Способ хранения холерных бактериофагов

 

Изобретение относится к области медицинской микробиологии. Цель изобретения - повьппение жизнеспособности и сохранение биологической активности умеренных фагов. Берут 1мл фага 8556 и соединяют с 2 мл защитной среды. Защитная среда имеет следующий состав: сахароза, желатина , хлористый кальций, дистиллированная вода. Среду стерилизуют в автоклаве . Препарат разливают в ампулы . Предварительное замораживание осуществляют путем погружения ампул . в охлажденный спирт. Производят лиофштьное высушивание в течение 26- 27 ч. Запаивают ампулы и в исследуемых образцах через 24 ч после высушивания определяк)т количество жизнеспособных корпускул фага. с € (Л ю О) ел 00

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (П) (5!)4 С 12 N 7 00 04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3865577/28-14 (22) 25.03.85 (46) 15..03..87. .Бюл. Р 10 (71) Ростовский-на-Дону государственний научно-исследовательский противочумный институт (72) Л.Д.Македонова, Т,А.Кудрякова и В.В.Кадетов (53) 576.858.9(088.8) (56) Шиганова Л.Б. Усовершенствование диагностических холерных монофагов ХДф-3, ХДФ-4, ХДФ-5/Автореф. канд. дис. Саратов, 1982.

Брандзищевскнй !0.В. Сублимация как метод стабилизации холерных фагов/Автореф. канд. дис. Саратов, 1976. (54) СПОСОБ ХРАНЕНИЯ ХОЛЕРНЫХ БАКТЕРИОФАГОВ (57) Изобретение относится к области медицинской микробиологии. Цель изобретения — повышение жизнеспособности и сохранение биологической активности умеренних фагов. Берут 1мл фага 8556 и соединяют с 2 мл защит.ной среды. Защитная среда имеет следующий состав: сахароза, желатина, хлористый кальций, дистиллированная вода. Среду стерилизуют в автоклаве. Препарат разливают в ампулы. Предварительное замораживание осуществляют путем погружения ампул в охлажденный спирт. Производят лиофильное висушивание в течение 2627 ч. Запаивают ампулы и в исследуемых образцах через 24 ч после висушивания определяют количество жизнеспособных корпускул фага, 6,5 — 8,5

Составитель Г.С

Техред А.Кравчу мирнова к

Корректор И.Эрдейи

Редактор А.Огар

Заказ 717/28

Тираж 500 Подписное

BHHVJIH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35,Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

1 1

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в.частности к способам хранения умеренных холерных фагов.

Цель изобретения — повышение жизнеспособности и сохранение биологической активности умеренных фагов, Пример 1 Бер!т 1 мл фага

8556 с титром 2,2 10 БОЕ/мл, соединяют с 2 мл защитной среды (соотношение 1:2), Состав защитной среды, г: сахароза ХЧ 99, желатина 14; хлористый кальций 6,5; дистиллированная вода — остальное (до л), Среду стерилизуют в автоклаве при

110 С в течение 30 мин. Препарат разливают в 5-кубиковые ампулы по 2мл.

Предварительное замораживание осуществляют путем погружения ампул в спирт, охлажденный до -55 на 3 мин, непосредственно перед сушкой. Лиофильное высушивание осуществляют в вакуум-сушильной установке L7,-9С в течение 26 ч. При этом температуру повышают постепенно в течение 3,ч от -50 до -10 С и в течение 13 ч— от -10 до +25 C Посушивают препарат а течение 8-9 ч при +25 С. Первые два часа сублимацию проводят без подогрева. Затем включают подогрев со скоростью 5 град в час. Запаивают ампулы с осушенным стерильным воздухом. В исследуемых образцах через 24 ч после высушивания определяют количество жизнеспособных корпускул фага. Ампулу вскрывают, таблетку растворяют в 2 мл дистиллированной воды. Титр фага после лиофилиэации !,7.10, что составляет

77,2Х активных фаговых корпускул от исходного жидкого препарата фа— га (согласно известному способу сохраняется 167 корпускул бактериофага), Пример 2. Берут 1 мл фага

8556 с титром 2,2 10 БОЕ/мл, соединяют с 2 мл защитной среды, состоящей из г: сахароза 100; желатина

15; хлористый кальций 7,5; дистиллированная вода — остальное, Препа296578 2 рат разливают в 5-кубиковые ампулы по ? мл. Предварительное замораживание осуществляют путем погружения ампул в спирт, охлажденный до -60 С на 4 мин. Лиофильное высушивание осуществляют в течение 27 ч. Титр фага после лиофилиэации 1,65. 10

Пример 3. Берут 1 мл фага

10 8556 с титром 2,2.10 БОЕ/мл, соединяют с 2 мл защитной среды, состоящей из, г/л: сахароза 101, желатина

16;, хлористый кальций 8,5; дистиллированная вода — остальное. Препарат

f5 разливают в 5-кубиковые ампулы по

2 мл. Предварительное замораживание осуществляют путем погружения ампул в спирт, охлажденный до -650, на

4 минуты. Лиофильное высушивание и определение активности Aara осуществляют аналогично примеру 1. Титр фаб га после лиофилизации 1,7 10 о р м у л а изобретения

Способ хранения холерных бактериофагов путем их смешения с защитной средой, содержащей дистиллированную воду, желатину и сахарозу, предвари30 тельного замораживания с последующим сублимированием и досушиванием целевого продукта, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения жизнеспособности и сохранения биологической активности умеренных фагов, защитная среда дополнительно содержит хлористый кальций при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:

Сахароза 99-101

Желатина 14-16

Хлористый кальций

Дистиллированная вода Остальное бактериофаг смешивают с защитной средой в соотношении 1:2, предварительное замораживание осуществляют в течение 3-4 мин, а высущивание проводят в течение 26-27 ч.

Сй