Пентафторфениловый эфир п-нитробензойной кислоты в качестве реагента для блокирования непрореагировавших аминогрупп в твердофазном синтезе пептидов

 

Пентафторфениловый эфир п-нитробензойной кислоты формулы ... . . TV т в качестве реагента для блокирования непрореагировавших аминогрупп в твер8 дофазн м синтезе пептидов.

a9} (И)

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

3а) СО С10 2

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А В ТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТЗФ (21) 3315801/23"04 (22) 13.07.81 (46) 23.03.83. Бел. М 11 (72) М.В.Сидорова, Г.А..Желтухина, Е И,филиппович и Р.П.Евстигнеева (71) Московский ордена.-Трудового

Красного Знамени институт тонкой химической технологии им. М.В.Ломоносова (53) .547.964.4i02(088.8) .(56) 1. Химия полипептидов. Под ред.

A.Kàòñoÿíèca, М., "Мир", 1977.- с. 406, 2. Мегг!field R.Â., "SolИ Phase

Peptide Synthesis. J.. The Synthesis

of à Tetrapeptide". ". J. An. Chem.

Soc., 8, 2149, 1963.

3. Wieland Т.; Birr С., Misienbach H.. "3-Nitrophthaisi@reanhydrid аis aiokierungs-reagens! be1 der Poiypeptid synthese пасп,йегг111еИ -, Angew. Chem. ф., 782, 1969.

4. Wissmann Н.,- Geiger R., "Abtrennung von Fehlsequenzen in der Anhydrid der 3:-Sulfoproplonsaure", Angew.

Ci1em, 822, 937, 1970.

5. Желтухина Г.А., Сидорова М.В.

Филиппович .Е.И., Евстигнеев P.П.

Твердофазный синтез пейтидных фрагментов -цепи гемоглобина человека с использованием й-нитрофенилацетата. . ЖОХ 4фэ 1171э 1978 .

6. Желтухина Г.А, Сидорова М.В.

Филиппович Е.И.; Лагуткина В.И,, Ев-стигнеева P.Ï, Синтез фрагментов ,В-цепи гемоглобина человека. Х. Твердофазныйсинтез додекапвптида, соответ"; ствующего последовательности 89-100;

N0X, 4Я, 1636, 1978. (54) ПЕНТАФТОРФЕНИЛОВЫЙ ЭФИР

h-НИТРОЬЕНЗОЙНО КИСЛОТЫ

В КАЧЕСТВЕ РЕАГЕНТА

ДЛЯ БЛОКИРОВАНИЯ

НЕПРОРЕАГИРОВАВШИХ АМИНОГРУПП

В ТВЕРДОФАЗНОМ СИНТЕЗЕ ПЕПТИДОВ (57} Пентафторфениловый эфир п-нитробензойной кислоты формулы

Т F в качестве реагента для блокирования

O непрореагироваввих аминогрупп в твер- ® дофазном синтеве пептидов.

Поставленная цель достигается пентафторфениловым эфиром и -нитробензайной кислоты формулы

1 1006430

Изобретение относится к новому хи,, мическому соединению, а именно к пент афторфениловому эфиру 0 - ни тробензойной кислоты формулы

0N i С вЂ” О

tl

О

7 Х которое может быть использовано в качестве реагента для блокирования непрореагировавших аминогрупп в твердофазном синтезе пептидов„

Известен твердофазный метод синтеза пептидов, который применяется для, получения биологически активных пептидов.

Одним из недостатков, этого способа получения пептидов является неполное протекание реакции образования пептидной связи, вследствие чего образуются пептиды с ошибочной последовательностью, которые трудно отде" лить от конечного целевого продукта.

Для того, чтобы снизить вероятность образования ошибочных последовательностей в пептидной цепи, все непрореагировавшие аминогруппы в полимере блокируются обработкой различными ацилирующими реагентами 1.1 ).

В качестве блокирующих реагентов используют уксусный ангидрид, 3-нитрофталевый ангидрид, сульфопропионо вый ангидрид $2), 13) и j4).

Общим недостатком указанных блокирующих реагентов является недостаточная эффективность -блокирования непрореагировавших аминогрупп и опасность протекания побочных реакций.

Известно использование в качест.ве реагента для блокирования непрореагировавших аминогрупп в твердофазном синтезе пептидов ll"нитрофенилового эфира уксусной, кислоты (5 ).

Недостатком этого реагента является недостаточно высокая степень блокирования непрореагировавших ами. ногрупп.

Цель изобретения - получение нового реагента для блокировки непрореагировавших аминогрупп в твердофаз

НоМ синтезе пептидов, позволяющего повысить степень блокирования непрореагировавших аминогрупп в пептидилполимере и упростить процедуру выделения конечного продукта. ом с о

И î

Синтез пентафторфенилового эфира

6"нитробензойной кислоты осуществляют путем взаимодействия и -нитробен зоилхлорида с пентафторфенолом.

1S Блокирование непрореагировавших аминогрупп осуществляют обработкой пептидилполимера 3-5-кратным избытком пентафторфенилового эфира и-нитробензойной кислоты в диметилформамищ де.

Пример 1. Пентафторфениловый эфир и-нитробензойной кислоты.

