Вакцина против инфекционного гепатита плотоядных и способ профилактики инфекционного гепатита плотоядных
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии. С целью повышения иммуногенной активности и стабильности в процессе хранения вакцина против инфекционного гепатита плотоядных включает вируссодержащий материал аттенуированного штамма В вируса инфекционного гепатита плотоядных и обезжиренное молоко в качестве стабилизатора. Способ профилактики инфекционного гепатита плотоядных предусматривает внутримышечное введение вакцины против инфекционного гепатита плотоядных в дозе 450-500 ТЦД50/мл взрослым животным однократно, а молодняку 2,0-2,5- месячного возраста двукратно. Способ обеспечивает повышение эффективности специфической профилактики заболевания и снижение трудозатрат при проведении вакцинации. 2 с.п. ф-лы.
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и касается вакцины против инфекционного гепатита плотоядных и способа профилактики этой инфекции. Цель изобретения повышение иммуногенности и стабильности вакцины в процессе хранения, снижение трудоемкости профилактики. Для достижения цели получают вакцину против инфекционного гепатита плотоядных, включающую вируссодержащий материал из штамма В вируса инфекционного гепатита плотоядных (ИГП) Virus Infections Canine Hepalilis, семейство Mammaliadenovirus, род Adenovirus (тип 1) и в качестве стабилизатора коровье обезжиренное молоко. Исходный штамм, использованный для получения вакцинного штамма В вируса ИГП, выделен из печени больной собаки в первично-трипсинизированной культуре клеток почек щенков собак. Штамм прошел 10 пассажей в перевиваемой культуре клеток почек эмбрионов щенят собак (МДСК) и 41 пассаж в первично-трипсинизированной культуре клеток почек эмбрионов свиней (ПЭС). Штамм В вируса ИГП хранится в коллекции микроорганизмов Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Госагропрома СССР, имеет регистстрационный номер 19 и характеризуется следующими свойствами. Морфологические свойства. При электронно-микроскопическом исследовании зрелые вибрионы имеют форму икосаэдра размером 76 
3 нм. В культурах клеток ПЭС и МДСК на 3-и сутки образуются эозинофильные, внутриядерные включения тельца Рубарта. При высеве штамма В на среды МПА, МПБ, Сабуро и Китт Тарроции не обнаружено контроминации грибами и бактериями, а при электронно-микроскопическом исследовании посторонними вирусами. Биологическая (инфекционная) активность штамма. При культивировании штамма В вируса ИГП в культуре клеток ПЭС биологическая активность составляет 103,5-104,5 ТЦД50/мл, в культуре клеток МДСК 104,0-5,5 ТЦД50/мл. Специфичность штамма. В реакции нейтрализации в культуре клеток 100 ТЦД50/мл штамма В вируса ИГП нейтрализует позитивную сыворотку против инфекционного гепатита плотоядных в разведении 1:80. Штамм не реактогенен для щенков собак в возрасте 8-10 недель. Апатогенен для белых мышей разной массы, кроликов, морских свинок, овец и коз. Активность штамма В вируса ИГП проверяют в следующих серологических реакциях: диффузионной преципитации в агаровом геле, встречного иммуноэлектроосмофореза с позитивными к вирусу инфекционного гепатита плотоядных сыворотками крови собак и песцов, гемагглютинации с эритроцитами человека "0" группы, овцы и морской свинки. Штамм В антигенно родственен эталонному штамму САВ-1 вируса инфекционного гепатита плотоядных, а также изолятам вируса ИГП, выделенным от больных собак, песцов и лисиц в разных географических регионах страны. На протяжении восьми последовательных пассажей через организм интактных щенков собак не отмечается реверсии штамма к исходным свойствам, не наблюдается ни местной, ни общей реакции, характерной для инфекционного процесса при этом заболевании. Штамм В сохраняет активность при хранении в следующих температурных условиях: 37 0,5оС в течение 3 сут, от 2 до 4оС 210 сут, от -20 до -22оС 30 сут и -40оС 3 года (срок наблюдения). Таким образом, штамм В вируса инфекционного гепатита плотоядных соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам. Штамм используют для изготовления вакцины против инфекционного гепатита плотоядных. Способ изготовления вакцины против инфекционного гепатита плотоядных заключается в следующем. Матрасы