Способ выявления тропизма стрептомицетов к водоросли

 

Изобретение относится к области микробиологии, экологии и физиологии микроорганизмов. Целью изобретения является отбор стрептомицетов для образования устойчивых консорциумов. Суть изобретения заключается в том, что стрептомицет высеивают на твердую питательную среду в чашку Петри, на поверхность среды раскладывают 4 мембранных фильтра с диаметром пор 1,5 мкм, на 2 фильтра наносят суспензию водоросли с концентрацией 10 кл/мл, оставшиеся 2 фильтра не содержат водоросли (контроль). После инкубации фильтры снимают с агара, окрашивают и под микроскопом просчитывают длину мицелия стрептомицета. О положительном тропизме стрептомицета к водоросли судят по отношению длины мицелия на фильтре с водорослью к длине мицелия на фильтре без водоросли (показатель тропизма К). Наличие положительного тропизма регистрируют при KY 1, отсутствие взаимодействия - при . 2 табл. SS сл

СО(ОЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (!!) А1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К д ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3977179/31-13 (22) 06.09.85 (46) 30.04.87. Бюл. Е 16 (71) МГУ им. М.В.Ломоносова (72) А.А.Лихачева, А.Н.Эфрон, Г.М.Зенова и Л.В.Калакуцкий (53) 576.333:63 1.466.3:63 1.466.1 (088.8) (56) Звягинцев Д.Г,, Зенова Г.М., Михайлов В.Д. Динамика численности и структура видовых популяций актиномицетов-антагонистов в почве. Микробиология", 1982, вып. 3, с. 520-522.

5jablad R.R., Ifitchel Е . Chemotactic responses in vibrio algipoliticus

to algal extracellular products".

"Canad. J. Nicrobio1", 1979, т. 9, р. 964-967. (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ТРОПИЗМА СТРЕПТОМИЦЕТОВ К ВОДОРОСЛИ (57) Изобретение относится к области микробиологии, экологии и физиологии (Ю 4 С 12 N 1/00; А 01 Н 13/О();

С 12 N 1/14 микроорганизмов. Целью изобретения является отбор стрептомицетов для образования устойчивых консорциумов.

Суть изобретения заключается в том, что стрептомицет высеивают на твердую питательную среду в чашку Петри, на поверхность среды раскладывают 4 мембранных фильтра с диаметром пор

1,5 мкм, на 2 фильтра наносят суспензию водоросли с концентрацией

10 кл/мл, оставшиеся 2 фильтра не содержат водоросли (контроль). После инкубации фильтры снимают с агара, окрашивают и под микроскопом просчитывают длину мицелия стрептомицета.

О положительном тропизме стрептомицета к водоросли судят по отношению длины мицелия на фильтре с водорослью к длине мицелия на фильтре без водоросли (показатель тропизма К ). Наличие положительного тропизма регистрируют при Кт> 1, отсутствие взаимодействия — при К 1. 2 табл.

1306948

Изобретение относится к микробиологии, а именно к разделу экологии и физиологии микроорганизмов.

Как известно, в естественной среде обитания микроорганизмы находятся в тесном контакте с другими организмами, поэтому в последние годы придается особое значение изучению взаимодействия микроорганизмов.

Целью изобретения является отбор стрептомицетов для образования устойчивых кансорциумов.

Сущность способа состоит в том, что мицелий стрептомицета, развивающийся на голодном агаре, проникает через поры мембранного фильтра, на котором находятся клетки водоросли.

Предлагаемый способ предусматривает следующие параметры подготовки инокулята стрептомицетов для посева на голодный агар.

1) Стрептомицеты выращивают на среде, содержащей овсяный отвар. Эта среда является наиболее подходящей для образования воздушного мицелия культурами стрептомицетов, а приготовление инокулята стрептомицетов в виде моноспоровой суспензии обусловлено необходимостью получения на голодном агаре равномерного газона.

2) Для получения газона достаточной плотности используют суспензию

9 в концентрации 10 спор/мл, 3) Диаметр пор фильтра составляет

1,5 мкм. Выбранный диаметр пор мем- 35 бранных фильтров обусловлен тем, что через поры могут проникать гифы мицелия всех культур стрептомицетов и практически не проникают клетки испытанных водорослей. 40

Клетки водоросли наносят на фильтр в виде суспензии, содержащей 10 кл/мл для создания достаточной их концентрации на фильтре.

