Способ идентификации стерина

 

..SU„„1097952 А

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

3(59 G 01 Я 33 48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН

И ABTOPCHOIVIV СВИДЕТЕЛЬСТВЪГ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3391756/28-13 (22) 02.06.82 (46) 15.06.84. Вюл. Ф 22 (72 ) Х.M. Касумов, О. К.Иалафриев и А.Г.Самедова (71) Научный центр биологических исследований AH АЗССР (53) 616.07(088.8) (56) 1. Руденко Б.A. Капиллярная хроматография M., 1978, с.17-26. (54) (57) СПОСОБ-ИДЕНТИФИКАЦИИ СТЕ:РИНА, о.т л и ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа,,к исследуемому стерину добавляют фосфолипиды и углеводородный растворитель, формируют из полученного .раствора бислойную мембрану, вводят в окружающий мембрану солевой раствор полиеновый антибиотик до появления дискретных уровней проводимости мембраны и по их величине идентифицируют стерни.

1097952

Составитель Н.Валеева

Редактор Н.Горват Техред А.вабинец Корректор И.Зрдейи

Заказ 4201/38 Тираж 823 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная,4

Изобретение относитя к биофизике и к биохимии липидов и может быть использовано в медицине, в частности в исследованиях липидного обмена.

Известен способ идентификации стерина, включающий ввод пробы исследуемого вещества, хроматографирование и регистрацию сигнала плазменноионизационным детектором (1). . Однако известный способ характеризуется высокой трудоемкостью. 10

Целью изобретения является упрощение способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу идентификации стерина к исследуемому стерину )5 добавляют фосфолипиды и углеводородный растворитель, формируют из полученного раствора бислойную мембрану, вводят в окружающий мембрану солевой раствор полиеновый антибиотик до появления дискретных уровней проводимости меМбраны и по их величине идентифицируют стерин.

Способ осуществляют следующим образом.

Готовят раствор в гептане 20 мг фосфолипидов и исследуемого вещест- ва в углеводородном растворителе.

Сформировывают мембрану в растворе

2M KCI pH 6 при 22 С. Дискретные уровни проводимости измеряют электро-30 метрическим усилителем постоянного тока У5 9 при 200 мв на мембране.

Регистрируют проводимость на самописце Н300.

В солевой раствор вводят полиено- 35 вый антибиотик, например амфотерицин B до появления дискретных уровней проводимости мембраны и по величине проводимости идентифицируют стерин. 40

Пример 1. Идентификация холестерина и зргостерина. Готовят растворы в гептане 20 мг фосфолипидов +1 мг холестерина/мл и 20 мг фосфолипидов +1 мг эргостерина/мп .

Сформировывают мембрану в растворе

2 N KCI, рН 6 при 22 С. Дискретные уровни проводимости измеряют злйктрометрическим усилителем постоянного тока У5-9 при 200 мв на мембране.

Регистрируют проводимость на самописце Н306. Вводят в солевой раствор амфотерицин В. В случае холестерина наблюдают устойчивую работу I ионного канала (I — уровень проводимости) при 2 10 N амфотерицина В. В случае зргостерина - при 5 -10 N. Проводимости каналов равны соответственно (6,5+0,5) 10 Ьм "и (3,5+0,5) ° 10 OM

Пример 2. Идентификация 5

Х андростак ЗД ОН и стигмастерина.

Проводимость каналов определяют при тех же условиях, при соотношении фосфолипид/холестерин 20:4. Каналы получены при 10Ъ и 5 10 N амфотерицина В и имеют проводимость (7+0,5) 10 Ом и (5+0,5)"10 Ом соответственно.

Таким образом, предлагаемый способ обладает значительными преимуществами в сравнении с прототипом.

П р е р 3. При идентификации стеринов неизвестной структуры определяют дискретные уровни проводимости мембран (ионные каналы)в присутствии амфотерицина В в мембранах, содержащих стерин, выделенный из различных штаммов дрожжей СапсПаа

abbicans. ВыдЕляют стерины из чувствительного штамма и из резис-. тентного штамма. При этом установлено, что определяемые каналы имеют различную проводимость и совершают обратимые переходы между проводящим и непроводящим состояниями. Для характеристики канала вводят также среднее время жизни его в том или другом состоянии. Эта величина может служить дополнительным признаком идентификации.

Ичпользование предлагаемого способа в практике позволяет упростить процесс идентификации стеринов, так как не требует для своего осуществления сложных операций и дорогостоящего оборудования.