Способ определения аллергенных свойств молочного белка

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Е 1, К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (Я) Дополнительное к авт. сеид-ву (22) Заявлено 19. 03. 81 (21) 3288527/28-13 (Я ) М. Кд.З

G 01 и 1/28

A 61 В 10/00 с присоединением заявки NP (23) Приоритет

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытии

Опубликовано 30,0183. бюллетень HP 4

Дата опубликования описания 3001,83 (33) УДК 615 ° 475 (088. 8) /

В.A.Øàòåðíèêîâ, И.Н.Марокко, Н.Н Пятницкий Л.Ш.Горго

Н.П.Сугоняева, Н.М.Винокурова и В,N.Жминченк4 - (.. :, ; => .;с„; в@ р ñ",»„

7 "..Ф lg». .,„»» """"" 7..1 д /

Йц@ц „„

Институт питания АМН СССР (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛЛЕРГЕННЫХ СВОЙСТВ

МОЛОЧНОГО БЕЛКА

Изобретение относится к медицине, а именно к гигиене питания, и может найти применение при подборе диет, снижающих проявление аллергии

Известен способ определения действия продуктов питания на проявление аллергии путем введения молочного белка энтерально животным с последующим воспроизведением анафилактического шока введением разрешающей дозы яичного белка (l}, Однако такой способ требует длительных сроков, из-за отсутствия эта" лона обладает малой точностью, а при энтеральной сенсибилизации энтераль» ное разрешение может быть полностью неэффективным.

Цель изобретения - повышение точ» ности способа.

Поставленная цель достигается согласно способу определения аллерГен- . ных свойств молочного белка путем его энтерального введения животным с последующим воспроизведением анафилактического шока введением разрешающей дозы яичного белка, при кото" ром молочный белок вводят в течение двух-трех месяцев, далее под кожу лап трехкратно с интервалом в 23-24 ч вводят 2,5-3,0 мг яичного белка, затем через 15-20 дней после последнего введения парентерально вводят разрешающую дозу, при этом ее устанавливают путем парвнтерального введения другой группе животных яичного белка в дозе, вызывающей в 40-.603 ик гибель, н по разнице погибших животных в опытной и контрольной .группах определяют аллергенные:свойства мо" лочного белка.

На чертеже првдставлена пробит-логарифмическая зависимость частоты смертельного анафилактического шока от разрешающих доз яичного белка (в десятичных логарифмах).

Способ осуществляют следующим образом.

Животным энтерально вводят молочный белок в течение двух-трех месяцев, далее под кожу лап трехкратно с интервалом в 23-24 ч вводят 2,53 мг яичного белка, затем через «5»

20 дней после последнего введения парентерально вводят разрешающую до" зу, при этом ее устанавливают путем парентерального введения другой группе животных яичного белка в дозе, вызывающей в 40-60% их гибель, и по разнице погибших животных в опытной

993095

Т а б л и ц а 1

Наблюдаемый эффект (смертель" ный анаАилактический шок) Выраженный наблюдаемый эффект

Ожидаемые" результаты

Разность между наблюдаемйм и ожидаемым про" центами

Дозы яично го бел ка, вводимого через рот, мг/кг

Сложение.для х пробиты пробиты

О/16

2,42 0,5 2)79 1,4 0,9

4,46 29,4 4,37 26,3 3,1

0,0058

0,0050

1.6

5/17

12/18

5r43 . 66ю7 5r44

400

67,0 0,3

75,2 2,6

0,0036

7/9

77,8 5,68

600

5,77

П р и м е ч а н и е. Среднее число животных в группе 15, К-число нанесенных доз

=0,0144

xi=0,216 и контрольной группах определяют аллергенные свойства молочного белка.

Пример 1. Для определения действия сухого творога на проявление аллергии берут две группы морс" ких свинок массой 300-320 г, 50 жи- 5 вотных в опытной и 30 животных в кон,трольной группе.

Контрольная группа в течение одного месяца содержится на обычном виварном рационе. В течение этого сро- 10

4 ка опытная группа животных наряду с обычным виварным рационом получает сухой творог, хранившийся при + 4сС в течение двух месяцев, из расчета

10 r белка в сутки на одного животного. После окончания данного срока каждое животное иммуниэируют 2,5-3 мг яичного белка в подушечки лап трехкратно с интервалом между введениями

23-24 ч. Через 15-20 дней после окон-2О чания иммунизации в контрольной группе животных определяют разрешающую дозу яичного белка, которая вызывает смертельный анафилактический шок у

40-60% животных при введении яичного белка морским. свинкам через рот. Значение разрешающей дозы для 40-603 величины смертельного анафилактического шока определяют расчетным спосо бом. Для этого берут 60 морских свинок, иммунизируют их 3 мг яичного белка вышеуказанным способом. Через

l5 дней после окончания иммунизации животных разделяют на 4 группы и вводят им через рот различные разрешающие дозы яичного белка 16 мг/кг мас-Зэ сы животного 16 80 мг/кг 17;

400 мг/кг 18 и 600 мг/кг 9 животным.

) )

) Результаты по воспроизведению смертельного анафилактического шока в зависимости от разрешающей дозы яичного белка представлены в табл. 1.

