Гидрохлорид 3-этилтио-5-(2-морфолино)-этил-1,2,4-триазино[5, 6-в]индола, обладающий противовоспалительной, противогипоксической активностью и способностью повышать устойчивость к повторной черепно-мозговой травме
Гидрохлорид 3-этилтио-5-(2-морфолино) -этил-1,2,4-триазино[5,6-b] индола формулы 
обладающий противовоспалительной, противогипоксической активностью и способностью повышать устойчивость к повторной черепно-мозговой травме.
Изобретение относится к классу триазино[5,6-b] индолов, конкретно к гидрохлориду 3-этилтио-5-(2-морфолино)-этил-1,2,4-триазино[5,6-b] индола формулы I (препарат N 58) 
обладающему противовоспалительной, противогипоксической активностью и способностью повышать устойчивость к повторной черепно-мозговой травме. Наиболее близкими к предлагаемым соединениям по структуре являются дигидрохлорид 3-этилтио-5-(2-диэтиламиноэтил)-1,2,4-триазино[5,6-b]индола формулы II [1] и гидрохлорид 3-(2-диэтиламиноэтилтио)-1,2,4-триазиноиндола формулы III [2] 
обладающие аналогичными видами активности. Однако эти соединения имеют достаточно высокую токсичность. Целью изобретения является расширение ассортимента веществ, воздействующих на живой организм и обладающих противовоспалительной, противогипоксической активностью и способностью повышать устойчивость к повторной черепно-мозговой травме. Указанная цель достигается новым соединением - гидрохлоридом 3-этилтио-5-(2-морфолино)этил-1,2,4-триазино[5,6-b]индола, обладающим данными видами активности. Это соединение представляет собой бледно-желтое кристаллическое вещество с т. пл. 223oС (из бутанола). Трудно растворяется в воде, устойчиво при хранении, не гигроскопично, pH 1%-ного водного раствора 3,4. Раствор выдерживает стерилизацию при 100oC. Вещество однородно по данным тонкослойной хроматографии. Адсорбент - силуфол, растворитель для нанесения - метиловый спирт, подвижный растворитель - этилацетат - гептан (3:2), Rf = 0,05; метиловый спирт - 3н. водный аммиак (10:1), Rf = 0,84. Растворитель для нанесения - спирт, подвижный растворитель - спирт - 3н. водный аммиак (10:1), Rf = 0,81; подвижный растворитель - этилацетат, насыщенный аммиаком - хлороформом (10:1), Rf = 0,66. Вещество как в видимом, так и в УФ-свете не содержит примесей, в том числе исходных веществ. При опрыскивании реактивом Драгендорфа обнаруживается в виде розового пятна. Строение вещества подтверждается данными элементного анализа, потенциометрического титрования щелочью, а также УФ-спектров. Соединение формулы I получают обычным методом. 3-Этилтио-1,2,4-триазино[5,6-b] индол превращают в натриевую соль действием этилата натрия в безводном спирте. Полученную соль обрабатывают гидробромидом морфолиноэтилбромида в диметилформамиде, к которому предварительно прибавляют гидрид натрия для превращения в свободное основание. Аминоалкилирование проводят при нагревании с использованием небольшого избытка морфолиноэтилбромида. При этом получают свободное основание 3-этилтио-5-(2-морфолино)этил-1,2,4-триазино[5,6-b] индола, которое затем обрабатывают хлористым водородом и превращают в гидрохлорид. Так как на стадии моногидрохлорида реакцию трудно остановить, удобнее пропускать хлористый водород до насыщения с образованием дигидрохлорида. Последний при действии эквимолекулярного количества щелочи превращают в гидрохлорид 3-этилтио-5-(2-морфолино)этил-1,2,4-триазино[5,6-b] индола. Выход 57 - 61% по отношению к 3-этилтио-1,2,4-триазино[5,6-b]индолу. 
Пример. Смешивают 51,7 г (0,224 моль) 3-этилтио-1,2,4-триазино[5,6-b] индола с раствором этилата натрия, полученным из 5,17 г (0,225 г-атом) натрия в 172 мл безводного спирта, и полученный раствор выпаривают досуха под вакуумом при нагревании на водяной бане (температура бани 35oC). Остаток сушат под вакуумом при 110oC. Получают 53 г (93,6%) натриевой соли 3-этилтио-1,2,4-триазино[5,6-b] индола в виде ярко-желтого кристаллического порошка. 44 г (0,16 моль) гидробромида 2-морфолиноэтилбромида смешивают с 44 мл безводного диметилформамида, при охлаждении и перемешивании постепенно прибавляют 4 г (0,167 моль) гидрида натрия. Перемешивают до прекращения выделения водорода, смесь фильтруют и смешивают фильтрат с раствором 35 г (0,139 моль) натриевой соли 3-этилтио-1,2,4-триазино[5,6-b]индола в 61 мл безводного диметилформамида. Нагревают на кипящей водяной бане 1,5 ч и после охлаждения выливают в 650 мл воды. При этом продукт реакции выпадает в осадок, pH суспензии 8 - 9 (по универсальному индикатору). Фильтруют, осадок отжимают, снимают с фильтра и перемешивают с 200 мл воды, снова фильтруют и промывают водой (50 мл), отжимают и сушат в вакуум-экстракторе над фосфорным ангидридом. Получают основание в виде кристаллов зеленовато-серого цвета, трудно растворяющихся в изопропиловом спирте на холоде и легко - при нагревании. Вещество растворяют при нагревании в 688 мл изопропилового спирта и при наружном охлаждении поддерживают температуру 60oC, насыщают раствор безводным хлористым водородом ( в течение 20 мин). При этом окраска раствора переходит из темно-коричневой в желтую. