Способ определения алкалоидов изохинолинового ряда в мачке желтом

 

Союз Советских

Социалистических республик

О П И С A Н l4 Е ььь)943565

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61 ) Допол интел ьное к а вт. с вид-ву(22)Заявлено 01.02.79 (21) 2723857/23-04 {51)м с присоединением заявки .ьтй

G 01 и 31/08

3Ъеудерстееииый комитет

СССР ио аелеи изобретений и открытий (23) Приоритет—

Опубликовано 15 ° 07 ° 82 ° Бюллетень JA 26

Дата опубликования описания 15.07.82

{53) УДК 543.544..42(088.8) М. Я. Ловкова, Г. Н. Бузук и Н> И. Гринкевич (72) Авторы изобретения

Ордена Ленина институт биохимии им. А. Н. Баха и 1-ый Московский ордена Ленина и ордена Трудового

Красного Знамени медицинский институт им. И. М Сеченова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛКАЛОИДОВ

ИЗОХИНОЛИНОВОГО РЯДА В МАЧКЕ

ЖЕЛТОМ

Изобретение относится к медицине, в частности к исследованию и анализу. биологически активных природных соединений, применяемых.; в качестве лекарственных средств, а именно к коли чественному определению алкалоидов в мачке желтом.

Ъ;

Известен способ определения алкалоидов изохинолинового ряда путем экстракции их из растительного материала хлороформом с последующей тонкослойной хроматографией экстракта в системе растворителей бензол-метанол, взятых в соотношении 80:20 Г1 ).

Йедостаток способа - неселективност ь.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемым результатам является способ определения алкало .идов изохинолинового ряда в мачке желтом путем экстракции алкагюидов петролейным эфиром, разделения стракта методом тонкослойной хроматографии в смеси растворителей хлоро2 форм — метанол - 253 аммиак, взятых в соотношении 22,5-2,5-0,1 с последующим проявлением пластинки реактивом. Драгендорфа и спектоофотометрированием (2 ).

Недостатком способа является его неселективност ь.

Цель изобретения - повышение селективности способа.

Указанная цель достигается тем, что в способе определения алкалоидов изохинолинового ряда в мачке желтом путем экстракции экстрагентом, тонкослойной хроматографии экстракта в смеси органических растворителей с

15 последующим проявлением пластинки и спектрофотометрироваььием, в качест" ве экстрагента используют смесь этанила, хлороформа и 253 аммиака, взя20 тых в соотношении (0,5- 1):(1-3): (0,08-0,64), в качестве смесь: органических растворителей используют смесь бензола, ацетона и метанола, взятых в соотношении 8;6-9,4:1-3:0,8-1

3 94356 ,и проявление пластинки ведут в парах иода с последующим опрыскиванием ее раствором тиосульфата натрия.

Отличительная особенность способа состоит в том, что в качестве эк<:трагента используют смесь этанола, хлороформа и 253-ного аммиака, взятых в соотношении (0,5-1):(1-3,0):(0,080,64), в качестве смеси органических растворителей используют смесь бензо- >в ла, ацетона и метанола, взятых в соотношении (8,6-9,4): (1-3): (0,3-1) и проявление пластинки ведут в парах иода с последующим опрыскиванием ее раСтвором тиосульфата натрия. 15

Пример. 1,0 г (точная навеска) воздушно-сухого измельченного (0,1 мм) растительного материала экстрагируют 25 мл смеси этанола - хлороформа - 253 аммиака в соотношении

1:1:0,1 в течение 16 ч при настраивании. Полученный экстракт отфильтровывают и замеряют его объем. К фильтрату прибавляют 10 мл 103-ного раствора уксусной кислоты. Из образовавшейся двухфазной системы этанол и хлороформ отгоняют под вакуумом на водяной бане. Полученный горячий водно-кислый раствор разбавляют 10 мл воды и охлаждают. После охлажде ния кислый ра ст-, вор отфильтровывают при отсас вании через стеклянный фильтр (Г 4. Образующийся осадок промывают 5 мл воды.

Водно-кислый фильтрат многократно экстрагируют хлороформом (20 мл х 4)

35 при подщелачивании 25 -ным аммиаком (рН 9) до полноты извлечения, которуа контролируют по реакции с реактивом

Драгендора. Хлороформенные экстракты сушат над безводным сульфатом натрия

40 и хлороформом отгоняют досуха. Сухой остаток количественно растворяют в 1 мл этанола.

