Штамм вируса virus infections canine hepatitis для контроля иммуногенной активности вакцин против вирусного гепатита плотоядных

 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и предназначается для контроля иммуногенной активности вакцин против вирусного гепатита плотоядных (собак, песцов и лисиц). Целью изобретения является штамм вируса инфекционного гепатита плотоядных, обладающий стабильной вирулентностью для тхорзофреток и естественно-восприимчивых животных, пригодный для использования в качестве контрольного при оценке иммуногенной активности вакцин против вирусного гепатита плотоядных. При внутрибрюшинном способе заражения животных культуральной расплодкой штамма вируса Virus infections Canine Hepatitis ВГНКИ 15 в дозе 4×10^5,0 ТЦД_50/мл клинические признаки заболевания проявляются у щенков собак в возрасте 2-4 месяца на 3 день, а у тхорзофреток на 15-20 день.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и предназначается для контроля иммуногенной активности вакцин против вирусного гепатита плотоядных (собак, песцов и лисиц). Целью изобретения является штамм вируса инфекционного гепатита плотоядных, обладающий стабильной вирулентностью для тхорзофреток и естественно-восприимчивых животных, пригодный для использования в качестве контрольного при оценке иммуногенной активности вакцин против вирусного гепатита плотоядных. Для этого был получен штамм вируса инфекционного гепатита плотоядных, депонированный в коллекции микроорганизмов Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов МСХ СССР, регистрационный номер 15. Исходный штамм выделен в 1984 г из печени восточно-европейской овчарки 2,5 лет, павшей с проявлением характерных для вирусного гепатита клинических и патолого-анатомических признаков. Культуральную вируссодержащую расплодку выделенного штамма изучали в реакции нейтрализации в культуре клеток ПЭС, реакции диффузионной преципитации в агаровом геле и реакции непрямой гемагглютинации с позитивными сыворотками против вирусного гепатита, полученными из института вирусологии им. Д.И.Ивановского и положительной сывороткой против вирусного гепатита собак Государственного контрольного института ветеринарных препаратов ГДР. Принадлежность выделенного штамма к вирусу гепатита плотоядных подтверждена прямым воспроизведением болезни на щенках собак и результатами электронной микроскопии. Предлагаемый штамм вируса гепатита плотоядных обладает следующими свойствами. Морфологические свойства. Под электронным микроскопом зрелые вирионы штамма имеют форму икосаэдра размером 76±3 нм. В клетках печени щенков собак, зараженных штаммом вируса, образуются зозинофильные внутриядерные тельца включения тельца Рубарта. Культурально-биологические свойства. В процессе изучения штамма провели 20 пассажей в перевиваемой культуре клеток почек щенят собак МДСК, первично-трипсинизированной культуре клеток ПЭС, что позволило получить штамм со стабильными культурально-биологическими свойствами. Штамм хорошо размножался и накапливался с титром инфекционной активности 10^5,0 ТЦД_50/мл в перевиваемой культуре клеток МДСК и до 10^4,0 ТЦД_50/мл в первично-трипсинизированной культуре клеток ПЭС. В прививаемой культуре клеток МДСК цитопатическое действие штамма вируса проявлялось в набухании клеток, образовании гроздевидных скоплений с последующим появлением пустот в монослое. В первично-трипсинизированных культурах клеток почек щенят собак и поросят деструктивное действие вируса выражалось в утрачивании границ между отдельными клетками в монослое, появлением разрывов с последующим образованием конгломератов и островков. Вирулентность. При внутрибрюшинном способе заражения животных культуральной расплодкой штамма в дозе 4х10^5,0 ТЦД_50/мл клинические признаки заболевания появлялись у щенков собак в возрасте 2-4 мес на 3 день, а у тхорзофреток на 15-20 день. В результате пассирования через организм интактных щенков собак не происходило уменьшения продолжительности инкубационного периода. При внутрибрюшинном способе заражения щенят собак летальная доза составляла 10^5,0 ТЦД_50/мл; при внутривенном 10^2,5 ТЦД_50/мл и при внутримышечном 6х10^5,0 ТЦД_50/мл. Для тхорзофреток летальная доза при внутримышечном способе заражения составляла 3х10^5,0 ТЦД_50/мл. У экспериментально зараженных щенков на 3 день происходит выделение вируса из крови, а на 6-7 день появляются характерные для болезни Рубарта клинические признаки. Штамм является апатогенным при испытании на других видах лабораторных и сельскохозяйственных животных. Для контроля иммуногенной активности вакцин против инфекционного гепатита плотоядных использовали дозу 2 х 10^5,0 ТЦД_50/мл при заражении щенков собак в возрасте 2-4 мес. Эта доза определена как разрешающая для собак и скорректирована с заражающей дозой, используемой при выпуске аналогичных биопрепаратов фирмами Франции, США и ЧССР. Активность штамма ВГНКИ вируса инфекционного гепатита плотоядных проверена в следующих реакциях: реакции диффузионной преципитации в агаровом геле, против позитивных сывороток, а также с сыворотками больных гепатитом собак и лисиц; реакции связывания комплимента, реакции нейтрализации в культуре клеток и реакции непрямой гемагглютинации с эритроцитами человека 0 группы. Выделенный штамм антигенно родственен изолятам вируса инфекционного гепатита плотоядных, имеющимся в коллекции микроорганизмов ВГНКИ ветпрепаратов. Штамм сохраняет активность при 37^оС в течение 9 дней, при 20-22^оС 45 сут, при (+2)-4^оС 280 дней, при -40^оС более года. Лиофилизированный со стабилизирующими добавками на основе кровезаменителей в соотношении 1:1 штамм хранится при этих же температурах более продолжительное время. Примеры использования. Штамм вируса гепатита плотоядных был использован в качестве контрольного при оценке иммуногенной активности следующих биологических препаратов против инфекционного гепатита плотоядных. Поливалентной вакцины "Пентадог" против чумы, инфекционного гепатита, лептоспироза и бешенства плотоядных. С этой целью 6 интактных к вирусу гепатита плотоядных щенков собак вакцинируют указанной вакциной в дозе 1,0 мл, а через 21 день всех привитых и 4 контрольных животных заражают внутрибрюшинно штаммом в дозе 2˙10⁵ ТЦД_50/мл. При последующем наблюдении отмечена устойчивость к заражению вакцинированных щенков и гибель невакцинированных животных. Благодаря использованию штамма для контроля иммуногенной активности вакцины биологический препарат рекомендован для применения. Проведен контроль качества вакцины "Санвак РИЛ" против чумы, гепатита и лептоспироза собак. На основании результатов контрольного заражения с использованием предлагаемого штамма показана высокая иммуногенная активность биопрепарата и разрешено использование ее в стране. Экспериментальной вакцины против инфекционного гепатита плотоядных. На основании результатов контрольного заражения использовали штамм. Установлено, что подкожное введение 1,0 мл вакцинного штамма, предохраняет собак от заболевания при последующем внутрибрюшинном заражении.

Формула изобретения

Штамм вируса VIRUS INFECTIONS CANINE HEPATITIS ВГНКИ 15 для контроля иммуногенной активности вакцин против вирусного гепатита плотоядных.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Номер и год публикации бюллетеня: 11-2002

Извещение опубликовано: 20.04.2002        

---