Способ выращивания культуры ткани высших грибов

 

ОПИСАНИЕ

И ЗОВРЕТЕН ИЯ

СОюз СОбетскнй

СоцналнстнчесНна

Реснублнн

<и86!460

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6 I ) Дополнительное к авт; свнд-ву—

{51)М. Кл.

С 12 и 1!38 (22) Заявлено 29.08.79 (21) 2812439/28 — 13. с присоединением заиякн М—

-Гввударстевкиый канитет

CCCP ав лвавм кзебрвтекай .. б втврнткй

Опубликовано 07;09,81. Бюллетень МЗЗ (23) Приоритет{.5З ) Уй К бб3.11 (088.8) Дата опубликовании оппсаиин 070981 (72) Авторы . изобретения

Г; P Морозова, Н. В. (Ъфонова, А. В. Шульга и Л С. Чибиеова (54) СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ КУЛЬТУРЫ ТКАНИ ВЫСШИХ ГРИБОВ

1 ." . р

Изобретение относится к области мнкуоЬи6ю-. Цель изобретения. — удешевление спосооа. . гнческой промышленности, а именно к полую- . Это достигается тем, что в способе выращиванию биомассы высших грибов. ния культуры ткани высших грибов на жидкой

Известен способ выращивания культуры тка- тйттательной среде, содержащей источники угле-., ни высших грибов на жидкой итателМЙ сре- рода,.азота, минеральные соли и нуклеотидсоде, содержащей.источники углерода, азота, не- держащие соединения, в качестве стимулятора . обходимые.минеральные соли и стимуяятрр . pocva, предусмотрено использование:нз нуклеоporta 11l . тндсодержащнх соединений экстракта, включаюВ качестве. стимулятора роста используют: . щего олигонуклеотнды и нуклеоэндмонофосфа-. дрожжевой экстракт.:: : . : ibad, полученного при удалении нуклеиновых

Ю

Недостатками этого способа вцратнявання . кислот из биомассы . высших грибов. в коликультуры ткани высших грибов являются срав-: честве 0,05.— 0,2, вес.%. иителвно низкий выход мипелия н.использова- Сущность способа заключается в. том, что в .ние дорогостоящего дрожжевого экстракта,".:, питательную среду для выращивания ткани

Наиболее близким к предлагаемому являет- .. вйсших грибов добавляют нуклеотндсодержащий ся способ выращивания культуры ткани выс1инх . экстракт, получаемый в значительных количест1,5 грибов иа жидкой- пйтательной среде, содержа-; вах как отход пртг денуклеииизанин биомассы щей источнйки углерода, азота, минеральные . мицелня высншх грибов. Денуклеиннзапию . соли и нуклеотидсодержащие соединеттия в:ка- : биомассы миделня йроводят следующим обрачеетве стимулятора роста Щ. - . .. зом. Иагрев. биомассы осуществляют в ®e

Согласно известному способу иэ нуклеотнд- .. атадин, первая иэ: KoTopblx длится 5-30 мин содержащих. соединений используют нуклеози1т- : при 70 — 80 С, рн 3,5 — 7,5; вторая —: 30-50.мин днфосфаты или нуклеозидтрифосфаты, кетор@те нри 80 — 90 С и рН-1 —.1,5 (рН доводят соляной, являются. дорогостоящими. .. серной или ортофосфорной кислотой). При

61400

0,06 этом между этими стадиями проводят инкубирование в течение 1,5 — 2 ч при 30 — 80 С, а после второй стадии нагревания рН повышают до 3,5 — 6,5 и проводят сепарирование, получая целевой продукт (биомассу с пониженным содержанием нуклеиновых кислот) и супернатант (нуклеотндсодержащий экстракт, включающий олнгонуклеотиды и нуклезидмонофосфаты). Экстракт содержит продукты ферментативного гидролиза нуклеиновых кислот— нуклеотиды, а также соли и небольшое количество аминокислот н витаминов. Нуклеотидсодержащий экстракт добавляют в питательную .среду в жидком илн высушенном виде в количестве 0,05 — 0,2% по сухому весу.

Пример 1. Биомассу базидиального гриба Pieuorotus ostreatus (Fr) Kummer (вешенка обыкновенная) выращивают в колбах на качалке. Питательная среда имеет следующий состав, вес.%:

Этиловый спирт 1,0

Азотнокислый аммоний 0,3

Фосфорнокислый калий однозамещенный

Фосфорнокислый калий двухзамешенный 0,06

Нуклеотидсодержащий экстракт 005 (АСВ, Экстракт получают следующим образом.

