Способ приготовления гистологического препарата ткани печени

 

СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ТКАНИ ПЕЧЕНИ, включающий фиксацию биоптата в растворах формалина, последующее приготовление срезов и их окрашивание, отличающийся тем, что, с целью четкой диЛференцировки паренхимы от стромы, фиксацию в течение 45-48 ч при 4-6°С, а окрашивание ведут при 18-24 С в течение 7.0-30. мин в смеси, содержащей сС-нафтил ацетат, прочный синий Б, ацетон и фосфатный буфер рН 7,27 ,4 при. следуювщх соотношениях компонентов, вес.%: оС-Нафтил ацетат 20-45 Прочный синий Б 20-45 АцетонО,3-0,7 С Фосфатный буфер Остальное

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

09) 01) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3339543/2$-13 (22) 21.09.81 (46) 23,10 ° 84. Бюл. Р. 39 (72) А.Г. Гиновкер, Л.Е. Немировский и Н.М. Вахтель (1) Тюменский государственный медицинский институт (53) 616-091.8 (088.8) (56) 1. Непомнящих Л.N. и Колесникова Л.В. Количественные взаимоотношения стромы и паренхимы миокарда кроликов при атеросклеротическом кярдиосклероэе. — "Бюллетень экспериментальной биологии и медицины", 1977, 1в 84, 8, с. 247-250.

2; Лилли Р. Патогистологическая техника н практическая гистохнмия.

И., "Мир", 1969, с. 205.

3 <я) С 01 N 1/28 А 61 В 10 0 (4) (57) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ТКАНИ ПЕЧЕНИ,, включающий фиксацию биоптата в растворах формалина, последующее приготовление срезов и-их окрашивание, отличающийся тем, что, с целью четкой дифференцировки паренхимы от стромы, фиксацию в тече" ние 45-48 ч при 4-6 С, а окрашивание ведут при 18-24 С в течение

20-30.мин в смеси, содержащей

А-нафтил ацетат, прочный синий Б, ацетон и фосфатный буфер рН 7,27,4 при следующих соотношениях компонентов, вес.Х: ш,-Нафтил ацетат 20-45

Прочный синий Б 20-45

Ацетон 0,3-0,7

Фосфатный буфер Остальное

1119983

Изобретение относится к медицине, а именно к области микроскопических исследований паренхиматоэных органов в частности печени.

Известен способ приготовления 5 гистологического препарата ткани паренхиматозных органов, в частнос- ти ткани миокарда, включающий фиксацию биоптата в осмиевой кислоте, приготовление срезов и их окрашива- 10 ние (1) .

Однако данный способ не позволяет приготовить. гистологический препарат ткани печени.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности является способ приготовления гистологического препарата ткани печени, включающий фиксацию биоптата в растворах формалина, последующее приготов- 20 ление срезов и их окрашивание в гематоксилин — эозин

Однако известный способ не позволяет четко дифференцировать паренхиму от стромы, что затрудняет 25 проведение цитоспектроскопических исследований при изучении структуры печени.

Ileab изобретения - четкая дифференцировка паренхимы от стромы.

Поставленная цель достигается согласно способу приготовления гисто. логического препарата ткани печени, включающему фиксацию биоптата в растворах формалина, последующее при- 35 готовление срезов ы их окрашивание, тем, что фиксацию проводят в, течение 45-48 ч, нри 4-6 С, а окрашивание ведут при 18-24 С в течение 20-30 мин в смеси, содержащей ф;нафтил ацетат, прочный синий Б, ацетон и фосфатный буфер рН 7,27,4 при следующих соотношениях компонентов, вес.Х:

at -Нафтил ацетат 20-45

Прочный синий Б 20-45

Ацетон 0,3-0, 7

Фосфатный буфер Остальное

Способ осуществляют следующим образом. 50

Биоптат ткани печени фиксируют в

10-12Х-ном нейтральном формалине в 45-48 ч при 4-6 С. Далее биоптат а н3>омывают водой в течение 10 мин, приготавливают замороженные срезы 55 на криомикротоме, которые окрашивают при 18-24 С в течение 20-30 мин в смеси, содержащей ю -нафтил. аце-. тат, прочный синий Б, ацетон и фосфатный буфер рН 7,2-7,4 при следующих соотношениях компонентов,вес.Х:

