Способ получения производных мурамилдипептида

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ МУРАМИЛДИПЕПТИДА общей формулы СН20Н .НОН даошз S (..... ч.1 СНзСНСО-Х-МНСНСН2СН СО-У где X - остаток L-аланина, L-серина или L-валина; Y - NHCH(COOH)(CH2)4-NH-CO-A, где А - разветвленный или неразветвленный С -С -алкил., заключающийся в том, что соединение общей формулы А-СООН, где А - имеет указанное значение, подвергают взаимодействию с N-окси 5-норбЬрнен-2 ,3-дикарбоксимидом или N-оксисукцинимидом в присутствии дициклогексилкарбодиимида в среде тетрагидрофурана в некоторых случаях в смеси с хлороформом при комнатной температуре в течение 1-24 ч и полученное соединение подвергают взаимодействию с соединением общей формулы снгон -о,н-он /OvV ф СО но hsiH iTsIHCOCHs СНзСНСО-Х- COllHoСООН I I - NHCHCH CH COl H CH( где X - имеет указанное значение, со о со со в среде Ы,Н-диметилформамида при комнатн (эй температуре в течение 1-24 ч.

il i ) I

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИ ЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (5114 С 07 К 9 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ПАТЕНТ,Ф

СН20Н

Н ОН

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

Il0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 2936451/23-04 (22) 20.06. 80 (31) 78317/79 (32) 21.06. 79 (33) JP (46) 07.11.85. Бюл. N 41 (71) Дайити Сейяку Ко., Лтд (JP) (72) Тецуо Сиба, Созо Котани, Юити

Ямамура, Осаму Нагасе и Хидемаса

Огава (JP) ,.(53) 547.917.07(088.8) (56) Заявка PCT WO 79/00802, кл. С 07 Н 15/04, опублик. 18.10.79 ° (54)(57).СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДHblX МУРАИИЛДИПЕПТИДА общей формулы

СН20Н. Н ОН

ИС0(Н СОЮН2. 3

СН СНС0-Х-жНСНСН2СН2СΠ— (Dj где Х вЂ” остаток Ь-аланина, L-серина или L-валина; . Y — NHCH(CO0H)(CH2)4 -NH-C0-А, ..,SU„„ I ИОВЕ() A где А — разветвленный или неразветвленный С -С ;алкил., заключающийся в том, что соединение общей формулы

А-СООН, где А — имеет указанное значение, подвергают взаимодействию с N-окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксимидом или N-оксисукцинимидом в присутствии дициклогексилкарбодиимида в среде тетрагидрофурана в некоторых случаях в смеси с хлороформом при комнатной температуре в- течение 1-24 ч и полученное соединение подвергают взаимодействию с соединением общей формулы

НО

НСОСН3 (Н,СНСΠ— Х—

ОООН

l I — NHCHCHgCHgCONH CH(CHg)q NHg где Х вЂ” имеет указанное значение, в среде N N-диметилформамида при комнатной температуре в течение 1-24 ч.

СН2,0Н

v- 0H

cow мнсосн, 1 1i 9099

Изобретение относится к способу получения новых производных мурамил* дипептида, общей формулы

СН СНСО.— Х-ИНСНСН СН2СО-У 1О (D) где Х вЂ” остаток L-аланина, Ь-серина .или L-валина;

Y - NHCH(C00H)(CH ) -NH-СО А где А — разветвленный или неразветi5 вленный С. -С -алкил, обладающий ценными фармакологическими свойствами.

Цель изобретения — получение новых производных мурамилдипептидов, обладающих преимуществами в фармако логическом отношении перед известными структурными аналогами.

Пример 1. 11,4 г бенэилового эфира М вЂ” ji-<-0-бензил-4 6-0ф г

У 25

-бензилиден-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутаминил -N -бензилоксикарбо6 нил-L-лизина суспендируют в 115 мл

607-ной уксусной кислоты и нагревают. на кипящей водяной бане в течение приблизительно 1 ч. После охлаждения до Комнатной температуры реакционную. смесь концентрируют при пониженном давлении и к остатку добавляют воду.