Биомассу мицелия (концентрация 100 r влажного веса на 1 л среды) суслензируют в культуральной жидкости (рН 6,0) и нагревают

20 мин при. 75 С, выдерживают 2 ч при 37 С и вновь нагревают до 85 С при рН 1,08 в течение часа (рН суспензии доводят соляной кислотой). После проведения стадии экстракции нуклеиновых кислот рН доводят до 3,5 и сепарируют. Полученный таким образом супернатант содержит, вес,% от сухого вещества:

Нуклеотндсодержащие вещества 12

Аминокислоты 5

Соли 60

На 1 л среды добавляют 50 мл эгого супернатана, этиловый спирт вводят дробно (3 раза через 24 ч), выращивание проводят 72 ч при

26 С н рН 6,0.

Концентрация биомассы через 72 ч составляет 6,3 г/л, что соответствует выходу от этилового спирта 63%.

Контролем служит аналогичное выращивание этого же,базидиального гриба на среде вышеуказанного состава с заменой нуклеотидсодержащего экстракта на дрожжевой экстракт.

Концентрация биомассы в этом опыте через

72 ч составляет 3,06 г/л, т.е, 30,5% от внесенного этанола.

Пример 2. Культуру ткани гриба

Pleuorotus ostreatus 1300 (вешенка обыкновен15

25 зо

5О

4 ная) выращивают в периодическом режиме в ферментере (с рабочей емкостью 200 л) с механическим. перемешиванием (300 об/мин) при 26 С, рН 5,8 — 6,1 и аэрации 1 л воздуха на 1 л среды в минуту на питательной среде следующего состава, вес.%:

Этиловый спирт 2,0

Аммоний азотнокислый 0,2

Мочевина 0,07

Калий фосфорнокислый однозамещенный 0,2

Магний сернокислый 0,05

Кукурузный экстракт 0,25

В контрольном опыте концентрация биомассы через 72 ч культивирования — 6,1 г/л (ACB), содержание белка —,. 33%, нуклеиновых кислот — 3,5%.

Выращивание с добавлением нуклеотндсодержащего экстракта осуществляют в аналогичных условиях на среде вышеуказанного состава, с заменой кукурузного экстракта на нуклеотндсодержащий в количестве 2 г сухого вещества на 1 л питательной среды. Выход биомассы через 72 ч — 12,3 г/л (АСВ), содержание белка — 37%, нуклеиновых кислот —.4,0%.

Пример 3. Мицелий базидиального гриба Polyporus squamosus (Hunds et Fr) (трутовик чешуйчатый) выращивают s условиях, аналогичных примеру 1, за исключением того, что этиловый спирт добавляют в количестве

1,5%, а нуклеотидсодержащий экстракт в количестве 0,1%.

Концентрация биомассы мицелия — 10,1 г/л, что соответствует выходу от этилового спирта

67,3%.

Замена в питательной среде нуклеотидсодержащего экстракта на дрожжевой экстракт приводит к снижению выхода мицелия до

6,2 и/г (АСВ), то есть 41,3% от внесенного этилового спирта.

П р и и е р 4. Мицелий гриба Polyporus

squamosus (Hunds, et Fr)- вырашнвают в условиях, аналогичных примеру 3, за исключением того, что экстракт грибов добавляют в количестве 0,05%.

Накопление АСВ мицелия составляет 8,0 г/л, что соответствует выходу от этилового спирта

53,5%.

Таким образом, предлагаемый способ выращивания культуры ткани высчппс грибов является более дешевым, так как предусматривает замену дорогостоящих нуклеознддифосфатов и нуклеозндтрифосфатов на экстракт, содержащий более дешевые олигонуклеотиды и нуклеозидмонофосфаты.

Формула изобретения

Способ выращивания культуры ткани высших грибов на жидкой. питательной среде, содерСоставитель В. Зайцева

Техред А; Ач

Корректор E. Рошко

Редактор Т. Колодцева

Заказ 6456/7

Тираж 528

ВНИИПИ Государственного комитета СССР цо делам изобретений и .открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушокая наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППЛ "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 861400 6 жащей источники углерода, азота, минеральные высших грибов, в количестве 0,05— соли и нуклеотидсодержащие соединения в ка- 02 вес%. честве стимулятора роста, о т л и ч а ю ° Источники информации, шийся тем, что, с целью удешевления принятые во внимание при экспертизе способа, из нуклеотидсодержащих соединений 5 1. Патент Японии У 50!6433, кл. 36(2) используют экстракт, включающий олигонуклео- В 221,2, опублик. 1975. тиды и нуклеоэидмонофосфаты, полученный 2. Авторское свидетельство СССР N 644824, при удалении нуклеиновых кислот иэ биомассы кл. С 12 В 3/14, 1976.