Способ получения производных 4-уреидооксазафосфоринов

 

Изобретение касается фосфорорганических соединений, в частности способа получения производных 4-уреидооксазафосфоринов (УФП) общей формулы XZ, где X - группа формулы -CH-NRj-P(0)(NR,Ri)-0-chr4-CH,i; Z - группа формулы -N(OH)-C(0)-NRjR6; а) при R и R - 2-клорэтил; R, R, Rg -Н, С, -С 4 злкш1, циклогексил, фенил (он может быть моно-или дизамещен галоидом, С -С 4 -алкилом, С -С4-алкоксш1ОМ, N0,, CF, сульфамоильной группой), бензоил, нафтил, флуоренил, 9-оксофлуоренш1, алкил (он замещен С1, С4-С,-карбалкоксилом, и/или С(0)ОН или группой: Р(СНз)аО; б) при указано; группа NRjRfc- ппперидил; в) при R, и 2-ХЛОРЭТШ1, 2-метилсульфонатоэтил; , CHj; , причем R, и R, одновременно 2-метилсульфонато этилу; г) при R,, 2-хлорэтил; RJ- 2-хлорэтил; R4-R6-H; или Rj-H; Rg-H или бензил; или R-, и , R5--CH,; Rg-CHJИЛй , или их солей с основанияг-ш (когда (O)OH), обладаюЕщх цйтостатической активностью, что может быть использовано в медицине для лечения злокачественных заболеваний. Цель изобретения - создание новых более активных и стабильных веществ указанного класса. Процесс ведут реакцией соединений общих формул XOY и HZ, где X и Z указаны, Y - Н, СН,, ., в присутствии при необходимости катализатора CF3C(0)OH в среде инертного растворителя при (-25) - (+20)С. Целевой продукт вьщеляют в свободном виде или в виде соли с основанием. Новые УФП обладают активностью в отношении асцитовой саркомы Иосида АН 13 (эффективная доза ЕДу .0,2- 100 мг/кг). Кроме того , в отношении опухолей они обладают канцеротоксической активностью, такой же как у циклофосфамида, но без использования ферментативного активирования. Токсичность новых УФП в 4 раза меньше, чем у циклофосфамида, что значительно расширяет область их терапевтического применения. 1 ил., 5 табл. с S СО 4 00 СП СП СП) О4

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК йс»-: < -.ФЕ 6

lt ь (,»,";4

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ! 13, ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР по ДелАм изОБРе Гений и QTHPblTHA (21) 3887403/23-04 (22) 13.05.85 (46) 30.10.88. Бюл. У 40 (71) Аста-Верке АГ, Хемише Фабрик (DE) (72) Герхард Шеффлер, Ульф Нимейер, Норберт Ьрок и Ерг Пол (BE) (53) 547 879 (088.8) (56) Выпоженная заявка ФРГ N 3133309, кл,С 07 F 9/65, 1982. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ 4УРЕИДООКСАЗАФОСФОРИНОВ (57) Изобретение касается фосфорорганических соединений, в частности способа получения производных 4-уреидо" . оксазафосфоринов (УФП) общей формулы

XR, где Х вЂ” группа формулы

-СН-NR -P(0)(NR R )-О-CHR4- СН, Z— группа формулы -И(ОН)-С(0)-?Ж К, а) при R, и R — .2-хлорэтил; R>, К4, R -Н R -Н С -С -алкил циклоэ э ф 14 Э гексил, фенил (он может быть моно-или дизамещен галоидом, С» -С 4 -алкилом, С„-С4-алкоксилом, NO<, CF» сульфамоильной группой), бензоил, нафтил, флуоренил, 9-оксофлуОренил, С -С4алкил (он замещен Cl С,-С -карбалкоксилом, С Н и/или С(0)ОН или группой: Р(СНз) 0; б) при R„-R4 указано; группа ИК К6- ппперидил; в) при R, и R>- 2-хлорэтил, 2-метилсульфонато„,SU „„1435156 А 3 (SD 4 С 07 F 9/65. А 61 К 31 675 этила Кх Н, СНз R R4, Н, причем R, и К одновременно 2-метилсульфонато» этилу; r) при R,, R — 2-хлорэтил;

R — 2-хлорэтил; К4-К -H; или R>-H;

К4-CH>, Ку-Н; R4-Н mud бензил;

Кз н Р4 Н, Rr-СН, К -СН илй CeHs или их солей с основаниями (когда

К -С(0) ОН), обладающих цитостатичес кой активностью, что может быть использовано в медицине для лечения злокачественных заболеваний. Цель изобретения — создание новых более активных и стабильных веществ указанного класса. Процесс ведут реакцией соединений общих формул XOY и НЕ, где Х и Е Указаны, Y — Н; СН., С Н ., в присутствии при необходимости катализатора СГ С(0)ОН в среде инертного растворителя при (-25) — (+20) С.

Целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде соли с основанием.

Новые УФП обладают активностью в отношении асцитовой саркомы "Иосида"

АН 13 (эффективная доза ЕД« =.0,2100 мг/кг). Кроме того, в отношении опухолей они обладают канцеротоксической активностью, такой же как у циклофосфамида, но без использования ферментативного активирования. Токсичность новых УФП в 4 раза меньше, чем у циклофосфамида, что значительно расширяет область их терапевтического применения. 1 ил., 5 табл.

