Способ получения иммуностимулятора

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОСТИМУЛЯТОРА , включающий замораживание сырья, измельчение, экстрагирование 3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, фильтрование , обработку надосадочной жидкости ацетоном, отделение осадка, перерастворение его в воде и выделение целевого продукта, отличающ и и с я тем, что, с целью повышения специфической активности целевого продукта, в качестве сырья используют лимфатические узлы животных, а сьфье перед заморозкой обрабатывают ацетоном.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТ ИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК! 19! " (! ! (5»4 A 61 К 35/30

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3588257/28-13

)(22) 03.05.83 (46) 30.10.85. Бюл. Р 40 (71) Ленинградское ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени производственное объединение мясной промышленности им. С.М.Кирова (72) В.Х.Хавинсон, В.Г.Морозов, Н.Д.Сидорова, В.Л.Константинов, О.В.Чайка и С.П.Князева (53) 576.8.097.3(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Ф 1112606, кл. А 61 К 35/30, 1982. (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОСТИМУЛЯТОРА, включающий замораживание сырья, измельчение, экстрагирование

37.-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, фильт рование, обработку надосадочной жидкости ацетоном, отделение осадка, перерастворение его в воде и выделение целевого продукта, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения специфической активности целевого продукта, в качестве сырья используют лимфатические узлы животньи, а сырье перед заморозкой обрабатывают ацетоном.

1187824

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается способов получения биологически активных веществ из животного сырья, в частности веществ, обладающих иммуностимулирующим действием, Цель изобретения — повышение специфической активности целевого продукта.

П р и м,е р 1.Берутлимфатические 10 узлы животных, удаляют жировой слой, обрабатывают ацетоном с температуг0 о рой 5 С 20 ч, замораживают при -20 С, 0 5 кг лимфатических узлов измельчают на волчке, загружают в реактор !5 с мешалкой и заливают 5 л 3%-ного раствора уксусной кислоты. Туда же добавляют 0.005 кг хлористого цинка и экстрагируют 24 ч, перемешивая

1 ч через каждые 8 ч.

По окончании экстракции субстрат

cJIHBRIoT и центрифугируют 20 мин со скоростью 3000 об/мин, надосадочную жидкость декаптируют к ней добавляют ацетон (1 час" ü элюата и 10 частей25 ацетона), перемешивают и формируют садок в течение 20 ч. Выпавпптй осадок в .t(--ушпвают, измельчают и растворяют 0,01 кг осадка в 0 5 л воды при рП==6,0 (экстрагент — 1 .-ный раствор уксусной кислоты), Экстракцию проводят 4 ч. Удаляют балластные вещества путем фильтрации, В прозрачный раствор добагляют уксусной кислоты до рН=4,0. Раствор стерильно фильтруют через пластины EKS, разливают во флаконы так, чтобы в каждом содержалось по 10 мг вещества, и лиофилизируют.

Выход активного вещества из исходного сырья составит 0,005 кг. gp

Пример 2. Берут лимфатические узлы животных, промывают и обрабатывают ацетоном с температурой 3 С в течение 18 ч. Лцетон удаляют и о сырье замораживают при t =-20 С. 45

Берут 1 кг лимфатических узлов, измельчают. Измельченное сырье загружают в реактор с мешалкой и заливают

10 л ЗЕ-ного раствора уксусной кислоты, туда же доб являют 0,01 кг хлорис-50 того цинка и экстрагируют 28 ч, перемешивая 1 ч через каждые 8 ч.

По окончании экстракции субстрат сливают и цснтрифугируют в течение

20 мип со скоростью 3000 об/мин, над-55 осадочную жидкость декантируют, и ней добавляют ацетон при 18 С в соотношении 1:10 (1 часть элюата и 10 частей ацетона), перемешивают и формируют осадок в течение 18 ч.

Выпавший осадок высушивают фильтрованием, измельчают и растворяют

0,02 кг в 1 л воды при рН=6,0 (экстрагент — 17-ный раствор уксусной кислоты). Экстракцию проводят 3 ч при непрерывном перемешивании, фильтруют.

После удаления балластных веществ в прозрачный раствор добавляют уксусной кислоты до pH=4,0. Раствор .стерильно фильтруют через пластины

EKS, разливают во флаконы так, чтобы в каждом содержалось по 10 мг вещества, и лиофилизируют. Выход активного вещества из исходного сырья составляет 0,01 кг.

Пример 3. Подготавливают сырье — лимфатические узлы животных, и обрабатывают его ацетоном с температурой 1 С 24 ч, ацетон удаляют и замораживают при t=-20 С. Берут 10 кг лимфатических узлов, измельчают.

Измельченное сырье помещают в реактор с мешалкой и заливают 100 л водного раствора.37.-ной уксусной кислоты, добавляют 0,1 кг хлористого цинка и экстрагируют 36 ч при беспрерывном перемеыивании в течение часа через каждые 8 ч, По окончании экстрагирования субстрат отделяют и центрифугируют его в течение 20 мин со скоростью

3000 об/мин, Надосадочную жидкость декантируют, к ней добавляют ацетон в соотношении 1:10 (на 1часть элюата 10 частей ацетона), перемешивают и формируют осадок ?4 ч. Выпавший осадок в количестве 0,2 кг высушивают фильтрованием, измельчают и раст1воряют в 2 литрах воды, подкисленной, до рН=7,0 уксусной кислотой.

Проводят экстракцию при непрерывном перемешивании 3 ч, удаляют балластные вещества путем фильтрации.

В отфильтрованный раствор добавляют уксусной кислоты до pH=4,0. Раствор стерильно фильтруют через пластины ЕКБ, разливают во флаконы по

10 мг в каждый и лиофилизируют. Выход активного вещества, полученного предлагаемым способом, относительно используемого сырья составит 0,1 кг.

Биологическую активность вещества, выделенного из лимфатических узлов, оценивают следующим образом.

Животных, морских свинок, самцов весом 200-250 г разделяют на 2 груп87824

239 + 21 546 -+36 (0,01

Тимус

Селезен217 15 294 -18 (0,05 ка

Лимфатический

275 22 490 26 (0,01 узел

Составитель Э.Цыганов

Редактор Л.Авраменко Техред M.Кузьма Корректор Е.Рошко

Заказ 6575/5 Тираж 721 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г,Ужгород, ул.Проектная, 4

3 11 пы — опытную и контрольную по 25 штук в каждой. Опытным животныМ вводят по 1 мг биологически активного вещества, полученного из лимфатических узлов, растворенного в 0,5 мл физиологического раствора. Вещество вводят внутримышечно в течение 4 дней ежедневно. Контрольным животным вводят по 0,5 мл физиологического раствора по аналогичной схеме. На пятые сутки всех животных забивают, выделяют тимус, селезенку и лимфатические узлы, определяют в них удельную концентрацию лимфацитов (удельная концентрация — это количество клеток в тысячах на 1 мг ткани).

Результаты исследований отражены в таблице.

Введение вещества, полученного из лимфатических узлов, приводит к значительному увеличению лимфоцитов во всех органах иммунной системы

5 в среднем в 1,5-2 раза.

Вещество, полученное иэ лимфатических узлов, представляет собой

1Î комплекс низкомолекулярных белковых веществ. При изучении токсичности обнаружено, что вещество не обладает в терапевтических дозах нобочньм эффектом. Вещество может быть использовано в качестве иммуностимулятора с высокой биологической активностью.