с сформировавшимся монослоем первично-трипсинизированной культуры клеток ПЭС заражают штаммом В из расчета 0,1 ТЦД50 на клетку и оставляют для контакта в термостате при 37 0,5оС на 1 ч, а затем вносят поддерживающую среду гидролизат лантальбумина на растворе Хенкса (pH 7,2-7,4) с антибиотиками в общепринятой концентрации. Размножение вируса в культуре клеток происходит в течение 72-96 ч, что подтверждается проявлением специфического цитопатического действия. После этого культуральную вируссодержащую жидкость подвергают замораживанию при -20оС с последующим оттаиванием в водяной бане. Полученный вируссодержащий материал из штамма В вируса ИГП с титром биологической активности 103,5-4,5 ТЦД50/мл используют для приготовления вакцины. В качестве защитной среды применяют обезжиренное молоко, компоненты смешивают в соотношении 0,8:1,2. Препарат расфасовывают в ампулы по 1,0 мл и лиофилизируют. Полученная вакцина имеет следующий компонентный состав, Вируссодержащий материал из штамма В вируса ИГП с титром ТЦД50/мл 103,5 104,0 104,5 60 50 40 Стабилизатор 40 50 60 Вакцину против инфекционного гепатита плотоядных из штамма В перед применением проверяют на стерильность в отношении грибов и бактерий, растворимость, внешний вид, биологическую активность в культуре клеток ПЭС, безвредность и иммуногенность. Предлагаемая живая культуральная вакцина против инфекционного гепатита плотоядных является безвредной и иммуногенной для собак и лисиц. Для профилактики инфекционного гепатита плотоядных вакцину против ИГП из штамма В разводят физиологическим раствором. Взрослым животным препарат вводят однократно внутримышечно в дозе 450-500 ТЦД50/мл в объеме 1,0 мл. Самок вакцинируют однократно за месяц до покрытия. Молодняк с 2,0-2,5-месячного возраста (независимо от эпизоотологического состояния хозяйства) вакцинируют внутримышечно двукратно: первый раз в дозе 450 ТЦД50/мл в объеме 0,5 мл и через 14 дней в объеме 1,0 мл. Напряженный иммунитет у привитых животных формируется к десятому дню после вакцинации и сохраняется до 1 года (срок наблюдения). П р и м е р 1. Приготовлены три серии предложенной вакцины против инфекционного гепатита плотоядных на основе аттенуированного штамма В вируса ИГП. Для этого сформировавшийся монослой культуры клеток ПЭС заражают вирусом ИГП (штамм В), в дозе 0,1 ТЦД50 на клетку. После часового контакта вируса с культурой клеток в условиях термостата проводят культивирование вируса при 37 0,5оС в течение 72-96 ч. По истечении указанного времени при наличии четко выраженного цитопатического действия вируса культуральную вируссодержащую жидкость подвергают замораживанию при -20oС с последующим оттаиванием в водяной бане. Получены три серии вируссодержащей культуральной жидкости штамма В вируса ИГП с титром биологической активности 103,5, 104,0 и 104,5 ТЦД50/мл. Для приготовления 1 л вакцины против ИГП каждой серии смешивают соответственно 600 мл вируссодержащего материала с титром биологической активности вируса 103,5 ТЦД50/мл и 400 мл стабилизатора, 500 мл вируссодержащего материала с титром вируса 104,0ТЦД50/мл и 500 мл стабилизатора и 400 мл вируссодержащего материала с титром вируса 104,5 ТЦД50/мл и 600 мл стабилизатора. Полученные серии вакцины имеют следующий компонентный состав, Вируссодержащий материал из штамма В вируса ИГП с титром ТЦП 50/мм 103,5 104,0 104,5
60 50 40 Стабилизатор 40 50 60
П р и м е р 2. Готовят две серии вакцины против инфекционного гепатита плотоядных. Для этого по примеру 1 штаммом В вируса ИГП заражают культуру клеток МДСК в дозе 0,01 ТЦД50 на клетку. В качестве питательной среды используют среду Игла (Мем) с глютамином. После культивирования вируса в течение 48-60 ч получают вируссодержащие материалы с титром биологической активности вируса 105,0, 105,5 ТЦД50/мл. Каждую серию вирусного сбора смешивают со стабилизатором обезжиренным молоком. Приготовленные препараты имеют следующий компонентный состав,
Вируссодержащий
материал из
штамма В вируса
ИГП с титром вируса 105,0 ГЦД50/мл 55 Стабилизатор 45
Вируссодержащий
материал из штамма
В вируса ИГП с тит- ром вируса 105,5 ТЦД50/мл 45 Стабилизатор 55