1435156

Йзобретение относится к способу получения новых производных 4-уреидооксаэафосфоринов общей формулы I но у, .В, -И-С-М, I н В в, «М- Р

110 И

О Н

Eq где при К, и К, представляющим собой

2-хЛОРЭТИЛ, Кэ, К4

H R вОДОР ОД 9 водород, алкильный остаток С„-С «„циклогексил, фенил, бензоил, нафтил, флуоренил, 9-оксо» флуоренил, фениль ный остаток, замеценный на один или два атома галогена, С -С4 -алкильную группу, С „-С 4 -алкок-25 сильную, нитро, трифторметильную, сульфамоильную группу, или С -С4 -алкильныи остаток, замешеí- 30 ный на хлор, С -Сэ— карбалкоксильную, фенильную и/или карбоксильную групny man va группу 35

-Po(cH ),, илй R. R К и R имеют укаэанные

-р . 4 значения, группа

NR R представля6 ет собой пипери диновое кольцо, или при К,, представляющем собой 2хлорэтил или 2-метилсульфонатоэтил, Rq-водород. мет4 кэ — 2- Îð- 45 этил или 2-метилсульфо натоэтил, К», К и R — водород, причем оба К, и К не могут быть 23 метилсульфонатоэтилом, или при К, и R представляющими собОй 2-хлОрэтил, R — 2-хлорэтил, К4, Ку и К - ВОДОр Од или R >- водо55 род, К4 "метил, R — водород, К4 водород или бензил, или R э и R4 — водор од, R — метил, R — метил или фе6 нил, или их солей с основаниями, в случае, когда R в соединении формулы I содержит карбоксильную группу, которые обладают цитостатической активностью. В силу указанных свойств соединения формулы 1 могут найти применение в медицинской практике для лечения злокачественных заболеваний.

Цель изобретения - разработка способа получения указанных производных 4-уреидооксафосфоринов, которые обладают высокой цитостатической активностью и повышенной стабильностью, На чертеже представлена схема осуществления способа по примеру 1 ° и р. и м е р 1. 1-Окси-1-j2-(бис(2-хлорэтил) амино)-2-оксотетрагидро2Н-1,3,2-оксазафосфорин-4-ил -мочевина.

15 г (54 ммоль) 4-оксициклофосфамида (т.е. 2-(бис(2-хлорэтил)-амино|4-окситетрагидро-2Н, 1, 3, 2-оксазафосфорин-2-оксида) и 4,4 г (58 ммоль) оксимочевины растворяют в 70 мл диметилформамида (ДИФ)р раствор под» кисляют трихлоруксусной кислотой (рН 3-4) и выдерживают в течение

20 ч в холодильнике при 0 С. Затем кристаллическую массу разбавляют

70 мл этилового эфира уксусной кисло" ты, а через 2 ч продукт отфильтро" вывают, промывают, сушат и перекристаллизовывают из метилового спирта.

Выход 11,3 r (62% от теоретически рассчитанного значения) цис-формы.

Т. пл. 139-143 С (разл.).

Пример. 2. 1-Окси-1-(2-(бис(2-хлорэтил)-амино)-2-оксотетрагидро2н-1, 3, 2-оксакафосфории-4-ил) -мочевина, цис-форма.

1,1 г (4,0 ммоль) 4-оксициклофосфамида растворяют в метиловом спирте, раствор смешивают со следами трихлоруксусной кислоты выдерживают в течение ночи при -25 С, затем метиловый

3 спирт осторожно отгоняют, остаток растворяют в небольшом количестве хлористого метилена, раствор сушат и упаривают, в результате чего получа ют 1,2 г 4-метоксициклофосфамида (т.е. 2-(бис-(2-хлорэтил)-амино1-4з 14351 метокситетрагидро-2Н, 1, 3, 2-оксазафосфорин-2-оксида). Непосредственно после этого 1,2 г 4-метоксициклофосфамида и 304 мг оксимочевины раст" воряют в 3 мл ДМФ, после чего раствор

5 вьдерживают в течение 20 ч при -25 С в холодильнике ° Кристаллическую массу разбавляют 3 мл этилового эфира уксусной кислоты, продукт отфильтро- 10 вывают, промывают, сушат и перекристаллизовывают из метилового спирта.

Выход 670 мг (507 от теоретически рассчитанного значения) такого же продукта, что и в примере 1. 15

Пример 3. 1-Окси-1-f2-(бис(2-хлорэтил)-амино1-2-оксотетрагидро2Н-1, 3, 2-оксазафосфорин-4-mz)-мочевина, транс-форма.

16 r (58 ммоль) 4-оксициклофосфа 2р мида и 5,2 г (68 ммоль) оксимочевины . растворяют в 160 мл воды, раствор подкисляют трихлоруксусной кислотой (рН 3-4) и в течение 20 ч выдерживао ют в холодильнике при 0 С. Затем 25 кристаллическую массу отфильтровывают, промывают водой, сушат в высоком вакууме над пятиокисью фосфора, пос" ле чего продукт перекристаллизовыва ют из смеси метилового спирта и хло- З0 роформа. Выход 12,7 г (657 от теоретически рассчитанного значения) транс-формы продукта, указанного в примере 1. Т. пл. 148 С (разл.).

