Способ определения активности супероксиддисмутазы в биологическом материале

Авторы патента:

G01N33/52 - использование соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, например реактивной бумаги

С нюэ Советских

Социалистических

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВ ИТИЛЬСТВУ (455502 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) ЗаЯвлено 021079 (21) 2849191/28-13 с присоединением заявки N9 (23) ПриоритетОпубликовано 150881 бюллетень N9 30

Датаопубликования описания 150881 (53)М Кпз G 01 N 33/52

Государственный комитет

ССС Р по делам изобретений н открытий (5З) Д (б 1 2 . 0 15, 1 (088.8) (72) Авторы изобретения

Э.П.Титовец и В.В.Кошкин ( (1

p -: - - " /

Белорусский научно-исследовательский Жтс .иыут неврологии, нейрохирургии и физиотерапии (71) Заявитель (5 4) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ СУПЕРОКСИДДИСМУТАЗЫ

В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в медицине! для биохимических исследований °

Известен способ определения активности супероксиддисмутаэы в биологическом материале путем инкубации его с субстратом с последующим фотометрированием продукта окисления Г1» .

Однако известный способ не обеспе- 10 чивает высокой точности.

Цель изобретения вЂ” повышение точности способа.

Эта цель дос ти гаетс я тем, что способ определения активности супероксиддисмутазы в биологическом матери- 1 але осуществляют путем инкубации его с субстратом с последующим фотометрированием продукта окисления, в качестве субстрата используют аминопроиэводные 1, 2 диоксибензола формуОН H>g

ОН

25 где R„ - аминоароматический или аминоалифатический остаток;

R вЂ” алкокси или аминоостаток. N

Пр едл а га етый спос об, определ ен и я активности супероксидцисмутазы осуществляют следующим образов..

В кювету спектрофотометра помещают эабуференную среду, например, 1/15 М фосфатный буфер рН 7,0 с

0,5 М ЭДТА (этилендиаминтетраацетат) уравновешенную по кислороду с атмосферным воэдухом. Среду постоянно перемещают механической мешалкой, вносят материал, исследуемяй на активность супероксиддисмутаэы, и вводят 20 мкМ 4-анилино-5-метокси-1,2-диоксибенэола или другого аминодифенола, из указанных выше. Регистрируют увеличение оптической плотности на максимуме поглощения образующегося производного О -бенэохинона. Активность супероксиддисмутаэы рассчитывают по степени торможения реакции автоокисления, как принято для непрямых методов определения активности этого фермента.

Исследования показали наличие линейной зависимости между обратной величиной скорости автоокисления и количеством супероксидцисмутазы в широком диапазоне концентраций фермента, что позволяет, пользуясь этой зависимостью, определить эквивалент855502 ои мну„! он - р

Формула изобретения

Составитель С,Малютина

Редактор К.Волощук Техред М. Голинка Корректор Г.Решетник

Заказ 6896/61 Тираж 907 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д.4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ное количество фермента по величине скорости автоокисления АМОБХН2.

Использование предлагаемого способа позволяет проводить определения активности супероксиддисмутаэы в фи.зиологической области значений рН, что невозможно при использовании .известного способа. Тем саум обеспечивается возможность контроля активности этого фермента в условиях, близким к условиям его функционирования в биологических тканях. Способ обеспе чивает большую информативность и достоверность получаемых результатов и вместе с тем обеспечивает большую практическую значимость получаемой. информации. 15

Способ определения активности 20 супероксиддисмутаэы в биологическом материале путем инкубации его с субстратом с последующим фотометрирова-, нием продукта окисления, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве субстрата используют аминопроизводное 1,2 диоксибензола формулы где R„- аминоароматический или амино алифатический остаток

R вЂ” алкокси или аминоостаток.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Misra Н.P. and TrioEovich Х

".ТЬе Кобе of Supегоxide anion in the аиСох1йо 1on of ср1перЬг1Ье апй

Simp(å assay ofor Supегоxide dismutase" Bio6.Chem. 1972, Т.247, с.31703175 .