Выпавшие кристаллы собирают фильтрованием и перекристаллизуют из смеси З5 диметилформамид (ДМФА) — этилацетат, при этом получают 7,6 г бензилового м эфира N — - Ь1-g-0-бензил-N-ацетилмура- мил-L-аланил-D-изоглутаминил1-И—

-бензилоксикарбонил-L-лизина, .т. пл. 40

207-2-10 С (с разлож.), (МЯ +56,6 (С = 0,3; ДМФА, через 17 ч) .

Вычислено, 7: С 59,80; Н 6,73;

М 8,90.

С4 Н6 О,,И6 1/2 Н, О 5

Найдено, 7: С 59,65; Н 6,67;

N 8,96.

Полученное соединение растворяют в приблизительно 20-кратном избытке уксусной кислоты и гидрируют в при- 50 сутствии катализатора палладия на .углероде в токе водорода при комнат. ной температуре. После завершения ,реакции катализатор отфильтровывают и .фильтрат концентрируют при пони- 55 женном давлении. Остаток очищают хроматографически на силикагеле с использованием в качестве элюента

0 2 смеси бутанол — уксусная кислота— вода (4:1:2 по объему). Фракции, содержащие требуемое вещество концент- рируют при пониженном давлении и пропускают червз основную ионообменную смолу (ацетатная форма). Элюат сушат вымораживанием, при этом получают

ФБ

N --(N- àöåòèëìóðàìèë-L-аланил-D-изоглутаминил)-L-лизин.

300.мг NOC-(N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутаминил)-L-лизина суспендируют в 7 мл ДМФА и добавляют при. охлаждении льдом 148 мг активного эфира октановой кислоты и гидрокси-5-норборнен-2,3-дикарбоксилида и 0,05 мл N-метилморфолина. Через

30 мин смесь постепенно нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и к остатку добавляют диэтиловый эфир. Выпавшие кристаллы отделяют фильтрованием и промывают последовательно диэтиловым эфиром и водой. При перекристаллизации из смеси ДМФА — диэтиловый эфир получают

310 мг N -(N-ацетилмурамил-Ь-аланилOC

-В-изоглутаминил)-N -октаноил-L-ли-.

E зина, т. пл. 126-.130 С (с разлож. ), Ц +28,8 (С = 0,2, ДМФА, через 17 ч) .

Вычислено, X,С 50,63; H 7,98;

Ы 10,74.

С33 H 580 l3 N 6 2Н2 0 °

Найдено, 7: С 50,32; Н 7,54;

N 11,00, Также синтезируют следующие соедикения.

N -(N-Ацетилмувамил-L-аланил-DM

-изоглутаминил) -N -лауроил-L-лизин, т.пл. 174,5-176,5ОС (с разлож.), (ег1 "+30,2 (G = 0,6, ДМФА, через 17 ч) .

Вычислено,,X: С 54,13; Н 8,35;

N i0 24.

С37Н660Л N6

Найдено, Ж: С 53,90; Н 8,40;

N 10,17.

N — (N-Аце тилмур амил-L-ал анил-DK

-изоглутаминил)-N-стеароил-L-лизин, т.пл. 175,0-177,0 С (с разлож.),(о 1

+ 25,9 (С 0,6 ДМФА, через 17 ч).

Вычислено, X:С 57,06; Н 8,91;

N 9,29.

C43H780l3 6. Н,О.

Найдено, Xi С 57,21; Н 8,87;

N 9,19.

0С

N — (N-Ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутаминил) -N -триаконтаноил-LF о

-лизин, т.пл. 165,0-168 С (разлож.).

1190990

30 з

Вычислено, %: С 61,03; Н 9,78;

N 7,76.

С Н«рг01 N (1-1/2) Н, О °

Найдено, %: С 60,89; Н 9,58;

N †(N-Ацетилмурамил-L-аланил-D M

-изоглутаминил)-N †изопентадеканоилЯ ь

°

-Ь-лизин, т.пл. 144,5-147,5 С (с разлож. ), (с4) д +20, 2 (С = 0,3; ДМФА, через 17 ч).

Вычислено, %: С 56,85; H 8,59;

N 9,95..

С40Н Оии

Найдено, %: С 57,26; Н 8,63;

N -(Н-Ацетилмурамил-L-серил-9Е»

-изоглутаминил)-N -стеароил-L-лизин, т.пл. 175,0-177 С (с разл,),(g) +

+ 27,8 (С = 0,5, ДМФА, через 17 ч) °

Вычислено, %: С 55,52; H 8,78; 20

N 9,04.