При подборе условий культивирования руководствовались созданием условий освещения и температуры, оптимальных для роста культур стрептомицетов и водоросли. Срок инкубации 7-10 сут обусловлен границами достижения зрелости культур стрептомицетов и водоросли. При разработке методов количественного учета гиф стрептомицетов, проникающих через фильтр, был произведен подбор красителей: использовали сенциановый фиолетовый, метиленовый синий, дианиловый голубой, карболовый эритрозин. Остановились на карболовом эритрозине, так как гри окраске этим красителем наиболее контрастно выглядели на мембранном фильтре живые гифы стрептокицета.

Пример 1. Моноспоровую суспензию актиномицета высевают газоном на голодный агар в чашки Петри, сверху помещают мембранные фильтры, на них наносят по одной капле суспензии клеток зеленой водоросли хлореллы, контрольный фильтр остается без водоросли, инкубацию проводят в люминос гате при о ос|зещенности 12 тыс. лк и 30-33 С, после инкубации фильтры снимают с агара, OKpallIHBaloT карболовым эритрозином, высушивают, осветляют и просчитывают под микроскопок длину мицелия стрептокицета.

Результаты приведены в табл. 1.

Данные табл. 1 четко показывают присутствие положительного т эопизма у культур стрептокицетов Streptomyces

griseolus штамм 140 и S.pluricolorescens штамм 18 к водоросли Chlorella

vulgaris штамм 234 и отсутствие тропизма у культур стрептомицетов

S.chrysomallus штамм К 63 и S.aureofaciens штамм 42 к водоросли Chlorel9

la vulgaris штамм 234.

Пример 2. Условия постановки эксперимента те же, что и в примере 1, с той разницей, ч о используется сине-зеленая водоросль Aphanocapsa

thermalis штамм 14. Данные приведены в табл. 2, Данные табл. 2 показывают, что с помощью предлагаемого способа достаточно надежно выявляется присутствие тропизма у культур стрептомицетов

Streptomyces griseolus штамм 140, S.pluricolorescens штамм 18 >1>

S.chrysomallus штамм К 63, S.aureofaciens штамм 429 и отсутствие тропизма у S.àlhînigår штамм 46 к водоросли Aphanocapsa thermalis штамм 14.

Таким образом, предложенный способ применяют для определения тропизма мицелиальных организмов (стрептомицетов) к водорослям, При этом предложенный способ является перспективным для решения биотехнологических задач, направленных на выявление специфичности кицелиальных организмов при взаимодействии автотрофов и гетеротрофов в водной среде обитания и почве и создание устойчивых консорциумов.

Т а блица 1

Длина мицелия (см) на фильтре К

Присутствие тропизма

Культура стрептомицетов

Chlorella vulgaris шт 234

Без водоросли

Streptomyces (S)

grisolus штамм 140

1, 5 Имеется

2 13 - 72

314+25

S. p lur ico lore scens штамм 18 M

197+ 96

1,3 Имеется

250+25

S.Chrysomallus штамм К 63

0,9 Отсутствует

2930+ 100

2660+430

S.aureofaciens штамм 42

0,9 Отсутствует

1080+110

1020+140

Таблица2

Длина мицелия (см) на фильтре

Культура стрептомице тов

Присутствие тропизма т

Aphanocapsa

thermalis штамм 14

Без водоросли

Streptomyces

griseolus штамм 140

7547+72

1,12 Имеется

8522>90

S.pluricolorescens штамм 18 М

686+60

989+184

1,41 Имеется

S.chrysomallus штамм К 63

110+55

1,90 Имеется

210+50

S.aureofaciens штамм 42

364 =216

137т54

2,65 Имеется

S.alboniger штамм 46

440+50

15660+50

0,02 Отсутствует

3 13069 формула изобретения

Способ выявления тропизма стрептомицетов к водоросли, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью отбора стрептомицетов для образования устойчивых консорциумов, осуществляют посев стрептомицета на твердую питательную среду, раскладывают на засеянную поверхность среды мембранные фильтры, на которые наносят суспепзию водоросли и инкубируют, о степени тропизма судят по отношению (К ) длины мицелия стрептомицета на фильтре с водорослью к длине мицелия на контрольном фильтре без водоросли, при этом при

Кт 1 судят о положительном тропизме.