Способ диагностики стафилококковой пневмонии у детей раннего возраста
СПОСОБ ДИАГНОСТИИ СТАФИЛОКОККОВОЙ ПНЕВМОНИИ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА путем исследования крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения сроков диагностики, исследуют лимфоциты, выведенные из крови больного в реакции розеткообразования, которые сенсибилизируют стафилококковым оС -токсином в разведении 1:15-1:20 в течение 25-30 мин при 37-38°С и по увеличению количества розеткообразующихлимфоцитов диагностируют стафилококковую пневмонию.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК зов А 61 В 1000
/ р
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИф :
Н АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ
"°
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3495397/27-13 (22) 27.09.82. (46) 30.10.84. Бюл. № 40 (72) Х. К. Султанов и А. В. Карась (71) Среднеазиатский медицинский педиатрический институт (53) 615.375 (088.8) (56) 1. Методические рекомендации «Бактериологическая диагностика стафилококковой инфекции, Ташкент, 1978, с. 15.
2. Там же.
3. Петров P. В. «Общие вопросы патологии», М., 1976, т. 4.
„„SU„„1120969 А (54) (57) СПОСОБ ДИАГНОСТИИ СТАФИЛОКОККОВОЙ ПНЕВМОНИИ У ДЕТЕй РАННЕГО ВОЗРАСТА путем исследования крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения сроков диагностики, исследуют лимфоциты, выведенные из крови больного в реакции розеткообразования, которые сенсибилизируют стафилококковым ос -токсином в разведении 1:15 — 1:20 в течение 25 — 30 мин при 37 — 38 С и по увеличению количества розеткообразующих лимфоцитов диагностируют стафилококковую пневмонию.
20969
ll
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике стафилококковой пиевмонии у детей раннего возраста.
Известен способ диагностики стафилококковой пневмонии, например бактериологической, заключающийся в выявлении стафилококков из биологических материалов (крови, мокроты и т.д.) с последующим определением их токсигенности (1).
Однако широкое применение лекарственных средств (в основном антибиотиков) привело к резкому снижению диагностической ценности этого способа.
Известен серологический способ исследования стафилококковой инфекции, заключающийся в реакции антиген-антитело в присутствии эритроцитов кроли ка, по степени гемолиза которых судят о наличии антител (2).
Однако такой способ недостаточно точен из-за наличия первичного и вторичного имму нодефицитов у детей раннего возраста и занимает много времени при его осуществлении.
Цель изобретения — повышение точности и сокращение сроков диагностики.
Указанная цель достигается тем, что согласно способу диагностики стафилококковой пневмонии у детей раннего возраста путем исследования крови, исследуют лимфоциты, выделенные из крови больного в реакции розеткообразования, которые сенсибилизируют стафилококковым сс -токсином в разведении 1:15 — 1:20 в течение 25 — 30 мин при 37--38 С, и по увеличению количества розеткообразующих лимфоцитов диагностируют стафилококковую пневмонию.
Способ осуществляется следующим образом.
Сенсибилизация лимфоцитов. Берут
3,0 мл крови больного из локтевой вены в пробирку с гепарином в разведении с физиологическим раствором 1:25 из расчета
0,1 мл íà l мл крови. На градиенте плотности (1,077) верографин-фиколл выделяют лимфоциты из полученной крсви, их трехкратно отмывают фосфатным буфером (рН вЂ” 7,2). Из лимфоцитов готовя1 4 пробы по 0,1 мл (2 сравниваемые и 2 основные) с одинаковой концентрацией лимфоцитов
2 х 10 клеток/мл.
Одновременно готовят рабочую взвесь эритроцитов барана для определения Тлимфоцитов. Для этого эритроциты барана трехкратно отмывают фосфатным буфером (рН вЂ” 7,2) путем центрифугирования (при
1000 об/мин) и из полученного плотного осадка готовят 0,3o/rr-ную рабочую взвесь эритроцитов.
Для определения В-лимфоцитов готовят рабочую взвесь зимозана путем добавления к 1,0 мл О, lо/р-ного -имозана l мл комплемента морской свинки в разведении 1:5.
1з
2О
\ )
3 с $
Полученную смесь выдерживают в термоcIaTe нри 37"С в течение 30 мин. Затем дважды промывают физиологическим раствором по 5 мин центрифугированием при 1000 об/ мин. После добавления к осадку 10 мл фосфатного буфера (рН вЂ” 7,2) получают рабочую взвесь зимозана для определения Влимфоцитов.