Пример 4. 1-Окси-1-13-(235 хлорэ тил) -2- (бис- (2"-хлор э тил) -Ймино), 2-оксотетрагидро-2Н-1, 3, 2-оксаза(. фосфорин-4-ил)-мочевина.

20 r (50 ммоль) 4-окситетрафосфамида (т.е. 3-(2-хлорэтил)-2-(бис-2- 40 хлорэтил)-aMHHoj -4-окситетрагидро-

2Н-1, 3, 2-оксазафосфорин-2-оксида) и 5,3 г (70 ммоль) оксимочевины растворяют в 100 мл диметилформамида, послечего раствор охлаждают до -15 С. 45

Затем раствор подкисляют трихлоруксуснойкислотой (рНЗ-4) ив течение 5 ч. перемешивают при -15OC. После вьдержЮ ки в течение ночи при 0 С реакционб. ный раствор разбавляют двукратным ко- 50 личеством воды. Непосредственно после этого 4 раза производят экстрагирование смесью этилового эфира уксусной кислоты и метилового спирта (10: 1), причем каждый раз применяют по 300 мп 55 смеси. Объединенные растворы продукта в этиловом эфире уксуной кислоты два раза промывают водой, сушат над сер нокислым натрием и упаривают в вакууме, в результате чего получают 22 r маслообразного вещества. После растворения в смеси этилового эфира уксусной кислоты и метилового спирта в кристаллической форме выделяют 4,2 г продукта (т. пл. 106-1 10 С) . Маточный раствор хроматографируют на заполненной силикагелем колонке при применении в качестве элюирующего средства смеси хлороформа и метилового спирта (10: 1). После чего получен- ное вещество перекристаллизовывают совместно с первым кристаллическим продуктом из смеси этилового эфира уксусной кислоты и метилового спирта.

Выход 7,0 r(35X от теоретически рассчитанного значения). Т. пл. 115116 С (разл.).

Пример 5. 3-Бензил- 1 окси1-(2-(бис- (2-хлор этил) -амине) -2-оксотетрагидро-2Н-1, 3, 2-оксазафосфорин4-ил)-мочевина

К 900 мг (3,25 ммоль) 4-оксициклофосфамида в 1 мл хлористого метилена прибавляют 540 мг (3,25 ммоль) 3-бензил-1-оксимочевины в 40 мл ацетона и каталитическое количество трихлоруксусной кислоты. Смесь выдерживают ,в течение ночи при -25 С. Затем кристаллический продукт отфильтровывают, промывают ацетоном и диэтиловым эфиром и перекристаллизовывают из этилового эфира уксусной кислоты. Выход

500 мг (40X от теоретически рассчи танного значения). Т. пл. 122-123 С (разл.).

Пример 6 ° 3-(o-Бромфенил)-1окси-1-(2-(бис-(2-хлорэтин)-амине) -2оксотетрагидро-2Н-1, 3, 2-оксазафосфорин-4-ил)-мочевина.

560 мг (2 ммоль) 4-оксипиклофосфамида в 10 мл ацетона смешивают с

460 мг 3-о-бромфенил-1-оксимочевины и каталитическим количеством трихлоруксусной кислоты после чего смесь вы0 держивают при -25 С. Через 2 сут кристаллическое вещество отфильтровыва ют и перекристаллизовывают его из ацетона. Выход 320 мг (32X от теоретически рассчитанного значения). Т. пл. 110-111 С (разл.).

П р и и е р ы 7 — 47. При применении в качестве исходных веществ соответствующих 4-окситетрагидро-2Н-1, 3, 2-оксазафосфорин-2-оксидов аналогичным способом получают указанные в табл. 1 другие 4-уреидоокси-производные общей формулы.

5 1435156

Пример 48 Соль 3-Окси- 3 ютиз ацетона с небольшой добавкой ме(-"--»2-(бис-(2-хлорэтил)-амино1-2-оксотет- тилового спир а. д: т Выхо: 3 1 г (44 о-2Н-1 3 2-оксазафосфорин-4- от теоретически рассчитанного значеь. фагидро- —,, -окс з

) пл 107-108 С. л ype oj уксуснОЙ кислоты цикло» 5 ния) °

Пример 49. Получение кислофексилами на.

3-Оксиуреидоуксусная кислота. ты из циклогексиламмонийной соли.

56, 5 r (О, 28 моль) гидрохлорида 1 r (2 ммоль) конечного соединеензилового эфира глицина суспендиру- ния, полученного в соответствии с т в 300 мл толуола и при перемешива- 10 примером 48 циклогексиламмонийная ии и температуре в бане 140 C в те" соль), растворяют в 20 мл воды, растение 2 ч вводят в суспензию сухой вор пропускают через сильно кислотазообразный фосген. После этого ре- ный катионообменник. После чего элюат акционную смесь упаривают в вакууме, сушат вымораживанием в вакууме. Выа полученный остаток перегоняют в вы- 15 ход 600 мг (767 от теоретически рассоком вакууме. Выход 51 r (957 от считанного значения). Т.пл. около о теоретически рассчитанного значения) 50 С (разл.). бензилизоцианатоацетата, т.кип. 100- Пример 50. Получение натрие" ,102 C/6,65 бар. вой соли.

