Способ получения иммунодиагностикума гепатита

 

Изобретение относится к медицине , точнее к иммунологии гепатита В,, и касается способа получения иммунодиагностикума. Производят импрегнацию носителя непрерывно-последовательным перемещением в антисыворотке с титром :антител 1/8000-1/10000. В процессе импрегнации производят одновременно прокатку и перфорацию носителя под слоем антисывороткй при температуре последней Осуществляют сушку, резку и герметическую упаковку импрегнированного носителя в эластичные емкости в присутствии активного влагопоглотителя. Элюцию требуемой дозы иt мyнoдяaгнQCтикyмa производят с определенного участка носителя, огранит ченного перфорацией. Способ позволяет снизить себестоимость имуннодиагностикума и повысить точность его дозирования путем повьшения адсорбционной ем- 5g кости носителя. , ,

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН ! .09) (И)

Я

I, (51)5:À 61 К 47/00 39/395

А1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (46) 15. 12. 90. Бюл. У 46 (21) 3855651/28-14 (22) 27.02.85 .(71) Научно-„исследовательский инсти- . тут гематологии и переливания крови (72) М.Л. Липсон, Г.Н. Хорват

-Х.А. Хакимов и А.К. Херсонский (53) 6!5.361.018.51/55(088,8) (56). Инструкция по применению иммуноднагностнкума. Институт эпидемиологии и микробиологии им. H,Ô. Гамалеи..ТУ

42,14-(20-77). (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОДИАГНОСТИКУМА ГЕПАТИТА В (57) Изобретение относится к медицине, точнее к иммунологии гепатита В, и касается способа получения иммунодиагностикума. Производят имнрегнацию носителя непрерывно-последовательным перемещением в антисыворотке с титром антител 1/8000-1/10000. В процессе импрегнации производят одновременно прокатку и перфорацию носителя под слоем антисывороткц при температуре

О последней 3-5 С, Осуществляют сушку, резку и герметическую упаковку импрегнированного носителя в эластичные ем1 кости в присутствии активного .влагопоглотителя. Элюцию требуемой дозы иммуноднагностикума производят с определенного участка носителя, ограни-, ченного перфорацией. Способ. позволяет снизить себестоимость имуннодиагностикума н повысить точность его дозирования путем повыиения адсорбционной ем- 3 кости носителя..

1403415

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и касается способа получения иммунодиагностикума гепатита В.

Целью изобретения является повыше-

5 нне экономичности способа.

Пример. Ослицу весом 250 кг подвергают карантину (до 30 дней) и исследовэнию крови на бруцеллез, а затем прсиэводят кровопускание иэ яремной вены крови в объеме 500 мл, для стимуляции иммунной системы.Через 15 дней после стимуляции осуществляют подкожное введени в области околоушных, лопаточных и бедренных лимфатических узлов 250 мкг НВз-антигена с полным адъювантом Фрейнда (ПАФ) в .соотноше и 1:20 — всего 6 точек. Соединение НВз"антигена с ПЛФ 2) о производят при 37-40 С до получения стойкой водно-масгяной эмульсии.

По достижении максимального титра антител, определяемого высокочувствительным иммунорадиометрическим методом (ориейтировочно по времеии через 15-16 дней), производят повторное кровопускание в объеме до 500 мл с аналогичной целью и введение

300 мкг антигена в 8 точках аналогичных областей лимфатических узлоз,:

Лналогичным. способом определяют дости"

I жеьие максимального титра (ориентировочно по времени, через 15-16 дней), осуществляют стимуляцию забором крови в том же объеме и. введение 350 мкг 35 антигена в 8 точках аналогичных îáластей лимфатических узлов. На этом первый этап иммунизации животного заканчивают, Достигаемый титр анти- . тел, определяемый методом встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ) составляет

1/256, "атем после периода стабилизации иммунной системы в течение 60 дней осуществляют второй этап иммунизации животного, включающий 3 последовательные стадии введения 150, 200 и

250 мкг антигена в 4,6 и 8 тачках областей лимфатических узлов в последовательности первого этапа иммуниза- 50 цин (с промежуточным контролем максимального подъема титра н стимуляцией в тех же объемах крови), Относительное снижение объемов (количеств) вводимого гнтигена связано с уменьше- 55 нием массы животного после введения

БАФ на первом этапе иммунизации. На э гом второй этап иммунизации животногь заканчивают. Достигаемый титр антител, определяемый методом ВИЗФ, составляет 1/1024-1/2048.

