Питательная среда для культивирования базидиальных грибов- продуцентов комплекса ферментов
Изобретение относится к биотехнологии , а именно к питательным средам для культивирования базидиальных грибов - продуцентов комплекса ферментов , осуществляющих деструкцию лигноцеллюлозного сырья. Целью изобретения является повышение активности монофенол-монооксигеназы и пероксидазы при сохранении целлюлозной активности . Сущность изобретения заключается в том, что питательная среда, содержащая минеральные соли и воду, содержит в качестве источника углерода лиофилизированный сок зеленой массы люцерны в количестве 1-2 мас.%. Изобретение позволяет более чем в 2 раза повысить активность монофенолмонооксигеназы и пероксидазы. 4 табл. (Л
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
GOLDA ËÈÑÒÈ×ÅÑÊÈÕ
РЕСПУБЛИК ((9) SU (II) (5И 4 С 12 N 1/14, 9/00// (С 12 N 1/14, С 12 R l:645) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ: у с
= 1
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
И1,1;
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTVM (21) 3971643/31-13 (22) 28.10.85 (46) 23.07.87. Бюл. У 27 (71) Институт ботаники им. Н.Г.Холод- ного и Центральный научно-исследовательский и проектно-технологический институт электрификации и механизации животноводства Южной эоны СССР (72) К.М.Сытник, Ю.Ф.Новиков, Н.И.Даниляк, B,Ä.Ñåìè÷àåýñêèé, М.N.Êîãàíîâ, Н.Н.Новиков, И.А.Дудка и А.С.Бухало (53) 577 15(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР
11(1218673, кл. С 12 N l/26, 1985.
Авторское свидетельство СССР
1(1(874755, кл. С .12 N 9/14, 1981.
Авторское свидетельство СССР
11 1068477> кл. С 12 N 9/00, 1984.
Авторское свидетельство СССР
У 1084299, кл. С 12 N 9/02, 1984. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИ-
РОВАНИЯ БАЗИДИАПЬНЬ1Х ГРИБО — ПРОДУ-1
ЦЕНТОВ КОМПЛЕКСА ФЕРМЕНТОВ (57) Изобретение относится к биотехнологии, а именно к питательным средам для культивирования базидиальньх грибов — продуцентов комплекса Аерментов, осуществляющих деструкцию лигноцеллюлозного сырья. Целью изобретения является повыщение активности моноАенол-монооксигенаэы и пероксидазы при сохранении целлюлозной активности. Сущность изобретения заключается в том, что питательная среда, содержащая минеральные соли и воду, содержит в качестве источника углерода лиоАилизированный сок зеленой массы люцерны в количестве 1-2 мас.Х.
Изобретение позволяет более чем в
2 раза повысить активность монофенолмонооксигеназы и пероксидазы. 4 табл.
1 1325
Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к способам получения ферментов, осуществляющих деструк. цию лигноцеллюлозного сырья, и может быть использовано в производстве Аерментов, применяемых н целлюлозно-бумажной, деревообрабатывающей, пищеной промышленности, а также н сельском хозяйстве.
Пель изобретения — повьппение ак- 10 тинности моноАенол-монооксигеназы и пероксидазы прн сохранении целлюлозной активности.
Питательная среда дпя культивирования базидиальньlx грибов — продуцентон комплекса ферментов, обладающего монофенол-монооксигеназной, пероксидазной и целлюлозной активностью, содержит н качестве источника углерода лиофилизиронанный сок зеленой массы люцерны, Состав лиофилизированного сока люцерны приведен в табл. 1, При этом состав питательной среды следующий, г/л: однозамещенный фосфат аммония 1,8-2,0; однозамещенный фосфат калия 0,5-0,6; днузамещенный фосфат калия 0,3-0,4; сульфат магния
0,4-0,5; лиофилизированный зеленый сок люцерны 10-20.
Пример 1, Готовят питательнь|е среды следующего состава, г: NH 2,0; КН РО, 0,6; К,НРО 0,4; Mgsu 0,5; лиофилизированный зеленый сок люцерны 5,0-40,0; вода водопронодная — 35 до 1,О л. Указанные питательные среды готовят путем последовательной загрузки всех компонентов при постоянном перемешивании, помещают н колбу Эрлен- 40 мейера емкостью 0,5 л (по О,1 л среды на колбу ) и стерилизуют острым паром 30 мин при 0,1 MIla. Затем колбы охлаждают до комнатной температуры и засевают чистой культурой высшего бази- 45 диального гриба Pleurotus ostreatus (Jacg.:Fr) Kumm И1 Б -1300. Культивирование проводят н стационарных условиях методом поверхностной пленки при ?8+1 С в течение 7 сут. 50 В табл. 2 приведены результаты измерений активностей монофенол-монооксигеназы (КФ 1,14.18,1), пероксидазы (КФ 1.)1.1,7), эндо-l,4-Р-глюканаэы (КФ 3.2.1.4), способности комплек- 55 са ферментов к осахаринанию фильтровальной