С4 Н 8 011 И 6 (1 — 1/2) Нг О

Найдено, %: С 55,46; Н 8,62;

N 9,.06. М

N --(N-Ацетилмурамил-Ь-валил-D- 25

-изоглутаминил)-N -стеарол-Ь-лизин, f т.пл. 182,0-185,0 С (с разлож.), (Ф1р+ 22,8 (С = 0,5, ДМФА, через

17 ч).

Вычислено, %: С 58,48; Н 9,05;

N 9,01.

С4 Н вгО, Nб 1/2 Нг О, Найдено, %: С 58,48; Н 8,89; .

N 9,12.

Пример 2-. 300 мг N-ацетил35 мурамил-L-аланил-D-изоглутамина, растворяют в -2 мл ДМФА, в которые добавлено 72 мл октиламина, 64 мг (0,56 ммоль) N-гидроксисукцинимида и 7 мл тетрагидрофурана. K этой 40 смеси при охлаждении льдом и перемешивании добавляют 115 мл (0,56 ммоль) дициклогексилкарбодиимида. Через 30 мин смесь медленно нагревают до комнатной температуры и оставляют на ночь. Выпавшую в осадок дициклогексилмочевину отфильтровывают фильтрат концентрируют при пониженном давлении и с целью понижения осадка добавляют воду. Перекристаллизация осадка из смеси ДМФА диэтиловый эфир дает 165 мг N-ацетилмурамил-L-аланил-Р- изоглутаминоктиламида,т.пл.1/4,0-175,5ОС(с разлож./

j ) + 30,5 (С = 0,4, уксусная кис. — SS лота, через 1 ч).

Вычислено, %: С 52,15; Н 8,26; N 11,26.

4 гг Н,,О,о И Нг О.

Найдено, %: С 51 88; H 8 00;

N 11,35.

Так же получают следующие соединения.

N-Ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутаминлауриламид, т.пл. 186-187РС (с разлож.),(g) + 30,0 (С=О 0,5, уксусная кислота, через 21 ч).

Вычислено, %: С 54,20; Н 8,82;

N 10,20.

Сэ Н . О (о1Я . (1-1/2) Нг О, Найдено, %: С 54,43; Н 8,60;

N 9,88.

N-Ацетилмурамил-L-a a -D-изоглутаминстеариламид, т .пл. 189-190 С (с разлож.),(Ы) + 28,0 (С = 0,5, уксусная кислота, через 2 1 ч).

Вычислено, %: С 59,00; Н 9,39;

N 9,30.

С Н,,О и, N 1/2 Н О.

Найдено, %: С 58,80, Н 9,37;

N 9,33.

N-Ацетилмурамил-L-валил-0-изоглутаминстеариламин, т.пл. 217-219 С (с разо лож.) .

Вычислено, %: С 59,96; Н 9,57;

N 8,97.

Су, Ну О(о N> ° 1/2 Н,О

Найдено, %: С 59,73; Н 9,58;

N 9,16.

Методика получения активного эфира жирной кислоты.

1,0 Ммоль жирной кислоты растворяют в .10 мл тетрагидрофурана и при перемешивании и охлаждении льдом добавляют 206 мг дициклогексилкарбодиимида и 179 мг N-гидрокси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимида. Через 30 мин смесь медленно нагревают до комнатной температуры и оставляют на 5 ч.

Выпавшую в осадок дициклогексилмочевину отфильтровывают, фильтрат кон.— центрируют. К остатку добавляют су-. хой диэтиловый эфир, нерастворившуюся часть отфильтровывают. Фильтрат концентрируют досуха при пониженном давлении, при этом получают активный эфир жирной кислоты и N-гидрокси-5-норборнен-2,3-жикарбоксимида в виде белых кристаллов.

В случае получения активного эфира триаконтановой кислоты используют смешанный растворитель — тетрагидрофуран — с хлороформом (1:1 по объему).

