Способ определения иммунологического статуса больных туберкулезом

 

Изобретение относится к иммуно-г логии. С целью повышения точности способа к гепаринизированной крови больного туберкулезом легких добавляют 0,87%-ный раствор NH С1, центрифугируют , клеточную взвесь отмывают средой Игла и ресуспендируют. Концентрацию нейтрофилов во взвеси доводят средой Игла до в 1 мл. Инкубируют 30 мин при в присутствии интерферона в разведении 1:4- 1:16 и при кон1 нтрации 10 полистероловых частиц латекса. При увеличении фагоцитарного числа до 51-68% и фагоцитарного индекса до 4,4-6,7 по сравнению с исходным значением выявляют снижение иммунологического статуса. С 4ii. р

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЗ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21 ) 3.642087/28-14 (22) 13г09.83 (46) 15.02.87. Бмп. 1 6 (71) Киевский научно-исследовательский институт туберкулеза, пульмонологии и грудной хирургии им. акад.

Ф. Г. Яновского (72) Е. Ф. Чернушенко, А. А. Шатров, Т. И. Беляновская, Л. В. Кузнецова, В. А. Шатров и А. Я. Дзюблик (53) 615.375(088.8) (56) Ехр." Immunol. 1980, 40 Р 2, с. 327-336.,SU„„32894 9 А"

1д) 4 А 61 К 45/02 G 01 N 33/48 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СТАТУСА БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ (57) Изобретение относится к иммуно= логик. С целью повышения точности способа к гепаринизированной крови больного туберкулезом легких добавляют 0,873-ный раствор NH С1 центрифугируют, клеточную взвесь отмывают средой Игла и ресуспендируют.

Концентрацию нейтрофилов во взвеси доводят средой Игла до 1 10 s I мп.

Инкубируют 30 мин при 37 С в. присутствии интерферона в разведении I:41:16 и при концентрации 10 полистероловых частиц латекса. При увеличении фагоцитарного числа до 51 -68X и фагоцитарного индекса до 4,4-6,7 по сравнению с исходным значением выявляют снижение иммунологического статуса, 1 12

Изобретение относится к медицине, а именно к ижунологии.

Цель изобретения — повьппение точности способа за счет того, что нейтрофилы инкубируют в присутствии интерферона.

Способ осуществляют следующим образом.

К 4 ма гепаринизированной крови больного туберкулезом легких добавляют 10 мл 0,8 раствора НН С1 и перемешивают. Смесь оставляют на 10 мин при комнатной температуре. Этот процесс приводит к лизису эритроцитов.

Затем смесь центрифугируют 5 мин при 800 об/мин, в результате на дно пробирки оседает взвесь лейкоцитов с небольшой примесью зритроцитов.

Клеточную взвесь трижды отмывают от раствора %Н С1 средой Игла и ресуспендируют. В камере Горяева подсчитывают количество выделенных нейтро6 филов, из 4 мл крови получают 1 10

1 10 клеток. Добавляют среду Игла и

1 цоводят концентрацию нейтрофилов во взвеси до 1.10 в 1 мл. Берут 9 цент рифужных пробирок и в каждую из них выливают по 1 мл среды Игла с клеточ ной взвесью. Предварительно подготавливают разведения интерферона, до бавляя к нему определенное количество среды Игла так, чтобы получить,) разведения интерферона 1:2, 1:4, 1:6, 1:8, 1:10, 1:12, 1:16, затем в каждую пробирку, содержащую по 1 мл среды Игла с клеточной взвесью, добавляют по 1 мл раствора интерферона в соответствующих разведениях таким образом, чтобы получить следующие конечные разведения интерферона в смеси с клеточной суспензией: 1:2, 1 i4у !å8у 1 е 12у 1 е 16 ° 1 å+20у 1 ° 24у

1:32.. В последнюю 9-ю пробирку, которая служит контролем реакции, к

1 мл клеточной взвеси добавляют .1мп среды Игла беэ интерферона. В каждую из 9 пробирок добавляют по 0,1 мл раствора полистероловых частиц латекса диаметром 1,3 мк в концентрации !0 "частиц в 1 мл среды Игла.

Клеточную взвесь с латексом и интерфероном перемешивают легким встряхиванием пробирок и инкубируют 30 мин при 37 С, Затем пробирки центрифугируют 5 мин при 800 об/мин. Иэ осадка делают мазки, которые фиксируют метанолом 7 мин и окрашивают по методу

Романовского-Гимза; Способность ней- трофилов поглощать частицы латекса

89499 2

:оценивают при помощи световой микроскопии окрашенных мазков под иммерсией (объектив х 90, окуляр х 7); частицы латекса имеют вид круглых бесцветных опалесцирующих тел.