К раствору 2,85 г (15,5 ммоль) пентафторфенола в 20 мл 3 н. едкого

g$ натра приб=.вляют при перемешивании

3,34 г (18,0 ммоль) и - нитробензоилхлорида. Выпавший осадок отделяют, промывают небольшим количеством воды и сушат, зо Получают 3,2 r (62,03) пентафторфенилового эфира и -нитробензойной кислоты в виде твердого вещества, т.пл. 122оС. R =0,9 (Силуфол, хлороформ:метанол 2:1), Ку=0,47 (Силуфол, хлороформ:гексан 2:1). Элементный анализ:

Найдено, . С 46,6. ; Н 1,23;

N 3,96

СЯНКА Г5""04

Вычислено, /: С(46„80, Н 1,201

N 4,20. П р и и е р 2. К 52,6 мг глицилполимера Н-GlyQP (P - хлорметилированный сополимер стирола с 2Ф диви45 нилбензола с содержанием хлора 4 5i) о с содержанием свободных аминогрупп

0,46 ммоль/г аминоацилполимера (100 ) прибавляют 2,6-кратный избыток пентафторфенилового эфира и-нитробензойной кислоты (21,0 мг, о 0,06 ммоль) в 0,5 мл диметилформамида и йеремешиввют 2 ч при 20"С. Количество остаточных аминогрупп после обработки составляет 2,34 от исходного количества свободных ами ногрупп, содержащихся в глицилполимере.

Пример 3. К 41,1 мг трипептидилполимера Вос-Val-Leu-Gló(Ð)(PСоставитель С.Белякова

Редактор Н,Гунько Техред Е.Харитончик Корректор Г.Огар

Ф

Заказ 2042/38 Тираж 416 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

lI3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", ге Ужгород, ул, Проектная, 4

3 100643 тефлон с радиационно привитым полистиролом) со степенью посадки стартовой аминокислоты 0,31 ммоль/г аминоацилполимера и содержанием остаточных аминогрупп 3,83 прибавляют

2,6-кратный избыток пентафторфенилового эфира и -нитробензойной кислоты (11,1 мг, 0,03 моль) в 0,2 мл диметилформамида и перемешивают 1 ч при

20 С. Содержание остаточных свобод- 1О о ных аминогрупп определяют с помощью пикриновой кислоты и составляет

1,541, считая на стартовую аминокислоту, присоединенную к полимеру.

Пример 3. Бромгидрат L-N -фор"15 миллизил-L âàëèë-б-лейцил-глицина.

Твердофазный синтез тетрапептиз дилполимера Вос-Lys (Form) -Va I -Leu-GIy©PnpoeopaT в стандартных условиях (6 ). ю

Цикл синтеза состоит из следующих стадий: кислотное деблокирование с(-аминогрупп, нейтрализация трифторацетата по аминогруппе, конденсация с зацищенной аминокислотой, определе- 25 ние количества остаточных аминогрупп с пикриновой кислотой, блокирование непрореагировавших аминогрупп 5-кратным избытком пентафторфенилового эфира И -нитробензойной кислоты в диметил-зв формамиде.

Для синтеза тетрапептидилполимера используют тефлон с радиационно при-. витым полистиролом, Присоединение стартовой аминокислоты Вос-Glу к хлорметилированному полимерному носителю осуществляют нагреванием 1,9 r полимера с 0,46 r цезиевой соли BocGly в 5 мл диметилформамида до

50еC е течение 17 ч Синтез начинают с 2,0 г Вос-Gly содержащего

0,31 инала Boc-G 1y (1 г Вос-ч!у ДР и последовательно присоединяют к не0 ф му 1,84 ммоль 8oc-Leu в присутствии

1,84 ммоль дициклогексилкарбодиимида и 1,84 ммоль 1-оксибензотриаэола в 4 мл диметилформамида при -15 С

7 ч (содержание остаточных аминогрупп в расчете на стартовую аминокислоту составляет 1,9ь) 1,84 ммоль симметричного ангидрида, полученного иэ

Вос-Val, в 4 мл диметилформамида в течение 14 ч при 20 С,{содержание остаточных аминогрупп 3,83), 1,84 ммоль

Вос-Lys (Form) в присутствии 1,84ммоль дициклогексилкарбодиимида и 1,84ммоль

1-оксибенэотриазола в 4 мл диметил" формамида при -15 С в течение 1& ч.

Затем 350 мг тетрапептидилполимера, содержащего 0,09 ммоль тетрапептида, суспендируют в 3 мл трифторуксусной кислоты в присутствии 0,3 мл анизола и пропускают через суспензию ток сухого бромистого водорода в течение

l ч при 20 С, Смолу отделяют фильтрованием, промывают.трифторуксусной кислотой, фильтрат упаривают s ва- кууме, остаток растирают с сухим эфиром и хроматографируют на колонке с сефадексом 1 Н-20 в метаноле. Фракции, содержащие целевой продукт, объединяют, упаривают в вакууме, остаток растирают с ацетоном.

Выход 25,5 мг (54,2ь в расчете на стартовую аминокислоту присоеФ диненную к полимеру), т,пл. 208-210 С, (сЦ =-29,0 (С=l; уксусная кислота), R †-0,63 (хроматография на бумаге марки Б, система н- бутанол : уксусная кислота:вода 4:I 5), Rg=O 79 (электрофорез на бумаге марки Б, буфер

2М уксусная кислота: 1,5И муравьиная кислота 1:1, рН 2, 350 В, 2 ч).

Аминокислотный анализ: Gly 0,92 (1,0);.

Leu 1,05 {1,0);- Val 0,.97 (1,0) 1 Lys

1,06 (1,0).