Способ количественного определения хлорофоса

 

679869

Союз Советских

Социалистицеских

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ЛетОРСКОМЮ СВИДИтИЛЬСтВЮ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 30.01.76 (21) 2321815/23 — 04 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет г (51) М. Кл.

G 01 N 31/14

Государственный квинтет ссср по делам нзооретеннй

N отнрытнй

Опубликовано 15.08.79. Бюллетень № 30

Дата опубликования описания 19.08.79 (53) УДК 543.426 (088.8) (72) Авторы изобретения

P. К. Бурганов, P. А. Ишмуратова, А. П. Кадочников и Х. Я. Орлов (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОРОФОСА

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к способам определения хлорофоса.

Известен способ определения хлорофоса, заключающийся в обработке анализируемой пробы раствором о-толидина в ацетоне.в присутствии перекиси ведорода с последующим образованием оранжево- красного окрашивання (11.

Недостатком способа является низкая чувствительность 1 10- мг/мл.

Наиболее близким к описываемому изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определения хлорофоса, заключающийся в обработке анализируемой пробы холинэстеразой в присутствии ацетилхолина с последующей обработкой полученного раствора гидроксиламином в присутствии ионов Fe и фотометрированием полученного при этом раствора (2).

Недостатком способа является низкая чувствительность 1 10- мг/мл и длительность определения 2 ч.

Целью изобретения является повышение чувствительности и сокращение времени определения.

Поставленная цель достигается описываемым способом количественного определения хлорофо. са, заключающимся в обработке анализируемой пробы холинэстераэой при рН среды 8,0-8,2 в присутствии раствора Р-метилумбелляферонацетата в этилцеллозольве с последующим измерением люминесценции полученного раствора.

Отличительным признаком способа является использование в качестве субстрата раствора

Р-метилумбеллиферонацетата в этилцеллоэольве с проведением обработки при рН среды 8,0-8,2 и последующее измерение люминесценции полученного раствора.

Хлорофос, являясь ингибитором холинзстеразы, угнетает ее активность. Процент угнетения активности определяется по замедлению нарастания люминесцентного свечения гидролизуюшегося люминесцентного субстрата Р-метилумбеллиферонацетата. Измерение степени угнетения холинэстеразы производится по скорости разложения Р- метилумбеллиферонацетата концентрации (2-2,5) 10- мг/мл в этилцеллозольве, Замеряется время, за которое стрелка микроамперметра люминесцентного прибора достигнет

679869

3 значения 100 ед. (тк ) при разложении субстрата р-метилумбеллиферонацетата холинэстеразой,» и такое же время, но при работе холинэстеразы в смеси с хлорофосом в»»робе (т „), По увели. чению топпо сравнению с т< судят о наличии хлорофоса в пробе воды. т, и т„„измеряют в минутах. Это время протекания реакции, которое фиксируют в тот момент, когда стрелка микроамперметра люминесцентного прибора достигает 100 ед; замер можно проводить на любом друтом участке шкалы. В данном случае интенсивность 100 ед. взята условно (можно взять 50, 70, 90 и т,д.) ..

Эту величину можно взять произвольно, однако ее не следует брать при малой интенсивности люминесценции (например, 10 или 15 ед.), так как при малой интенсивности еще не установился процесс гидролиза.

/ т — это контрольное время, эа которое стрелка микроамперметра люминесцентного прибора достигает 100 условных единиц в холостой пробе. т — это опытное время, за которое стрел

on ка микроамперметра люминесцентного прибора достигнет 100 условных 5 единиц в присутствии хлорофоса в пробе. — отношение времени протекания реак1: к ции в интервале 100 ед. при определении хлорофоса в исследуемой про- 30 бе к контрольному времени, т.е. при определении в отсутствие хлорофоса в исследуемой пробе.

