Способ получения пептидов, меченных изотопами йода

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИЯЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскмк

Соцналмстмческмк

Республик (61) Дополнительное к авт. свмд-ву (22) Заявлено 1904.76 (21) 2377023/23-04 с присоединением заявкм HP (23) Приоритет

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий

Опубликовано 1507.79. бюллетень HP 26

Дата опублмкованмя описания 1 0779 (72) Авторы В.И.Станко, В.Н.Кулаков, A.М.Можайский, М.Н.Славин, изобретения В.Б.Коршунов, Н.Ф.Тарасов и Л.П.Старовойтова (71) Заявитель

Институт биофизики АН СССР (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ, МЕЧЕННЫХ

ИЗОТОПАМИ ЙОДА

Изобретение относится к способу получения пептидов, меченных .изотопаки йода, которые могут найти применение в медицине в качестве радиодиагностического средства при исследовании почек методом скеннирования.

Известен электрохимический способ получения белков, модифицированных изотопами йода. Процесс проводят в платиновой чашке (анод) путем электролиза белка и йодид-ионов в фосфатном буферном растворе с рН > 6 при контролируемом значении потенциала 450850 мВ, плотности тока не более

40 мкА/см (1).

Такой способ не позволяет получать йодированные полипептиды с молеку.лярным весом менее 12000. Кроме того, использование в качестве растворителя фосфатных буферных растворов вызывает сильную коагуляцию полипептида и приводит к снижению степени полезного применения радиоактивного изотопа и значительному уменьшению исходной биологической активности пептида.

Известен способ получения йодоптида-тразилола 3 при обработке тразилола Na 3 в 0,05 M фосфатном буфере при рН 7,5 в присутствии в качестве окислителя .хлорамина Т (2).

Радиохимический выход. тразилола з Э

65%. При этом сохраняется иигибирующая активность модифицированного йодом тразилола, проверенная на системе трипсин-бенэоиларгинин-т1 -нитроанилнд (синтетический субстрат). Основной недостаток траэилола- з g, полученного таким способом, состойт в невысоком . (до ЗОВ эа 90 мин) накоплении его в почках экспериментальных животных, что свидетельствует о повреждении структуры пептида под действием такого сильного окислителя, как хлорамин Т.

С целью повышения выхода, сохранения нативных свойств модифицированных пептидов и расширения ассортимента диагностических средств для исследования почек методом скеннирования по предлагаемому способу получения пептидов, меченных иэотопами йода, на основе йодирования пептидов с использованием меченого йодистого натрия процесс проводят в электрохимической ячейке при значении анодного потенциала 360 †7 мВ, плотности тока. 30 мкА/см, соотношении вон йода: пептид — (1-4):1 в солевом

601925 растворе с ионной силой 0,2 при рН

6,0-10,0.

Процесс йодирования пептидов целесообразно проводить в стерильных условиях, в качестве меченого йодистого натрия использовать Ко Э или Иа 7.

Кроме того, электрохимическое йо- 5 дирование полипептида более эффектив- . но протекает в 0,9%-ном растворе хлористого натрия, где точное значение рН задают и контролируют в процессе электролиза добавлением щелочи )0 ( или кислоты.

Оптимальные условия получения йодоптида, меченного изотопами йода:. величина анодного потенциала от

360 MB и выше, время 30-60 мин, тем- (5 пература комнатная. Радиохимический выход продукта 72-85%.

Целевой продукт можно очистить от несвязанных ионных форм йода любым известным способом, например гель.фильтрацией на молселектах.Препарат выдерживает способы стерилизации, обычно применяемые для белковых радиофармацевтических препаратов. Полученные пептиды являются ингибиторами протеолитических ферментов.

Пример 1. Контрикал- 17.

Раствор 20 мг контрикала (20000

ATE) в 10 мл 0,9%-ного раствора хлористого натрия наливают в ячейку с разделенными полунепроницаемой мембраной платиновыми электродами, а затем добавляют 0,62 мп 10 М раствора йодистого натрия (мольное соотношение йодистый натрий: ингибитор—

2:1) и 20-50 мКи йодистого натрия

Ка з"Д без носителя. Электролиэ проводят при 760 МВ., рН 7,0 в течение

1 ч при плотности тока не выше

30 мКа/см . Радиохимический выход

80+3%. 40

Пример 2, Тразилол- <>" g.

Раствор 50000 КИЕ тразилола доводят до 10,мл 0,9Ъ-ным раствором ,хлористого натрия и полученную смесь помещают в ячейку с разделенными полу-45 непроницаемой мембраной платиновыми электродами. Затем к смеси добавляют 0,62 мл 10 2 М раствора йодистого натрия (мольное соотношение йодистый натрий:ингибитор-2:1) и 20 мКи йодис- 50 того натрия Ка +3 без носителя.