В двух сравниваемых пробирках известным способом определяют количества Т- и
В-лимфоцитов (3).
K двум основным пробиркам, содержащим по 0,1 мл взвеси лимфоцитов добавляют по 0,1 мл стафилококкового <х. -токсина в разведении 1:15 — 1:20 в зависимости От гемолитической активности.
Короткая сенсибилизация JIHMIpoIIHT(JB осуществляется инкубирова нием смеси в термостате при 37 — 38 С в течение 25—
30 мин, После инкубации обе смеси трехкратно отмывают фосфатным буфером (рН вЂ” 7,2) и далее проводят обычную реакцию по определению количества Т- и В-лимфоцитов.
Реакция положительная, так как количество Т-лимфоцитов увеличилось не менее чем на 10 розеткообразуloIILHx клеток при сопоставлении с сравниваемым опытом.
Пример l. Больной К., б мес., ист.бол. № 1044, поступил в тяжелом состоянии с выраженной одышкой (до б0 раз в мин), цианозом носогубного треугольника в покое, капгл .м Влажного характера, хрипами и крепи;ацнями в легких, увеличенными размерами гечени. Неоднократные посевы крови роста с-афилококка не дали.
1-.а первые сутки проведено определение
Т- и В-ли4фоцитОВ до H после инкубации в течение 27 мин с 1:20-кратно разведенным стафилококковым токсином и взвесью лимфоцитов. В результате чего количество розеткообразую.пих Т-лимфоцитов увеличилось на 13 клеток. Количество розеткообразую|цих В-лимфоцитов осталось без изменения.
K концу второй недели болезни выявлено увеличение уровня альфа-а;.и итоксина ь сыворотке крови больного от 0,25 ЛГ до
1,0 AE.
На основании клиники и увеличения специфически сенсибилизированных T-лимфоцитов на 13 клеток уже в первые сутки установлен диагноз: стафилококковая пневмония.
Нарастание уровня стафилококкового
:льфа-антитоксина ol 0,25 АЕ до 1,0 ЛЕ, а также эффект от проведения специфической антистафилококковой терапии подтвердил достоверность псставленного диагноза.
Пример 2. Больная Д., 5 мес., ист. бол. № 2199, - оступила "; стационар с клиническиMи и 3(Jявлениями дыхательной недостаточности, I ипертермической реакции до 39-,2, интокснкании, характерными вези1120969
К концу второй недели болезни выявлено нарастание уровня стафилококкового альфа-антитоксина в сыворотке крови от 0,25 ае до 1,0 AE.
На основании клиники и применения предлагаемого способа диагностики на первый день болезни установлен диагноз: стафилококковая пневмония. В последствии на 6 день пребывания в стационаре и к концу второй недели болезни бактериологически и серологически подтверждена достоверность установленного диагноза. Цель достигнута при применении разведенного стафилококкового токсина 1:20.
Разведение стафилококкового токсина
1:21 и 1:22 и более не дает положительного эффекта увеличения количества розеткообразующих Т-лимфоцитов.
Пример 4. Больной Д., 2 г. 6 мес., ист. бол. № 287, поступил на стационарное лечение в тяжелом состоянии с выраженной одышкой, цианозом носогубного треугольника, акроцианозом, кашлем влажного характера, температурной реакцией до 39,4, участием вспомогательных мышц в акте дыхания, характерными везикальными данными (хрип и крепитациями) со стороны легких.
На первый день поступления в стационар проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов до и после инкубации взвеси лимфоцитов с 1:15-кратно разведенным стафилококковым токсином в течение 25 мин. При этом выявлено увеличение количества розеткообразующих
Т-лимфоцитов после инкубации со стафилококковым токсином на 19 клеток. Увеличения В-лимфоцитов не выявлено.
На 6 и 8 дни пребывания больного в стационаре получены результаты посева крови больного. При этом выявлен гемолитический стафилококк одного фаговара.
К концу второй недели болезни выявлено нарастание уровня стафилококкового альфа-антитоксина в сыворотке крови от
0,25 АЕ до 1,0 АЕ.
15
20 ной установлен диагноз: стафилококковая пневмония, что в последующем (на 5 сут — бактериологическим, к концу второй недели
3 кальными данными (хрипами и крепитациями) в легких.
На первый день пребывания больной в стационаре проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов до и после инкубации взвеси лимфоцитов в течение 25 мин с 1:13, 1:14 и 1:15кратно разведенным стафилококковым токсином. При этом в разведениях 1:13 и 1:14 из-за полного и частичного гемолиза эритроцитов не получены результаты анализа.