= ъ

К 28 7 г (О 15 моль) бензилизоци- 20 5,4 г (40 ммоль) Ç-оксиуреидоуксус-. с анатоацетата в 50 мл диоксана при ной кислоты в 30 мл воды смешивают перемешивании и временном охлаждении раствором 15,3 r (50 ммоль) 4-этоксийрибавляют по каплям раствор 6,6 r циклофосфамида в 60 мл ацетона при (0,2 моль) гидроксиламина в 200 мл охлаждении, Смесь выдерживают в тедиоксана. После дополнительного пере- 25 чение 1 сут при 4 С, а затем разбавмешивания в течение 1 ч при комнат- ляют ее 60 мл ацетона, нейтрализуют ной температуре содержимое реакцион прибавлением 20 мл 2н.раствора гидро" ного сосуда упаривают в вакууме, а окиси натрия и после выдерживания в

О остаток перекристаллизовывают из эти- течение 2 сут при -25 С продукта отлового эфира уксусной кислоты. Выход 30 фильтровывают„промывают сушат. Вы28 1 г (83,6Х от теоретически рассчи- ход 5,7 r (34K от теоретически рась танного значения) бензил-3-оксиуреи- считанного значения). Т.пл. около доацетата. Т.пл. 113-120 C. 85ОС (разл.).

22,4 г (0,1 моль) бензил-3-оксиу- Пример 51. Получение калие" реидоацетата в 300 мл метилового спир-35 вой соли. та смешивают с 5 г палладия на угла ; 5,4 г (40 ммоль) 3 оксиуреидоуксус- и производят гидрирование на приборе ной кислоты в 30 мп вьопы смешивают для встряхивания. Приблизительно при охлаждении с раствором 15,3 г через 20 мин поглощение соответствую- (50 ммоль) 4-этоксициклофосфамида в б щего количества водорода заканчивает- 4р 60 мл ацетона. Смесь выдерживают в ся. Катализатор отфильтровывают, течение 1 сут при 4 С после чего ее фильтрат упаривают в вакууме, после неитрализую р т п ибавлением 20 мл 2 н, Затем чего твердый остаток перекристаллизо- раствора гидроокиси калия. вывают из диоксана. Выход 9,8 г (73X . смесь упаривают, смешивают остаток а етона и 50 мл диэтиловоот теоретически рассчитанного значе- 45 со 150 мл ацетона и ния) 3-оксиуреидоуксусной кислоты. го ф р д го эфи а о помутнения. После выдер С

Т.пл. 135 С. о живания смеси в течение 3 сут -25 С

2,4 г (19 миоль) 3-оксиуреидоуксус- продукт отфильтровывают, промывают и. ной кислоты в 10 мл воды и мл

0 25 сушат. Выход 4,2 r (24X от теорети-.

61 (2 ) чески рассчитанного значения). Т.пл. ацетона смешивают с 6,1 г (ммоль) 50

4-оксициклофосфа ащаь после чего ре- около 75 С (разл.

П и м е р 52. Получение кальакционную смесь выдерживают в течение Пр р ночи при -25 С. Непосредственно пос- циевой соли. ле этого к реакционнои смеси прибав- 4 r (40 оль) 3-оксиуреидоуксусляют 25 мл ацетона и, r мм

1 8 (18 оль) ной кислоты в ЗО мл воды смешивают с . циклогексиламина в мл ацетона, 10 цетона раствором 15,3 г 4-этоксициклофосфаПосле выдержки смеси в течение 2 ч мида в а в 60 мл ацетона. Смесь выдержи

1 4 С производят фильтро ф ьтрование и отфильтро- вают в течение 1 аут при 4 С, после ванный продукт певекристаллизовыва- чего прибавляют к ней 1,5 г (20 моль) 1435 гидроокиси кальция в 100 мл воды.

Через следующие сутки продукт отфильтровывают с применением вакуума, промывают и сушат. Выход 4,6 г (517

5 от теоретически рассчитанного значения). Т.пл. 139 С (разл.).

Пример 53. Получение аммонийной соли.

5,4 г (40ммоль) 3-оксиуреидоуксус- 10 ной кислоты в 30 мл воды смешивают с раствором 15,3 г 4-этоксициклофосфамида в 60 мл ацетона. Смесь выдерживают в течение 2 сут при 4 С, а затем разбавляют ее 60 мл ацетона и нейтрализуют прибавлением 20 мл 2 н. раствора аммиака. Непосредственно после этого смесь упаривают в вакууме, остаток растирают с диэтиловым эфиром и отделяют декантацией. Соль он

N-СО NH-(СН24-С02НхН2МС8НЦ (Cl СН2- СН2), N X 3Н-( г >

Получение осуществляют по анало" гии с описанным в примере 48 из 4,4 r (30 ммоль) 3-(3-оксиуреидо)-пропио" новой кислоты и 10 г (36 ммолей) фоксициклофосфамида. Выход 3,4 г (22,47 от теоретически рассчитанного значения). Т.пл. 116-117 С.

