Способ получения омомицина

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к производству антибиотиков. Цель изобретения - упрощение способа. Для получения омомицина культивируют штамм Streptomyces chromopurpureus subsp. chiketamanus subsp. nov. 985. Затем культуральную жидкость или отделенный мицелий высушивают и экстрагируют смесью петролейного эфира и хлороформа или метиленхлорида при соотношении последних 3 - 4 : 1. Затем экстракт концентрируют, например, под вакуумом, а затем проводят хроматографическую очистку на колонке с водной кремниевой кислотой. Выход омомицина 80 - 85% от содержания его в культуральной жидкости с 85 - 90%-ной степенью очистки.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается способа получения антибиотика-омомицина (985 И), который может быть применен в сельском хозяйстве в качестве антикокцидийного, ростостимулирующего средства и антибактериального препарата. Целью изобретения является упрощение способа. П р и м е р 1. Для получения спорового материала культуру Streptomyces chromopurpureus subsp. chiketamanus subsp.nov. ВНИИА N 1702 продуцент антибиотика 985 И выращивают в течение 7-10 дней при 28^оС на овсяном агаре следующего состава, мас. овсяная мука 2,0 агар-агар 2,0, рН до стерилизации 7,2. Для получения вегетативного посевного мицелия споры культуры засевают в колбы Эрленмейера емкостью 750 мл, содержащие 150 мл питательной среды следующего состава, мас. гороховая мука 1,5, сахароза 2,0, крахмал 0,85, NaNO₃ 0,5, СаСО₃ 0,5, СоСl₂ 0,0008. Посевной материал выращивают в течение 40-48 ч при 28^оС в колбах на качалках, производящих 240 об/мин. Посевной материал в количестве 5 об. вносят в колбы с ферментационной средой следующего состава, мас. паста личинок синатропных мух 2,5, сахароза 3,0, крахмал 1,5, NH₄NO₃ 0,1, СаСО₃ 1,0. Ферментацию антибиотика проводят на качалках с 240 об/мин в течение 120 ч при 28^оС. 1 л культуральной жидкости, содержащей 840 мкг/мл антибиотика, высушивают при 50^оС методом распылительной сушки. Получают 65 г сухого остатка. К сухому материалу добавляют трехкратный объем (195 мл) смеси петролейного эфира (т.кип. 70-100^оС) с хлороформом в соотношении 4:1 (20% хлороформа) и оставляют для экстракции при помешивании на 24 ч при комнатной температуре, после чего твердый остаток отделяют и вновь экстрагируют 3 объемами (195 мл) указанной смеси растворителей в течение 2 ч. Оба экстракта объединяют, концентрируют в вакууме до 20 мл и вносят в колонку с водной кремниевой кислотой (Н= 30, Д=3), загруженной из хлороформа. Колонку промывают 300 мл хлороформа для удаления жирных примесей и антибиотик элюируют смесью хлороформа с этилацетатом (20:1). Элюат собирают фракционно по 20 мл. Анализ фракций проводят с помощью ТСХ на пластинах Силуфол в системе растворителей бензол-ацетон (10: 1). Антибиотик обнаруживают по поглощению в УФ-свете при 254 нм или проявлением 1%-ным водным раствором КМnO₄ (коричневое окрашивание). Фракции, содержащие антибиотики, объединяют, растворитель удаляют выпариванием в вакууме и получают 750 мг препарата 90%-ной чистоты. Содержание антибиотика в культуральной жидкости и препарате определяют спектрофотометрическим методом (поглощение при 245 и 290 нм) с применением ТСХ на силуфоле в указанной выше системе. Выход составляет 80% от содержания антибиотика в культуральной жидкости. П р и м е р 2. Продуцент антибиотика омомицина выращивают в соответствии с примером 1. От 1 л культуральной жидкости, содержащей 850 мкг/мл антибиотика, отделяют мицелий центрифугированием или фильтрованием и высушивают в вакуум-сушильном шкафу при 50^оС в течение 24 ч. Получают 40 г сухого мицелия, к которому добавляют 120 мл смеси петролейного эфира (70-100^оС) с хлороформом (4: 1) и экстрагируют при помешивании в течение 24 ч при комнатной температуре, после чего мицелий отделяют и повторно экстрагируют 120 мл экстрагента. Экстракты объединяют, концентрируют в вакууме и подвергают хроматографической очистке на колонке с водной кремниевой кислотой в условиях, описанных в примере 1. Получают 820 мг препарата омомицина 85%-ной чистоты. Выход активного вещества составляет 82% от активности в культуральной жидкости. П р и м е р 3. Продуцент антибиотика омомицина выращивают в условиях, описанных в примере 1. От 1 л культуральной жидкости, содержащей 770 мкг/мл антибиотика, отделяют мицелий и высушивают. Получают 40 г сухого мицелия, к которому добавляют 120 мл смеси петролейного эфира (70-100^оС) с метиленхлоридом в соотношениях 3:1 (25%) и оставляют для экстракции при перемешивании на 24 ч при комнатной температуре, после чего мицелий отделяют и повторно экстрагируют 120 мл указанной смеси. Экстракты объединяют, концентрируют в вакууме и подвергают хроматографической очистке на колонке с водной кремниевой кислотой в условиях, описанных в примере 1. Получают 750 мг препарата омомицина 88%-ной чистоты. Выход составляет 85% от содержания антибиотика в культуральной жидкости. Использование способа позволяет значительно упростить процесс выделения антибиотика омомицина, сделать его более технологичным.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОМОМИЦИНА путем культивирования штамма Steptomucei chromopurpureus subsp. chiretamahui subip nov ВНИИА N 1702 с последующей экстракцией целевого продукта органическими растворителями, концентрированием его и хроматографической очисткой, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, экстракции подвергают предварительно высушенную культуральную жидкость или мицелий, при этом в качестве органических растворителей используют смесь петролейного эфира и хлороформа или метиленхлорида в объемных соотношениях 3 4 1, а хроматографическую очистку проводят на колонке с водной кремниевой кислотой.