В разведении l:15 количество розеткообразующих Т-лимфоцитов увеличилось после инкубации до 11 клеток. Количество
В-лимфоцитов как до инкубации так и после нее оставалось на одинаковых цифрах.
На 5 сут получены результаты посева крови, проведенного в день поступления, где выявлен патогенный гемолитический стафилококк.
К концу второй недели болезни выявлено нарастание уровня стгфилококкового альфа-антитоксина от 0,25 АЕ до 1,0 АЕ. На основании клиники и предлагаемого способа диагностики в первый день поступления больболезни — серологическим) подтвердило правомерность установленного диагноза.
Поставленная цель при разведении стафилококкового токсина 1:13 и 1:14 не достигнута, а достигнута при проведении реакции в разведенном стафилококковом токсине 1:15.
Пример 3. Больной 3„6 мес., ист. бол. № 1803, поступил в стационар с клиническими проявлениями дыхательной недостаточности, интоксикации, гипертермической реакции, характерных везикальных данных со стороны легких (хрипы и крепитации).
На первый день поступления в стационар проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов до и после
25 мин инкубации взвеси лимфоцитов больного с 1:20, 1:21, и 1:22-кратно разведенным стафилококковым токсином.
При этом увеличение розеткообразующих Т-лимфоцитов произошло на 17 клеток при инкубации, взвеси лимфоцитов с 1:20кратно разведенным стафилококковым токсином. При инкубации взвеси лимфоцитов с 1:21 и 1:22-кратно разведенным стафилококковым токсином не обнаруживается увеличение розеткообразующих Т-лимфоцитов.
Количество В-лимфоцитов остается без изменения после инкубации при всех указанных разведениях стафилококкового токсина.
На 6 день пребывания больного в стационаре получен положительный результат посева, проведенного в день поступления, где выявлен патогенный гемолитический стафилококк.
Однако уже в течение первых суток пребывания больного в стационаре на основании клиники и применения предлагаемого способа диагностики установлен диагноз: стафилококковая пневмония. В последствии на 6 и 8 сут и к концу второй недели болезни подтверждена правомерность установленного диагноза.
Пример 5. Больная Б., г 4 мес., ист. бол. № 2134, поступила в тяжелом состоянии с выраженными проявлениями дыхательной недостаточности, гипертермической реакции, интоксикации, кашлем влажного характера, характерными изменениями со стороны легких (хрипами и крепитациями).
В первый день поступления больной в стационар проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов
1120969 до и после инкубации взвеси лимфоцитов с 1:15-кратно разведенным стафилококковым токсином в течение 25 мин. При этом выявлено увеличение количества розеткообразных Т-лимфоцитов после инкубации со стафилококковым токсином на 17 клеток.
Увеличения В-лимфоцитов не выявлено.
Неоднократные посевы крови больной на выявление стафилококка не дали положительного результата.
К концу второй недели болезни в сыворотке крови больной выявлено нарастание уровня стафилококкового альфа-антитоксина с 0,25 АЕ до 1,0 АЕ. Однако уже в течение первый суток установлен диагноз: стафилококковая пневмония на основании клиники и применения предлагаемого способа диагностики.
Нарастание уровня стафилококкового альфа-антитоксина к концу второй недели болезни и эффект от проведенной специцической антистафилококковой терапии подтвердили правомерность установленного диагноза.
Показана возможность выявления стафилококковой этиологии пневмонии предлагаемым способом при условии отрицательного бактериологического ответа.
Пример 6. Больной 3. 2 мес., ист. бол. № 1888, поступил на стационарное лечение в тяжелом состоянии с проявлениями дыхательной недостаточности, влажным кашлем, гипертермической реакцией, судорога ми тонико-клонического характера, характерными изменениями (хрипами и крепитациями) со стороны легких.
В первый день пребывания больного в стационаре проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов до и после инкубации лимфоцитов с 1:20-кратно разведенным стафилококковым токсином в течение 25 мин. При этом выявлено увеличение количества Т-лимфоцитов после короткой инкубации со стафилококковым токсином на 11 клеток. Увеличение количества В-лимфоцитов не выявлено.
На 5 и 6 день пребывания больного в стационаре высеяны из крови гемолитические стафилококки одного фаговара. В динамике заболевания не удалось выявить нарастания стафилококкового альфа-антитоксина в сыворотке крови больного.
Однако уже в первый день пребывания больного в стационаре на основании клиники и применения предлагаемого способа диагностики установлен диагноз: стафилококковая пневмония.