Пример 1. В кювету объемом 8 мл с

4,9 мл фосфатного буфера (рН 8,15) и 1,9 мл воды добавляют 0,39 мл холинэстераэы в фосфатном буфере. Смесь тщательно перемешивают и проверяют излучение люминесценции. Затем . прибавляют 0,030 мл раствора Р-метилумбеллиферонацетата в этилцеллозольве. Пробу тщатель. 40 но перемешивают и вводят в блок фотометрирования люминесцентного прибора, Отмечается время, эа которое стрелка микроамперметра прибора достигает значения 100 ед,, r 5 мин. т „определяется аналогичным образом. В кювету с 50 мл буферного раствора холинэстеразы той же активности после тщательного перемешивания и 10-минутной инкубации прибавляют

0,030 мл раствора Р-метилумбеллиферонацетата; т,. 107, По увеличению т и по сравнению с т„судят о наличии хлорофоса в пробе воды. Величина то»» зависит от концентрации хлорофоса в анализируемой пробе. Пример 2. В к»овету объемом 8 мл с

5 мл фосфатного буфера (рН 8,2) и 2 мл воды добавляют 0,4 мл холинэстеразы в фосфатном буфере, смесь тщательно перемешивают и проверяют излучение люминесценции. Затем приКонцентрация хло» рофоса, мг/мл . т, .мин т 1, мин тр»» т»

9,3 1,87

10,0 2,0

10,8 2,16

5-105 10-а

5 ° 10-з

Чувствительность определения настоящего способа 5 ° 10- мг/мл, что дает возможность определять предельно допустимую концентрацию хлорофоса. Время определения 15 мин.

4 бавляют 0,035 мл раствора Р-метилумбеллиферонацетата в этилцеллоэольве. Пробу тщательно перемешивают, помещают в блок фотометрирования люминесцентного прибора и отмечают время, за которое стрелка микроамперметра прибо= ра достигает значения 100 ед., т„= 5 мин. т „ определяется аналогичным образом, В кювету с 2 мл буферного раствора холинэстеразы той ,же активности и после тщательного перемешива ния и 10-минутной инкубации прибавляют

:0,035 мл раствора р-метилумбеллиферонацетата; т, =10,8 мин (при концентрации хлорофоса

5 ° 10- мг/мл). По увеличению т „по сравнению с т» судят о наличии хлорофоса в пробе воды. Величина т „зависит от концентрации хлорофоса в анализируемой пробе.

Пример 3. В кювету объемом 8 мл с

5,1 мл фосфатного буфера (рН 8,00) и 2,1 мл анализируемой воды добавляют 0,41 мл холинэстеразы в фосфатном буфере. Смесь тщательно перемешивают и проверяют излучение люминесценции. Затем прибавляют 0,036 мл раствора

Р-метилумбеллиферонацетата в этилцеллозольве.

Пробу тщательно перемешивают и помещают в

: блок фотометрирования люминесцентного при- ., . бора, Отмечается время, за которое стрелка микроамперметра прибора достигает значения

100 ед., т к "4,9 мин, топ определяется анало, гичным образом. В кювету с 5,1 мл буферного, раствора и 2,1 мл анализируемой. пробы воды с хлорофосом добавляют 0,41 мл раствора холинэстеразы той же акп»вности и после тщательного перемешивания и 10-минутной инкубации прибавляют 0,036 мл раствора Р-метилумбеллиферонацетата; т»т=10,9 — 11,0 мин (при концентрации хлорофоса 5 10-з мг/мл).

По увеличению т „, по сравнению с т„судят о наличии хлорофоса в пробе воды. Величина то, зависит от концентрации хлорофоса в анализируемой пробе.

О количестве хлорофоса в анализируемой пробе судят по отношению ь „/ „В таблице приведены данные по зависимости времени протекания реакции от содержания хлорофоса в анализируемой пробе.

679869

Формула изобретения

Составитель Л. Соломенцева

Редактор В. Минасбекова Техред Р.Андрейко Корректор А. Гриценко

:Заказ 4780/38

Тираж 1090 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открьпий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ количественного определения хлорофоса путем обработки анализируемой пробы холинэстеразой в присутствии субстрата, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности определения и сокращения времени определения, в качестве субстрата используют раствор Р-метнлумбеллиферонацетата в этил6 целлозольве и обработку ведут при рН среды

8,0-8,2 с последующим измерением люминесценции полученного раствора.

Источники информации, принятые во внимание

lIpH экспертизе

1. Швайкова М Д. Токсикологическая химия.

М., 1975, с. 273.

2. Филов В. А. Определение ядохимикатов в биологических субстратах. М.— Л., 1964, с. 16-21.