at,-Нафтил ацетат 20-45

Прочный синий Б 20-45

Ацетон 0,3-0,7

Фосфатный буфер Остальное

Фиксация биоптата в 10-12Х-ном растворе формалин в течение меньше 45 и больше 48 ч при температурах меньше 4 и больше 6 С не позволяет

О получить четкую дифференцировку паренхимы от стромы,что видно из таблицы, где приведены показатели опти ческого поглощения стромы и паренхимы печени интактного золотистого хомяка через различное время после экспозиции образцов ткани в 1012Х-ном нейтральном формалине при о

4-6 С (в условных единицах оптической плотности) .

Окрашивание при температурах. меньше 18 и больше 24 С в течение времени меньше 20 и больше 30 мии также приводит к менее четкой дифференцировке паренхимы от стромы за счет полной ииактивации выявляемых красителем эстераз, имеющей мес- то при этих режимах обработки.

П р и и е р 1. У наркотизированного животного вскрывали брюшную полость, удаляли печень и из каждой доли ее вырезали кусочки, которые помещали в

10-12Х-ный нейтральный формалин на

45 ч, предварительно охлажденный до о

4 С, после чего промывали кусочки в дистиллированной воде 10 мин, изготовляли на микротоме замороженные сре зы. Срезы наклеивали белком на сухие обезжиренные предметные стекла и окрашивали при температуре 18 С в о течение 20 мин в смеси, содержащей ь =нафтил ацетат, прочный синий Б,аце. тон и фосфатный буфер рН 7,2-7,4 при следующих соотношениях компонентов, вес... 7 ° а,-Нафтил ацетат 20

Прочный синий Б 20

Ацетон 0,3

Фосфатный буфер Остальное

Соотношение стромы и паренхимы в печени у интактного животного, в частности золотистого хомяка, проводится при планиметрии на микровидеомате на тестовой площади, равной

19200 мк, принятой за 1.00Х и равно

0,0967 + 0,01.

Пример 2. У наркотизированного животного (золотистого хомяка), Строма

Время экс- Паренхима позиции в формалине, ч

45-48 17,8+ 0,9 050

15,1i 0,9 0,5 Т0,1

Составитель Л. Стебаева

Техред C.Ëå геэ а корректор О. ЛуговаЯ

Редактор F.. Папп

Заказ 7682/19 Тираж 822 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,4 инвазированного эписторхоэом, вскрывали брюшную полость, удаляли печень, которую помещали в 10-12Х-ный нейтральный формалин на 48 ч, предварительно охлаяденный до боС, после чего промывали кусочки в дистиллированной воде 10 мин, изготавливали замороженные срезы, которые окрашивали при 24 С в течение ЗО мин в о смеси, содержащей еС -нафтил ацетат, прочный синий Б,ацетон и фоСфатный буфер рН 7,2-7,4 при следующих соотношениях компонентов, вес.Х:

d,-Пафтил ацетат 45

Прочный синий Б 45

Ацетон 0,7 фосфатный буфер Остальное

Соотношение стромы и паренхимы у золотистого хомяка при описторхозе 1,1+ 0,13.

Специфичность и достоверность маркирования стромы и паренхнмы обусловлены избирательным маркированием этих структур. Интенсивная

119983 4 окраска паренхиматозного компонента ткани связана с выявлением в нем неспецифических эстераз. Четкая дифференцировка паренхимы от стромы позволяет проводить количественныеисследования с помощью телевизионного планиметра "Иикровидеомат" и цитоспектрофотометра, что повышает точность определения различных па1р тологических состояний. й»

12. 24э7+ Оэ7 1,2+ 0,12

24 24,1+ 0,5 0,71+ 0,06