Способ определения эпидемичности вируса гриппа
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭПИДЕМИЧНОСТИ ВИРУСА ГРИППА путем исследования антигенной гетерогенности популяций штаммов вируса, выделенных от больных, отличающий ся тем, что, с целью упрощения способа, исследуют антигенную гетерогенность штаммов в пределах дрейфа и шифта и по наличию гетерогенности штаммов по антигенному составу в пределах дрейфа и шифта определяют эпидемичность вируса гриппа, а по наличию гетерогенности штаммов только в пределах дрейфа или дополнительно содержащие единичные вариашты с шифтовьо ш изменениями определяют отсутствие эпидекдачности.i
(19) (11) СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 2888007/28-13 (22) 10. 01..80 (46) 15.12.83. Бюл. В 46 (72) Ю. П. Христофоров, Л. Н.Темирева, В. Н. Заку сило и И. С. Фучижи (71) Одесский научно-исследовательский институт вирусологии и эпидемиологии им. И.И.Мечникова (53) д 576. 8. 095. 172 (088. 8) (56) 1 ° Скрипченко Г. С., Поляков Е.М., Князева H..È. "Иммунологические предвестники эпидемий гриппа", Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, Р 5, 1978.
Р (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭПИДЕ МИЧНОСТИ ВИРУСА ГРИППА путем исследования антигенной гетерогенностн популяций штаммов вируса, выделенных от больных, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, исследуют антигенную гетерогенность штаммов s пределах дрейфа и шифта и по наличию гетерогенности штаммов по антигенному составу в пределах дрейфа и шифта определяют элидемичность вируса гриппа, а по наличию гетерогенности штаммов только в пределах дрейфа или дополнительно содержащие единичные варианты с шифтовыми изменениями определяют отсутствие эпидемнчности.
875847
- Изобретение относится к медицине, а именно, к вирусологии.
Известен способ определения эпидемичности вируса гриппа путем исследования антигенной гетерогенности популяций штаммов вируса, выделенных от больных 11 .
Однако известный способ сложен, длителен, что затрудняет проведение профилактических мероприятий и своевременное приготовление вакцины из выделенных штаммов.
Целью изобретения является упрощение способа, цель достигается тем, что при осу; ществлении способа определения эпидемичности вируса гриппа путем исследования антигенной гетерогенности популяций штаммов вируса, выделенных от больных, исследуют антигенную гетерогенность штаммов в пределах дрейфа и шифта и по наличию гетерогенности штаммов по антигенному составу в пределах дрейфа и шифта определяют эпидемичность вируса гриппа, а по наличию гетерогенности штаммов только в пределах дрейфа или дополнительно содержащие единичные варианты с шифтовыми изменениями определяют отсутствие эпидемичности.
Способ осуществляют следующим образом.
Накопление вируса производят путем пассажей смывов от больных на куриных эмбрионах. Полученный материал разводят стерильным физиологическим раствором хлористого натрия с коэффициентом 10, после чего заражают куриные эмбрионы, которые инкубируют при 35оС в течение 72 ч.
Эмбрионы вскрывают, отбирают эллан- 4 тоисные жидкости, давшие положительную реакцию геммагглютинации, и готовят из них пул, состоящий из равных объемов отдельных аллантоисных жидкостей. Собирают фракции вируса.
Фракционирование проводят на свежих или формализированных куриных эритроцитах, предварительно отмытых стерильным физиологическим раствором хлористоro натрия. Вирус адсорбируют на куриных эритроцитах в течение 1,5 ч при +4 C. Соотношение вирусосодержащей жидкости и эритроцитов равно 10:1. После адсорбции смесь центрифугируют при 1,5 тысяч об/мин в течение 5 мин. Снимают над- 5 осадочную жидкость. Для промывания к эритроцитам добавляют охлажденный до +4 С физиологический раствор хлористого натрия в соотношении 2:1, смесь размешивают и центрифугируют при 1,5 тысяч об/мин в течение 5 мин.
После снятия промывной жидкости к эритроцйтам добарчяют охлажденный физиологический раствор в соотношении 1:0,7, размешивают и оставляют для элюции при комнатной температу ре. Через 30 60 мин проводят цент рифугирование в указанном режиме и отсасывание пастеровской пипеткой элюата. К осадку эритроцитов добав5 ляют новую порцию охлажденного физиологического раствора. Последующие элюаты снимают с тем же интервалом до полного истощения гемагглю . тинина. Для предотвращения npopocI0 та в используемый физиологический раствор и в пробирки для элюатов добавляют смесь антибиотиков (пенициллин со стрептомицином из расчета 100-200 ЕД/мл) . Затем проводят проверку элюатов и установление антигенной структуры популяции. В надосадочной и промывной жидкостях, а также в полученных элюатах определяют геммагглютинирующую активность. Затем надосадочную и промывную жидкости, полученные элюаты, а также осадок эритроцитов после снятия последнего элюата, разводят с коэффициентом 10 до предельных разведений, пассируют на куриных эмбрионах и инкубируют при 35,5 С в течение 48-72 ч. Эмбрионы вскрывают, собирают аллантоионные жидкости и материал, отдельно от каждого эмбриона, проверяют в РТГА с гепер30 иммунными сыворотками к эталонным штаммам вируса гриппа. По данным
РТГЛ определяют. гетерогенность исследуемой популяции в пределах дрейфа, что свидетельствует о спо5 собности данного штамма вызвать некрупную эпидемию, а только локальные вспышки. Проявление гетерогенности популяции исследуемого штамма как в пределах дрейфа, так и в пределах шифта свидетельствуют о потенциальной возможности перерастания вызванных им вспышек в широко распространяемые эпидемии.
