Способ определения активности креатинфосфокиназы в крови

 

Изобретение относится к способам ранней диагностики инфаркта миокарда . Цель - повьппение точности, чувствительности и упрощение способа достигается за счет инкубации сьшоротки крови в присутствии креатина, АТФ, унитиола и буферного раствора, обработки смеси последовательно раствором молибдата аммония в серной кислоте , раствором аскорбиновой кислоты в соляной кислоте, растворения полу- . ценного осадка щелочью и колориметрии при 625 нм. Чувствительность способа 70 мкмоль/л, ошибка способа 1,6 %.

СОЮ3 СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1462204 А1 (51) 4 С 01 N 33/70

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTQPCH0MY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4239432/28-14 (22) 31.03.87 (46) 28.02.89. Бюл. 11 - 8 (/1} Физико-механический институт им. Г.В.Карпенко (72) О. Г.Яворский и В.Д.Вайса (53) 612.015 (088.8) (56) Лабораторное дело, 1973, У 4, с. 229-231.

1 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

КРЕАТИНФОСФОКИНАЗЫ В КРОВИ (57) Изобретение относится к спосо1

Изобретение относится к биохимичес ким исследованиям в медицине и может быть использовано в клинической практике как основной биохимический тест в диагностике инфаркта миокарда в ранние сроки.

Целью изобретения является повышение точности и чувствительности и упрощение способа.

Цель достигается путем проведения реакции сыворотки крови с реагентом, включающим креатин, АТФ, буферный раствор и унитиол, остановки реакции раствором молибдата аммония в серной кислоте, проявления фосфора раствором аскорбиновой кислоты в соляной кислоте, растворения деиатурированно"

ro белка добавлением гидрата окиси натрия.

Способ осуществляется следующим образом.

В две пробирки (опытную и контрольную) вносят по 0,05 мп сыворотки или плазмы. Добавляют в каждую по

0,2 мп раствора свежеприготовленной бам ранней диагностики инфаркта миокарда. Цель — повышение точности, чувствительности и упрощение способа достигается за счет инкубации сыво-" ротки крови в присутствии креатина, АТФ, унитиола и буферного раствора, обработки смеси последовательно раствором молибдата аммония в серной кислоте, раствором аскорбиновой кислоты в соляной кислоте, растворения полученного осадка щелочью и колориметрии при 625 нм. Чувствительность способа

70 мкмоль/л, ошибка способа 1,6 Х.

3 субстратной смеси, включающей 8,35мМ

АТФ и 5,3 мМ унитиола в 0,15 М трисоксиметиламинометана, содержащего

11,3 мМ магния ацетата. Ставят на о водяную баню с температурой 37 С.

Через 3 мин в опытную пробирку вносят

0,1 мп 86,3 мМ раствора креатина.

Продолжают инкубацию в течение 30мин. вфла

Реакцию останавливают добавлением в фф обе пробирки по 1 мп 0,67-ногомолиб- фф дата аммония в 0,4 М серной кислоте, фф после чего в контрольную пробирку вносят 0,1 мл 86,3 мМ раствора креа- р тина. Последующие операции проводят прн комнатной температуре. Через

15 мин в обе пробирки вносят по 1 мп свежеприготовленного 1Х-ного раствора аскорбиновой кислоты в 0,1 М соляной кислоте. Ровно через !5 мин, соблюдая ту же последовательность, в пробирки вносят по 2 мл 1 М раствора гидрата окиси натрия. Пробирки встряхивают дб растворения денатурированного белка. Через 15 мин прозрачные однородные растворы подвергают пооче1462204 ной предлагаемым способом, на 377 выше показателей, определенных известным способом. Следовательно, чувствительность предлагаемого способа вьппе.

Ю

Показатель воспроизводимости способов определяется при анализе разброса цифровых значений отдельных определений в обоих способах относительно их средних значений. Показатель воспроизводимости результатов предлагаемого способа составляет

1,67, известного 11,4_#_.,Формула изобретения

Составитель В.Галкина

Техред И.Верес

Корректор М.Пожо

Редактор Л. Веселовская

Наказ 1811 Тираж 790 Подписное сс /, /

БНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,103 р@дной колориметрии. Применяя фотоэяектроколориметр с красным светофильтром нли спектрофотометр при дйине волны в 625 нм, в односантимет- 5 ровых кюветах определяют степень поглОщения светового луча в растворах.

Ойределяют разницу показаний между опытным и контрольным растворами. По калибровочному графику, представляю- 10 щФму собой зависимость степени поглОщения светового луча заданной. дли» ны волны от количества фосфора в растворах различных концентраций однозамещенного фосфата натрия, определяют 15 количественное содержание фосфора, оораэовавшегося из синтезированного кфеатинфосфокиназной креатинфосфата в:проведенной реакции. Активность кфеатинфосфокиназы выражают в микро- 20 мЬлях фосфора в 1 л сыворотки или пфаэмы за 1 мин, учитывая количественные соотношения.

Для подтверждения более высокой эффективности предлагаемого способа в., сравнении с известным быпо проведенЬ исследование одной пробы крови больного К.; с целью исключения ошибок в анализе проведено по 10 определений каждым: способом. ЗО

Активность креатинфосфокиназы, определенная предлагаемым .способом составила 98; 96, 95; 98; 94; 98;

100; 97; 96; 95; т.е. в среднем

96 мкмоль/л в 1 мин.

Активность креатинфосфокиназы, определенная известным способом составила 67; 80; 56; 69; 78; 75: 79;

67; 51; 78, в среднем 70 мкмоль/и в мин. 40

Средние цифровые показатели актив ности креатинфосфокиназы, определенСпособ определения активности креатинфосфокинаэы в крови путем инкубации сыворотки крови в щелочной среде, содержащей трис-НС1 буффер, креатин, АТФ, сульфат магния и донор сульфгидрильных групп, остановки реакции образования креатинфо1фата, гидролиза его в кислой среде, проявления фосфора восстановителем и определения фосфора, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повьппения точности и чувствительности способа, в качестве донора сульфгидрильных групп используют унитиол, остановку реакции и гидролиз креатинфосфата проводят одновременно добавлением

0,6Х молибдата аммония в 0,4 М серной кислоте, фосфор проявляют раствором аскорбиновой кислоты в соляной кислоте, затем через 15 мин после развития цветовой реакции растворяют денатурированный белок добавле-, нием 1 Б гидрата окиси натрия с последующим определением фосфора.