Группам по двадцать мышей линии

Sld-ddy/26+ 1 r, возрастом 5 недель

1190990

Таблица 1

Процент выживания на 7 день после заражения

Количество мышей

Испытуемое соединение клеток/мышь

9х10

Е. coli Е77156

1,.2х10

Inoculum бх10 Контрольные

40

20

50

10

20

Предлагаемые

7.0 50 40

80

45 а

60

70

20

80

50

80

50

60

50

80

*) Процент выживаЕмости показывает разницу между группой мышей, обработанной соединением, указанным в таблице,.и необработанной группой с мышей.

Т а б л и ц а 2 Продолжение табл.

163

180

gp 4

183

1,7

186

1,7

0,5

123

Иет соединения

134

0,1

0,6

Контрольное 2 100

0,4

151

0,5

157

0,3

Предлагаемое

152

0,9 вводили подкожно соответственно по

0,1 мг каждого из соединений и конт 1 рольные соединения. Через 24 ч мышей заражали подкожным введением инокулума Е. coli штамм Е 77156, материалом бх10 х 9х10 и 1,2х10 кле6 6 7 ток/мьппь, соответственно. Об эффекте судили по проценту мышей, выживших через 7 дней после заражения. Как видно из результатов, приведенных в табл. 1, предлагаемые соединения продемонстрировали прекрасный профилак- тический эффект против данной инфекции.

Адъювантная активность.

Проводили роговичный тест на морских свинках, считающийся одним из показателей адъювантной активности.

Как показано в табл. 2, результаты свидетельствуют о том, что предлагаемые соединения обладают адъювантной активностью такой же, и даже более высокой, чем мурамилди пептид. !

Контрольные соединениы 1-4 и соединения 1-11, приведенные в табл.1 и 2.

1190990,7

Таблица 3

LD, мг/кг

Мышь

Внутривенное Подкожное применение применение

436 ю90

Самка

632

>90

Составитель И. Федосеева

Редактор С.Патрушева Техред M.Ïàðîäàé Корректор В. Бутяга

Заказ 7010/62 Тираж 353 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ЛПП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Контрольное соединение 1: N --(NM

-ацетилмурамил-Ь-аланил-D-изоглутаминил)-?.-лизин.

Контрольное соединение 2: N-ацею тилмурамил-L-аланил-D-изоглутамин.

Контрольное соединение 3: N-ацетилмурамил-Ь-серил-D-изоглутамин.

Контрольное соединение 4: N-ацетилмурамил-L-валил-D-иэоглутамин.

Предлагаемое соединение 1: N -(N-ацетилмурамил-L-a a "D-изоглутаминил)-N -октаноил-L-лизин.

М

Предлагаемое соединение 2: N --(N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглу. таминил)-N -лауроил-L-лизин.

Предлагаемое соединение 3: N -(NM

-аце тилмур амил-L-аланил-Р-из о глутаминил)-N -стеароил-L-лизин. .

Предлагаемое .соединение 4: N -(Ы0(-ацетилмурамил-L-серил-D-изоглутамиЯ . нил)-N -стеароил-Ь-лизин.

М

Предлагаемое соединение 5: N --(N

-ацетилмурамил-L-валил-D-изоглутаминил)-N --стеароил-Ь-лизин.

Е

Предлагаемое соединение 6: N --(N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутаЕ минкл)-М -триаконтаноил-лизин.

Предлагаемое соединение 7: N --(N-ацетилмурамил-L-алил-0-изоглутамиУ ,нил)-N -иэопентадеканоил-L-лизин.

Предлагаемое соединение 8: N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутамин октиламид.

Предлагаемое соединение 9: N-ацетилмурамил-Ь-аланил-D-изоглутамин лауриламнд.

Предлагаемое соединение 10: N-аце-. тилмурамил-L-аланил-D-изоглутамин стеариламид.

Предлагаемое соединение 11: N-ацетилмурамил-L-валил-D-изоглутамин стеариламид.

N -(N-ацетилмурамил-L-аланил-D-иэоглутаминил)-N-стеароил-Ь-лизин является типичным примером предлагаемого соединения и имеет токсичность

15 (LD ), ппределенную на мышах, предо ставленную в табл, 3 .

Как видно иэ табл. 3, указанное соединение является эффективным при

30 дозе 100 г/мышь (26 r). Этот факт

:показывает, что детальная доза этого соединения более чем в 100 раз больше эффективной .дозы и, следовательно, предлагаемые соединения являют- °

35 ся безопасными и полезными фармацевтическими агентами.