Индуктор интерферона

 

мэиэн латеи но то -, те: л несь,%„ о "иоле. g ц

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНЙЯ

Союз,.Советских

Социалистических

Реснублин (111 72 1 1 ОЗ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 11.0178 (21) 2567607/28-13 (51)М, Кл,2

А 61 К 45/04 с присоединением заявки Ко

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) ПриоритетtОпубликовано 150380, Бюллетень МЯ 10 (5Ç) УДК 576. 8. 097. .4 (088.8) Дата опубликования описания 15р38р,А.Ñ. Садыков, Ф,И. Ершов, X A Асланов,, A Ñ. Новохатский, А.И. ИсмаилЬв, С.А. Ауелбеков, Л. Биктимиров.и Н.И. Барам (72) Авторы изобретения (71) Заявители Институт вирусологии им. Д. И. Ивановского АИН СССР и Институт биоо1>ганической химии AH Узбекской CCP (5 4 ) ИНДУКТОР ИНТЕР ФЕРОНА

Предложенное соединение известно в качестве иммунодепрессора (2).

Целью изобретения является расширение арсенала индукторов.

Мао - $СН бн МН вЂ” НС ок

НО

ОН

С11> н, н, СН я,C сн,,в качестве индуктора интерферона.

Пример 1. Интерфероногенную ур активность госсипол-,Ь -амнноэтилсернокислый натрий ГСН на культуре клеток определяют, добавляя препарат в пи- тательную среду 48-часовых культур фибробластов эмбрионов кур. По исте- 25

- чении 24-часового контакта при 37 С клетки тщательно отмывают, заливают свежей питательной средой и инкубируют еще 24 ч. Затем в культуральной жидкости определяют содержание ин

Изобретение относится к области медицины, а именно вирусологии.

Известными индуктора и интерферо на являются синтетические полинуклеотиды и вирусы (1).

Однако эти препараты дорогостоящие и обладают антигенной активностью.

Эта цель достигается тем, что применяют госсипол-р -аминоэтилсернокислый натрий формулы

ОН К -МК-СН - CHg$0зМ

0 терф усна методом титрования по подавлению бляшкообразования тест-вируса на гомологичных культурах. Специфичность интерферона подтверждают определением термостабильности, прогреванием при 56ОС в течение 1 ч, а также определением чувствительности к обработке трипсииом (О, 2 мл О, 25% ного раствора трипсина в течение 30 мин при 37о С) .

Результаты эксперимента представлены в таблице.

3 721103

Индукции интерферона ГСП в культурах фибробластов эмбрионов кур

ы интерферона

БОЕSO/р

210

Контроль,31 мкг/мп ГСН

62 мкг/мл ГСН

125 мкг/мл ГСН

250 мкг/мл ГСН

640

Препарат интерферона, полученный при обработке клеток 250 мкг/мл ГСН, прогретый при 56 С в течение 1 ч

640

Препарат интерферона, полученный при обработке клеток 250 мкг/мл ГСН, подвергнутый воздействию трипсина

1-10 мкг/мл поли ИЦ в присутствии 70-100 мкг/мл ДЭАЗ -декстрана 64-128

512

Вирус Синдбис

Вирус везикулярного стоматита 320 рольных сыворотках титры интерферона при введении 500 мкг/мышь препарата составляют через 24 ч 320 ИЕ / „, череа 48 ч 160 ИЕ р/л д

Пример 4. Противовирусную активность,ГСН на экспериментальных животных (мыши 16-18 r) определяют . введением (интрапери1онеальцо) 500 мкг/мышь (25 мг/кг). Через 24 ч повторно вводят ту же дозу ГСН и сразу же после этого заражают мышей интрацеребрально 1 000 - 10 000 БОЕ вируса Синдбис в объеме 0,03 мп. Через

24 ч после заражения мыщей забивают, извлекают мозг и готовят 10%-ную мозговую суспензию, которую титруют методом бляшек под агаровым покрытием на фибробластах эмбрионов кур.

Пример 5. О токсичности ГСН.

В культуру клеток куриных фибробластов добавляют различные концентрации

ГСН и определяют цитотоксическую дозу препарата.

При экспериментах на животных мышам (16-18 г) вводят интраперитонеально различные дозы препарата и в течение 6 сут наблюдают за животными

В концентрации до 2500 мкг/мышь (125 мкг/кг) ГСН не оказывает видимого токсического действия.

Индуктор интерферона позволяет повысить титры интерферона и обладает широким спектром прогивовирусного действия.

Формула изобретения

П Ф и м е"р 2. для ойределения противовирусной активности ГСН на 30 культуре клеток берут 2-3-суточные культуры фибробластов эмбрионов кур и заражают вирусом везикулярного стоматита (BBC) с множественностью ййфекции 10 БОЕ на клетку. После 35

30-минутной адсорбции при 37 С вируссодержащую жидкость отсасывают, клетки отмывают раствором Хэнкса и заливают свежей пйтательной средой, содержащей препарат. Через 24 ч, когда в контроле наблюдают выражен ное цитопатическое действие вируса, культуральную жидкость сливают и инфекцйойность вируса определяют методом титрования по бляшкам под агаровым покрытием. Так, если в контро- 45 ле титр вируса достигает 9,2Ч БОЕ/мл в обработанных 120 мкг/мл ГСН культурах продукция вируса составляет

5,0 EOE/ìë. Степень подавления раз-. множения вируса превышает 4Q БОЕ/мл, Я) т. е. продукция вируса снижается в

i0000 раз. П р; и м е р 3. Иышиный сывороточный интерферон получают введением ьжшам 500мкг/мышь ГСН интраперитонеаль- 55 но. П Ъпарат вводят 2 раза c ïðoìåæóòком 24 ч. КонтроЛьным мышам вводят цлацебодистиллироЪанную воду. Через, 24 ч и 48 ч после последнего введе ййя препарата из .подключичной.артерии забирают кровь, получают сыворотку и титруют в йей содержание иитерферона- методом подавления цитопатйческого действия тест вируса (BBC) на .мышиных клетках ЬЯ9 . При отсутствии вирусингибирующей активности в конт- 65

Применение госсипол- Я -аминоэтилсернокислого натрия формулы

НО в качестве индуктора ийтерферона. 1йв1в КВЪ4в1егояМи4Ь.наМай.Аваев Фит 973.. Источники информации; !О 2. Авторское .свидетельство СССР принятые во внимание при кс рщтизе В 5 4 56 34, ко С 07С 87/28,А61В 32/И5, 1974.. Составитель С. Малютина

Редактор Т, Девятко Техред 3.ЧУжик Корректор И. Ьуска.Заказ 26/5 Тираж 673 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 г

721103

М60 — бНуСнуИН НС ОН

0к не Cí

0R Н0-МН-CEg-CHg)0yNQ

ОИ

СИЗ нС Сн