Способ снижения резистентности одноклеточных организмов

 

в 628920

Союз Cole

Соцмалнстмм вских

Республик (61) Дополнительное к аят, синд-яу (22) Заявлено 05.08.75 (21) 2160730/28-1 Э

2 (51) M. Кл.

А 61 К 29/00 (23) Приоритет (43) Опублнкояано25.10.78.Беоллетень М 39 (45) Дата опубликования описания 21.09.73 йсудорственный комитет

Совета Мкнкстроа СССР оо делам изооретеннк и открытки (53) УДМ 616-092.. 7 (088.8 ) H. Н, Сухарева-Немакова, Т. С. Титова и А. Б. Сипаев (72) Авторы изобретения (73) Заявитель

Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им, М. В. Ломоносова (54) СПОСОБ СНИЖЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ

OQHOKfIETO×HÛÕ ОРГАНИЗМОВ

Изобретение относится к медицине и может найти применение при отборе лекарственных препаратов.

Известен способ снижения резистентности одноклеточных организмов к лекарственным препаратам путем выращивания культуры микроорганизмов на питательной среде в присутствии модифицирующего фактора (I).

Недостатком этого способа является адаптация культуры к лекарственным препаратам.

Целью изобретения является исключение адаптации культуры к лекарственным препаратам.

Это достигается тем, что культуру Crithidia oncopelti выращивают в присутствии

0,005 — 0,01 вес. % аминокислоты и 0,00!в

0,005 вес. % аскорбиновой кислоты при 22—

25 С.

Кроме того, в качестве аминокислоты вводят валин или //-фенил-/т-алании.

Пример 1. Берут культуру жгутикового простейшего Сrithidia oncopelti и сеют на синтетическую среду, содсря .з иую (мг/л): метионин 200, аденин !00, ;-: †:. .::.н 25, тиамин 1,0, глюкозу 10000, хл":::"..:-"-:ыи аммоний 5000, натрий фосфорнокислый двузамегценный 1500, калий фосфорнокислый однозамещенный 80, калий хлористый 420, никотинамид 10, пантотенат кальция 1,0, пиридоксин 1,0, парааминобензойную кислоту

1,0, биотин 0 01, раствор микроэлементов

10 мл. (pH средьт7,6 — 7,8). Состав раствора микроэлементов (г/л); сернокислый магний

20, сернокнслое железо 0,5, сернокислый цинк 0,5, сернокислый марганец 0,5, серно-.

© кислая медь 0,5.

В качестве посевного материала используют! 44-часовую кул ьтуру С r i t h i d i à oncopelti. Посевной материал в дозе 5 млн. клеток на 1 мл среды вносят в пробирки, содержащие 5 мл той же среды. В момент посева культуры добавляют ми ни м альп ую литическую дозу оливомицина (62,5 мкг/мл) и 0,005% валина. Пробирки располагают наклонно при 24 — 25 С. Пробы для анализа отбирают через 48, 96, 144, !92, 240, 288 часов. инкубации.

В контроле (культура и антибиотик) в течение первых 48 час культивирования наблюдается стимуляция деления клеток, сменяющаяся частичным их лизисом и регенервцией культуры после 96 час инкубации.

При добавленви к культуре простейшегб с оливомицетниом аминокислоты валина в концентрации 0,01% в течение первых

48 час инкубации происходит размножение клеток, сменяющееся интенсивным лизисом без последующего восстановления культуры; Оптимальной концентрацией валина, пол;ностью ингибирующей размножение клеток в присутствии оливомицина, является 0,005%<

Количество клеток остается иа уровне посевной дозы в течение всего периода инкубации. Наименее эффективной концентрацией валина оказалась 0,05%, так как при этом наблюдается восстановление культуры к 192 час инкубации и прпбли>кение числа клеток к контролю.

Ингибирующий эффект комбинации оливомиципа и валина увеличивается, если к культуре одноклеточного организма добавить аскорбинову1о кислоту, изменяющук> окислительно-восстановительный потенциал. Оптимальная концентрация 0,005%, Пример 2: 144-час культуру Сгithidia

oncope1ti в дозе 5 млн. клеток иа 1 мл. среды сеют и пробирки, содержащие 5 мл среды по примеру 1. В момент посев", культуры добавля;от минимальную лити-:,ескую дозу трипафлавина (3,9 мкг/мл) и 0,I,. :;25% валина. На&: oLa;oT анеле.-:.-.:-;ые закономерности роста : лизиса клеток, описанные в примере 1. г/изнс клеток усиливается при добавлении 0,005% аскорбиновой кислоты, Предлагаемый способ благодаря стсутстви,о привыкания культуры к лекарственным препаратам позволяет повыс.;:= =-ффективность отбора лекарственных пре;- 1атов.

Формула изобретения

l. Способ снижения резистентности одноклеточных организмов к воздействию лекарственных препаратов путем выра.цивания культуры на питательной среде в присутствии,-. д;:фицирующего фактора, отличающийся тем, что, с целью исключения адаптации,культуры к лекарственным препаратам, культуру Сг111ийа oncol>e ;! выращивают в присутствии 0,005 — 0,0! зес. % аминокислоты v. 0,001 — 0,005 вес. % аскорбиновой кислоты при 22 — 25 С.

2. Способ по и. 1, отличающийся тем, что в качестве аминокислоты вводят валин или 3-фенил — P-алании. источники информаци:, пр:-:::г-„-.;.: a. мание при экспертизе:

1. 1. General Microbiology, v. 54, о, ;968, 4I

Составитель С. Малютина

Редактор Д. Пинчук Техред О. Луговая Корректор А. Власенко Заказ 5941/8 Тираж,03 Подписное

ЫНИИПИ Государственного комитета Совета Мнннстрон СССР по делам изобретений н открытий

I! 3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4