Исходную пропионовую кислоту полу- я5 чают по аналогии с описанным в приме0Н

N-C0-NH-CH-СО2Нх H2N С6Н13

СН СВН (С1-СН2-СН2) 2 Х,Я

О О ф

П р н м е р 56. 1-окон-1(2-(и50 2-хлорэтил-N-метиламино) -3- 2- (метилсульфоната)-этил)-2-оксотетрагидро 2H-1, 3, 2-оксавафосфорин-4-ил1мочевина

СН2-СН2 — Π— SOgCHg

С1-СН2-СН2, сн, ip, N Х N-СО-ХН2.

Org О

Получение осуществляют по аналогии с описанным в примере 48 б из

2,7 г (12 ммоль) и -2-(3-оксиуреидо)—

3-фенилпропионовой кислоты и 4 г (14 ммоль) 4-оксициклофосфамида. Выход 3,2 r (387 от теоретически рассчитанного значения). Т.пл. 128 С.

Исходную пропионовую кислоту получают по аналогии с описанным в при156 8 растворяют в 40 мл метилового спирта, после чего раствор смешивают с небольшим количеством сухого эфира до появления мути. После выдержки в о течение 1 сут при - 25 С продукт отфильтровывают при применении вакуума и сушат над пятиоокисью фосфора. Выход 4,8 г (297 от теоретически рассчитанного значения) . Т.пл. около

55 С (разл.).

Значейия, полученные при анализе новых солей, а также их структура указаны в табл. 2.

Пример 54. Соль 3-(3-окси3-|2-(бис-(2-хлорэтил)-амино1-2-оксотетрагидро-2Н-1, 3, 2-оксазафосфорин4-нл3-уреипо1-пропионовой кислоты и циклогексиламина. ре 48 а при применении 41 r (0,19 моль) гидрохлорида бензилового эфира бета-аланина.

Пример 55. Соль r4 2-f3-оксиГ

2- бис- (2-хлорэтил) -амино) -2-оксо-. тетрагидро-2Н-1, 3, 2-оксазафосфорин4-ил) -уреило3-3-фенилпропионовой кислоты и циклогексиламина мере 48 а при применении 46,7 г (О, 16 моль)-гидрохлорида бензилового эфира Ы. -фенилаланина.

14351

Получение этого соединения и сое,,динения, соответствующего примеру

38, осуществляют при использовании

3,4 г (8,8 ммоль)2-(3-2-хлорэтил-Nметиламино)-4-окси-3- (2-(метилсульфонато)этил)-тетрагидро-2Н»1, 3, 2, ексазафосфорин-2-оксида и 0,68 г (9 ммоль) оксимочевины. Выход 0,87 r (15 . от теоретически рассчитанного значения), Соединение представляет собой маслообразное вещество. Значение М 0,45, элюирующее средство: смесь хлороформа и метилового спирта в соотношении 10:1 (2-кратное элюиро- 15 вание). Проявление осуществляют с помощью иода.

Пример 57. Получение диэтиламмонийнои соли."

По аналогии с описанным в примере

51, 5,4 r (40 ммоль) 3-оксиуреидоук сусной кислоты вводят во взаимодейст-

0Н ! О

N=C0-NH — СН -СОО Я (С1СИ2 CH2) gN Ы

О 0

ОН

l (СК-CHZ-СН2) 2Ж ХН N-CO-NH — СН2- С02гх HgN-С8Нц

Р

0 0 ветствующая стереограмма прилагается на чертеже). Из этогорентгеновского структурного анализа следует,.что в

4r„ соединении, согласно примеру 1, атом

4 углерода производных оксазафосфори1 ) ной связан с атомом N-1 части мочевины (соединение N-1 ). Это означает, 1 что данному соединению соответствует

5О формула

Был снят ядерно-магнитный резонансный спектр соединения, согласно при= . меру 1, и известного соединения, 55 согласно примеру 46, причем исследовали ядра водорода (Н) (спектр Н— ! I

"ЯМР). При этом были выявлены характерные различия в спектрах обоих соединений (см. табл, 4).

Пример 59. Пиклогексиламин ная соль 3- (3- окси-3- (2- (бис-(2хлорэтил)-амино -2-оксотетрагидро. 2, 4 F (18 ммол ь).-3-ок си-ур еидоук сусной кислоты в 10 мл воды и 25 мл ацетона при 20 С смешивают с 6, 1 r

0 (20 ммоль)4-оксициклофосфамида и следами трихлоруксусной кислоты. Остав" ляют стоять в течение 3 ч, охлаждают до 10 С и добавляют 25 мл ацетона и

1,8 г (18 ммоль) циклогексиламина в

10 мл ацетона. После стояния в тече ние 4 ч отсасывают циклогексиламин ную соль и перекристаллизуют из небольшого количества метанола. Выход

2 г. Т.пл. 107-108 С.

Структура полученных соединений, соответствующих формуле I, вытекает из данных следующих анализов.

Проведен рен ггеновский структурный анализ соединения кз примера 1 (соот-

56 о вие с 15,3 г (50 ммоль) 4-этоксициклофосфамида, затем производят нейтрализацию реакционной смеси и дальнейшую обработку. Выход 4,3 r (23 от теоретически рассчитанного значения).

Т. пл. 60 С (разл.).

Пример 58, Получение соли с пиперазином.

