температуре 26-28оС, Через сутки инокупят переносят в 120 и среды указанного состава.

Трансформирующую культуру выращивают в аппарате иэ нержавеющей стапи емкостью

200 п при подаче воздуха 0,5 п/мин, перемешивании (800 об/мин) и температуре 2628 С. Через 20 час роста вносят первую порцию (30 r) бсср -фгор-láoc,17ос.-иэопропипидендиоксипрегн-4-ен-21-оп-3,20-диона в 1200 мп диметипформамида, Вторую такую же порцию стероида вносят через 5 час поспе первой (общее количество стериода 60 г в 2400 мп диметипформамида). фансформапию проводят при том же режиме, что и выращивание культуры. Продолжительность процесса гидроксипирования 15-20 час она контролируется методом хроматографии на ппастинках 3< цГо3". При содержанки исходного стероида не более 5% трансформацию прекращают, мицепий отделяют фипьтрацией на друкфипьтре, промывают 10-20 п воды, купьтурапьную жидкость вместе с промывными водами возвращают в аппарат и стерипизуют 30 мин при 120оС, Поспе стерипизации и охлаждения до 30 С в аппарат подают культуру С.Яуи рРех, выращенную спедующим образом. Исходной культурой засевают матрицы с агаризованной средой следующего состава: пептон 6 r, дрожжевой автопиэат 3 r, мясной бульон 150мп,гидропиэат казвина 4 r глюкоза 1 r агар 20 r aorist проводная вода 1000 мп. На матрице купьтуру выращивают в течение трех суток при

26-28оС, после чего сливают.100 мп стерипьной воды. Бактериапьную суспенэию с двух матрацев (копичество культуры 1-1,5,г по сухому весу) вносят в 7 и стерильной среды вышеприведенного состава as искпючением агара. Культуру выращивают в стекпянном ферментере в тех же условиях, что и инокупят Т ЮЯМмеЮа о сЬЫ б, но при

29-32оС. Через сутки роста ее передают в аппарат дпя проведения процесса дегидрирования. Последний осуществляют в тех же усповиях аэрации, что и процесс гидроксипирования, но при 29-32оС. Продолжительность процесса дегидрирования 12-15 час. При содержании исходного стероида не более 3% трансформацию прекращают, купьтурапьную жидкость подкиспяют 10%-ным раствором серной кислоты и передают на сепарацию и экстракцию хлористым метилейом. Остаток после отгонки хлористого метипена растворяют в ледяной уксусной кислоте и ацетипируют по С-21 уксусным ангидридом в присутствии ацетата бария, Получают 32 г 21-ацетата 6ос фтор-16ж,170 -иэопропипидендиоксипрегна-1,4-диен-l 1p 2 1-диоп-, 20-диона, т. пп. 271-272 С (с раэп.),,(ос) + 92,36 (1%, СНС2 ), 6 317,5, Л, 242.

Пример 2, Процесс трансформации стероида проводят, как в примере 1, но вмес57 1489

Составитель Т. Илюхина

Редактор 3. Бородкина Техред А, Демьянова Корректор А. Лакида

Заказ 3196/16 Тираж 553 Подписное

БНИИПИ. Государственного комятета Совета Министров СССР по.делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

ro культуры С,Si er p Ee x используют культуруМ.gFobi forwe N 193, Процесс дегидрирования длится 15-18 час. Получают целевой продукт с теми же выходом н константами, что в примере 1.

Формула изобретения

1. Способ получения 21«ацетата бсср - p

-фтор-1 Boy, 17 - иэопропипидендиокснпрегна»

-1,4-пиен-1 1/5,21-диод-3,20-диона с использованием пропессов микробиологического

1 1/3 -гидроксилирования бсср -фтор-16ы, 17Й.-иэопропилиаендиокс ипрегн-4-ен-2 l-on-3, 20-1б

-диона и его 1,2-дегидрирования с посл дующим ацетилированием в нелевой продукт, отличающийся тем, что, с пелью интенсификации процесса, 11/3 «гидроксилнрование проводят действием и тамма TiegbetneFPa orch id1à и 1,2-дагидрирование проводят непосредственно с помощью штамма

Nycobacter iud g РбЬ о и е.

2, Способ по п. 1, о т л и ч а ю ш и йс я тем, что ферментапию проводят путем дробной подачи стероида и растворе диметипформамида при конечной концентрации его в среде 2%, 3. Способ цо и. 1, о т п и ч а ю m и и

= s тем, что процесс ведут без постадийного выделения промежуточного продукта, Источники инфомации, принятые во внимание цри экспертизе:

1, Патент США ¹ 3124571, кл, 26О239.55, 10 ..03. 64»