Фагоцитарную активность определяют на основании подсчета 100 клеток, при этом учитывают следующие показатели: фагоцитарное число (далее ФЧ)— процент фагоцитирующих нейтрофилов; фагоцитарный индекс (далее ФИ) среднее число частиц латекса в одном профагоцитированном нейтрофиле. При увеличении ФЧ до 51-68 и ФИ до 4,46,7 по сравнению с исходным значением выявляют снижение иммунологического статуса.

Пример 1. Больной Н., 42 лет, поступил с диагнозом: фибрознокавернозный туберкулез верхней доли правого легкого в фазе распада,БК-, Больного беспокоит кашель с небольшим выделением слизистогнойной мокроты, общая слабость. Объективно: больной умеренного питания, нормального телосложения, кодные покрытия и видимые слизистые без особенностей.

Тоны сердца ритмичные. Пульс

92 уд/мин, хорошего наполнения и

30 напряжения. В легких на фоне жесткого дыхания выслушиваются рассеянные сухие хрипы. Печень пальпируется у края реберной дуги. Живот мягкий, безболезненный, стул и диурез без

35 особенностей, На обзорной рентгенограмме органов грудной клетки видны деструктивные изменения верхней доли правого легкого. Общий анализ крови: Эр 4,8 г/л, Л 9,4 г/л, Э-1, 4Q П-2, С-74, Л-24, М-1. СОЭ 17 мм/ч, Иммунологическое исследование крови выполнено согласно методике, предлагаемой в изобретении: выделение нейтрофилов из периферической крови 5 больного и доведение концентрации до

1 10 клеток в 1 мл среды Игла; осуществление реакции поглощения нейтрофиламн частиц латекса до и после обработки клеток раствором интерферона

50 в разведении 1:4.

В результате осуществления реакций показатели фагоцитарной активности нейтрофилов до обработки клеток интерфероном составляли: ФЧ 38

55 и ФИ 2,3. После обработки клеток раствором интерферона в разведении

1:4, ФЧ составляет 51% и ФИ 4,4 °

Пример 2. Больной 35 лет, поступил с диагнозом: ннфильтративФормула изобретения

Составитель М, Позняк

Редактор А. Долинич Техред В.Кадар

Корректор В. Бутяга

Заказ 7837/6 Тираж 617 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 128949 ный туберкулез левого легкого в фазе распада, БК-. Больного беспокоит кашель с небольшим отделением мокроты, общая слабость. Объективно: умеренного питания, нормального телосложения. 5

Кожные покровы и видимые слизистые беэ особенностей, Тоны сердца ясные, чистые. Пульс 90 уд/мин. Анализы крови и мочи в пределах нормы. На обзорной рентгенограмме органов груд- 1О ной клетки фиброзно измененное правое легкое.

Иммунологические исследования выполнены согласно методике, предлагаемой в изобретении: выделение нейтро- филов из периферической крови больного и доведение их концентрации до

1 10 клеток в 1 мл среды Игла; осуществление реакции поглощения нейтрофилами частиц латекса до и после обработки клеток раствором интерферона в разведении 1:8.

В результате осуществления реакции, показатели фагоцитарной активности нейтрофилов до обработки клеток интерфероном составили: ФЧ 40Х и ФИ 3,0. После обработки клеток интерфероном ФЧ 60 и ФИ 5,1.

Пример 3, Больной Н., 40 лет, поступил с диагнозом: диссеминированный туберкулез обоих легких в фазе распада, БК+, Больного беспокоит кашель с большим отделением гнойной мокроты, общая слабость, Больной пониженного питания, нормаль- 35 ного телосложения, Кожные покровы чистые, со стороны органов брюшной полости изменений нет. Анализы крови

4 и мочи в пределах нормы. На обзорной рентгенограмме фиброзно измененные правое и левое легкое.

Иммунологическое исследование крови выполнено согласно методике. предлагаемой в изобретении: выделение нейтрофилов из периферической крови больного и доведение их до концентрации 1.10 клеток в 1 мл среды

Игла; осуществление реакции поглощения нейтрофилами частиц латекса до и после обработки клеток раствором интерферона в концентрации 1:16.

В результате осуществления реакции показатели фагоцитарной активности нейтрофилов до обработки клеток раствором интерферона в концентрации 1:16 ФЧ 687. и ФИ 6,7.

Способ определения иммунологического статуса больных туберкулезом путем выделения из .крови нейтрофилов больного и инкубирования клеток под действием лекарственного вещества с последующей оценкой их функциональной активности, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности способа, инкубирование нейтрофилов осуществляют в присутствии интерферона в разведении 1:4-1:16 на

1 10 клеток в мл и при увеличении

5 фагоцитарного числа до 51-68Х и фагоцитарного индекса до 4,4-6,7 по сравнению с исходным значением, выявляют снижение иммунологического статуса.