В связи с увеличением титра период стабилизации иммунной системы удлиняется и достигает 200 дней, после чего осуществляют третий этап иммуни.,ации, включающий три последовательных стадии введения 200, 300 и 250 мкг антигена в 6, 6 и 6 точках областей лимфатических узлов в последовательности первого этапа иммунизации (с промежуточным контролем максимального подъема титра и стимуляции в тех же объемах крови). При этом при первом введении антигена (200 мкг) его соединяют с ПАФ в соотношении 1:10 (по методике первого этапа) и вводят в лопаточные лимфатические узлы животного.

На этом иммунизацию животного заканчивают. Достигаемый титр антител

1/8000-1/10000 (метод ВИЭФ).

1lo завершении этапа иммунизации от животного забивают необходимое количество крови (до 1 л), центрифугируют и отделяют от форменных элементов. Часть отделенной сыворотки в необходимом количестве помещают в ванну с донным охладителем, поддерживающим температуру сыворотки в ин- о тервале 3-5 С. В ванну опускают перфорирующее устройство с заправленным к.онцом твердого носителя в виде ленточной фильтровальной бумаги (ГОСТ

7584-77) и производят протягивание его с одновременной перфорацией и последующими сушкой при +20 С и резкой на мерные отрезки. Мерные отрезки носителя, импрегнированного аитителами, ерметиэируют в эластичные .ем" костч 1пакеты) в присутствии активного поглотителя влаги. Оставшуюся б часть сыворотки хранят при -40 С.

При полезной емкости ванны 125 смз и использовании при импрегнировании носителя 0,5 объема сыворотки число рабочих доз достигает 1 ° 10

Приготовление рабочего разведения иммунодиагностикума гепатита В при массовых обследованиях осуществляют элюированием антител, помещая мерный участок носителя в физраствор в соотношении 4 мл последнего на 1 см имо прегнированного носителя при 18-22 С в течение 30-40 мин, при этом мерный участок носителя регламентирован числом исследований.

Формула изобретения

Составитель С. Мельникова

Техред М.Дидык Корректор В. Бутяга

Редактор Т., Клюкина

Тираж 541 . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий.!

)3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 4334 .Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4. з

140341

Стоимость дозы. диагностикума составляет 0,00002 руб, в то время как

I по известному способу стоимость дозы составляет 0,04 руб.

Способ получения иммунодиагностикума гепатита В путем многократной иммунизации ослов очищенным НВ антигеS ном, забора крови, получении,.сыворотки, отличающийся тем, что, с целью повышения экономичности, иммунизацию осуществляют трехстадийно с введением на первой стадии антигена с полным адьювантом Фрейнда в соотношении 1:20 в области околоушных, лопаточных и бедренных лнмфоузлов в 6 точках, на второй и третьей стадиях - введением антигена в 8 точках аналогичнЫх областей лимфоузлов, при этом каждую последующую стадию !

4 осуществляют после достижения максимального титра антител, повторную реиммунизацию осущесты яют соответственно через 60 дней в два трехстадийных этапа последовательным введением нарастающих доэ антигена в 4,6 и 8 точках аналогичных лимфоузлов соответственно и через 200 дней последовательным введением воэрастаюмцих количеств антигена в 6,6 и 6 точках аналогичных областей лимфоузлов,причем на первой стадии второго этапа дополнительно вводят антиген с пол-. ным едъювантом Фрейнда в соотношении 1: 10 в лопаточные лимфоузлы и . после достижения титра антител 1/80001/10000 в реакции встречного иммуноэлектрофореза полученной сывороткой пропитывают бумажный носитель йри одновременной прокатке и перфорации его под слоем сыворотки при темперао туре 3-5 С.