Способ получения лейкоцитов из крови

 

Для повышения выхода жизнеспособности лейкоцитов осадок крови после отделения плазмы обрабатывают 0,12-0,15%-ным раствором метилцеллюлозы на 0,9%-ном растворе хлористого натрия в соотношении 1:2,5-3 при температуре 25-30^oС. Выход лейкоцитов 86-90%, количество оставшихся эритроцитов на 1 лейкоцит 2-6.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для получения лейкоцитов при производстве интерферона. Цель изобретения повышение выхода жизнеспособных лейкоцитов за счет обработки крови или ее фракций 0,12-0,15%-ным раствором метилцеллюлозы в соотношении 1:2,5-3,0 при 25-30^oС. Примеры реализации способа. Пример 1. Приготавливают 6 л 0,12%-ного раствора водорастворимой метилцеллюлозы на 0,9%-ном растворе хлористого натрия. Раствор стерилизуют в автоклаве при 0,5-0,6 атм в течение 30-35 мин и охлаждают до (26±1)^oС. Донорскую кровь в объеме 4 л во флаконах центрифугируют при 1500 об/мин в течение 20 мин. Отсасывают плазму, а осадки крови в объеме 2 л переносят в бутыль и добавляют 6 л водорастворимой метилцеллюлозы. Соотношение крови с осадителем 1:3,0. Все перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 30-40 мин. После отстоя надосадочную, содержащую взвесь лейкоцитов жидкость отсасывают и центрифугируют при 1500-2000 об/мин в течение 20-25 мин. Недостаточную жидкость сливают, а осадок лейкоцитов суспендируют средой 199 с гепарином и ведут подсчет выхода лейкоцитов, количество эритроцитов на один лейкоцит. Выход лейкоцитов в данном примере составляет 88% а количество эритроцитов 4 на 1 лейкоцит, что позволяет считать лейкоциты чистыми и не требует использования гемолитика. Пример 2. Приготавливают 5 л 15%-ного раствора водорастворимой метилцеллюлозы на 0,9% растворе хлористого натрия. Раствор стерилизуют в автоклаве при 0,5-0,6 атм в течение 30-35 мин и охлаждают до (29±1)^oС. Донорскую кровь в объеме 4 л во флаконах центрифугируют при 1500 об/мин в течение 20 мин. Отсасывают плазму, а осадки крови в объеме 2 л переносят в бутыль и добавляют 5 л раствора метилцеллюлозы (соотношение крови с осадителем 1:2,5), перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 30-40 мин. После отстоя надосадочную жидкость, содержащую взвесь лейкоцитов, отсасывают и центрифугируют при 1500-2000 об/мин в течение 20-25 мин. Надосадочную жидкость сливают, а осадок лейкоцитов суспендируют средой 199 с гепарином и ведут подсчет выхода лейкоцитов и количество эритроцитов на один лейкоцит. Выход лейкоцитов в данном примере составил 90% а количество эритроцитов на один лейкоцит не превышало 5. Интерферон, получаемый на лейкоцитах, выделенных из донорской крови или ее фракций, полностью соответствует всем требованиям, предъявляемым к человеческому лейкоцитарному интерферону. Выход лейкоцитов: по предлагаемому способу 86-90% по известному способу 35-40% Количество оставшихся эритроцитов на 1 лейкоцит: по предлагаемому 2-6, по известному способу 6-8.

Формула изобретения

Способ получения лейкоцитов из крови путем обработки пробы крови или ее фракций осадителем, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, обработку пробы проводят 0,12 0,15%-ной метилцеллюлозой в соотношении 1 2,5 3,0 при температуре 25 30^oС.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Номер и год публикации бюллетеня: 36-2000

Извещение опубликовано: 27.12.2000        

---