По аналогии с описанным в примере

51, 5,4 r (40 ммоль) 3-оксиуреидоуксусной кислоты вводят во взаимодей,ствие с 15,3 r (50ммоль) 4-этоксициклофосфамида, затем производят нейтрализацию реакционной смеси пиперазином и дальней альнейшую обработку. Выход 6,1 r (35 от теоретически рассчитанного значения) . Т. пл. 7 2 С (разл, ), Структура и данные анализа солей,. полученных в примерах 57 и 78, приведены в табл, 3.

2Н-1, 3, 2-оксазафосфорин-4-mnj -уреидоуксусной кислоты, ll 1435

Спектры ЯМР бьши получены в дейтеризованном диметилсульфоксиде. Веществом-эталоном являлся тетраметилсилан при 3 =0 ч/тыс. J 2,4 является постоянной соединения, которая показывает в герцах расщепление сигнала

4-Н в результате соединения атома фосфора в позиции 2 с протоном (Н) в атоме 4 углерода производных оксаза. — 10 фосфоринов (С-4). иприта: вьптадение волос, воспаление слизистых оболочек, расшатывание зубов, апатия и понос. Смерть наступала большей частью на седьмой день наблюдения.

На основе процентного соотношения летальных исходов и группы доз с по.-. мощью метода Миллера и Тейнтера быпа

З0 графически определена средняя летапьная доза (летальная доза, приводящая к гибели 507 вредителей), которая приведена в табл. 5.

Химиотерапевтические медицинские

35 Опыты Ин ВИВО °

Химиотерапевтические опыты на препарате асцитовой саркомы AH 13 "Иосида".

Крысам с 5-7-дневной асцитовой

40 саркомой Иосида вырезали с соблюдение стерильных условий опухолевый асцит (Pàêòåðèoëoãè÷åñêèé контроль).

Среднее количество клеток асцита составляло 2х10 кл/мл. Путем добав45 ления раствора Тироде (физиологический раствор для выращивания и консервирования тканей) размер асцита увеличивается до 10 кл/мл. Подопытным животным имплантировали 0 4 мп из

rp указанного количества (=4х10 клеток)

Ф в брюшную полость.

У необследованных животных первоначальная доля указанной опухоли составляет около 907., средняя продолжи5б тельность летального исхода составляеч 8 дней (S = + 0 5 d). Через 3 ч после имплантации опухоли в .брюшную полость также вводили опытные вещества.

В целях синтеза была произведена реакция обмена между 4-гидроксицикло(С1СН OH2)2, г21

О 0

Были также сняты соответствующие

1 спектры Н вЂ” SIMP других соединений и бьшо проведено сравнение сигналов

Н соединений, согласно примеру 1 и известного соединения...Так как структуры соединений, согласно примеру 1 и примеру 46, являются известными, 4 то путем сравнения сигналов Н определяют и структуру других соединений, Было выявлено, что соединения, пблученные в соответствии с приведен-. ными примерами конкретного выполнения предлагаемого способа, имеют сравнимые сигналы Н, такие же, как

I и в соединении, согласно примеру 1, а также структуру, согласно соединению из примера 1, соответствующую формуле 1.

Результаты иследований представителей полученных соединений формулы

I, проведенного нахарактерных фармакотерапевтических опытных моделях, выражаются в следующем.

Определение летальной дозы при однократном введении (острая токсичность). Вещества были введены в состав суспензии траганта и затем инъекцированы в брюшную полость мужским особям крыс (род Sprague-Dawley) имеющих средйий вес тела 160 г. Максимальная доза составляла 1000 мг/кг.

Инъекцированные дозы варьировались в соответствии с логарифмическим рядом с коэффициентом 2,15. Наблюдение за подопытными животными велось в течение 30 дней, картина отравления полностью соответствовала известным симптомам отравления от азотистого

156

12 фосфамидом и N-гидрокси-й, N -PHMe ткпмочевиной сн сн

I (но-N-со-хн ) з соответствии с примером 46 .. В спектре Н-SIMP соединения, согласно примеру 46, не хватает протонных сигналов для гидрокси-групп исходных соединений. Таким образом, известное соединение может иметь только следующую структуру

1435156 где при R u или К„, R

40 или при R при R

Каждая подопытная групп состояла ,из 6 животных.

Критерием лечебного, действия явля5 ется выздоровление, которое определя ется в течение 90 дней после операции в качестве отсутствия рецидивов и метастазов. После определения процентной доли выздоровления на основе прямых действий дозы с помощью пробирно- 10

ro анализа P. Фишера была вычислена доза, приводящая к выздоровлению половины животных (см. табл. 5, колонку 4).

Как видно из данных табл. 5, соединения формулы I являются менее токсичными.

Кроме того, вследствие более медленного гидролиза соединения формулы 20

I остаются в организме биологически активными более длительное время и отличаются поэтому большей продолжительностью действия по сравнению с указанными эталонными соединениями. !

В сравнении с ранее известным стандартным препаратом, циклофосфамидом, в случае экспериментальных трансплантированных опухолей крыс 30 соединения формулы I обладают примерно такой же сильной канцеротоксической активностью. В водном растворе они действуют непосредственно алкили- рующе, а в опытах in vitro обладают высокой цитотоксичностью, в то время ,как циклофосфамиду необходимо фермен, тативное активирование, а опытах 1п

vitro он практически не действует цитотоксично. Острая токсичность предлагаемых соединений приблизительно в 4 раза меньше, чем острая токсичность стандартного вещества циклофосфамида, причем в результате этого значительно расширяется область тера- 5 певтического применения. Также и в отношении таких органотоксических побочных явлений, как снижение количества лейкоцитов и подавление невосприимчивости, предлагаемые соединения 50 обладают существенными преимуществами по сравнению со стандартным препаратом циклофосфамидом.

