Способ получения пиримидиновых блоков

 

Г-= т, pl l

О П И С А""Н И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советскик

Социааээстичесиик ресээубиии (!1) 602505

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. саид-ву

2 (6l) М. Кл.

С 07 Н 21/02 (22) Заявлено 31,1275(21) 2300301/23-04 с присоединением заявки Ph—

Геэрдэрэтээээый ээвэтэт

Вээетэ Мээээтрээ ВВФР эе аэээв ээээрэтээээ э етэрмтэЭ (23) Приоритет— (43) Опубликовано150428. Бтоллетень Эй 14 (63) УД< 547.963.32..07 (088.8) (46) Дата опубликования описання170378 (72) Двторьт изобретения

А.М.Мазо, Л.Л.Киселев и В.Ш.Шейнкер

Pl) Заявитель

Институт молекулярной биологии AH СССР (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПИРИМИДИНОВЫХ БЛОКОВ

Изобретение относится к способу пО; лучения пиримидиновых блоков, оканчивающихся с ЗТ-конца адениловой или гуаниловой кислотой, которые могут найти применение в фармакологии и биохимии.

Известны способы специФического расщепления полирибонуклеотидов рибонуклеазами (гуанил-РНКэ.эа и пирими,пил-РНКаза) с предшествующей блокиров- ТТ3 кой определенных звеньев полирибонуклеотидов химическими модификаторами таким образом, чтобы специфические и неспецифические РНКазы не могли расщеплять связи между этими звеньями, N вследствие чего приобретали новую специфичность. К таким способам относит-. ся расщепление полирибонуклеотида пи римидил-РНКаэбй по цитидиновым звеньям после модификации уридиновых остат- ков водорастворимым карбодиимидом. Известно также, что гуаниловые звенья после их модификации кетоксалем становятся устойчивыми к действию неспецифической РНКазы Т .

Целью изобретения является способ, позволяющий получать пиримидиновьте блоки, оканчивающиеся с 3 -конца аде1 ниловой или гуаниловой кислотой, путем избирательного расщепления полирибонуклеотидов по пуриновым звеньям рибонуклеазой Т>.

Предлагаемый способ заключается в том,.что полирибонуклеотид предварительно обрабатывают смесью метоксиамина и метабисульфита натрия при рН

7,0 0,1 и температуре 37-40 С, а затем подвергают расщеплению рибонуклеазой Т>.

Способ основан на устойчивости фосфодиэфирных связей между 5,6-дигидро<6-сульфо-K -метоксицитидиловой и 5,6 дигидро-6-сульфо-уридиловой кислотами, полученными в результате обработки полирибонуклеотида смесью метоксиамина и метабисульфита .натрия, и со- седними с ними с 3 -конца нуклеотидами к расщеплению под действием рибонуклеазы Т . В результате происходит расщепление лишь по пуриновым остаткам полирибонуклеотида.

Полученный пирнмидиновый блок может быть использован для синтеза фармакологических препаратов направленного действия, для синтеза полинуклеотидов заданной структуры, при анализе первичной структуры нуклеиновых кислот, как биохимический реактив.

Пример 5. 0,5 мг РНХ иэ рибосом выдерживают при 37 С в течение

602505

Формула изобретения

Составитель. B.ЖЕдтков

ТехредМ.Борисова . корректор П. Макаревич

Редактор Е.Хорина,Эаказ 1762/21 Тираж 559 Подписное

gHHHHH Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раущская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент,.г. Ужгород, ул. Проектная, 4

4 час с,0,05 мл раствора, содержащего (г/л) 125 метоксиамина и 380 метабисульфита натрия при рН 7,0+0,1.

По окончании реакции инкубационную смесь разбавляют водой до 2,5 мл, добавляют 0,002 мл раствора рибонуклеазы Т, содержащего не менее 500 единиц з ктивности в 1 мл, и доводят до рН 5 ацетатом натрия. Раствор выдер живают 2 час при 37 С, изменяют рН до )0

8 бикарбонатом аммония, добавляют

0,02 мл раствора фосфомоноэстеразы (0,6 г/л) и выдерживают еще.2 час при 37 С.

Полученный образец упарнвают и Наносят на пластинку 16 х 16 см, покрытую тонким слоем целлюлозы (3,5 r).

Пластинку помещают в герметичный резервуар, на дно которого наливают

100 мл раствора нормального бутанола, насыщенного водой. Восходящую хроматографию .в этой системе проводят при комнатной температуре s течение 3-5час, пока граница поднимающегося раствора йе достигнет верхнего края пластинки.

При такой хроматографии устоичивый к действию нуклеазы материал остается на месте нанесения, а неустойчивый движется в данной хроматограФической системе.

После расщепления материал можно разделить по длине цепи или по составу известным методом хроматографии на колонке, наколненной ДЭАЭ-Сефадексом A-25 с использованием раствора, содержащего мочевину (420 г/л) °

После такого разделения собранные продукты обессоливают пррпусканием через. колонку со смолой биогель Р или через колонку с ДЭАЭ целлюлозой.

Способ получения пиримидиновых блоков, состоящих из цитидиловой и уридиновай кислот и оканчивающихся с 3 -конца адениловой или гуаниловой кислотой, отличающийся тем, что полирибонуклеотид предварительно обрабатывают смесью метоксиамина и, метабисульфита натрия при рН 7,0+0,1 и темпера- туре 37-40 С, а затем подвергают расщеплению рибонуклеазой Т »