Способ определения криорезистентности эритроцитов
Изобретение относится к биологии и медицине, может найти применение при низкотемпературном консервировании эритроцитов. Цель изобретения - упрощение и ускорение способа. Для этого эритроциты крови разводят в соотношении 1:1000 физиологическим р-ром. Полученную суспензию смешивают с 0,004 н. НС1 в кювете фотоэлектроколориметра. Каждые 30 с отсчитывают показатели по шкале экстинкции. Измерения ведут до получения двух совпадающих показаний. На основании показателей экстинкции производят расчет количества эритроцитов (%), гемолизированных между двумя отсчетами времени. Затем рассчитывают среднее время гемолиза эритроцитов в 0,004 н. НС1, при его значении 5,0 - 5,6 мин определяют максимум криорезистентности.
C0IO3 СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
А1 (19) (И) (5l)4 G 01 N 33 48 с
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А BTOPCHOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3993779/28-14 (22) 17. 12. 86 (46) 07.05,88. Бюл. Р 17 (71) Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР (72) Л.К.Стусь, Е.А.Гордиенко и В.И.Куракса (53) 612.015 (088.8) (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КРИОРЕЗИСТЕНТНОСТИ ЗРИТРОЦИТОВ (57) Изобретение относится к биологии и медицине, может найти применение при низкотемпературном консервировании эритроцитов. Цель изобретения — упрощение и ускорение способа.
Для этого эритроциты крови разводят в соотношении 1: 1000 физиологическим р-ром. Полученную суспензию смешивают с 0,004 н. НС1 в кювете фотоэлектроколориметра. Каждые 30 с отсчитывают показатели по шкале экстинкции.
Измерения ведут до поЛучения двух совпадающих показаний. На основании показателей экстинкции производят расчет количества эритроцитов {Ж), гемолизированных между двумя отсчетами времени. Затем рассчитывают среднее время гемолиза эритроцитов в
0,004 н. НС1, при его значении 5,0—
5,6 мин определяют максимум криорезистентности.
1394129
Изобретение относится к биологии ,и медицине и может быть использовано при низкотемпературном консервировании эритроцитов.
Целью изобретения является упрощение и ускорение способа оценки криорезистентности эритроцитов.
Способ осуществляется следующим образом.
Эритроциты крови разводят в соот: ношении 1: 1000 физиологическим раст, вором. 2 мл полученной суспензии ,; эритроцитов смешивают с 2 мл 0,004 н, . НС1 в кювете фотоэлектроколориметра.
Каждые 30 с производят отсчет показаний по шкале экстинкции. Измерения ведут до получения двух совпадающих показаний. На основании полученных значений экстинкции производят рас- 20 чет количества эритроцитов (), гемолизированных между двумя отсчетами времени по формуле — 100%, (1) 25
1 с1Н
HО H dt где Но — начальное значение экстинкции, Н„ - конечное значение экстинкции;
dH — изменение экстинкции за 30 с, dt
Среднее время гемолиза эритроцитов в 0,004 í. НС1 рассчитывали по формуле 35
dN — йс, (2) N dt
9 оп где t — - время, отсчитанное от начала
rемолиэа, мин; 40
N,„„ — исходное количество эритроцитов в единице объема пробы (принимается за 1007.) ;
dN — количество эритроцитов, гемолизированных за время dt (7). g5
Пример 1. Из флакона с кровью, взятой на "глюгицире", отбирают эритроциты, разводят их в соотношении 1:1000 физиологическим раствором.
Затем в кювете фотоэлектроколориметра
ФЭК-56M смешивают 2 мл суспензии эритроцитов с 2 мл 0,004 н. НС1. Каждые
30 с производят отсчет показаний при" бора по шкале экстинкции. Затем вычисляют среднее время гемолиза в растворе соляной кислоты
j1 мин (-1, 57.)+1, 5 мин
1007 (-1953)+2 мин 07+2,5 мин 1,57 +
+ 3,0 мин.1,57+3,5 мин 10,37. + .
+4 мин . 17, б +4, 5 мин 16, 97+5, 0 мин 9
15,47+5,5 мин-13, 2К+690 мин 10,37+
+6,5 мин 8,8 +7,0 мин ° 5,17+7,5 мин 292%+8 мин 07) = 5,07 мин.
Ошибка измерения =5% 9 т. е.
5,07 мин + 0,25 мин.
Эритроциты замораживают в контейнерах объемом 10 мл под защитой ограждающего раствора ЦОЛИПК-11 °
После отделения плазмы к эритроцитам добавляют раствор ЦОЛИПК-11 .
После 15-минутной экспозиции эритроцитов с ограждающим раствором контейнер с эритроцитами погружают в ванну с жидким азотом. Оттаивание эритроцитов производят в водяной бане (45 С).
Потери гемоглобина эритроцитами после замораживания-отогрева составляют 5,6+0,67, что свидетельствует о высокой криорезистентности эритроцитов.
Пример 2. Эритроциты донора исследуют аналогично примеру 1. Определяют среднее время кислотного гемолиза эритроцитов t
= — (1, 5 мин ° (-1, 47.) +2, 0 мин х о
09 77+2,5 мин 0,7%+390 мин ° 07 +
+3,5 мин 2, 85Х+490 мин ° 8, б +
+4,5 мин 15%+590 мин-19957+5,5 мин«
«1795%+690 мин ° 13907+695 мин ° 11 8%+
+7,0 мин 9,07+7,5 мин-4,57 j=596 мин.
Ошибка измерения t составляет 5, т,е, t = 5,6 + 0,28 мин.
Для данного значения t = 5,6 +
+ 0,28 мин прогнозируется значение гемолиза (согласно установленной нами зависимости) в пределах от 5 до 8%.
Для подтверждения этого вывода эритроциты донора замораживают под защитой глицерина согласно методике.
Потери гемолиза после замораживания-отогрева составляют 5,8+1,27, что подтверждает предварительный прогноз результата низкотемпературной консервации эритроцитов и свидетельствует о высокой криорезистентности эритроцитов.
Формула изобретения
Способ определения криорезистентности эритроцитов, включающий инкубацию суспензии эритроцитов в физиологическом растворе, регистрацию проницаемости мембран и о:-,енку криоре1394129
Составитель М.Шерстнев
Редактор Г.Волкова Техред М.Моргентал Корректор О.Кундрик
Заказ 2216/41
Тираж 847
Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 зистентности, о тлич ающийс я тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, инкубируют суспензию зритроцитов в присутствии 0,004 н. соляной кислоты, регистрируют время гемолиэа эритроцитов и при его значении 5,0-5,6 мин определяют максимальную их криорезистентность.