Пример 1. Для изучения антигенной структуры популяции был взят вирус гриппа серотипа А/НЗй /, эталонный штамм А/Гонконг/1/б8.
После его накопления .на куриных амбрионах 100 мл вирусосодержащей аллантоисной жидкости адсорбировали
О в течение 1,5 ч на свежих эритроцитах кур. Элюцию проводили в 7 мл физиологического раствора хлористого натрия при комнатной температуре.
Полученные элюаты, осадок эритроци5 тов, насадочную и проьывную жидкости пассировали в куриных эмбрионах до предельных разведений. Все материалы, отдельно от каждого эмбриона, были оттипированы в PTFA. Всего при фракционировании было получено
479 штамм-вариантов. Из них 372 типируются как исходный штамм, причем у 75 отмечаются изменения в преде-, лах дрейфа. У 77 полученных штаммвариантов отмечаются отличия от ос875847
Пример 3. Для изучения анткгенной структуры популяции вируса 40 гриппа серотипа A/H3N2/ был взят штамм A/Виктория/3-75, выделенный от больного. Фракцконированке популяции данного штамма проводили в строгом соответствии с методом, описанным в примере 1. Всего прк фракционированик было получено .365 штамм-вариантов. Из них 355 типкруются как исходный штамм, причем у
260 отмечаются изменения в пределах дрейфа. Штамм-вариантов с шифто- 50 выми изменениями прк фракционировании указанной популяции выделено не было. 10 штамм-вариантов оказались неткпируемымк. Из полученных данных видно, что у популяции штамма-аналога55
А/Виктория/3/75, вызвавшего только !
Составитель
Редактор Е. Зубкетова Техред N.Koñòèê
Корректор A. Дзятко
Заказ 10698/6 Тираж 523
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Подписное
Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 новного штамма в пределах шифта, причем выделяются штамм- варианты с отличиями в пределах всего серотипа. По полученным данным можно отметить,что популяция штамма вируса гриппа .
А/Гонконг/1/68, давшая пандемию, 5 проявляет ярко выраженную гетероген- ° ность в пределах дрейфа и шифта.
Пример 2. Для изучения антигенной структуры популяции вируса гриппа серотипа A/H3N1/ был взят штамм А/Порт Чалмерс/1/73, выделенный от больного. Фрак1уонирование популяции указанного штамма проводи ли строго в соответствии с методом, описанным в примере 1. Всего при фракционировании получено 709 штамм-вариантов.
Из них 656 типируются как исходный штамм, причем у 486 отмечаются изменения в пределах дрейфа. 9 штаммвариантов имеют отличие от исходно- 20 го штамма в пределах шифта, причем отмечено, что выделенные штаммы относятся к сероподтипам АО, А1 и
А/Англия-12/64. Аналогов
A/Ñèíãàïóð/1/57, А/Гонконг/1/68 25 и A/Âèêòîðèÿ/35/72 выделено не было.
По полученным данным отмечено, что популяция вируса гриппа штамма-аналога A/Ïîðò Чалмерс/1/73, отличающегося меньшей эпидемичностью, чем 30
A/Ãîíêîíã/1/68, проявляет ярко выраженную гетерогенность в пределах дрейфа, но гетерогенность в пределах шифта выражена у популяции штамма А/Порт Чалмерс/1/73 в меньшей степени, чем у A/Ãîíêîíã/1-68 . (1,26Ъ и 16,07% соответственно). ограниченные вспышки и не получившего широкого распространения, гетерогенность в пределах дрейфа выражена меньше, чем у его предшественников A/ÃoHêoíã/1/68 и А/Порт
Чалмерс/1/73, гетерогенность по типу шифта для штамма A/Bèêòoðèÿ/3/75 не установлена.
I1 р и м е р 4. Для изучения антигенной структуры популяции вируса гриппа серотипа A/ÍÎN1/ был взят штамм-аналог A/РR-8/34, выделенный от больного. Фракционирование проводилось в строгом соответствии с методом, описанным в примере 1. Всего при фракционировании было получено 409 штамм-вариантов. Из них 406 типируются как исХодный штамм, причем только у 176 наблюдаются незначительные изменения в пределах дрейфа. Штамм-вариантов с выраженными изменениями в пределах шифта не выделено. Нетипируемых было выделено
2 варианта. Таким образом, можно отметить, что в отличии от эпкдемическкх штаммов, штамм-аналог A/Pg -8/34, вызвавший только ограниченную вспышку, проявляет гетерогенность популяцкк только в пределах дрейфа.
Пример 5. Для изучения анткгенной структуры популяции вируса гриппа серотипа А (H1N1) был взят штамм-аналог А/CCCP/77, выделенный от больного. Фракционирование проводилось в строгом соответствии с методом, описанным в примере 1. При фракцконировании было получено 342 штамм-варианта. Из них 268 типкруются как исходный штамм, причем только у 70 наблюдаются изменения в пределах дрейфа. Изменений в пределах шифта на наблюдается. Четыре штамма-варианта были неткпируемимк. Следовательно, популяция штамма вируса гриппа аналога A/СССР/77 не давшего крупных эпидемий, а ограничевшегося только вспышками различной кнтснквности проявляет, в отличие от эпйдемкческкх штаммов, незначительную гетерогенность только в пределах дрейфа.
Таким образом, предложенный способ прост, не требует длительного времени, экономичен, что позволяет дать заключенке о способности популяции штамма вызвать эпидемию или локальную вспышку и своевременно решить вопрос о необходимости приготовления вакцины к данному штамму.