Правомерность установленного диагноза была подтверждена на 6 день пребывания больного в стационаре бактериологическим способом исследования и эффективностью антистафилококковой терапии. Показана возможность диагностики при условии отрицательного ответа серологического способа выявления этиологии пневмонии.
Пример 7. Больная К., 5 мес., ист., бол.
1 № 1846, поступила в тяжелом состоянии на стационарное лечение. При поступлении отмечались выраженные проявления дыхательной недостаточности, гипертермической реакции, кашель влажного характера, хрипы и крепитации в легких.
В первый день поступления больной в стационар проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов до и после инкубации взвеси лимфоцитов с 1:20-кратно разведенным стафилококковым токсином в течение 25 мин. При этом выявлено увеличение количества розеткообразующих Т-лимфоцитов после короткой инкубации со стафилококковым токсином на 21 клетку. Увеличение В-лимфо20 цитов не выявлено.
Повторное бактериологическое обследование крови больной не выявило роста стафилококков.
Определение уровня стафилококкового альфа-антитоксина также не выявило его нарастания в динамике болезни.
В первый же день поступления больной в стационар на основании клиники и применения предлагаемого способа диагностики установлен диагноз: стафилококковая пневмония. Эффект от проведенной специфической антистафилококковой терапии подтвердил достоверность установленного диагноза. Показана возможность ранней диагностики стафилококковой этиологии пневмонии при условии отрицательных отЗ5 ветов бактериологического и серологического способов диагностики.
В таблице представлена сравнительная оценка точности диагностики стафилококковой пневмонии у детей раннего возраста
4п при способе-прототипе и предлагаемом способе.
Как видно из представленных данных увеличение количества розеткообразующих
Т-лимфоцитов более чем на 10 клеток достоверно для диагностики стафилококко45 вой этиологии пневмонии у детей раннего возраста. При этом увеличение В-лимфоцитов не происходит и не является информативным тестом диагностики этой нозологической единицы.
Таким образом, использование предлагаемого способа диагностики стафилококковой пневмонии у детей раннего возраста обеспечивает по сравнению с известными способами — бактериологическим и серологическим сокращение сроков обследо вания (на 10 — 12 дней), повышение точности диагностики (приблизительно в 4 раза).
1120969
1 о х х
Cf о и и} о г„ » о
Ц
Д}
\ и
Ф о х х х
Ц
Х оо
Р4
cr»
К (}}
Х и у х и и
}о о
Г» о х о л о х
У» х
Е» о»о г Г}
}г}
С»}
<1}
Н
ГГ}
Q}
«4
Г»
ГП о
И х
E о
Е» о
«4
И
Г}} о о,а
С 4 (4
»
» о о о (4
» о
Х
«4 х х х о
Е х
И х х
Е
Q}
Е и о и о
И и
cd о и о
И и о
«»
r}
Е о
Г о х х о оа г о
lI о»о
Ь"
С 4
1 оо о
Х
М о
М о
»
Л}
К и
Q} о х
Г» о о с }
Q} х х
0} х е}
Е х
Гз»
A и о
Г-»
Ц х х х
Р)
Q} о о х
Г:»
Ц
\ о
С} оо
/3 Тираж 687
», r. Ужгород, ул.
Подписное
Проектная. 4
Заказ 7602
П «Патент вниипи
Филиал ПП о
И х
E о
E о
«4
И
I о
}о о и о
Г» и х х х
Q} х
Е х
«4
И ьс»
Е и о г
Х о
Г}} о
4)
Q} х х
»} о
Э
Е х
«4
1-» ф и
Е»
Э
М
Ц х х
2 х о
Г.» о х ц
Ц о о и о
И и
Р\ о
Е»
<(}
cc}
Q}
«4
ГЛ х
Д х
Q}
Е х
М о
Г о
ГЬ с:Е х
«4 х
Е» и о х
Х о
I4 о и х
«4
И х и
Q} (а
Г}} х
C, Ы сД («» и х х
Х
rJ
Q} о х
Г» о
Ь., о х
Q}
Г»
Е»
Ю
«4 л
К с4
Х и
»}} о
Г» о х о х
«4
Э
Е»
Х
О
I«}
»} о х
Г» х х
kf х
E и о
» о о
Е»
2 х х
Q} и} х х и
cd
I-"4 о
Г» (}} х х п5
«4
Яг
cd
Е» и (0 х х а
Ц
»} х л о»
Qi (б
Г}} х о
