Способ определения активности иммунорегуляторных лимфоцитов

 

Изобретение относится к иммунологии . Цель изобретения - упрощение способа. Лимфоциты прогревают при температуре 44-45 С в течение 55- 60 мин и отмывают средой 199. Способ позволяет полностью остановить пролиферацию лимфоцитов и выявить их регуляторную активность.

СОЮЗ СООЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСГ1УБ ЛИК (19) (11) (Ю 4 G 0 N 33 48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ЮТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3916926/28-14 (22) 07.05.85 (46) 07.01.88. Бюл. N 1 (71) Киевский научно-исследовательский институт нейрохирургии и Киевский институт педиатрии, акушерства и гинекологии (72) Н.И.Лисяный, Т.А.Лисяна и Л.В.Курганова (53) 615.375(088.8) (56) Иммунология, 1984, В 5, с. 70. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

ИММУНОРЕГУЛЯТОРНЫХ ЛИМФОЦИТОВ (57) Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения — упрощение способа. Лимфоциты прогревают при температуре 44-45 С в течение 5560 мин и отмывают средой 199. Способ позволяет полностью остановить пролиферацию лимфоцитов и выявить их регуляторную активность.

1364985

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным способам диагностики, которые основаны на иммунологических исследованиях.

Целью изобретения является упрощение способа эа счет ингибиции пролиферации прогреванием.

Пример 1. Лимфоциты, выделенные известным способом иэ крови доно- 10 ра, были разделены на шесть проб по

1,5 10 клеток в 1 мл. Лимфоциты про6 гревали при 42, 45 и 48 С в течение

30, 50, 60 и 75 мин. Жизнеспособность клеток определяли по окрашива- 15 нию 0,17.-ным раствором трипанового синего.

Установлено, что прогревание при о

42 и 45 С лишь незначительно снижает жизнеспособность клеток, тогда как 20 о при прогревании при 48 С уже через

1 ч жизнеспособных клеток было только

247, что свидетельствует о быстрой гибели лимфоцитов. Следовательно прогревание в течение 1 ч при 45 С 25 практически не влияло на жизнеспособность клеток, выявляемую трипановым синим, Изучение пролиферативной способности прогретых в течение 30, 50, 60 3р и 75 мин лимфоцитов при 44-45 С показало, что по мере увеличения времени прогревания уменьшается пролиферативная способность лимфоцитов в присутствии ФГА. При прогревании 50 мин пролиферативная активность ниже, чем при

60 мин, где наблюдается практически полная остановка пролиферации клеток.

Дальнейшее увеличение времени прогрерания (до 75 мин) практически не влия-40 ло на уровень пролиферации клеток, но в то же время отмечено при этой же температуре значительное снижение жизнеспособности клеток, определенных по трипановому синему что свиУ

45 детельствует о неблагоприятном воздействии длительного прогревания ° !

Исследование иммунорегуляторной активности лимфоцитов в зависимости от времени прогревания показало, что добавление прогретых лимфоцитов в дозе 1 10 к тест-системе аллогенных

6 лимфоцитов вызывает максимальное угнетение пролиферации при прогревании в течение 60 мин, тогда как большее (70 мин) и меньшее (50 мин) время обладали нестабильной и значительно менее выраженной ингибирующей активностью, Таким образом, оптимальными условиями прогревания является время, равное 55-60 мин, при 45 С.

Пример 2. Из 10,0 мл крови донора (28 лет) вьщеляли лимфоциты известным способом на градиенте фиколл-верографин и разделяли на три пробы, которые прогревали в течение о

60 мин при 42, 45 и 48 С. После этого лимфоциты отмывали два раза средой

199 и разделяли на 2 равных части: с одной из которых ставили РБТЛ с ФГА для определения пролиферативной активности, а с другой — порцию прогретых лимфоцитов, смешивали с ауто" логичными непрогретыми лимфоцитами и ставили РБТЛ известным способом.

Установлено, что прогревание в течение 60 мин при 42 С значительно снижает пролиферативную активность лимфоцитов, но при 45 С наблюдается практически полная остановка пролиферации даже ниже уровня спонтанной контрольной пролиферации, куда не вводился ФГА. Следовательно, только при о

45 С происходит полная остановка пролиферации лимфоцнтов.

Определение регуляторной активности клеток, прогретых при разных тем-. пературных режимах, показало, что только при 45 и 48 С происходит значительное угнетение пролиферации тест-культуры лимфоцитов, тогда как при 42 С отмечается лишь незначительное угнетение (индекс супрессии

0,26), Прогревание при 48 С неприемлемо из-за высокого процента гибели клеток. Следовательно, прогревание лимфоо цитов при 45 С способно останавливать полностью их,пролиферацию и выявлять их регуляторную активность.

Предлагаемый способ определения активности иммунорегуляторных лимфоцитов значительно более экономичен и более прост в использовании по сравнению с известными способами, где используются R-лучи или митомицин С.

Применение R-лучей для остановки пролиферации клеток требует дополнительного сложного и дорогостоящего оборудования радиационной защиты персонала и окружающих и, следовательно, может быть применен лишь в специальных учреждениях, обладающих этими условиями.

Применение химического ингибитора пролиферации лимфоцитов митомицина С

1364985

Составитель П.Бонарцев

Редактор Н,Гунько Техред Л.Сердюкова Корректор И.Эрдейи

Заказ 6591/37 Тирах 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r.ужгород, ул.Проектная, 4 такке ограничивает использование этого способа, так как это импортный дорогостоящий реактив ограниченного срока хранения.

Использование предлагаемого способа возможно при использовании отечественного оборудования (водяной бани) и доступно всем клиническим лабораториям. 10

Все это позволяет более широко использовать данный способ в клинической практике и при изучении функции иммунорегуляторных лимфоцитов, что способствует более полной и объектив- 16 ной диагностике состояния иммунной системы при различной патологии, включающей иммунодефицитные, инфекционные, воспалительные и аллергические заболевания.

Формула изобретения

Способ определения активности иммунорегуляторных лимфоцитов путем их выделения иэ периферической крови с последующей ингибицией их пролиферативной активности и инкубацией в тест-системе и учетом иммунорегуляторного действия лимфоцитов, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа, ингибицию пролиферативной активности иммунорегуляторных лимфоцитов осуществляют путем их

О прогревания при 44-45 С в течение

55-60 мин.