Формула из о бр ет ения55

Способ получения производных 4уреидооксазафосфоринов общей формулы I

К, представляющими собой 2-хлорэтил, К, Rg и R — водород, R — водород, алкильньй остаток

С„ -С,, циклогексил, фенил, бензоил, нафтил, флуоренил, 9-оксофлуоренил, фенильный остаток, замещенный на один или два атома галогена, С„ -С4 алкильную группу, С вЂ”

С вЂ” алкоксильную, нитро-трифторметиль ную, сульфамоильную группу, или С„. -С, алкильный остаток, замещенный на хлор, : С -С -карбалкоксильную фенильную и/или карбоксиль-. ную группу или на группу О(СН3 э

К и R имеют указанные значения, группа НК Ка представляет собой пиперидиновое кольцо представляющим собой}

2-хлорэтил или 2-ме- . тилсульфонатоэтил, R — водород, метил;

К вЂ” 2 хлорэтил или

2-метилсульфонатоэтил;

R< R< и К водо род, причем оба R и

R не могут быть 23 метилсульфонатоэтилом; H Rg представляющими собой 2-хлорэтил;

2-хлорэтил; R, К и

R — водород; или К водород; R — метил;

К вЂ” водород; К вЂ” водород или бензил;

l6! 5 1435156 или R> и К вЂ” водород, R — метил R — ме5

У тил или фенил, или их солей с основаниями, в случае, когда R в

r соединении формулы I содержит карбоксильную группу, отличающийся тем, что 10 соответствующее производное 4-окси-, или 4-метокси-, или 4-этоксиоксазафосфорина общей формулы II

/ 5

НΠ— Mi — С вЂ” М 6 де R — водород или метил;

R — водород алкильныи остаток

Э

С, -С „4, циклогексил, фенил, бензоил, нафтил, флуоренил, 9 оксофлуоренил, фенильный остаток, замещенный на один или два атома галогена, С< -С4 -алкильную, С, С4 алкоксильную, нитро, трифторметильную, сульфамоильную группу, или С, -С4 -алкильный остаток, замещенный на хлор, С,, -C> -карбалкоксильную группу, фенильную и/или карбоксильную группу, или на группу -РО(СН,1), или группа 5

Я представляет собой пипеВ6 ридиновое кольцо, о при температуре от -25 до +20 С в среде инертного растворителя в при" сутствии при необходимости трифторуксусной кислоты в качестве катализатора с последующим выделением целевого соединения в свободном виде, или в виде соли с основанием, в случае, когда В соединении формулы I Ка содержит карбоксильную группу. з 0У

1 в,,,ы — сн ж- сн, я Ilo- сн/

2 Q

15

Таблица

4-уреидоокси — производные общей формулы, В

В1 1

ОФ О

Rq о

° IUI С, При- R< мер

4 5 6

-N(0H) -Со-NH=CH

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлор этил

2-Хлорэтил

106

НННННН t0

Н, где К1, — 2-хлорэтил или 2 метилсульфонатбэтил;

R — водород, метил или 2-хлорэтил;

R — водород, 2-хлорэтил, метил или 2-метилсульфонатоэтил;

R4 — водород или метил; -30

7 — водород, метил или этил; подвергают взаимодействию с соответствующим производным мочевины общей формулы Ш

-N(OH)-СО-NH-CH -СН 101

1 3

-N(OH)-СО-NH-СН(СН э) 99

-N (ОН) -СО-NH- (CH1) -CH3 50

1435156!

Продолжение табл.!

-N(oH)-co-NH-(сн ) -сн 70-71 — 1цоц1-со-NH-Н (Н 111

-3(OH)-G0-ЮЯ-CHg-.СН . 100-101 щ оц1-оо-кн-сн< с 1,)-1 . ):113

N(OHI-CONN 98 .

1I2

НННН«4

Нн— q ОЦ1-CO-W

91-92.

»8-120

Н»8

НН101

НН» 6-117

93-94

НН2

НН-Я(ОИ1- СО-ЮЯ МО;

7 гг

-®он!- со-мн

34О

117-118

111 1t2 н2-Хлорэтил

2-Хлор2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

ННэтил

2-ХлоР- Н- Н- -И(ОИ1 — СО-яН- этил АД г

91-93

2-Хлорэтил

8 2-Хлор- 2-Хлор- Н- Н- -WOW CO- Cg 107 этил зтил ф.

-N(OH)-СО-NH-CH -CH - Cl 98

НН-N(OH) -СО-ЯН-.ОН(НН, )—

-со с,н, -N(OH)-CO-NH-CH -PO (сн ), -N (он) -со-NH-сн—

-со с н

Н30

102-103

»О-»3

Н31

НН32

106

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлор этил

2-Хлор этил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлор зтил

2-Хлорэтил

2-Хлорзтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорзтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорзтил

2-Хлорзтил

2-Хлорэтил

2-Хлор этил

2-Хлорэтил

2-Хлорзтил

Z-Хлорз тип

К(ОЯ! — CG-NH 81 г

-NIOHI-CO-NH Cl

-N ОН}-СО-NH

С1

-Я ОН!-СО-ЯН

-к!Ои1-со w

4.