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и оставляют на 1 ч. Фильтруют, осадок промывают малым количеством изопропилового спирта, эфиром и сушат под вакуумом над фосфорным ангидридом. Получают дигидрохлорид 3-этилтио-5-(2-морфолино)-1,2,4-триазино[5,6-b] индола, выход 40,9 г (64% по отношению к исходной натриевой соли), желтые кристаллы, т.пл. 207oC. К 40,9 г (0,0982 моль) гидрохлорида прибавляют 154 мл воды и к полученной суспензии при перемешивании (температура 20oC) прибавляют 1 н. раствор едкого натра до pH 3,42 (потенциометрически, 100,7 мл). При этом окраска изменяется от ярко-желтой до бледно-желтой; суспензию выдерживают в бане со льдом 2 ч, фильтруют, осадок промывают ледяной водой (2 х 30 мл) и сушат под вакуумом над фосфорным ангидридом. Получают моногидрохлорид 3-этилтио-5-(2-морфолино)этил-1,2,4-триазино[5,6-b] индола, выход 37,1 г (99,1% по отношению к дигидрохлориду, 59,5% по отношению к исходному 3-этилтио-1,2,4-триазино[5,6-b] индолу). После перекристаллизации из бутилового спирта (10,6 мл/г) выход при кристаллизации 98% (бледно-желтые кристаллы, т.пл. 223oC). При последующей перекристаллизации из смеси изопропилового спирта с водой (10:1, 15 мл/г), выход 68%, температура плавления не изменяется. Найдено, %: C 53,91, 54,07; H 5,88, 5,67; Cl 9,56, 9,35; N 18,84, 18,91; S 8,35, 8,28, мол. вес 385 (потенциометрическое титрование водного раствора щелочью). C17H22ClN5OS Вычислено,%: C 53,74; H 5,84; Cl 9,33; N 18,43; S 8,44, мол. вес 388. УФ-спектр, 
макс , нм (lg 
) : 224 пл (4,162), 269 (4,162), 354 (3,933). Уф-спектр снят для раствора в воде на приборе СФ-20. Определение острой токсичности соединения I проводили на мышах массой 18 - 20 г при внутрибрюшинном введении вещества в виде 2%-ного водного раствора; крысам массой 180 - 190 г препарат N 58 вводили внутривенно и внутрибрюшинно. В данных условиях опыта ЛД50 для мышей составляет 970 мг/кг; для крыс при внутривенном введении 29 мг/кг, при внутрибрюшинном 350 мг/кг, что в 6 раз больше, чем у соединения II, и в 3 раз больше, чем у соединения III. Кролики без летального исхода переносят внутривенное введение вещества в дозе 100 мг/кг. Внутрибрюшинное введение вещества в дозе 40 мг/кг в течение 6 дней мышам не сопровождалось какими-либо видимыми токсическими реакциями со стороны желудочно-кишечного тракта, а также общего состояния животных. Изъязвлений слизистой желудка и кишечника отмечено не было. Ежедневное внутривенное ведение крысам, кроликам и собакам соединения I в дозе 10 - 15 мг/кг в течение 30 дней не сопровождалось изменениями в общих анализах крови и мочи, не наблюдалось также изменений в показателях трансаминаз, щелочной фосфатазы, холестерина, билирубина, остаточного азота, креатинина, глюкозы, натрия, калия и хлорида, определяемых в сыворотке крови кроликов и собак. Установлено, что вещество не обладает мутагенным действием на хромосомный аппарат мышей. Противовоспалительную активность соединения I изучали на крысах-самцах массой 170 - 180 г, по 10 животных в группе, на модели асептического воспаления по методу "ватная гранулема". В табл. 1 приводятся данные, показывающие во сколько раз уменьшилось выделение жидкости во влажной гранулеме и разрастание соединительной ткани в сухой гранулеме по отношению к контролю. Испытывали влияние соединений I - III на развитие воспалительного процесса (гистаминовый отек, крысы-самцы массой 170 - 180 г, в группе по 10 животных). Результаты приведены в табл. 2. На модели "адреналиновый отек" легких соединение I значительно превосходит по противовоспалительному эффекту известные соединения. Испытывали влияние соединений I - III в дозе 1/10 LD50 на развитие воспалительного процесса на модели "адреналиновый отек" легких на мышах массой 18 - 20 г: соединение II 31,2%, соединение III 25,6%, соединение I 12%. Преимущества препарата N 58 установлены и при изучении противогипоксической активности на мышах, крысах и кроликах. Достоинство этого соединения состоит в том, что оно проявляет противогипоксическое действие при гипоксической гипоксии в ранние сроки после внутрибрюшинной инъекции, о чем свидетельствуют данные табл. 3 и 4. Длительность жизни кроликов на "высоте" 10,5 км на фоне внутривенной инъекции препарата N 58 составила 18,3 
1,1 мин, в то время как после введения соединений II и III она равнялась контрольным данным. Результаты экспериментов, представленные в табл. 3 и 4, а также испытания на кроликах свидетельствуют о наличии у предлагаемого соединения более выраженной противогипоксической активности, чем у соединений I и II. В дополнение к найденным противовоспалительной и противогипоксической активностям препарат N 58 обладает способностью повышать устойчивость организма к повторной черепно-мозговой травме, которая сопоставлена с активностью соединений II и III в табл. 5. В качестве аналога использована ГАМК, которая применяется в клинике для лечения последствий острой черепно-мозговой травмы. Таким образом, соединение I превосходит соединения II и III по противовоспалительному эффекту на модели "адреналиновый отек" легких, по гипоксической активности и по способности повышать устойчивость к черепно-мозговой травме.
Формула изобретения
обладающий противовоспалительной, противогипоксической активностью и способностью повышать устойчивость к повторной черепно-мозговой травме.
РИСУНКИ
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3
