Способ получения убихинона q 9

 

Изобретение относится к микробиологии и касается получения убихинона Q, используемого в медицине. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта. Сущность способа сводится к тому, что фототрофные бактерии выращивают в питательной среде Пфеннига, полученную биомассу лиофильно высушивают, затем омьшяю г. После омьшения целевой продукт экстрагируют органическим растворителем, промывают и высушивают. Выход убихинона Q,j 1,8-2,6 мг/г сухих клеток. 01 CAS 00

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

А1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3973993/31-13 (22) 31. 10.85 ,. (46) 23.11.87. Бюл. Р 43 (71) Институт почвоведения и фотосинтеза AH СССР (72) О.Ф.Корсунский (53) 615.7(088. 8) (56) Воробьева Л,И, Микробиологический синтез витаминов.-N.: ИГУ, !982, с. 151-165.

Авторское свидетельство СССР

М 401180, кл. С 12 Р 7/66, 1971.

„„SU„, 1353808 (бу 4 С 12 Р 7/66//(С 12 Р ?/66, С 12 R 1:01) (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УБИХИНОНА Q (57) Изобретение относится к микробиологии и касается получения убихинона Q9, используемого в медицине.

Цель изобретения — повышение выхода целевого продукта. Сущность способа сводится к тому, что фототрофные бактерии выращивают в питательной среде Пфеннига, полученную биомассу лиофильно высушивают, затем омыляют.

После омыления целевой продукт экстрагируют органическим растворителем, промывают и высушивают. Выход убихинона Qg 1,8-2,6 мг/г сухих клеток.

1 1353808 2

ВНИИПИ Заказ 5670/24

Тираж 500

Подписное

Произв.-палигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицине при терапии сердечно-сосудистых заболеваний, заболеваний, связанных с энергетикой клетки, и в научных исследованиях при изучении процессов дыхания и фотосинтеза, фотохимических реакций при фотосинтезе.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта.

Пример i. Убихинон Q> получают из клеток бактерий Rhodopseudomonas viridis ВЬ1. Культуру выращива" ют на среде Пфеннига следующего сос- 15 тава, г/л: NH4С1 0,33, KkI РО 0,33

MgClz 0,33 КС1 0,33 МаНСО 1,50, СаС1 0,33, Na-яблочнакислый 2,0; дрожжевой экстракт 0,01 „ микроэлементы 1 мл, 20

Состав микроэлементов, г/л: ЭДТА

5,0; Ре804 7Н,О 2,0; МпС12 4Н,О 0,03, СаС1 2Н О 0,2; NiC1 ° 6Н О 0,02;

ZQS04 7Н О О, 1; Н ЬО, О, 3, CUC1 р О 0,01 1 »а Иа 4 2Н 0 0, 03 среды 6,0. Выращивание проводят на свету (20x10 эрг/см с) при 30 C.

Полученную биомассу отделяют от культуральной жидкости с помощью сепаратора и лиофильно высушивают. Затем проводят омыление — 1 г сухих клеток помещают в колбу с мешалкой, приливают 10 мл воды, 0 5 г пирогаллала в 15 мл этанола и 5 мл ?5%-ного

:раствора КОН (при использовании сырых З клеток берут навеску 5 г и добавляют

5 мл воды). Смесь кипятят с обратным шариковым холодильником в течение

25 мин при перемешивании в токе аргона, затем охлаждают на бане =o льдом. Добавляют 15 мл воды и экстрагируют петролейным эфиром, гептаном или гексаном три раза па 50 мл, Водную фазу отделяют с помощью делительной воронки. Объединенный: экстракт желтого цвета промывают два раза водой до нейтральной реакции и высушивают над сульфатом аммония.

Далее экстракт отфильтровывают, количественно переносят в колбу для выпаривания и упаривают под вакуумом при 45 С.

Сухой красно-оранжевый осадок растворяют в 2 мл смеси для элюции и наносят на колонку (1,6х15. см) с

65 водяной рубашкой. Хроматографию убихинона проводят на окиси алюминия для тонкослойной хроматографии или окиси алюминия II степени по Брокману. Элюцию проводят смесью петролейный эфир (т.кип. 40-70 С) — хлороформ — диэтиловый эфир (85:10:5), объем 100 мл. Францию в виде явкооранжевой полосы с R 0,55, содержащую убихинон (, отделяют и упаривают.

Рехраматографию проводят либо на пластинах силуфол, либо с помощью второй колонки с окисью алюминия в системе петралейный эфир — диэтиловый эфир — ледяная уксусная кислота (90:30: 1). Элюат упаривают и определяют количество убихинона весовым методом или спектрофотометрически по поглощению спиртового раствора при 275 нм, используя малярный коэффициент экстинкции Е = 14,600 для кюветы с длиной оптического пути 1 см.

Выход убихинона Qq 2,6 мг/1 r сухих клеток.

П р и м e p 2. Убихинон Q9 получают при выращивании пурпурной бактерии Rhodopseudomonas sulfoviridis

Pi на среде Ормерода с добавлением

0,01% дрожжевого экстракта, 0,05% тиосульфата и 0,2% лактата натрия.

Убихинон вьделяют из полученных клеток Rh. sulfoviridis Р1 аналогична примеру

Выход 0,» 1,8 мг/1 r сухих микробных клеток.

Использование предлагаемого способа выделения убихинона обеспечивает по сравнению с известным в 1020 раз (0,1,-0,2 мг/г сухих клеток), а па сравнению с другими известными— в 100 раз увеличение выхода убихинона О .

Формула изобретения

Способ получения убихинана О4, включающий культивирование штаммапрадуцента, отделение биомассь:, ее амыление с последующим вьделением у-бихинана из неомыленной фракции, отличающийся тем,что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве прадуцента используют штамм Rhodopseudomona ч1ridis BLI или штамм Rhoclopseudomonas sulfoviridis Р1.