Для приготовления пластинок 13 х х 18 см используют 6,0 г силикагеля, 0,3 г гипса и 14 мл 0,5 н. КОН. Для

45 проведения разделения пластинку делят на 4 равные полоски. На каждую из трех полосок наносят штрихом 0,1 мл этанольного раствора суммы алкалоидов, Ф

5 4

Четвертая полоска служит в качестве холостого; опыта. Хроматографическое разделение проводят восходящим спосо-бом в системе бензол - ацетон — метанол в соотношении 9:2:1. После прохождения растворителя пластинку сушат на воздухе и проявляют в течение не более 3-х мин в парах иода. После того, как пятна алкалоидов отмечены, пластинку опрыскивают 103-ным водным раствором тиосульфата натрия и высушивают на воздухе. Отмеченные зоны силикагеля с алкалоидами согласно их

R, соскабливают, тщательно растирают на кальке и алкалоиды элюируют

10 мл этанола, насыщенного тиосульфатом натрия, в течение 30 мин при встряхивании, Измеряют оптическую плотность элюатов, полученных после фильтрования через стеклянный фильтр У 4 при от са сыва ни и и до вед ен Hblx до 1 0 мл, на СФ-4А при 280 нм — для глауцина, изоболдина и таликмидина, 289 нмдля прототипа и норхелидонина, 285 нм для синоакутина и аллокриптопина, 265 нм - для коридина и 272 нмдля оксоглауцина, хелеритрина и сангвинарина против контроля, в качестве которого используют элюат с контрольной полоски силикагеля, взятый на уровне пятен определяемых алкалоидов. „ Содержание алкалоидов в элюатах расчитывают по калибровочным графикам.

В табл. 1 приведено влияние соот ношений этанола, хлороформа и 25io ного аммиака в экстрагенте на извлечение глауцина из травы мачка желтого.

Как видно из табл. 1, наибольшая полнота экстрагирования алкалоидов из растительного материала наблюдается при соотношениях этанол - хлороформ — 25 . аммиак в следующих пределах (o,5-1):(1-3):(o,o8-o,64) .

В табл. 2 приведены значения алкалоидов мачка желтого при разделении их тонкослойной хроматографией.

В табл. 3 приведены значения алкалоидов мачка желтого при разделении их тонкослойной хроматографией.

943565

Таблица 1

21 93

25,90

25,9ã

25,94

25,94

24,87

19,84

19,65

19,52

21,86.

25 90

1:2:0,16

25,92

1:2:0 32

1:2:0,44

1:2:1,38

25,90

25,90

17,36

Таблица 2

Смеси органических растворителей

Алкалоиды

Изоболдин Оксоглауцин Аллокриптонин Глауцин Известный способ

0,72

0,60

0,40

0,34

0,30

0,50

0,83

0,70

0,45

0,43

0152

0,66,0 33

0,27

0,23

0,62

0,55

0,32

0,28

0,27

0,38, 0,50

".. 0,21

0,12

0,16

° o,ð4

0,40

0,21

0,48

0,57

0,29

0,77

0,45

0,70

0 36

VI I

Соотношение О, 5-1: 1-4: О, 08-0, 64 этайол - хлороФорм - 253 аммиак

0:4:0,25

0,5:4;0,25

1:3:o ã5

1:2:0,25

1:1:0,25

2:1:0,25

3:1-.о ã5

4:0,5:0,25

4:0:0,25

1:2:0,00

1:2:0,08

Обнаружено глауцина в образце мг/г

943565

Таблица 3

Смеси ,органических растворителей

Алкалоиды

Желеритрии Сан гвинарин Коридин

Хелидонин

0,85

0,98

0,62

О !90

О 98

0,62

0,95

0,90

0,85

0,48

0,90

0,70

0,88

0,96

0,52

0,93

0,66

0,78

0,86

0,33

0,84

0,40

0,80

0,70

0,94

0,64

0,85

0,96

Vl! и м е ч а н и е. бензол-ацетон-метанол (9;2:1) ! I! (9:2:0,8)

I I !! (9: 2: 1,2)

IV (9: 3:1)

«!!» .(9:1: )

Vl

»!! (9,4:2:1)

Vl I.

»! !» (8,6:2: I ) П р

3О

Формула изобретения

Составитель С ° Хованская

Редактор Т. Парфенова Техред Е.Харитончик Корректор Г, Огар

Заказ 5096/48 Тираж 887 Подписное

8НИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, москва, 3-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужг:!род, ул. Проектная, 4

Способ определения алкалоидов изо.хинолинового ряда в мацке желтом путем экстракции алкалоидов из растительного материала экстрагентом, тон- 35 кослойной хроматографии экстракта в смеси органических растворителей с последующим проявлением пластинки и спектрофотометрированием, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью 40 повышения селективности способа, в качестве экстрагента используют смесь этанола, хлороформа и 254-ного амми-! ака, взятых в соотношении (0,5-1): и (1-3):(0,08"0,64), в качестве сме- !45 си органических растворителей используют смесь бензола, ацетона и метанола, взятых в соотношении (8,6-9 4): (1-3): (0,8-1), и проявление пластинки ведут в парах иода с последующим опрыскиванием ее раствором тиосульфата натрия.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Хроматография в тонких слоях.

Под ред. Э. Нталь, М., !!Мир", 1965,,с. 280-304.

2. Маслова Г. А. Методика количественного определения глауцина в траве.

Фармация. 1974, У 4, 68 (прототип).