Стимулятор роста микроорганизмов
„„SU„„1010124
COOS СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК
Зй С 12М1/8
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3?88121/28-13, (22) 19.05.81 (46) 07.04.83. Бюл. И 13 (72) М.И. Назарук, Н.Е. Олейник и О.Н. Костюковская (71) Львовский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии .(53) 663 18(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР
Н 632202, кл. С 12 N 1/22, 1976. (54) СТИМУЛЯТОР РОСТА МИКРООРГАНИЗМОВ (57) Применение 2,3-диоксибензоилсерина в качестве стимулятора роста микроорганизмов.
1010 l
Изобретение относится к микроЬиологической промышленности, в частности к стимуляторам роста микроорганизмов.
Известны стимуляторы роста микроорганизмов - сложные органические соединения, например хинонполикарбоновые кислоты (1 ).
Целью изобретения является повы- }Q шение накопления Ьиомассы микроорганизмов при внесении в среду стимуля"
4 тора роста.
Цель достигается применением в качестве стимулятора роста 2,3-диоксибензоилсерина - энтерохелина. .Энтерохелин относится к биологически активным веществам и известен, как специфический хелатор железа, синтезируемый энтеробактериями.
Выделение энтерохелина проводят следующим образом. Культуральную жидкость подкисляют 12 н. НС1 до рН 1, затем центрифугируют, супернатант переносят в делительную воронку и прибавляют половинный объем этилацетата.
Смесь интенсивно встряхивают и отстаивают до полного разведения водного и этилацетатного слоев. Этилацетатные экстракты упаривают на роторном испарителе при 42 С. Сухой остаток растЗО воряют в небольшом объеме свежего ацетата„ дважды промывают О, 1 í. НС1 и повторно упаривают. Препарат энтерохелина высушивают при 60 C под вакуо умом в течение 24 ч. 35
Варианты опыта
Накопление биомассы ед.опт ° плотности
М+м
1,15 0,030
Среда Ьез железа
С. utilis
Y-766
Контроль : среда с FeSO< (20 мкМ) 1,20 0,030
1,40+0,015
1,58+0,017
0,61+0 015
0,70+0,018
1,15+0,035
2,17+0,100
100
Энтерохелин 20 мкг/мл
Энтерохелин 45 мкг/мл
Среда без железа
Контроль
Энтерохелин 20 мкг/мл
Энтерохелин 45 мкг/мл
117
С, Йгорlсаl I S
100
310
Название микроорганизма
24 2
Рабочий раствор энтерохелина готовят растворением одного моля выделенного соединения в 1%-ным Ма2НРО и добавлением одного моля Fе50,1, 7Н О. После образования энтерохелинового комплекса раствор фильтруют и вносят в питательную среду для культивирования в количестве 10 100 мкг/Mfl.
Посевной материал Candida utilis т-766, Candida troplcalis, Pichia
ohmeri, Е. coli 0111, Е, coli (непатогенная), Shigella sonnei выращивают в МПБ в течение 20-24 ч и вносят в количестве 0,013 по объему.
Микроорганизмы культивируют в
МПБ или синтетической среде следующего состава, г/л: NH+C 1 1,0; КН2РО+
1,5; Na НР0,1 3,0; NgSO 0,1; глюкоза 5, О, микроэлементы, м г/л: Нз ВО
0,056; CuSO 5НдО 0,039; СоС1> 0,050;
ZnSOp 7Н20 0,303; (МН,1) Мо. 02 4Н20
0,120, вода дистиллированная — до 1 л.
Микроорганизмы культивируют в конических колбах (250 мл ) на качалке при 200 об/мин, или в пробирках, в которые наливают 5 мл среды, или аппарате для непрерывного культивирования с автоматическим поддержанием необходимой температуры, непрерывной подачей стерильного воздуха при заданных оборотах мешалки. Энтеробактерии культивируют при 37 С, дрожжи о при 28 С. Биомассу определяют на фЭК-М.
Влияние энтерохелина на рост микроорганизмов показано в таблице.
1010124
Продолжение таблИцы
Накопление биомассы
Наименование микроорганизма
Варианты опыта ед.опт.плотности
И м
Среда без железа
P. ohmer i
100
Контроль
Энтерохелин 20 мкг/мл
Энтерохелин 45 мкг/мл
Среда без железа
Контроль
Энтерохелин 50 мкг/мл
Среда без железа
Контроль
Энтерохелин 50 мкг/мл
Среда без железа
Контроль
103
Е . col i 0111
100
115
Е. col1 (непатогенная) 70
100
112
Sh. sonnei
100
Энтерохелин 50 мкгlмл с 5 мл синтетической среды. Пробирки помещают в аппарат для встряхивания и культивируют в течение 24 ч при о
28 С. Накопление биомассы составляет
310ь по сравнению с контролем (без добавления стимулятора).
Таким образом, предлагаемое изобретение позволяет увеличить накопление биомассы различных микроорганизмов на 10-2004 по сравнению с контролем.
Составитель В. Голимбет
Редактор Л. Веселовская Техред N.Êàñòeëåâè÷ Корректор Н Шароши
Заказ 2408/13 Тираж 521 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
11)ОД Москва, Ж- Ра шская наб. g. 4/5
Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4
ЗЮ
Микроорганизмы, усваивающие железосвязывающий комплекс, накапливают на10-2003 биомассы больше, чем в контрольном варианте - среде без добавления энтерохелина.
Пример. Энтерохелин получают при культивировании К!еЬз1е1la рпеыmon!a sp. ДБС 10l5 известным способом.
Полученный стимулятор вносят в среду в количестве 45 .мкг/мл. Выращива45 ют дрожжи С. trop i ca l i s в пробирках
1,65+0,018
1,95+0, 019
2,00+0,6024
2,20+0,020
1,05 0,040
1,40+0,070
1,60+0,050
1, 10> О, 040
1,6040,020
1,80+0,040
1,200),060
1,30+0,040
1,70+0,070