Электролиз .проводят при 430 мВ, рН

7,0 в течение 1 ч при плотности тока не выше 30 мКа/см 1. Радиохимический выход 78133.

Пример 3. Контрикал- ЗД.

Смесь 20 мг контрикала (20000 АТЕ) и 10 N раствора йодистого натрия, содержащую 30 мКи йодистого натрия

go" Д, вносят в электрохимическую ячейку с разделенными полунепрони- 60 цаемой мембраной платиновыми электродами и подвергают электролизу в те- „ чение 1 ч при плотности тока не выше

30 мкА/см1. Условия йодирования и полученные результаты приведены в табл. 1.

Таблица 1

77т3

80 3

3:1

72+ 3

80+3

2:1

4:1

85тЗ

Пример 4. Тразилол- .

К раствору 50000 КИЕ тразилола добавляют 10 М раствор йодистого,натрия и 50 мКи йодистого натрия А/а 3,, полученную смесь вносят в ячейку с разделенными полунепроницаемой мембраной платиновыми электродами. Электролиз ведут в течение 1 ч при плотности тока не более 30 мкА/см2. условия йодирования и полученные результаты приведены в табл. 2.

2:1

2:1

4:1

Пример 5. Иодоптид, меченный йодом-125 или йодом -131, полученный в примерах 1-4, с радиохимической чистотой 9841% вводят внутривенно кроликам и собакам из расчета 3(60 мКи/кг веса животного для ю и 50-100 мккюри/кг для > 3 . После этого проводят скеннирование экс,периментальных животных.

6,0 530

7,0 530

8,0 460

9,0 600

10,0 700

6,0 530

7,0 530

8,0 500

9, 0 700

10,0 360

73+3

80+ 3

75+3

83+3

75+3

5

Таблица 3

4 7 3,8 Более 40,0 t5

4,0 6,2 Более 40,0

21

Формула изобретения

100

Траэилол

Иодоптид

То же

100

2:1

100

3:1

84

4:1

8:1

16:1

Ссставитель В.Волкова

Редактор Л.Письман Техред Л. Алферова Корректор В. Сийицкая

Заказ 4125/62 Тираж 512 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная,4

5 6019

Пример 6. Иодоптид, меченный 3 с радиохимической чистотой 97t1,5% вводят внутривенно животным (см. пример 5) сразу после получения препарата и через 21 день. Распределение препарата по органам животного показано в табл. 3.

Пример 7. Изменение ингибирующей активности препарата в процессе введения радиоактивных изотопов йода контролируют по торможению протеолитической активности трипсина на системе трипсин-гемоглобин исходным и йодированным ингибиторами.

Зависимость относительной ингибирующей активности йодоптида от количества йодистого натрия, введенного в реакцию йодирования, показана в табл. 4.

Таблица 4

Исдоптид, полученный по предлагаемому способу, быстро накапливается в скеннируемом органе, например в почках его содержание достигает 48% от введенной радиоактивности через

20 мин. Такой препарат благодаря высокой скорости катаболиэма (Т „

Обкол.

0,3 сут для BOtt выведения) оказывает незначительную нагрузку по лучевому воздействию на организм. Иодоптид не имеет побочных явлений, à его seсокая степень накопления в почках (более 40Ъ) с5еспечивает получение высококачественных скеннограмм. Кроме того, полипептид, меченный радиоактивными иэотопами предлагаемым способом, не вызывает повреждения или ухудшения состояния исследуемого органа, что позволяет проводить многократное радиологическое обследование не только больных, страдающих заболеванием почек, но и лиц, занятых на производстве ртути и ртутных препаратов.

Таким образом, йодоптид, полученный по предлагаемому способу, позволяет значительно расширить контингент больных, подвергаемых радиологическому обследованию.

1.Способ получения пептидов, меченных изотопами йода,на основе йодирования пептида с использованием меченого йодистого натрия,о т л и ч а юшийся тем,что,с целью повышения выхода, сохранения нативных свойств модифицированных пептидов и расширения ассортимента целевых продуктов, процесс проводят в электрохимической ячейке при значении анодного потенциала 360-700 мВ,плотности тока 30мкА/см, ь соотношении ион йода:пептид-(1-4):1 в солевом растворе с ионной силой

0,2 при рН 6,0-10,0.

2. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что процесс йодирования пептидов ведут в стерильных условиях и в качестве меченого йодистого натрия используют Иа 3 или

133

Яа1х5 g

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

Р 421254, кл. С 07 С 103/52, 28.11.7,.

2. )3. Arndts, К.O. Raker, Р Tor dk, C.Heber"mann "51udien аг Vertei(.un/ and Ебпипа(on енъеь Proteinasen- inbibitors rnit 3wto

pentechrriken" Av zneirnitteE. -Porschung, (970, т, ZO, 4 5, 667- 674 .