Используя частоты смертельного анафилактического шока от разрешающих доз яичного белка 80 мг/кг, 400 мг/кг и 600 мг/кг, строят пробитлогарифмическую зависимость, представленную на чертеже, из которой видно, что 503 случаев смертельного анафилактического шока возникают от разрешающей дозы яичного белка, логарифм которой равен 1g=2,26. Разрешающая доза яичного белка, соответствующая найденному лог рифму, составляет

182 мг/кг массы морской свинки.

Теоретически рассчитанное значение х для числа степеней свободы f равно числу доз, нанесенных на график, уменьшенному на 2 (в данном случае f=2) лри уровне достоверности

Р=0,05, составляет х -5,99. Поскольку вычисленное х =0,216 меньше теоретически рассчитанного значения х =

=5,99, то проведенную прямую считают достоверно соответствующей нане" сенным точкам.

Далее каждому опытному и контрольному животному через рот вводят

182 мг яичного белка и определяют частоту смертельного анафилактического шока.

Частоты развития смертельного анафилактического шока в опытной и конт рольной, группах животных представлены в табл. 2.

993095

Т а блица 2 уппа животйых

56,7

10

Группа животных опытная (иэомил)

n>-- 30 контрольная и 26

46 2

12

Достоверную разницу между исследуемыми группами определяют по критерию ФИ - 4 (углового преобразования) Фишера. Критерий достоверности

F<, .вычисленный нри значениях п 30, и = 50, „=1,7052 и Ч *0,6435, состав" ляет FR=21 135.

При сравнении критерия достоверйости Fq 21,135 со стандартными значениями критерия Фишера " Fgg, определенными теоретически при Ч 1 и

V<=n<+n> H Равными F (4,0-7,0-11,9) видно, что разность между исследуе" мыми группами достоверна по третьему порогу вероятности безошибочных прогнозов, т.е. Р < 0,001.

Затем сравнивают, насколько Разнятся величины смертельного анафилактического шока опытной и контрольной групп животных. Эти величины соответственно равны 10Ъ и 56,73. Делают вывод, что сухой творог снижает проявление аллергии на 46,7% по сравнению с контролем., Q p и м е р 2. Для определения действия изомила на проявление

Число погибших, % погибших

Ау

Достоверную разницу между исследуемыми группами определяют по критерию ФИ - (углового преобразования). Критерии достоверности Р,(, вычисленный при значениях п< 26, аллергии берут две группы морских свинок массой 300-350 r, 30 животных в опытной и 26 животных в контрольной группе. Контрольная группа в течение одного месяца содержится на обычном виварном рационе. Опытная группа в течение этого срока наряду с обычным виварным рационом получает иэомил,.хранившийся при комнатной температуре в течение трех месяцев, иэ расчета 5 r белка в сутки на опытного животного. После окончания данного срока каждое животное иммунизируют яичным белком вышеописанным

ЗО способом. Через 15 дней после окончания иммунизации каждому опытному и контрольному животному через рот . вводят разрешающую дозу яичного белка 182 мг/кг, которая согласно расЗ5 четным вызывает 50% случаев смертельного анафклактического шока в контрольной группе животных.

Частоты развития смертельного анафилактического шока в опытной и конт40 рольной группах животных представле" ны в табл. 3.

Т а б л и ц а 3

Число погибших, Ъ погибших

A и = 30, Ч 1,4947,Ч2 0,9273; состав" ляет F =3,48. При сравнении критерия достоверности F 4,48 со стандартны ми значениями критерия ФиШера - РЭ., 4Ъ определенными теоретическими при Ч l

993095

1У 4Ф 4б pig и Vg и„+п -2=54 и равными FS_#_4 0-7,1- 12,1),Ьидно,что разность между исследуемыми группами достоверна по первому порогу вероятности безошибочных прогнозов, т.е. Р < 0,05.

Затем сравнивают, насколько раз" нятся величины смертельного анафилактического шока опытной и контрольной групп животных. Эти величины сост" ветственно равны 20 и 46,2Ъ. Делают вывод, что продукт детского питания изомил (заменитель коровьего мо» лока) снижает проявление аллергии на 26,2Ъ по сравнению с контролем.

Положительный эффект достигнут в связи с изменен!!ем технологии при ис- 15 пользовании изобретения и выражается в том, что точность способа повышается за счет введения эталона, вос" производимость анафилактического шока увеличивается за счет применения ур приема парентеральной иммунизации экс периментальных животных растворимым пищевым белком.

Кроме того, сокращаются сроки исследования.. 25

Формула изобретения !

Способ определения аллергенных свойств молочного белка путем его энтерального введения животным с последующим воспроизведением анафилактического шока введением разрешающей дозы яичного белка, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, молочный белок животным вводят в течение двух-трех месяцев, далее под кожу лап трехкратно с интервалом 23-24 ч вводят 2,53,0 мг яичного белка, затем через

15-20 дней после последнего введения парентерально вводят разрешающую дозу, при этом ее устанавливают путем парентерального, введения другой группе животных яичного белка в дозе, вызывающей в 40-60% их гибель, и по разнице погибших животных в опытной и контрольной группах определяют аллергенные свойства молочного белка.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Harly G. The parmeability of

the gastrointrstinal mucose of guinea pigs to crystalline eggaltumin.

immunol, 1942, Ч.43, 4, р. 297-309, ВНИИПИ Заказ 443/57

Тираж 871 Подписное

Филиал ПШ! "Патен ", r.Ужгород, ул.П :. ектная,4