бумаги (Ф1 †активнос) и растворимой карбоксиметилцеллюлоэы 07Г 0,3-0,4 0,4-0,5 люцерны 10-20 KMII-активность) в культуральных фильтратах, полученных после отделения мицелия и остатков твердого субстрата. Пример 2. Готовят питательные среды следующего состава, г: NH Н PO 1 8; KH РО4 0,5; К НР04 0 3; MgSOq 0,4; лиоАилиэированный зеленый сок люцерны 5-40; вода водопроводная до 1 и. В качестве продуцента ннеклеточных ферментов используют высший баэидиальный гриб Funalia trogii (Berk.) Bond ° et Sing. 0146 ° Результаты, полученные для 7-суточной культуры, приведены в табл. 3. Пример 3. Состав питательных сред и условия культивирования аналогичны примеру I. Активности внеклеточных ферментов Coriolus hirsutus (Fr.) Quel. 069, Stereum purpureum (Pers,) Fr. 030, Coriolus versicolor (Fr.) Quel. 087, . Fomes fomentarius (Fr.) Kickx. Ol17 при культивировании и на среде с зеленым соком люцерны приведены в табл ° 4. Изобретение позволяет более чем в 2 раза повысить активность монофенол-монооксигеназы и пероксидазы. Формула и э о б р е т е н и я Питательная среда для культивирования базидиальных грибов — проду-. центов комплекса ферментов, осуществляющих деструкцию лигноцеллюлозного сырья, содержащая источник углерода, однозамещенный фосфат аммония, однозамещенный фосфат калия, двузамещенный фосфат калия, сульфат магния и воду, отличающаяся тем, что, с целью поньппения активности монофенол-монооксигеназы и пероксидаэы при сохранении целлюлозной активности, н качестве источника углерода и стимулятора биосинтеза среда содержит лиофилизированный сок зеленой массы люцерны при следующем соотношении компонентов, г/л воды: Однозамещенный фосфат аммония 1,8-2,0 Однозамещенный фосфат калия 0 5-0,6 Днузамещенный АосАат калия СульАат магния ЛиоАилизиронанный зеленый сок 1325071 Таблица 1 Содержание, 7. на сухую массу Компоненты 93,8-95,7 24,3-25,1 15,3-15,5 1,91-1,94 2,76-2,77 l 8 ° 40 19!0 50,80-51,90 5!90 5.99 4,64-4,66 Сухое вещество Сырой протеин Белок Сырой жир Сырая клетчатка Сырая зола БЭВ Сахара Кальций Фосфор 0,26-0,27 0,30-0,32 4,50-4,52 Натрий 90, 18-91, 34 мг/кг 164,0-168,0 ед/г Каротин Сапонины Хлорофилл (суммарный) 14,2-14,3мг/кг Таблица 2 Фермент Субстрат Единицы изме- Показатели при концентрации рения зеленого сока, 7. О!5 1 ° 0 2ьО 4эО Мо нофе нолмоноок си ед/л Бензидин 140,0 140,0 122,2 112,0 140,0 128,8 70,0 геназа Пероксидаза 70,0 Эндо-1,4- глюканаза Х деполимеризации 22 ° 5 22 5 20 ° 8 16,6 28,3 25,9 20,0 мг Х глюкозы КИЦ-активность 13,9 ФБ-активность Фильтровальная бумага 117,5 80,4 80,0 1325071 Единицы изме- Показатели при концентрации рения зеленого сока, Х Субстрат Фермент ед/л 43 1 Бе изидин 43,7 Пероксидаза мг 7. глюкозы 27,8 36,8 35,5 35,0 Фильтроваль" ная бумага 6,2 8,8 Таблица 4 Фермент Субстрат Coriolus hirsutus (Fr.) Quel. 069 ед/л 14,4 Бенэидин 12 7 14 7 15 1 геназа 13,3 18,5 18,0 17,6 21,2 21,0 20,2 25,0 мг 7. глюкозы 16,1 l2 3 12,2 10,6 ФБ-активФильтров альная бумага ность 6,0 22,7 15,Я Stereum purpureum (Pers) Fr. 030 Монофенол-монооксигенаэа Бензидин ед/л 14,0! 0,0 18,6 12,2 Пероксидаза Моноф гнолмонооксигеназа Эндо- 1,4-Jглюк анаэ а КМЦ-актив— ность ФБ-активность МонофенолмонооксиПероксидаэа Эндо-1, 4-Pглюканаэа КИЦ- ак тивность Х деполимеризации Единицы измерения 7. деполимеризации Таблица 3 0,5 1,0 2,0 4,0 50,0 108,0 106,6 50,9 1)2,0 1 10,6 l5,6 56,3 40,6 40,0 Показатели при концентрации зеленого сока, 7 0,5 1,0 2,0 4,0 14,7 14,5 17,5 18,0 1325071 Продолжение табл.4 Субстрат Фермент Эндо- l, 4-P— глюканаэа 17,3 21,2 22,0 23,0 мг Е глюкозы 14, 1 9,1 9,5 9,0 2,4 Cnrio1us versicolor (Fr.) Quel. 087 Монофенол-монооксигенаэа ед/л 14,5 Бенэидин 17,5 Пероксидаза Эндо- l, 4-P— глюк анаэ а 9,6 9,6 12,5 10,9 16,7 22,0 20,0 мг Ж глюкозы 10 6 2,4 26,2 14,4 3,9 Гошев fomentarius (Fr.) Kickx. 0117 Монофенол-монооксигеназа ед/л 13,7 23,3 27,3 Бензидин 39,0 24,4 18,0 25,5 Пероксидаза Эндо-1 4- глюканаза 18,0 7,3 11,0 мг Х ггллююккооэзы ы 1!44,1 7,9 2,2 26 О. ВНИИПИ Заказ 3021/24 "Гираж 499 Подписное Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 КМЦ-активность ФБ-активность КМЦ-активность ФБ"активность КМЦ-активность ФБ-активность Фильтровальная бумага Фильтровальная бумага Фильтровальная бумага Единицы измерения 7 деполимернзации Е деполимеризации Х деполимеризации Показатели при концентрации зеленого сока, X 0 5 1,0 2,0 4,0 6,7 13,3 18,9 8,5 17,4 18,9