Лиофилизированные серии вакцины при испытании на естественно-восприимчивых животных эффективны в качестве средств специфической профилактики инфекционного гепатита собак. П р и м е р 3. Безвредность и иммуногенность культуральной вакцины против ИГП из штамма В излучают в остром опыте на щенках собак в возрасте 8-10 недель, свободных от антител в сыворотке крови к этому заболеванию. Животных разделяют на группы и вакцинируют внутримышечно в дозах 50, 500 и 5000 ТЦД50/мл, используя по 10 щенят на каждую дозу вакцины, 8 невакцинированных животных служат контролем. Через 21 сут после введения вакцины всех щенят внутрибрюшинно заражают вирулентным штаммом ВГНКИ вируса инфекционного гепатита плотоядных в дозе 2.104 ТЦД50/мл. Результаты контрольного заражения показывают, что введение щенкам 500 ТЦД50/мл обеспечивает 100%-ную защиту животных от экспериментального заражения эпизоотическим штаммом вируса ИГП, доза 50 ТЦД50/мл обеспечивает защиту 50% вакцинированных животных, а 5000 ТЦД50мл предохраняет всех опытных животных от заражения, однако при серологическом исследовании сывороток крови вакционированных этой дозой животных отмечают значительное угнетение образования специфических антител к вирусу ИГП. Вначале на 10-й день в сыворотках крови вакцинированных против ИГП собак появляются вируснейтрализующие антитела, а через 14 дней преципитирующие и комплементсвязывающие. П р и м е р 4. Предлагаемый способ профилактики инфекционного гепатита плотоядных испытывают на служебно-розыскных собаках, в хозяйстве стационарно неблагополучном по этому заболеванию. Для этого вакцинируют 469 собак в возрасте более 1 года. Вакцину, содержащую 50% вируссодержащего материала из штамма В с титром биологической активности 104,0 ТЦД50/мл и 50% стабилизатора, вводят внутримышечно однократно в предлопаточные мышцы в дозе 450 ТЦД50/мл. Щенков собак, начиная с 2,0-2,5-месячного возраста, вакцинируют двукратно: первый раз вводят 0,5 мл вакцины, а через 14 дней проводят ревакцинацию в объеме 1,0 мл. До введения, а также через 15, 30, 60, 120 и 150 сут после иммунизации в сыворотках крови собак изучают динамику нарастания специфических антител. Проведенные исследования показывают, что через 15 дней у животных образуются вируснейтрализующие антитела, прециптирующие антитела у 80% и комплементсвязывающие у 60% вакцинированных собак. Через 30 дней после вакцинации нарастание антител у животных достигает своего максимума, который сохраняется в течение 60 дней, а в последующие сроки исследования происходит постепенное снижение прециптирующих, вируснейтрализующих и комплементсвязывающих антител. Применение предлагаемой вакцины позволяет предохранить собак от заболевания вирусным гепатитом и значительно улучшить эпизоотологическую обстановку по этому заболеванию в хозяйстве. П р и м е р 5. В соответствии с предложенным способом профилактики инфекционного гепатита плотоядных культуральную вакцину из штамма В вируса ИГП вводят лисицам, находящимся в разных стадиях беременности. Зверей вакцинируют внутримышечно в дозе 500 ТЦД50/мл в объеме 1,0 мл. Последующие наблюдения показывают, что культуральная вакцина против инфекционного гепатита плотоядных не оказывает отрицательного влияния на развитие беременности у лисиц. Падеж щенков, родившихся от вакционированного поголовья, составляет 7,2% а в контроле 13,6%
Таким образом, предлагаемая вакцина против инфекционного гепатита плотоядных из штамма В вируса ИГП безвредна для собак и лисиц разного возраста, обладает стабильными биологическими свойствами и обеспечивает у привитых животных напряженный иммунитет к вирусу инфекционного гепатита плотоядных.
Формула изобретения
40 60
Обезжиренное молоко 60 40
2. Способ профилактики инфекционного гепатита плотоядных, включающий введение животным вакцинного препарата, отличающийся тем, что, с целью снижения трудоемкости, в качестве вакцинного препарата используют вакцину на основе штамма ВГНКИ N 19 с титром биологической активности 103,5-5,5 ТЦД50/мл, введение вакцины осуществляют внутримышечно в дозах 450 500 ТЦД50/мл взрослым животным однократно, а молодняку 2,0 2,5 мес двукратно, причем первый раз в объеме 0,5 мл, в второй раз 1,0 мл.
MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Номер и год публикации бюллетеня: 11-2002
Извещение опубликовано: 20.04.2002