-к оя1-со-жн- -о-авиа (М(ОН!- CO-NH

Сн, 19

Продольна е ни е та 6л 1

1435156

-Ю(ОЩ-Сб-ЯНН- Н2-Хлор этил

2-Хлорэтил

125

-Nlощ-ао-а<сн,1

0,65

96-98

Н- Н2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

НН- Н-N (0H) -C0-Б (СН ) 35

-N(OH)-Со-МН

-N(0H)-CO-NH-j

134

Метил

144

Метил

114-115

0, 34

-N(OH)-CO-NH11

Н39*

0,29

40*

136-138

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

0,64

Я(ОН) СО NH С14

Н„,,п

Н-.

Н-14 о в-а о-а )

1, -Nl oHl-oo-ын-ан,-QO

-wow-аа-он О)

so ын

-""" -"-"" {oOQ

109

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорзтил

2-Xqopэтил

НН2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

110-112

Метил

Н44

131

НН45

114

НН46

-N (0H1 — 00-Ю о О) 133

НН2-Хлорз тил

47 2-Хлоратил

* В примерах 34, 39, 40, 42 вместо т. пл. приведено Rf значение.

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

2-Хпорэтил з 0з сн—

2-Хлорэтил сн so -сн—

-сЙ й

2-Хлорэтил

2-Хлорэтил

Я-Хлор" этил Н2-Хлорэтил Н2-Хлорэтил НСН S0 -Н1 З сн сн

2-Хлорэтил НН- Метил

1435156

Таблица2

Структура солей и данные анализа на С, Н, ОН

Н I (с сн,сн,)р, и- со-чн- сн соон

P о о

При- . R мер

4,87(4,6) 14,25(13,9) 30,55(30,0) 28,93(28,6) 4,37(4, 1) 13,50(13,7)

27,86(27,4) 4,21(4,1) 13,.00(12,8) Na

+

К (СаОН) 26, 74 (26, 5) 4,26(4,4) 12,47(12,6)

5,41 (5,6) 17,07 (17, 2) 29,28(29,0) Т а б л и ц а 3

Рассчитано (найдено) дине ние при мер

57 Н И(С Н ) 36,06(35,5) 6,48(6,4)

+/ +

58 ф2% / 2) 33,05(32,8) 5,55(5,5)

1/Z

Таблица 4

Характерные сигналы Н, соедине ( ния примера 1 и известного

Соединения примера

Сигналы

46 (известное)

0Н к N-1

9, 19 ч/тыс

6,51 ч/тыс

7,22 ч/тыс

Н к N-3

4,72 ч/тыс 6,23 ч/тыс

5,57 ч/тыс 4,93 ч/тыс

27 Гц (18 Гц

Н к И-1

Нк И-3

Н к С-4 .1 2,4

15,02 (14,8)

16,06(15,7) 24

1435156

Та блица: 5

507-ная летальная доза при введении в брюшнув полость крыс, мг/кг

Шифр ,соедине ния, Пример, 800

7250

7251

7536

2,8

7463

1,5

7523

9,7

7514

1,5

7525

7.495

1,5

6,0

7539

0,7

7517

0,8

7345

7574,1,5

7533

0,7

0,6

7490

2,2

7491

3,0

7492

7496

3,0

2,2

7510

1в5

7466

0,2

7521

1,5

7515

7538

0,6

7464

4,6

7511

3 «800

4 1000

5 >1000

6 «1000

8 . 680

9 1000

12 1000

13 >1000

14 -«1 000

15 700

16 1000

17 «1000

18 «1000

20 «1 000

21 1000

22 «1000

23 1000

24 «1000

25 1000

26 ъ 1000

27 1000

28 .«1000

29 : .1000

Асцитовая сарко.ма "Иосида", АН 13 крысы

50Х-ная лечебная доза (в брвшну@ полость),.ыг/кг

26

Продолжение табл.5

i 435156

3,0

7544

7456

1000 (внутривенный) 10

1000

7508

1,5

33 700

34 «1000

35 1000

36 1000

37 1000

38 1000

41 700

43 700

44 750:

45 1000

46 =-1000

47 «1000

48 1000

7530

0,5

7538

7572

7247

7537

7529

10-100

7552

7583

7585

7593 с46,4

46,4

7594

7595

10-100

10-100

54 «1000

7607

55 «1000

56 «1000

7608

«22

7569"

7549*

3,0

Q,2

150 сн( -и j ер

*Отруктура известных эталонных веществ

Н

0© Î Í>- Онд

М р

«СН СН ф, Q Q

С2Н5

D 7569 -р -Я вЂ” gQ —.ЯИ

CH

D 7549

%=M-СО-ИН- СН

14351 56

Составитель Г.Гуляева

Техред М. Ходанич

Корректор Л.Патай

P едактор Н. Киштулинец

Заказ 5567/58 Тираж 348

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

Подписное

113035, Москва, Ж 35, Рауаская наб,, д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. ужгород, ул. Проектная ° 4