Способ определения активности супероксиддисмутазы в биологическом материале

Способ определения гистамина в би-ологическом материале // 845099

Способ определения свободного гидрокси-пролина b плазме крови // 834518

Способ определения тканевой несов-местимости донора и реципиента // 828087

Способ количественного определения препаратов фенотиазинового ряда в биологических жидкостях1изобретение относится к области медицины,, а именно к методам анализа лекарственных препаратов.известен способ количественного определения препаратов фенотиазинового ряда в биологических жидкостях путем экстракции их с последующим разделением жидкостной хроматографией [1].однако известный способ _трудоёмок, длителен' и не обеспечивает .высокой чувствительности и воспроизводимости результатов..цель изобретения ~ повышение точности способа.эта цель достигается путем экстр^кции препаратов с последующим ра^вделением жидкостной хроматографией. при этом хроматографию ведут на катионите, а в качестве элюентов ис- 20 пользуют смесь этанола и воды, взятых в соотношении 1:5 - 5:1 по объему с добавлением 0,1-5,0% смеси уксусной кислоты и дизтиламин'а в соотношении 5:4.' способ осуществляют следующим образом.образец биологической жидкости, содержащий один или несколько препа_- ратов фенотиазинового ряда, под- ' 30101525вергают экстракции при рн 9,5 хлороформом. затем экстракт упаривают, остаток растворяют в этаноле и вводят в колонку длиной от 10 до 50 см, заполненную сильньм катионитом, например партисилом 10- scx. через колонку пропускают смесь этанола и воды с добавлением диэтиламина и уксусной кислоты. время удерживания фенотиазиновых препаратов различно. детектирование выходящих из колонки разделенных konotohehtob осуществляют по поглощению уф-света в проточной кювете. поскольку все фенотиазиновые 'препараты характеризуются сильным поглощением уф~света, такой метод детектирования гарантирует высокую чувствительность анализа. содержание препарата опреде.пяют по калибровочному графику,пример 1. , построение калибровочного графика для анализа ч нонахлазина и этмозина.к 2 мл плазмы добавляют нонахлазин и этмозин в виде водных райтворов соответствующих гидрохлоридов. прибавляют 0,5 г сульфата аммония и 0,5 мл 10%-ного аммиака. экстрагируют 2 раза по 5 мл хлороформа. объединенный экстракт испаряют'в // 826242

Патент 826241 // 826241

Способ определения фосфоновыхкислот b биологических жидкостях // 819721

Средство для очистки сыворотки при фотометрических измерениях // 791267

Способ диагностики раковых заболеваний // 428278

Способ определения чнсла аминокислотных остатков в молекулах белков // 303569

Способ определения антиоксидантной активности плазмы крови // 2102757

Способ дифференциальной диагностики гемморрагической лихорадки с почечным синдромом от острых распираторных вирусных инфекций и воспалительных заболеваний почек // 2104540

Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии и инфекционным болезням

Способ прогнозирования острого инфаркта миокарда // 2105981

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и предназначено для прогнозирования течения инфаркта миокарда

Способ определения влияния со*002 на генерацию супероксидного анион-радикала фагоцитами // 2108572

Изобретение относится к медицине и касается исследования влияния CO2 на генерацию супероксидного анионрадикала фагоцитами

Способ определения степени магниточувствительности человека // 2108581

Изобретение относится к медицине, в частности, к гигиене, может быть использовано для определения индивидуальной магниточувствительности человека при профотборе

Способ определения естественной киллерной активности лимфоцитов человека в условиях гипербарии // 2109288

Изобретение относится к области водолазной медицины и физиологии подводных погружений и может быть использовано для определения влияния факторов гипербарии (величины общего давления, вида используемой газовой смеси, типа водолазного спуска, параметров микроклимата в гипербарических комплексах и т.д.) на естественную киллерную активность лимфоцитов крови водолазов

Способ диагностики перинатальных нефропатий на стадии предболезни // 2110799

Способ определения бактериальных липополисахаридов // 2114436

Изобретение относится к медицине, а именно к способам количественного определения бактериальных липополисахаридов в процессе производства медицинских иммунобиологических препаратов

Способ обнаружения идентификации и/или количественной оценки материала, набор для анализа, оптический волновод, биосенсор // 2116349

Изобретение относится к генной инженерии, а именно к способу проведения анализов с помощью генных зондов и с использованием биосенсора, включающего детектор затухания колебаний

Способ определения количества бактерий в биопрепарате // 2117291

Изобретение относится к способам исследования биологических материалов с использованием соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, в частности к способам определения количества бактерий в биопрепаратах, и может быть использовано в медицинской микробиологии и микробиологической промышленности